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1.
目的探讨神经干细胞(NSCs)条件培养液对其单细胞克隆增殖的影响。方法采用无血清培养法体外培养Wistar大鼠海马神经干细胞并进行传代培养,然后收集神经干细胞条件培养液。第四代细胞进行单细胞克隆,并将单细胞克隆细胞分为条件培养液组、无血清培养液对照组。通过MTT法比较两组细胞的增殖情况。单克隆培养细胞行巢蛋白(nestin)免疫细胞化学染色,诱导分化后细胞行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(Galc)免疫细胞化学染色。结果单克隆培养后克隆球表达nestin,诱导分化后细胞表达NSE、GFAP、Galc,条件培养液组细胞增殖速度高于对照组。结论条件培养液能提高Wistar大鼠海马神经干细胞单细胞克隆的增殖速度。  相似文献   

2.
建立大鼠胚胎神经干细胞克隆的实验研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
为了获得神经干细胞克隆,作者从胚胎大鼠脑前区取出神经组织,经酶消化,机械吹打,有限稀释法培养具有单细胞克隆能力的细胞群,再利用单细胞克隆技术连续传代培养获取亚克隆,采用免疫细胞化学技术检测并鉴定神经干细胞和分化后成熟神经细胞特异抗原的表达.发现从胎脑分离的细胞群具有形成连续克隆能力,并表达特异的神经干细胞蛋白(Nestin);诱导分化后的细胞表达神经元和星形神经胶质细胞的特异抗原(Tubulin和GFAP).因而认为分离细胞克隆具有自我更新和多分化潜能,表达神经干细胞蛋白,有较强的体外增殖和分化成成熟神经细胞的能力,是中枢神经系统的干细胞.  相似文献   

3.
目的:研究从冻存人脐带组织中分离培养的脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的成软骨分化能力。方法:从冻存人脐带组织中分离培养的hUC-MSCs分为诱导组与对照组,分别采用成软骨诱导分化完全培养基和常规培养基培养7 d。采用实时荧光定量(qRT)-PCR法检测干细胞中成软骨标志物ColⅡa1、ColⅩa1和蛋白聚糖mRNA的表达,免疫印迹及免疫荧光染色检测干细胞Ⅱ型胶原蛋白的表达,阿尔新蓝染色检测干细胞中氨基聚糖含量。结果:hUC-MSCs成软骨诱导分化7 d后,与对照组比较,干细胞中ColⅡa1、ColⅩa1和蛋白聚糖mRNA的表达均上升,Ⅱ型胶原蛋白的表达上升,氨基聚糖含量升高(均 P<0.05)。 结论:从冻存人脐带组织中分离培养的hUC-MSCs采用成软骨诱导分化完全培养基培养7 d后可分化为成软骨细胞,可用于软骨疾病的实验研究和临床治疗。  相似文献   

4.
背景:脂肪组织来源丰富,不同部位脂肪组织分离培养的脂肪干细胞在体外生物学特性上是否存在差异,目前相关研究较少。目的:观察肾脂肪囊来源与腹股沟来源脂肪干细胞的体外增殖和成软骨诱导分化能力。方法:收集大鼠肾脂肪囊来源与腹股沟区来源组织进行脂肪干细胞培养与鉴定,MTT法检测两组细胞的体外增殖能力。取第3代细胞进行软骨定向诱导2周,免疫荧光检测诱导后细胞CollagenⅡ表达,RT-PCR检测两组细胞诱导后Aggrecan、CollagenⅡm RNA表达水平。结果与结论:(1)肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞经原代与传代培养,形态基本一致;(2)经流式细胞仪检测,不同来源脂肪干细胞的CD44阳性率均达到95%以上;(3)两组细胞的体外生长曲线均呈"S"型;(4)诱导后两组细胞均表现出CollagenⅡ阳性表达;(5)两组细胞的Aggrecan、CollagenⅡmRNA表达水平比较差异无显著性意义(P>0.05);(6)结果显示,肾脂肪囊来源与腹股沟区来源脂肪干细胞均在体外生长稳定,迅速增殖,经定向诱导向软骨细胞发生分化,二者无明显区别。  相似文献   

5.
背景:人脂肪来源间充质干细胞是种具有较强的体外增殖和多系分化能力的成体干细胞,可以从美容吸脂手术中获得,取材方便,原料来源丰富,在生物治疗应用方面蕴藏着巨大的价值。 目的:体外分离、培养人脂肪来源间充质干细胞,探讨其基本生物学特性及成骨成软骨的潜能。 方法:取美容吸脂获得的脂肪组织,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养;观察细胞形态、测定细胞周期、流式细胞仪鉴定细胞表面标志;取第3代细胞,分别加入成骨诱导培养基及成软骨诱导培养基行体外成骨及成软骨诱导。 结果与结论:体外培养人脂肪来源间充质干细胞呈纤维样形态,原代细胞24 h内贴壁,培养5~7 d 后开始形成细胞集落;经细胞周期检测显示G0/G1,S和G2/M所占比例分别为(88±2)%,(12±2)%和0.03%。经流式细胞仪检测CD29和CD105呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达。RT-PCR检测显示,人脂肪间充质干细胞经成骨诱导分化后细胞中骨桥蛋白mRNA呈阳性表达,经软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原mRNA呈阳性表达。结果证实,实验成功体外分离、培养人脂肪来源间充质干细胞,其具有向成骨细胞和软骨细胞分化的潜能。  相似文献   

6.
背景:关节软骨损伤后,自身修复能力十分有限,以往医学手段无法对其进行再生修复,利用干细胞治疗软骨损伤彻底扭转了这一局面。 目的:探讨不同生长因子诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型的转化机制。 方法:取第5代大鼠骨髓间充质干细胞,利用不同的生长因子及生长因子组合对大鼠骨髓间充质干细胞进行诱导,分别为TGF-β1组、TGF-β1+IGF-1组、BMP-2+IGF-1组、TGF-β1+BMP-2组、TGF-β1+IGF-1+BMP-2组、空白对照组。诱导后21 d进行阿尔新蓝染色和茜素红染色,RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA表达。 结果与结论:阿新蓝染色观察可见细胞胞浆与间质存在异染情况,蛋白多糖呈绿色表达,经茜素红染色未见橘红色钙结节。初步推断,骨髓间充质干细胞已分化形成软骨细胞,不表达骨细胞表型。空白对照组Ⅱ型胶原mRNA表达呈阴性。与TGF-β1组比较,BMP-2+IGF-1组Ⅱ型胶原mRNA表达显著偏低,TGF-β1+BMP-2组和TGF-β1+IGF-1+BMP-2组Ⅱ型胶原mRNA表达显著偏高(P < 0.05);且TGF-β1+IGF-1+BMP-2组Ⅱ型胶原mRNA表达显著高于其他各组(P < 0.05)。结果表明,转化生长因子β1具备单独诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的能力,采用胰岛素样生长因子1、骨形态发生蛋白2、转化生长因子β1在诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化时具有协同作用,可以发挥出最大的诱导软骨分化效应。 中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程  相似文献   

7.
目的研究Notch信号系统对骨髓间充质干细胞的增殖与分化的调控作用。方法用密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞,观察其增殖及传代情况,并进行成骨、成软骨及成心肌细胞诱导,Western blot检测细胞增殖及分化过程中Notch信号蛋白的表达。结果骨髓间充质干细胞呈梭形、旋涡样生长,增殖及传代能力强,可在体外形成钙结节,分化为软骨细胞,免疫组化示心肌细胞标志物的表达。Western blot显示在增殖过程中可见Notch信号蛋白的表达,为1.00±0.13,当分化为骨细胞及心肌细胞时,其表达上调,分别为1.20±0.14及1.70±0.17,与增殖的干细胞相比有明显差异(P<0.05)。结论 Notch信号系统对骨髓间充质干细胞的增殖及分化起重要的调控作用。  相似文献   

8.
目的建立人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导方法。方法用低血清培养体系培养人胚胎干细胞,每3 d半量换液,7~10 d后消化成单细胞用扩增培养基培养,每3 d传代1次。结果人胚胎干细胞呈克隆样增殖,边缘呈锯齿状,表达多能干细胞标志OCT4、SOX2和NANOG。诱导3 d后,克隆间隙出现体积较小的成纤维样细胞,增殖能力强,经两次传代后可获得形态一致的长梭形细胞。这些细胞表达间质细胞标志VIMENTIN,细胞均表达CD105、CD90、CD73、CD44和HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR,且具有成脂和成骨分化能力。结论用低血清诱导法能快速获得较高纯度的人胚胎干细胞源性间充质干细胞。  相似文献   

9.
目的探讨miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C2C12成骨分化中的作用。方法 BMP9条件培养基处理间充质干细胞C2C12诱导成骨分化,用real-time PCR连续检测miR-30家族成员的mRNA。用BMP9条件培养基作用Ad-mmu-miR-30a预处理的C2C12细胞,通过ALP染色和活性检测来反映早期成骨指标ALP的表达、分别在mRNA水平和蛋白水平检测中期成骨指标(OCN)的表达、用钙盐沉积来检测晚期成骨分化,用流式细胞术和MTT检测C2C12细胞的周期与增殖。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中的作用机制。结果 miR-30家族中,只有miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中表达下调,miR-30a过表达后,通过靶基因Runx2使BMP9诱导成骨分化能力减弱,ALP的表达下降(P0.05),OCN蛋白水平和mRNA水平也都表达下调(P0.05),钙盐沉积受到抑制。结论 miR-30a可以抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化。  相似文献   

10.
提高成年大鼠神经干细胞单克隆形成率的方法   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的 探索提高神经干细胞单克隆形成率的方法并证实所分离培养的神经干细胞仍具有多分化潜能。 方法 对神经干细胞单克隆方法进行改良 ,即在单克隆培养液中加入 1 2原代克隆培养液。将所得到的单细胞克隆球消化、分离、增殖成大量的神经干细胞球 ,用含血清的DMEM分化培养液促其分化。 14d后 ,分别用神经元和胶质细胞的特异性标记物MAP 2标记神经元、GFAP标记星形胶质细胞和CNP标记少突胶质细胞。 结果平均每块含 1 2原代克隆培养液的 96孔培养板中有 2~ 3只孔可形成克隆球 ,而含纯新鲜培养液的培养板中仅 0 5~ 1 0只孔可形成克隆球。这些单细胞克隆球增殖后得到的大量亚细胞系克隆球分化后分别呈MAP 2、GFAP和CNP免疫荧光阳性。 结论 单细胞克隆实验中加入 1 2原代克隆培养液可提高神经干细胞的单克隆形成率 ,单克隆球增殖后得到的大量亚细胞系克隆球亦具有多分化潜能。  相似文献   

11.
目的初步观察外源性细胞因子重组人促红细胞生成素(NEPO)对小鼠胚胎干细胞(ESC)向心肌细胞分化的影响。方法将NEPO加到细胞培养基中配成终浓度分别为0.5、1.O、5.0U/ml的诱导分化液,分别在分化第8、12天观察ESC自发及在rhEPO诱导情况下心肌细胞分化率;在分化第7天应用RT-PCR检测自发分化组及NEPO诱导组心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5mRNA的相对表达。结果在分化第8、12天rhEPO诱导(1.0U/ml)心肌细胞分化率分别显著高于对应分化天数的自发心肌细胞分化率(0.11±0.02对0.05±0.01,P〈0.05;0.86±0.02对0.65±0.05,P〈0.05);与自发分化组比较.NEPO干预(1.0U/ml)上调GATA-4、Nkx2.5mRNA的相对表达。结论外源性rhEPO早期干预能够促进ESC向心肌细胞分化。  相似文献   

12.
目的明确小型猪的脂肪来源间充质干细胞(A_r_MSCs)和猪的骨髓来源间充质干细胞(BM—MSCsl体外培养特性的异同。方法广西巴马小型猪,雌雄不限,猪龄4~6个月,体质量20~30kg。AT-MSCs来源于小型猪腹股沟皮下组织.BM—MSCs来源于小型猪的骨髓组织。培养AT-MSCs和BM—MSCs并观察它们的细胞形态。流式细胞仪检测Arr_MSCs和BM—MSCs的表面标志物(CD29、CD34、CD45、CD90)。分别观察Arr-MSCs和BM—MSCs的细胞生长分化能力;实时聚合酶链反应(PCR)检测基因表达。结果流式细胞仪检测结果表明,A.r_MSCs和BM—MSCs均表达CD29[分别为(99.06±0.30)%、(99.94±0.05)%]、CD90[分别为(97.404-0.40)%、(97.43±1J29)%1阳性,CD34、CD45阴性。AT-MSCs传代需培养5~7d,而BM—MSCs需培养7~10d。与BM—MSCs比较,AT—MSCs具有更强的生长分化能力。实时PCR检测基因表达结果显示.AT—MSCs和BM—MSCs均能分化心肌特异标志物a—skeletalactin和Troponin—I.二者差异无统计学意义.表明AT—MSCs和BM—MSCs均具备多项分化潜能.结论AT—MSCs是小型猪干细胞移植治疗的理想选择.  相似文献   

13.
申屠刚  李强  李骥  王刚  姚有榕 《解剖与临床》2009,14(3):171-173,177
目的:探讨纤维蛋白胶(FG)对骨髓间充质干细胞(MSCs)黏附作用的影响,以提高组织工程骨(TEB)成骨能力。方法:将成骨诱导后人MSCs体外与同种异体的脱钙骨基质(DBM)复合构建组织工程骨,根据DBM中是否加入FG分为两组,A组加入FG,B组未加入FG。于构建后10h计算细胞黏附率,24h后用荧光显微镜观察MSCs在支架材料上的黏附情况,3d、7d用扫描电镜观察比较两组种支架材料的MSCs生长与增殖的差异。结果:体外构建10h后,A组的细胞黏附率为(95.3±9.2)%,B组为(89.2±8.7)%,两者之间差异具有统计学意义(P〈0.05)。24h后荧光显微镜下见A组上黏附的细胞数量明显多,部分呈簇状和团状较均匀地密布;而B组细胞数量较少,呈散在非均匀分布。构建后3dA组网孔间出现细胞外基质,至第7d基质变得稠密;B组细胞外基质较少。结论:纤维蛋白胶与MSCs具有良好的组织相容性,能明显促进MSCs的黏附生长。  相似文献   

14.
目的探讨小儿外周血造血干/祖细胞采集的效果和安全性。方法32名供者经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后,应用血细胞分离机进行外周血干/祖细胞采集。循环血量2~6 L。采集中,监测病人的血压、心率、呼吸、MNC(单个核细胞)、WBC、RBC、Hb、Hct和Plt及血清Ca^2+浓度的变化。采集的MNC液用CD34单抗标记后检测CD34^+细胞数,并同时作CFU-GM集落培养。结果32例共进行了89次干/祖细胞采集,机器平均每次循环血量2.5个血容量。MNC采集效率达(64.78±3.23)%,每次采得MNC液60ml,获得MNC为(3.1±0.6)×10^8/kg;CD34+为(2.8±0.6)×10^6/kg及CFU-GM(2.6±0.5)×10^5/kg。术中供者无任何不良反应。采集前后血压、心率、呼吸、RBC、Hb、Hct和血清Ca^2+浓度无明显变化(P〉0.05),但Plt数从采集前的159.63×10^9/L下降到采集后的112.78×10^9/L,下降幅度达29.35%。结论采用CS-3000PLUS血细胞分离机采集小儿外周血造血干/祖细胞是一种有效和安全的方法,供者仅需2~3次采集就能获得异体外周血造血干/祖细胞移植所需的干/祖细胞数量。  相似文献   

15.
探讨脂多糖(LPS)对牙周膜干细胞(PDLSCs)生物学特性的影响.方法 分离、培养PDLSCs,并检测其间充质干细胞标志物STRO-1、CD146的表达情况.在含有LPS的培养基中培养PDLSCs,分别进行以下实验:(1)应用甲苯胺蓝染色法和Brdu掺入法分别检测PDLSCs的克隆形成率和细胞增殖率;(2)对PDLSCs进行骨向和脂肪向诱导,采用茜素红染色和油红O染色检测其骨向和脂肪向分化潜能;(3)应用ELISA法测定培养上清中IL-6的浓度;(4) Western blot检测PDLSCs磷酸化ERK1/2的表达情况.结果 PDLSCs表达STRO-1、CD146,阳性率分别为28.6%±2.3%、86.7%±3.9%.LPS对PDLSCs的克隆形成率和细胞增殖率没有影响.在含有LPS的矿化诱导液中,矿化面积明显增多,说明LPS能够促进PDLSCs骨向分化.脂肪向诱导实验发现,LPS组和无LPS组的油红染色阳性面积相近,两组无显著性差异.LPS促进IL-6的分泌和ERK1/2活化,并具有剂量依赖性.结论 LPS改变了PDLSCs的生物学特性,提示炎性状态可能影响PDLSCs介导的牙周组织再生.  相似文献   

16.
目的探讨体外直接诱导HSF6人胚胎干细胞(humanem bryonic stem cells,hESCs)分化为神经细胞的方法。方法采用直接的方法,在1%血清培养条件下,顺序添加bFGF、RA和Forskolin,诱导HSF6人ESCs分化为神经细胞。结果细胞发生神经样形态学改变,免疫荧光细胞化学分析结果显示,分化细胞表达神经干细胞特异性标志分子——巢蛋白(nestin),以及神经元标志分子——β微管蛋白Ⅲ(neuron-specific class Ⅲ beta-tubulin,TuJ1)。实验组nestin阳性细胞数占(95.2±3.03)%,明显高于未添加诱导因子组的(31.6±4.93)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论本研究直接诱导hESCs分化为神经细胞,减少了常规经胚胎体(embryoid body,EB)的诱导方法而产生其它胚层细胞的机会,为进一步探索hESCs源性神经细胞的功能,以及为细胞替代治疗提供高纯度的hESCs源性神经细胞奠定了基础。  相似文献   

17.
目的 研究心复康含药血清对骨髓干细胞(BMSCs)中间质源性细胞因子α(SDF-1α)mRNA表达和蛋白分泌的影响.方法 采用全骨髓培养法分离和扩增BMSCs,并用流式细胞仪进行鉴定.以定量PCR(q-PCR)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测含药血清作用后BMSCs中SDF-1α mRNA表达和蛋白分泌的改变情况.结果 经心复康含药血清作用72 h后,SDF-1α mRNA的表达量明显增加,实验组约为对照组的200倍(P<0.05);SDF-1α蛋白分泌量增加近1倍(P<0.05),其中实验组为(277.561 1±15.651 8)pg/ml,对照组(153.107 1±14.765 1)pg/ml.结论 全骨髓培养法可获得高纯度的BMSCs,含药血清可明显促进SDF-1αmRNA的表达及其蛋白分泌.  相似文献   

18.
Jin F  Zhao L  Zhao HY  Guo SG  Feng J  Jiang XB  Zhang SL  Wei YJ  Fu R  Zhao JS 《Neuroscience》2008,154(2):541-550
This study is to explore and compare the features of the cells and cancer stem-like cells (CSCs) isolated from both glioblastoma and astrocytoma on expression of anti-apoptotic and multidrug resistance-associated protein (MRP) genes. As a result, the mRNA expression of livin, livinalpha and MRP1 was up-regulated in human CSCs from 2 times to 85 times, but the gene expression of MRP3 was down-regulated from 0.09 times to 0.5 times. After just differentiation the mRNA expression of livin, livinalpha and MRP3 was up-regulated from 9 times to 64 times, but the mRNA expression of MRP1 was down-regulated from 0.01 times to 0.03 times. It is a rare report that glioma stem-like cells can be induced successfully from a grade 2-3 astrocytoma tissue. The properties of glioblastoma and astrocytoma stem-like cells on anti-apoptotic and MRP genes are: anti-apoptotic gene livin and survivin are elevated in CSCs but are the most increased in just differentiated CSCs; MRP1 gene is significantly increased and MRP3 is decreased in CSCs, but when differentiating the MRP3 gene starts a remarkable increase in CSCs; the expression of anti-apoptotic and MRP genes shows no differences between the CSCs isolated from glioblastoma and astrocytoma tissues.  相似文献   

19.
Cancer stem cells (CSCs), which have the abilities of tumor-initiating, self-renewal and differentiation, are thought to cause post-therapeutic recurrence and the progression of cancer. However, CSCs are commonly resistant to current cancer therapies including chemotherapy and radiotherapy. In this study, we isolated cancer stem celllike side population (SP) cells from human bladder cancer cell line SW780 by a flow cytometry-based SP technique. SP cells were only about 3.6% of SW780 cells and showed higher expression of ATP-binding cassette sub-family G member 2 (ABCG2) and CD133. In vitro assay of tumor sphere growth as well as in vivo assay of xenograft transplantation confirmed the higher tumorigenicity of isolated SP cells. These data indicated that SP cells were enriched with CSCs of bladder cancer. Furthermore, we determined the expression of melanoma antigen family A, 3 (MAGEA3), one of the most studied cancer testis (CT) antigens, in these SP and main population (MP) cells derived from SW780 cells. SW780 SP cells representing CSCs of bladder cancer showed an up-regulated expression of MAGE-A3 and a positive coexpression of MAGE-A3 and CD133, indicating that MAGE-A3 was a novel CT antigen preferentially expressed in the CSCs of bladder cancer. In summary, our findings confirmed the existence of cancer stem cell-like SP cells in bladder cancer cells, and further indicated that MAGE-A3 is a novel CSC antigen and therefore may serve as an immunotherapeutic target for CSCs of bladder cancer.  相似文献   

20.
目的:探讨转染微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对c-Kit~+心脏干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法:采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养c-Kit~+心脏干细胞,以Lipofectamine~2000为载体将miR-21模拟物(mimics)和其阴性对照(mimics negative control,MNC)分别转染至c-Kit~+心脏干细胞。实验分为正常对照(control)组(正常培养的心脏干细胞)、MNC组(转染MNC 48 h的细胞)和mimics组(转染miR-21 mimics 48 h的细胞)。qPCR检测各组细胞miR-21的表达情况,以CCK-8法和EdU法检测细胞增殖状态,qPCR及免疫荧光检测细胞分化情况,划痕实验观察细胞迁移能力。结果:成功获取c-Kit~+心脏干细胞,经流式细胞术鉴定其高表达c-Kit(90.8%),低表达CD45(0.6%)及CD34(0.5%);与control组相比,mimics组中miR-21表达量显著增高(P0.05),MNC组中miR-21表达量与control组无明显差异。CCK-8和EdU实验结果发现与control组比较,mimics组中细胞增殖能力明显增加(P0.05),MNC组中细胞增殖能力无明显变化;免疫荧光及qPCR结果表明3组心肌细胞谱系标志物Nkx2.5、CD31和α-平滑肌肌动蛋白水平无明显差异;细胞划痕实验结果发现,3组间细胞迁移能力无明显不同。结论:过表达miR-21可显著促进c-Kit~+心脏干细胞的增殖能力,但对细胞迁移及分化能力无明显影响。  相似文献   

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