聚四氟乙烯涂层的玻片用于ELISA测定HIV抗体

作者将ELISA技术用于有聚四氟乙烯涂层的玻片,这种玻片有30个小圆孔,孔底是玻璃的,容量为5～10μl。每个孔作为一个固相,吸附加入的5μl HIV抗原稀释液,37℃干燥后即可使用(可在37℃保存一年多)。使用耐,先将吸附HIV抗原的玻片每孔加10μ1含有10%山羊血清的blotto液(即加3.75%脱脂奶粉的PBS)。封闭15分     

应用SPA协同凝集试验检测人类轮状病毒

本文试用人轮状病毒豚鼠抗血清标记SPA(上海生物制品研究所生产)作协同凝集试验诊断婴幼儿轮状病毒性胃肠炎,并和直接滴膜电镜法进行了比较。非特异性凝集素的去除:取粪便悬液2ml于试管中,在酒精灯火焰上直接加热至沸,冷却后,1000转/分离心5分钟,其上清液即可供试验用。SPA协同凝集试验,用接种环挑取上述的上清液,分别和SPA菌体试剂、SPA标记试剂作玻片凝集试验,凡在2分钟内与菌体试剂不出现凝集,而在标记试剂中出现肉眼可见的凝集颗粒,液体澄清者为阳性,同时设PBS加标     

微生物荚膜染色方法的改良

1.在无油脂的载物片上,放1滴不稀释的动物(马、兔、羊)或人血清。将一滴有荚膜微生物的一昼夜肉汤培养物加至血清滴中,仔细混合,用第二个载物片的边作成薄片,如同制作血片一样。固体培养物作荚膜染色时,首先需在生理盐水溶液中制备微生物悬液,然后按上法作成薄片。2.空气干燥的涂片以甲醇固定5分钟。3.用以水稀释1:10的龙胆紫石炭酸液染色1分钟。4.用水洗涤制片(短时间),空气干燥,显微镜下用油浸镜检查。细菌细胞体染成紫色,荚膜染成淡紫色。     

对网织红细胞染色的改进

取一支20ml定量取血管吸入约5～10ml煌焦油蓝水溶液,再用同一取血管在手指或耳垂采血5～10μl,然后将它们轻轻打在洁净玻片上充分混匀,重吸回取血管内,将其上端用橡皮泥或胶布密封,室温放置15～20分钟后。取1滴制成血片,按全国临     

病毒分离、间接免疫荧光和套式多重聚合酶链反应对原发和再发性HSV-1和HSV-2感染诊断的比较

作者从 12 6例临床上疑诊为单纯疱疹病毒 ( HSV)感染的患者中收集病灶棉拭 134份。将标本置于 2 ml病毒运输液中运送。每份标本经旋转 15秒后取出 5 0μl进行病毒培养和套式多重聚合酶链反应 ( NMPCR) ,剩余的用于免疫荧光 ( IF)试验检测抗原。　　病毒培养时 ,每 10 μl标本按 10 - 1～ 10 - 4作对数稀释 ,重复 4孔 ,再分别加入原代猴肾、E6 - vero、RD及 HEp- 2细胞各 2 5μl/孔 ,置 CO2 孵箱中每天观察细胞病变效应共 7天 ,阳性标本收获后作鉴定、分型。 IF试验是用新制的 HSV特异性单克隆抗体 ( Mab) ,直接检测 HSV抗原 ,共…     

用一种新的有色胶乳试验检测和鉴别多种抗原

胶乳凝集试验操作简单、快速,已广泛用于各类抗原或抗体的检测和鉴别。但它与其他免疫分析法一样,只能检测一种抗原。如要检测多种抗原中的一种,就要进行复杂的试验。为此,作者介绍了一种新的有色聚苯乙烯胶乳试验来检测和鉴别多种抗原的方法。各种不同颜色的胶乳颗粒用特异的抗体致敏后混在一起,混合的胶乳试剂含有两种以上不同颜色的胶乳悬液。因此能检测和鉴别多种抗原。通过凝集颗粒的聚集检测抗原;根据凝集颗粒颜色鉴别抗原,凝集从头至尾     

荚膜多糖或多糖结合菌苗诱导的人抗b型流感杆菌抗体的功能活性

磷酸多核糖基核糖醇(PRP)是b型流感杆菌(Hib)的荚膜多糖。PRP菌苗免疫原性弱,PRP与白喉毒素结合菌苗(PRP-D)的免疫原性明显高于PRP。作者用PRP和PRP-D分别免疫健康成人,用体内外试验比较两种菌苗诱导的抗血清的保护作用。体外调理试验是用1×10~6多形核白细胞(PMNs)/40μl与10μl对数生长期菌液[2×10~5菌落形成单位(cfu)]混合,加30μl脐带血提供补体,10μl由原倍到1∶125 5倍倍比稀释的人体PRP或PRP-D抗血清及10μl基础液,     

微量加样器吸液嘴湿化前后取样量的结果比较

作者用血清蛋白显色作标化方法对吸液嘴湿化剂后取样量的结果作一比较,并从实验中探讨其偏差程度,现将报告如下。1 材料:微量定量加样器.10μl.20μl.50μl,100μl,200μl,各一支(上海求精生(?)仪器厂产品),正常人混合血清;纯人血清白蛋白标准液(上海生物制品研究所生产)。2 湿化方法:①湿化方法步聚:将吸液嘴套在移液管把吸嘴尖浸入到液面下2—3mm,吸液自离开刻度     

协同凝集用于脑膜炎球菌的血清学分群与脑脊液中抗原之检测

本文作者参照Kronvall(1973),与Olcen等(1975)所提出协同凝集(缩写为CoA)的方法对脑膜炎双球菌的分群和脑脊液中抗原的检测作了不同方法的比较。兹介绍如下: 稳定的A蛋白葡萄球菌悬液之制备:将金黄色葡萄球菌(NCTC 8530)接种于营养琼脂上,经36℃孵育过夜后,用20ml“D”氏PBS(pH7.3)将十个平皿上(直径9cm)之菌苔洗下,以PBS洗二次,用0.5％甲醛PBS处理3小时,洗涤后,加PBS至原体积,80℃加热30分钟,再用PBS洗,最后用PBS制成10％悬液加硫柳汞防腐置4℃中备用。抗体致敏法:吸取脑膜炎球菌A·B·C·X·Y·Z·29E与W_(135)等群之抗血清各0.1ml加到1.0ml上述之10％悬液中,置室温10分钟后以PBS洗,最后加10mlPBS使成致敏菌悬液。     

免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对汉坦病毒感染的血清学测定的比较

作者用3种酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IFA)检测102份人血清样品中的汉坦病毒(HV)抗体,并用蛋白印迹法对各种结果进行确证.细胞ELISA:将γ射线照射的HV感染或未感染的VeroE6细胞悬液(10~6细胞/ml)加入微滴板中,用含5%醋酸的乙醇固定,待用.使用时,加入50μl人血清样品,置37℃     

血液压片法临床应用体会

本法5年时间的应用效果极好。取代了推片法,它具有快速、准确、易学、分布均匀、着色好、厚度适中、易固定、细胞不溶解和不易退行性变等特点,基本符合优质血片。 1 材料与方法:①材料:普通750mm×250mm载玻片,一次性刺血针,75％洒精棉球。染色液:瑞氏染液,内含瑞氏染料0.1g(加4ml中性甘油乳钵研磨),甲醇60ml。磷酸盐缓冲液:内含磷酸二氢钾(KH_2PO_4)0.3g,磷酸氢二钠(Na_2HPO_4)0.2g,H_2O1000ml。②方法:消毒耳(末梢血)后,取一滴耳血至玻片2/3处,血液位于中央,约10μl。将另一玻片放在血滴上,要将玻片各     

由转录抑制剂处理的外周血单个核细胞产生的一种新型人体干扰素

外周血单个核细胞(PBMC)在不同的诱生剂作用下能产生两种干扰素(IFN):IFN-α和IFN-γ。作者发现,PBMC经转录抑制剂放线菌素D(ACD)和二呋喃核糖苯并咪唑(DRB)处理后可产生IFN样蛋白(ILP)。用Picoll-Hypaque从正常人外周血中分离出PBMC,用含2%胎牛血清的RPMI1640培养液配成5×10~6/ml悬液,经20μg/ml放线菌酮加5μg/ml ACD或50μg/ml DRB处理1小时,洗去药物后,以1×10~6/ml浓度再悬于预温培养液中,37℃培养过夜。用常规试验检测培养上清液中IFN活性。结果表明,ACD诱生的ILP抗病毒效价     

在发展中国家中六种血清学测定法检测HIV抗体的比较

本文用Vironostika酶免疫分析(VIR)、Wellcozyme竞争酶免疫分析(WEL)、JLC Allaman间接免疫荧光试验(IFA)、Biotech dip stick(DS)、胶乳凝集试验(LA)及蛋白印迹法(WB)比较测定了人类免疫缺陷症病毒(HIV)抗体,以WB试验为参考试验。目的是在发展中国家寻求切实可行的HIV抗体检测法。将来自卢旺达的306份血清样品分为5组。第1组85份血清来源于艾滋病患者;第2组46份血清来源于艾滋病高危人群;第3组18份血清来源于各种不同临床病例;第4     

HIV-1 DNA-单磷酰脂质A佐剂疫苗鼻内与肌肉免疫的比较

最近作者对1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)DNA疫苗接种的研究证明,从细菌脂多糖取得的单磷酰脂质A(MPL)免疫佐剂可有效增强抗原特异性免疫力.免疫对象为BALB/c小鼠,DNA疫苗用pCMV160ⅢB和pCREV(ⅡB/REV)构建,使用稳定乳剂中的MPL(MPL-SE)作佐剂.肌肉免疫方法为:ⅢB/REV各2μg(总量4μg)溶于灭菌PBS,加(或不加)50μl MPL-SE,在小鼠股二头肌注射100μl疫苗.鼻内免疫的DNA剂量相同,仅MPL-SE改为5和20μl.用乙醚麻醉小鼠后,将30μl疫苗渐渐滴入小鼠鼻孔,让小鼠用自然方式吸入.肌肉和皮内途径均只接种1次.用ELISA检测血清IgG、IgG1和IgG2a及粪便中分泌性IgA(SIgA)滴度;用小鼠足垫试验评估迟发型超敏(DTH)反应;用标准~51Cr释放试验测定免     

吡喹酮致严重不良反应2例

例1,男,34岁。于1周前无明显诱因出现发热,体温39.3-40℃,傍晚时明显,次日清晨退热。自行按感冒治疗无效。因有疫水接触史,于2001年7月25日就诊,血吸虫间接血细胞凝集试验(IHA)、胶乳凝集试验(LA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)均为阳性,诊断为急性血吸虫病。给予吡喹酮(每片0.2 g,南京制药厂生产,批号:990503)早餐后口服1.0 g,于1.5 h后发生呕吐、腹泻,患者昏迷、大汗淋漓、四肢冰冷,继之发生抽搐,血压     

葡萄球菌凝集试验方法的评价与对比研究

目的比较试管法凝固酶、玻片法凝聚因子试验、乳胶凝集试验鉴定金黄色葡萄球菌的特异性及敏感性。方法用MicroScan auto SCAN4细菌鉴定仪对临床各种标本分离出来的葡萄球菌进行鉴定,再与试管法、玻片法、乳胶法进行比较。结果乳胶法敏感性为100%,特异性为98.7%;试管法敏感性为94.7%,特异性为100%;玻片法敏感性为72%,特异性为78.7%。结论玻片法凝聚因子试验不宜作为鉴定金黄色葡萄球菌的可靠指标。     

高效液相色谱法测定动物试样中氟桂嗪(Flunarizine)

本文报道了用HPLC测定动物试样中的氟桂嗪。方法:取试样(血浆、血清、10%脑组织浆)1ml于10ml离心管中,加0.2M醋酸盐缓冲溶液(pH 9.0)3ml,加内标溶液(脑益嗪10ng/μCH_3oH)20μl,充分混匀后,加0.1N NaOH 90μl调节溶液的pH为9.0～9.1,再加正庚烷4ml混匀,然后进行离心分     

荧光免疫测定法与酶免疫测定法、放射免疫测定法对庆大霉素的测定比较

荧光免疫测定法(FIA):荧光免疫测定试剂盒内含N-二(羟乙基)甘氨酸缓冲液、抗体-酶试剂和荧光基因性庆大霉素试剂等三种试剂。另备有标准液(含硫酸庆大霉素浓度为1.0,4.0,8.0和12.0μg/ml)。测定时,用N-二(羟乙基)甘氨酸缓冲液3.0ml 分别将血清样品液60μl 及标准液60μl 稀释,然后加抗体-酶试剂     

一种改进的通透性处理方法用于胞内抗原的流式细胞仪测定(IL-2产生的分析)

淋巴类细胞激活的最重要变化是细胞变大、增殖和白细胞介素(IL)的产生。对此,可用DNA染色,抗增殖性核抗原抗体或抗IL抗体进行研究,故需增加细胞膜的通透性。本文介绍一种细胞膜通透性化学处理的改进方法,即将细胞用冰冷的等渗缓冲液洗两次后,重悬于培养液中,密度为2×10~6细胞数/ml。取100μl细胞悬液与5μg/ml溶血卵磷脂     

一种以病毒糖蛋白固定于伴刀豆球蛋白A包被的微漏板孔来检测HIV-1包膜糖蛋白抗体的新型ELISA

作者用伴刀豆球蛋白A(ConA)吸附微量滴定板孔,并用以亲和固定在无血清培养基中生长的1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)感染细胞培养液中释放的经去垢剂处理的病毒糖蛋白,大大简化了HIV-1包膜(env)糖蛋白固相的制备程序,从而建立了一种新型ConA env ELISA。以100μl ConA(200μg/ml)包被板孔,用含0.1%Triton-X的PBS洗涤后,将100μl经去垢剂处理的无血清病毒原液加至孔中作用1小时;洗涤板孔,以含10%胎牛血清的RPMI培养液(RPMI-10%FCS)封闭未反应