单细胞凝胶电泳在遗传学损伤检测中的应用

单细胞凝胶电泳或彗星试验是在暴露人群中评价遗传学损伤的新式方法。这种分析可以快速的探测单一细胞中不同形式的DNA损伤，因此适于在暴露人群分析应用。本文将对彗星试验在临床研究及监测职业、环境、合理饮食、生活方式等对DNA损伤的危险性，以及在DNA损伤与修复研究中的应用等方面进行综述。     

多光谱单细胞凝胶电泳图像分析系统及其应用

设计了一套多光谱单细胞凝胶电泳（SCGE）图像分析系统,利用该系统简便、快捷、准确地同时获得单细胞彗星图像包括彗星、彗星尾、彗星头参数的多个彗星分析指标。并使用该系统测量了H2O2致淋巴细胞DNA损伤的作用,实验证明,该系统可较好的满足SCGE图像的分析要求。     

葛根素对血管内皮细胞DNA损伤的保护作用

目的研究葛根素对血管内皮细胞DNA损伤的保护作用.方法不同浓度葛根素预处理人脐静脉内皮细胞24 h后,用500 μmol/L过氧化氢造成细胞的过氧化损伤,MTT法判断细胞存活率并选用合适的药物浓度,应用单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测DNA损伤程度.结果未用过氧化氢处理的各组细胞拖尾率及彗星尾长无显著性差异(P》0.05);加用过氧化氢后彗星百分率及彗星尾长显著增高(P《0.005);过氧化氢处理组之间拖尾率及彗星尾长有显著性差异,葛根素的两个剂量组的拖尾率和彗星尾长均明显低于对照 H2O2组(P《0.05).结论葛根素对人脐静脉内皮细胞DNA损伤具有保护作用.     

纳秒电脉冲致人卵巢癌细胞DNA损伤的时间效应

本研究旨在探讨纳秒电脉冲(nsEP)对人卵巢癌细胞铂敏感株A2780及铂耐药株C30的DNA损伤效应。将A2780和C30分别作用于场强为6kV/cm,脉宽为24ns的脉冲电场处理60s。假处理组予假脉冲处理。nsEP处理后0h、4h、8h、12h和24h采用CCK-8法检测细胞生存率;采用碱性单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)检测细胞DNA损伤,测定彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)的75th百分位数。结果显示随着时间增加,A2780和C30细胞的生存率和彗星形成率均先降低后增加,8h时最低(P0.05);C30细胞的生存率高于A2780细胞(P0.05),彗星形成率低于A2780细胞(P0.05);C30细胞的TL、TM和OTM均低于A2780细胞(P0.05);细胞死亡率和彗星形成率呈正相关(r=0.997,P0.05;r=0.998,P0.05)。结果表明,nsEP对人卵巢癌铂敏感细胞株和铂耐药细胞株的DNA损伤效应存在差异;nsEP致细胞死亡与DNA损伤相关。     

不同牙科烤瓷合金材料诱导小鼠成纤维细胞DNA损伤的研究

研究不同牙科烤瓷合金材料诱导小鼠成纤维细胞(L929细胞)DNA的损伤情况,评价各种合金材料的遗传毒性.选择镍铬合金、钛合金、钴铬合金和金合金4种牙科烤瓷合金材料,制备4种合金材料的浸提液,用浸提液培养L929细胞.采用单细胞凝胶电泳(彗星试验)方法检测细胞DNA的损伤情况,镍铬合金和钛合金对细胞DNA损伤等级主要为重度损伤,钴铬合金组和金合金组的DNA损伤等级分别为中度损伤和轻度损伤.4种合金组彗星细胞的尾长、尾矩和Olive尾矩数值之间的差异具有统计学意义(P<0.05). 不同牙烤瓷合金材料诱导L929细胞DNA损伤的情况表现不同.金合金的遗传毒性性能优于镍铬合金、钛合金和钴铬合金,是具有良好生物学性能的牙科烤瓷合金材料.     

格雷夫斯病患者体内抗氧化状态及氧化损伤的研究

目的:观察格雷夫斯病(GD)患者体内抗氧化状态及生物大分子的氧化损伤情况。方法: 检测GD初发组和治疗组各31例患者血浆总抗氧化能力(TAC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及血浆丙二醛(MDA)和巯基(SH)含量,与31例正常对照比较;采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测各组外周血单个核细胞(PBMC)的DNA损伤情况(用彗星率表示)。结果: GD初发组血浆TAC、SOD、GSH-Px活性及SH含量明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),MDA含量及彗星率明显高于对照组(P＜0.01);GD治疗组各指标明显轻于初发组(P＜0.05,P＜0.01),但仍未达到对照水平。GD初发组及治疗组患者PBMC彗星率与TAC呈负相关,与MDA含量呈正相关。 结论:GD患者体内存在氧化应激及脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,生物大分子的氧化损伤可能参与GD的发生和发展。     

高剂量X射线对人离体外周血中有核细胞DNA的损伤及其修复

目的:应用单细胞凝胶电泳技术检测X射线对离体外周血中有核细胞的DNA的损伤及损伤修复.方法:采用血常规正常的离体人外周血,用能量为6MV的X射线给予0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy的剂量照射,分别在0.5h、1h、2h用单细胞凝胶电泳技术检测全血中有核细胞的彗星率、慧尾长度和尾部DNA含量.结果:0Gy...     

用SCE及微核技术检测光疗对新生儿高胆血症的影响

姐妹染色单体交换(sister-chromatide exchange,SCE)及微核技术,做为DNA损伤的敏感指标,已广泛用于致突变物的筛选.本文主要介绍我院93年1-5月间对住院的34例新生儿高胆血症,观察用光疗照射治疗前后的SCE及微核的变化,并与对照组(体检正常的新生儿)作比较.     

单细胞凝胶电泳在精液标本检测中的影响因素及解决方法

单细胞凝胶电泳实验 (single cell gel electrophoresis,SCGE)或称彗星试验 (comet assay) ,是一种直接在荧光显微镜下用肉眼观察单个细胞 DNA链断裂的试验方法 ,也是目前检测外来有害物质对精子损伤的有效方法。在应用过程中我们发现有许多因素能够造成 SCGE结果的不稳定 ,特别是精液标本的保存和制备过程中的影响因素较大。我们就一些主要影响因素进行分析并探讨解决的方法。1　材料与方法1.1　标本与分组　对 110份精液标本按照主要影响因素分组　 (1)将采集后的精液分为原液和稀释 TNE液 (Tris-HCl9.48g,Na Cl 52 .6g,EDTA2 .…     

彗星试验中磨砂玻片的制作

彗星试验(COMET)又称单细胞凝胶电泳(singlecell gel electrophoresis，SCGE)是一种简便而灵敏的在单细胞水平上检测有核细胞DNA损伤与修复的方法，在国外广泛的用于各类化学诱变剂的检测。该试验是把在培养过程中经诱变剂或有毒物质干预后的细胞放在凝胶中制片，然后经裂解、解旋、电泳和漂洗及染色一系列过程，最后在荧光显微镜下观察，求出拖尾细胞的百分率及拖尾细胞的尾长进行统计分析。     

烤瓷合金对机体细胞毒性的实验研究

目的:探讨3种口腔科常用烤瓷合金的细胞毒性。方法:分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和单细胞凝胶电泳(彗星试验)法检测3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929相对增殖率(RGR)的影响以及DNA的损伤情况。结果:金合金组的RGR为87.7±11.3,与钴铬合金组、对照组比较差异无统计学意义,其余各组间RGR比较差异均有统计学意义(P0.05);镍铬合金对DNA的损伤主要为严重损伤,而钴铬合金和金合金分别为中度和轻度损伤。结论:金合金材料和钴铬合金材料对RGR的影响显著小于镍铬合金,同时金合金材料所造成的DNA损伤最轻,因此,金合金材料是具有良好生物学性能的口腔科烤瓷合金材料。     

单细胞凝胶电泳技术及其应用

由Ostliny于1984年首创的单细胞凝胶电脉（SCGE）用于检测CNA单或双链缺口．具有简单、灵敏、迅速且不需放射性核素标记等优点。其基本原理是将单个细胞包埋于琼脂糖凝胶中进行裂解、电泳、荧光染色和显微镜检测,细胞DNA损伤产生的链缺口在电泳中迁移形成典型的"彗星"图像（故又称CometAssay）。根据迁移长度和荧光强度即可定量分析DNA损伤,故该方法在放射生物学、遗传毒理学、群体生物学监测、肿瘤发病机制、肿瘤治疗学以及细胞凋亡等领域具有广泛的应用前景。     

慢性乙型肝炎合并肝癌患者淋巴细胞的彗星试验分析

目的：观察慢性乙型肝炎合并肝癌患者外周血淋巴细胞DNA的损伤情况。 方法: 利用先进、快速、灵敏、客观的彗星试验及IMI 1.0彗星分析软件，对慢性乙型肝炎合并肝癌患者淋巴细胞DNA损伤进行观察。 结果: 慢性乙型肝炎合并肝癌患者外周血淋巴细胞的“彗星”尾长、尾%DNA、尾惯量和尾矩4个指标均显著高于健康人(P<0.05)。 结论: 慢性乙型肝炎合并肝癌患者外周血淋巴细胞的DNA损伤明显，其原因可能是HBV DNA整合到淋巴细胞内，导致淋巴细胞DNA高级结构发生了变化。     

山稔子提取物对体外DNA氧化性损伤的保护作用

目的观察山稔子提取物对原代体外培养淋巴细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法原代培养24h的脾淋巴细胞悬液,随机分为7组,其中5组细胞用不同浓度的山稔子提取物溶液预先处理60min,再加入50μmol/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,7组细胞共同在4℃下染毒20min,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度。结果H2O2可致原代培养脾淋巴细胞的DNA严重损伤,而山稔子提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100μg/mL的浓度下,彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为85%、65%和30%（P分别〈0.05、0.01、0.01）,总彗星长度也从对照组的（52.82±6.42）μm,逐渐降低为（43.68±5.59）μm、（35.80±8.75）μm、（25.35±4.32）μm（P分别〈0.05、0.01、0.01）。结论山稔子提取物具有抗氧化作用,能在一定浓度范围内保护细胞显著降低氧自由基对DNA的氧化损伤。     

vWF和EPCR检测在AMI中的临床意义

目的：观察急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction,AMI）患者循环内皮细胞（CEC）核DNA改变的特点,检测血浆中血管性血友病因子（Von Willebr and factor,vWF）、内皮细胞蛋白C受体（vascular endothelial cell protein C receptor,EPCR）的含量变化,探讨其临床意义。方法：应用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测102例AMI组患者和75例健康对照组CEC核DNA的损伤;以酶联免疫吸附试验（ELISA）进一步检测两组vWF、EPCR的含量。结果：SCGE显示,AMI组患者93.72%±6.75%CEC核DNA电泳呈明显的＂彗星＂状,其彗尾DNA%含量为42.22%±1.56%;对照组10.24%±4.33% CEC核DNA表现为＂彗星＂状,其彗尾DNA%含量为6.31%±2.41%。AMI组与对照组彗星率、彗尾DNA%含量相比均有显著性差异（P〈0.001）。AMI组vWF、EPCR的含量显著高于对照组（P〈0.01）。结论：AMI组患者血管内皮细胞明显损伤;血浆中vWF、EPCR的含量明显升高,早期检测血浆vWF、EPCR的含量可能有利于AMI的治疗,甚至预防。     

光疗对新生儿黄疸患儿DNA损伤性研究

本文通过对２８例（两组）高间按胆红素血症新生儿光疗前后和２０例正常新生儿外周血淋巴细胞ＳＣＥ频率进行对比研究，结果显示：光疗时间超过３６小时ＳＣＥ频率明显升高，光上于３６小时ＳＣＥ频率无明显的变化，文中还提示高间接胆红素血症未经光疗ＳＣＥ频率明显高于正常新生儿。结果说明较长时间挑 间接胆红素异常升高对新生儿体细胞仍一定的损伤作用     

布比卡因介导神经细胞DNA损伤后修复通路的激活

目的:通过cDNA基因筛查探讨布比卡因导致神经元DNA损伤后相关修复通路的激活情况。方法:首先建立布比卡因导致的神经细胞SH-SY5Y毒性损伤及DNA损伤模型,再应用cDNA微孔板阵列技术进行DNA损伤修复通路中21个重要调控因子的基因筛查;通过数据库比对后分析这些差异表达的修复基因的修复通路富集和分布。数据资料通过GraphPad Prism 6统计软件进行分析,比较各组间的差异。结果:CCK-8法检测布比卡因不同浓度组处理细胞的活力变化,结果显示布比卡因的半数抑制浓度(IC_(50)值)为1.5 mmol/L;彗星实验相关指标(彗星尾距)增高(P0.05),γH2AX蛋白的磷酸化水平增多(P0.05),提示布比卡因处理SH-SY5Y细胞后细胞的DNA损伤明显加重。cDNA微孔板阵列实验结果显示,与对照组细胞比较,布比卡因处理后差异表达基因有DNAPKcs、PTEN、NTH1、RAD9、CSB、GADD45、XPD、XPC-HR23B和P53;通过数据库比对分析可见这些修复基因主要集中在以下3个修复机制:(1)碱基切除修复;(2)核酸切除修复;(3)非同源重组修复。结论:局麻药导致的神经细胞DNA损伤后差异表达的修复基因主要集中在非同源末端修复、碱基切除修复和核酸切除修复。     

光疗对新生儿皮肤体温与核心体温的影响

目的探讨光疗对皮肤体温(A)与核心体温(R)的影响,以选择能正确地反映体内温度的测温方法.方法测定了新生儿黄疸60例,在光疗前、光疗下4小时、光疗下8小时及光疗后8小时的A与R.结果在光疗前无发热,光疗下4小时A与R分别升高0.58℃和0.5℃;A的发热率为46.7%、R的发热率41.7%;光疗下8小时,皮肤体温比光疗4小时升高0.2℃,R仅轻微升高;A的发热率(70.0%),明显高于R的发热率43.3%,也高于光疗下4小时的发热率.在光疗结束后8小时,患儿体温已恢复正常.结论在光疗下测体温时,应测量核心温度.     

重铬酸钾致鲫鱼肝细胞DNA损伤作用研究

目的建立鲫鱼肝细胞彗星试验方法,检测重铬酸钾致鱼肝细胞DNA损伤作用。方法制备鲫鱼原代肝细胞悬液,以0．5,0．25和0．1mM重铬酸钾染毒细胞1．5h,彗星试验检测细胞DNA损伤。结果重铬酸钾各浓度作用组细胞平均拖尾长度和拖尾细胞率存在剂量反应关系,且0．5和0．25mM作用组细胞平均拖尾长度与阴性对照组之间差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论鲫鱼肝细胞彗星试验方法成功建立,重铬酸钾具有致鱼肝细胞DNA损伤作用。     

单纯光疗或光疗联合白蛋白治疗足月新生儿重度黄疸的效果分析

目的:分析非换血治疗(包括单纯光疗和光疗联合白蛋白治疗)对足月新生儿重度黄疸的治疗效果。方法:回顾分析110例接受单纯光疗或光疗联合白蛋白治疗、血清总胆红素水平342μmol/L的足月新生儿。观察患儿血清胆红素水平变化及神经系统体征。结果:单纯光疗组和光疗联合白蛋白治疗组患儿在治疗第1天后及出院时其血清总胆红素及间接胆红素水平均显著下降(P0.01)。光疗联合白蛋白治疗组患儿较单纯光疗组患儿出院时血清总胆红素及间接胆红素水平降低程度更高。所有患儿入院及出院时均未发生胆红素脑病。结论:单纯光疗和光疗联合白蛋白治疗均可以有效治疗足月新生儿重度黄疸,预防急性胆红素脑病。