黄芪多糖对兔脂肪来源的间充质干细胞体外增殖的影响

目的黄芪多糖(APS)对兔脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)体外增殖的作用。方法提取兔ASCs进行培养,设实验组和对照组,实验组加入不同浓度APS注射液,对照组加常规培养液,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞的增殖率,比较两组之间的差异。结果 APS浓度为1.95～3.90μg/mL时,对ASCs的增殖无明显影响(P>0.05);而浓度为7.80～1 000μg/mL时,对ASCs的增殖有明显抑制作用(P<0.01);在一定浓度范围内(25～100μg/mL),浓度对细胞增殖的影响不大,而与培养的时间有关,随着作用时间的延长,对ASCs的抑制作用更加明显。结论低浓度APS对兔ASCs体外增殖无影响;高浓度APS对ASCs有明显的抑制作用。     

黄芪甲苷对大鼠海马源神经干细胞体外增殖的影响

目的观察黄芪甲苷对神经干细胞（NSC）体外增殖的影响,为神经干细胞应用于临床提供理论依据。方法利用无血清培养技术,从新生大鼠海马区分离培养NSC,并进行体外扩增、传代。取传至第3代的NSC,观察不同浓度黄芪甲苷（40、80、120mg／L）对其增殖的影响。对神经球形成数进行计数并进行噻唑蓝（MTT）比色分析。结果40mg／L和80mg／L黄芪甲苷实验组神经球形成数和细胞吸光度值均明显高于对照组（神经球形成数：8．1±1．4,8．8±1．3比7．2±1．2;细胞吸光度值：0．87±0．02、0．89±0．03比0．694-0．03,P〈0．05或P〈0．01）,而120mg／L黄芪甲苷组实验组神经球形成数和细胞吸光度值（分别为3．1±1．2、0．30±0．02）低于对照组（P〈0．01）。结论在一定浓度范围内,黄芪甲苷可促进体外培养NSC的增殖。     

高糖抑制内皮细胞增殖的细胞周期调控

目的 研究高浓度葡萄糖(HG)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和细胞周期的影响.方法 以体外培养的HUVEC为模型,采用倒置显微镜观察细胞形态学;噻唑蓝比色法测定细胞的增殖与活性;流式细胞术检测细胞周期以及相关蛋白-增殖性细胞核抗原(PCNA)与细胞周期蛋白D1的表达.结果 HG(20mmol/L、40mmol/L)作用72h后,HUVEC的增殖受到了明显抑制(P＜0.01);48～72h后细胞周期中G0-G1期细胞的百分比增加,与对照组同期比较均有显著差异(P＜0.01);同时PCNA、周期蛋白D1的表达均明显低于对照组(P＜0.01).结论 HG可抑制体外培养的HUVEC增殖,使细胞阻滞于G1期,PCNA及周期蛋白D1表达的下调可能参与了此过程的调控.     

甘草甜素及地塞米松对体外培养足细胞增殖的影响研究

目的通过建立嘌呤霉素(PAN)诱导小鼠足细胞MPC5损伤模型,观察甘草甜素(GL)及地塞米松(DEX)对足细胞及受损足细胞增殖的影响作用,探讨GL在体外培养足细胞损伤中是否具有类似DEX的防护作用。方法体外培养小鼠足细胞,分为对照组、PAN组、GL组、DEX组、PAN+GL组、PAN+DEX组。对照组采用RPMI-1640培养液培养;PAN组加入终浓度50mg/LPAN;GL组加入不同浓度的GL,终浓度分别为50、100、200、400、600、800mg/L;DEX组加入终浓度1μmol/LDEX;PAN+GL组同时加入PAN(终浓度50mg/L)和GL(终浓度分别为50、100、200、400、600、800mg/L);PAN+DEX组同时加入PAN(终浓度50mg/L)和DEX(终浓度1μmol/L),培养24h及48h,采用MTT检测细胞的增殖活性。结果与对照组相比,PAN组24h及48h时足细胞增殖的光密度(A)值均明显降低(P<0.01),抑制率(IE)分别为55.56%、59.10%;GL组中不同浓度组24h时A值较对照组均明显降低(P<0.01),48h时GL50mg/L组A值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各组A值较对照组均明显降低(P<0.01);低浓度GL组(100～400mg/L)对足细胞的IE48h较24h明显下降,高浓度GL组(600～800mg/L)对足细胞的IE48h较24h明显升高。DEX组24、48h足细胞增殖A值较对照组均明显降低(P<0.01),48h时足细胞的IE较24h时差异无统计学意义(P>0.05)。PAN+GL组50～600mg/L浓度范围内,24h、48h时足细胞增殖A值均呈剂量依赖性升高(P<0.01),但PAN+GL组800mg/L浓度时足细胞增殖活性不再增加。PAN+DEX组24、48h时足细胞增殖A值均明显升高(P<0.01)。结论 PAN能显著抑制足细胞增殖,GL及DEX对体外培养的正常足细胞增殖有轻微抑制作用,但二者均能促进受损足细胞的增殖,且GL在一定范围内呈剂量依赖性关系,对PAN诱导足细胞损伤具有类似DEX的防护作用。     

黄芪注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞株的抑制作用研究

目的:研究黄芪注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的体外抑制作用。方法:以不同浓度的黄芪注射液(实验组)作用于人鼻咽癌CNE-2细胞,应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法测定细胞的增殖状态,应用细胞形态学和流式细胞仪观察细胞凋亡,并与未处理的对照组进行比较。结果:与对照组比较,实验组对受试细胞株增殖均有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),且与浓度和作用时间呈正比;实验组细胞发生病理形态改变。结论:黄芪注射液可抑制人鼻咽癌CNE-2细胞株增殖并诱导其凋亡。     

黄芪甲苷对体外培养神经干细胞分化作用的研究

目的观察黄芪甲苷对体外培养神经干细胞分化作用的影响。方法利用无血清培养技术在体外对新生Wistar大鼠海马区与神经干细胞进行培养,观察相同接种密度条件下,不同浓度黄芪甲苷（20mg／L,40ms／L,80mg／L）对神经干细胞分化作用的影响,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞及其分化后细胞。结果从新生大鼠海马区分离出的神经干细胞经鉴定呈nestin阳性,且加入黄芪甲苷组所表达的神经干细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较对照组明显增多（17．60±2．85vs15．65±2．29;24．10±3．13VS21．95±2．37;P〈0．05）。结论黄芪甲苷对体外培养大鼠海马区神经干细胞的分化有促进作用。     

苦参碱对人原代白血病细胞的体外作用研究

目的研究苦参碱对原代人白血病细胞的体外作用及可能的分子机制。方法取临床初诊的髓系白血病患者外周血,分离得到原代白血病细胞体外培养。不同浓度苦参碱作用后,观察细胞的形态学改变、CCK8法检测细胞增殖、Annexin V-FITC/PI分析细胞凋亡及流式检测细胞周期。结果苦参碱作用24 h,细胞增殖明显受抑,0.5、0.8 mg/m L组的生长抑制率分别为54.98%和72.96%,与对照组相比差异显著(P<0.01),抑制效应有明显剂量相关性。苦参碱作用24 h的IC50为0.5 mg/m L。苦参碱作用24 h,0.2、0.5、0.8 mg/m L组细胞早期凋亡率分别为11.8%、37.6%、54.7%,明显高于对照组自发凋亡率(7.50%)(P<0.05)。苦参碱作用48 h后,细胞周期阻滞于G0/G1→S期。结论苦参碱可显著抑制体外培养的人原代白血病细胞增殖,其机制与诱导细胞早期凋亡,促进细胞周期G1→S期阻滞有关。     

黄芪甲苷对Th2型淋巴细胞D10.G4.1体外作用的研究

目的探讨黄芪甲苷对Th2型淋巴细胞株(D10.G4.1,D10)体外的干预作用。方法体外培养D10细胞,采用ConA作为刺激剂,分别予以2、4、8×10-5mol·L-1剂量黄芪甲苷体外干预,并用地塞米松作为对照。CCK-8法检测药物对D10细胞的增殖影响;流式细胞术检测药物对D10细胞凋亡和周期的影响;ELISA法检测药物对细胞培养上清IL-4、IL-5、IL-13及TNF-α水平的影响;Western blot法检测D10细胞gata-3表达水平。结果黄芪甲苷各剂量组对D10细胞增殖及凋亡均无明显影响(P>0.05);但黄芪甲苷高剂量组IL-13与gata-3表达水平明显下降(P<0.01),而低剂量组TNF-α明显下降(P<0.01)。结论黄芪甲苷体外具有抑制Th2反应的作用,但与药物细胞毒性或诱导凋亡无关。     

黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖作用影响的研究

目的探讨黄芪甲苷(astragaloside,AS)对神经干细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠胎鼠神经干细胞,Nestin免疫化学染色鉴定NSCs,BrdU标记鉴定NSCs增殖。BrdU标记免疫细胞化学染色检测神经干细胞增殖能力。实时定量PCR技术探讨黄芪甲苷促进NSCs增殖的作用机制。结果Nestin鉴定为阳性,Brdu标记亦呈阳性;BrdU标记结果表明,黄芪甲苷高、中、低剂量组NSCs的增殖率明显提高(P<0.05,P<0.01)。实时定量PCR结果表明在诱导NSCs增殖过程中,黄芪甲苷高剂量组Hes5基因表达增加(P<0.05)。结论黄芪甲苷对NSCs增殖具有明显的诱导作用,其可能通过上调与细胞增殖相关基因Hes1、Hes5、cyclinD1表达而起作用,但也可能调节与其它增殖通路有关。     

黄芪、红芪小分子提取物对间充质干细胞体外增殖与遗传稳定性的考察

目的:探讨黄芪、红芪小分子提取物对骨髓间充质干细胞(mesenehymal stem cells, MSCs)体外增殖的影响。方法:利用水提法结合超滤法提取黄芪、红芪中小分子物质,并筛选其促进MSCs增殖的最佳浓度。设单独培养的MSCs为对照组,黄芪、红芪最佳浓度分别培养72 h后MSCs为实验组,于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态学的改变;采用四唑蓝(MTT)法检测各组细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞周期;染色体显色、计数与原子力显微镜法(atomic force microscope,AFM)分析细胞染色体。结果:黄芪质量浓度60 mg·L^-1、红芪质量浓度20 mg·L^-1为最佳促进MSCs增殖质量浓度(P<0.05)。倒置相差显微镜下观察对照组细胞呈成纤维细胞样;黄芪组、红芪组细胞呈长梭形,形态类似于对照组。与对照组比较,黄芪组、红芪组细胞生长速度均显著增快(P<0.05);细胞周期G₀/G₁期细胞减少,S期和G₂/M期细胞增多,但差异无统计学意义(P>0.05);染色体无异常改变(P>0.05)。结论:黄芪、红芪小分子提取物分别为60,20 mg·L^-1体外培养MSCs 72 h后,对其增殖有明显促进作用,且维持其遗传物质染色体的稳定性。     

黄芪多糖与黄芪甲苷配伍对辐射损伤模型小鼠的保护作用

目的:研究黄芪多糖与黄芪甲苷配伍对辐射损伤模型小鼠的保护作用。方法:100只雌性ICR小鼠随机分为正常对照(等容生理盐水)组、黄芪多糖对照(80 mg/kg)组、黄芪甲苷对照(80 mg/kg)组、模型(等容生理盐水)组、黄芪多糖(80 mg/kg)组、黄芪甲苷(80 mg/kg)组与联合用药①、②、③、④(黄芪多糖80、40、20、80 mg/kg+黄芪甲苷20、40、80、80 mg/kg)组。灌胃给药,每天1次,连续14 d。末次给药后小鼠接受60Coγ射线(剂量:5 cy)一次性全身辐射以复制辐射损伤模型。测定小鼠30 d存活率和死亡小鼠平均存活时间;肝脏HE染色光镜下观察小鼠肝组织形态学;测定小鼠外周血白细胞数、骨髓细胞DNA含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠30 d存活率降低,死亡小鼠平均存活时间缩短;小鼠肝细胞广泛肿胀,出现大滴性脂肪变、气球样变,肝脏细胞点状坏死严重,炎性因子大面积浸润组织;外周白细胞计数减少;骨髓细胞DNA含量减少;血清SOD活性减弱,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,联合用药①、②、③、④组小鼠30 d存活率升高,死亡小鼠平均存活时间延长,外周白细胞计数增加,骨髓细胞DNA含量增加,小鼠肝细胞形态学明显改善;联合用药①、②、③组小鼠血清中SOD活性增强,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪多糖与黄芪甲苷配伍是通过多靶点发挥作用,其中黄芪多糖与黄芪甲苷质量比为4∶1时配伍效果最佳。     

神经生长因子(NGF)对兔角膜缘干细胞增殖的影响

目的:探讨神经生长因子(NGF)对兔角膜缘干细胞增殖作用的影响及最佳有效浓度。方法:取成年大耳白兔角膜缘组织,应用组织块消化培养法进行原代培养,取第2代生长状态良好的干细胞,以5×103个/m l细胞浓度接种于96孔细胞培养板中,依次加入不同浓度的NGF,培养48h后,采用M TT法测定细胞增殖情况。结果:10ng/m l、50ng/m l、100ng/m l、200ng/m l不同浓度组的NGF均有促进角膜缘干细胞的增殖作用,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。1ng/m l组与对照组、50ng/m l组与200ng/m l组比较差异均无显著性(P>0.05)。结论:NGF可有效促进培养角膜缘干细胞的生长,培养的适宜浓度为10~100 ng/m l,为角膜缘干细胞移植患者术后及角膜外伤或溃疡时局部应用NGF提供了理论依据。     

培养胎兔角膜缘干细胞移植治疗兔眼碱烧伤的实验研究

目的 探讨羊膜为载体培养的胎兔角膜缘干细胞移植治疗兔角膜缘碱烧伤的效果。方法 将胎兔角膜缘干细胞原代培养于羊膜上7d后。移植于兔角膜缘碱烧伤动物模型眼，并对治疗后的角膜进行临床及病理学检查。结果 体外培养的胎兔角膜缘干细胞可在羊膜上保持高增殖力。并分化为密集的角膜上皮细胞层。角膜缘干细胞移植术后兔角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少，与对照组和单纯羊膜移植组相比其临床评分差异有显著意义。结论 胎兔角膜缘干细胞移植术治疗角膜碱烧伤可有效重建眼表，为临床应用胎儿角膜缘干细胞进行眼表重建奠定了实验基础。     

黄芪甲苷调控自噬减轻氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞氧化应激损伤研究

目的观察黄芪甲苷对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞自噬和氧化应激的影响。方法将PC12细胞分为正常组、模型组(即氧糖剥夺/复氧复糖组)、黄芪甲苷组、自噬抑制剂+黄芪甲苷组。用CCK-8法检测细胞活性;ELISA法检测MDA含量、SOD和GSH-Px活性;透射电镜和MDC荧光染色检测自噬小体;Western blot检测Beclin1蛋白表达。结果与正常组相比,模型组细胞活性降低(P<0.05),MDA含量增多、SOD和GSH-Px活性下降(P<0.05),可见自噬小体,Beclin1表达增多(P<0.05);与模型组相比,黄芪甲苷组细胞活性升高(P<0.05),MDA含量减少、SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),自噬小体数量增多(P<0.05),Beclin1表达增多(P<0.05);当给予自噬抑制剂处理时,自噬抑制剂在减轻自噬的同时,可明显拮抗黄芪甲苷的抗氧化作用。结论黄芪甲苷可通过上调自噬减轻氧糖剥夺/复氧复糖诱导的PC12细胞氧化应激损伤,发挥保护作用。     

组织工程化骨修复兔桡骨缺损的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(marrow stromal stem cells,MSCs)离体培养后与生物衍生骨(bio-derivcd bone,BDB)复合修复兔桡骨的节段性骨缺损的可行性.方法 将25只健康成年新西兰大白兔双侧桡骨制备成中段15mm的骨缺损,其中20只,将MSCs与生物衍生骨于体外复合培养后,通过手术将其植入右侧桡骨缺损处作为实验组;以单纯生物衍生骨植入左侧桡骨缺损处作为对照组:另5只为空白组不植入任何材料,在2、4、、8、12周各时间点分别行大体标本X线放射学检查、组织学观察,比较3组骨缺损修复的能力.结果 术后2、4、8、12周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成,有显著性差异(P＜0.05).术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著性差异(P＜0.05).空白对照组各时点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填.结论 生物衍生骨能够与兔骨髓间充质干细胞体外复合培养,移植入异体新西兰大白兔后未见明显免疫排斥反应,是可以选择的细胞载体.MSCs/BDB复合物植入修复兔桡骨缺损能够加速新骨形成,修复能力明显优于单纯生物衍生骨植入.     

Gene-modified adult stem cells regenerate vertebral bone defect in a rat model

Vertebral compression fractures (VCFs), the most common fragility fractures, account for approximately 700,000 injuries per year. Since open surgery involves morbidity and implant failure in the osteoporotic patient population, a new minimally invasive biological solution to vertebral bone repair is needed. Previously, we showed that adipose-derived stem cells (ASCs) overexpressing a BMP gene are capable of inducing spinal fusion in vivo. We hypothesized that a direct injection of ASCs, designed to transiently overexpress rhBMP6, into a vertebral bone void defect would accelerate bone regeneration. Porcine ASCs were isolated and labeled with lentiviral vectors that encode for the reporter gene luciferase (Luc) under constitutive (ubiquitin) or inductive (osteocalcin) promoters. The ASCs were first labeled with reporter genes and then nucleofected with an rhBMP6-encoding plasmid. Twenty-four hours later, bone void defects were created in the coccygeal vertebrae of nude rats. The ASC-BMP6 cells were suspended in fibrin gel (FG) and injected into the bone void. A control group was injected with FG alone. The regenerative process was monitored in vivo using microCT, and cell survival and differentiation were monitored using tissue specific reporter genes and bioluminescence imaging (BLI). The surgically treated vertebrae were harvested after 12 weeks and subjected to histological and immunohistochemical (against porcine vimentin) analyses. In vivo BLI detected Luc-expressing cells at the implantation site over a 12-week period. Beginning 2 weeks postoperatively, considerable defect repair was observed in the group treated with ASC-BMP6 cells. The rate of bone formation in the stem cell-treated group was two times faster than that in the FG-treated group, and bone volume at the end point was 2-fold compared to the control group. Twelve weeks after cell injection the bone volume within the void reached the volume measured in native vertebrae. Immunostaining against porcine vimentin indicated that the ASC-BMP6 cells contributed to new bone formation. Here we show the potential of injections of BMP-modified ASCs to repair vertebral bone defects in a rat model. Our results could pave the way to a novel approach for the biological treatment of traumatic and osteoporosis-related vertebral bone injuries.     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导大鼠 心肌肥厚的保护作用研究

摘要：目的 探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素（ISO）诱导的大鼠心肌肥厚的保护作用机制。方法 健康SPF级SD 大鼠24只,随机分为4组,对照组（与ISO组等体积的生理盐水腹腔注射,之后与黄芪甲苷组等体积生理盐水灌胃）、 ISO组［ISO 3 mg/ （kg·d）腹腔注射,与黄芪甲苷等体积生理盐水灌胃］、黄芪甲苷组［与ISO等体积生理盐水腹腔注射, 黄芪甲苷溶液5 mg/ （kg·d）灌胃］、黄芪甲苷+ISO组［ISO 3 mg/ （kg·d）腹腔注射,黄芪甲苷溶液5 mg/ （kg·d）灌胃］,每 组6只,共处理14 d。处理结束后取大鼠左心室,计算左心室质量指数（左心室质量/体质量）。HE染色观察左心室心 肌肥厚情况,比较心肌横截面积的差异。以二氯荧光素（DCF）为探针检测心肌线粒体活性氧（ROS）生成速率; Western blot 法检测大鼠心肌NADPH氧化酶4（NOX4）和心房利钠肽（ANP）蛋白表达水平;RT-qPCR检测大鼠心肌 ANP在转录水平的表达情况。结果 与对照组相比,ISO组左心室质量指数明显升高,心肌横截面积扩大,心肌线粒 体ROS生成速率加快,NOX4蛋白、ANP mRNA及蛋白表达水平均明显升高（P < 0.05）。而ISO+黄芪甲苷组与ISO组 相比,上述指标均明显改善,主要表现为心肌横截面积缩小,ROS生成速率减慢,NOX4蛋白、ANP mRNA及蛋白表达 明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 黄芪甲苷对ISO诱导的大鼠心肌肥厚具有确切的保护作用,且该 保护作用可能与黄芪甲苷降低氧化应激反应相关。     

黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的影响(英文)

目的 :探讨黄芪活性成分黄芪甲苷对小鼠病毒性心肌炎心肌纤维化的影响。方法 :BALB/C小鼠 10 0只 ,随机分成 6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液 ,分为正常对照组 (A组 ,12只 ,以生理盐水 0 .1mL灌胃 7d)、9%黄芪甲苷对照组(B组 ,16只 ,9%黄芪甲苷 0 .1mL灌胃 7d) ;余 72只小鼠以柯萨奇病毒 (CVB3)腹腔无菌注射制作病毒性心肌炎模型 ,模型小鼠随机分为心肌炎对照组和 1% ,3% ,9%黄芪甲苷干预心肌炎组 ,分别以生理盐水 ,1% ,3%和 9%黄芪甲苷 0 .1mL灌胃 7d (分别为C ,D ,E ,F组 ,每组 18只 )。 14d后处死小鼠 ,以ELISA法检测血清胶原前肽 (PIP和PII INP)浓度 ,心脏组织用天狼星红染色后测定胶原容积积分 (CVF) ,以流式细胞仪检测心肌细胞凋亡指数。结果 :9%黄芪甲苷干预心肌炎组小鼠较心肌炎对照组死亡率明显降低 [2 2 % (4/ 18)vs 4 4%(8/ 18) ,P <0 .0 5 ],9%黄芪甲苷对照组无小鼠死亡 ;与心肌炎对照组相比 ,CVF以及血清PIP和PIIINP浓度在 9%黄芪甲苷干预心肌炎组显著下降 (分别为 (10±s 3) %vs (2 1± 8) % ,(1.4±0 .6 )mg·L- 1vs (3.0± 1.9)mg·L- 1,(2 2± 4 )mg·L- 1vs (2 9± 5 )mg·L- 1,均P <0 .0 1) ,而 1%和 3%黄芪甲苷对心肌炎小鼠生存率和血清胶原前肽无明显影响 ;心肌细胞凋亡指?