地塞米松对变应性哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的 探讨地塞米松对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其mRNA表达的影响.方法 30只清洁级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组.以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,末次激发24 h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织.BALF行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测BALF中TARC和IL-4水平;免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TARC蛋白和TARC mRNA在肺组织中的表达.结果 ①哮喘组BALF中细胞总数,EOS绝对数和EOS占细胞总数的百分数(EOS%)均显著高于正常对照组,地塞米松组上述指标均显著低于哮喘组(均P＜0.01);②哮喘组BALF中TARC,IL-4浓度均显著高于对照组,地塞米松干预后BALF中TARC,IL-4浓度均显著低于哮喘组(均P＜0.01).③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中TARC蛋白及其mRNA的表达,哮喘组显著高于对照组,地塞米松组较哮喘组显著减弱(均P＜0.01),免疫组化显示,TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞.④相关性分析显示,小鼠BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度均呈显著正相关(均P＜0.01).结论 糖皮质激素(地塞米松)可抑制TARC在哮喘小鼠气道上皮中的表达,可能是其治疗哮喘气道炎症的部分作用机制.     

心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制

目的探讨心房钠尿肽(ANP)信号通路在小鼠支气管哮喘(BA)发病中的作用及其机制。方法 40只雌性BALB/C小鼠随机分为正常对照组、BA组、ANP组和ANP+A71915组,每组10只;建立BA小鼠模型和ANP在体干预模型,观察各组小鼠支气管炎症改变情况和支气管黏液分泌情况,采用免疫组织化学技术检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果 BA组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较正常对照组显著(P<0.01),ANP组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较BA组更严重(P<0.01),ANP+A71915组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较ANP组明显减轻(P<0.01)。BA组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著高于正常对照组(P<0.01),ANP组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著高于BA组(P<0.01),ANP+A71915组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著低于ANP组(P<0.01)。BA组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.01),ANP组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达明显低于BA组(P<0.01),ANP+A71915组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达明显高于ANP组(P<0.01)。结论 ANP信号可能通过调控T-bet和GATA-3蛋白的表达参与BA小鼠免疫功能失衡的发病过程。     

小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达TSLP的影响研究

目的 探讨小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响.方法 将30只健康雌性BALB/C小鼠分为空白对照组、哮喘模型组、小青龙汤组,每组10只.各组采取相应干预措施后取支气管、肺组织,免疫荧光检测支气管TSLP的表达水平,qRT-PCR和Western blot分别检测肺组织TSLP mRNA和蛋白表达水平.结果 小鼠支气管上皮细胞膜上TSLP荧光染色在哮喘模型组呈强阳性,小青龙汤组呈弱阳性,空白对照组呈阴性.小青龙汤组与空白对照组小鼠肺组织 TSLP mRNA表达水平较哮喘模型组降低(P<0.05),小青龙汤组略高于空白对照组,但组间差异无统计学意义(P>0.05).小青龙汤组与空白对照组小鼠肺组织TSLP蛋白表达水平均低于哮喘模型组(P<0.05),小青龙汤组较空白对照组略高,但组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达TSLP有明显抑制作用.     

穴位敷贴对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡及其调控基因的影响

目的探讨穴位敷贴治疗哮喘的机理。方法将40只豚鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、穴位敷贴治疗组、地塞米松治疗组,每组10只。处理结束后采用TUNEL法检测支气管肺泡组织EOS凋亡;免疫组化法检测凋亡相关基因Fas、Fas配体(FasL)、bcl-2表达。结果模型组豚鼠支气管肺组织EOS凋亡指数及Fas、FasL、bcl-2表达与正常对照组比较差异均无显著性。穴位敷贴组和地塞米松组EOS凋亡指数及Fas、FasL表达明显高于模型组(P<0.01);地塞米松组和穴位敷贴组之间有显著性差异,前者明显高于后者(P<0.01)。穴位敷贴组bcl-2表达低于模型组(P<0·05);地塞米松组和模型组之间差异无显著性。结论穴位敷贴可以上调支气管肺泡组织促凋亡基因Fas及其配体FasL表达、下调凋亡抑制基因bcl-2表达、促进哮喘主要炎性细胞EOS凋亡。这可能是其治疗哮喘的作用机理之一。     

甲泼尼龙对哮喘模型MMP-9的表达及对气道炎症的影响

目的 探讨甲泼尼龙(MP)对哮喘小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和气道炎症的影响.方法 30只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为哮喘组、MP治疗组和生理盐水对照组,每组10只.采用鸡卵清白蛋白(OVA)腹腔注射和滴鼻的方法 建立小鼠急性哮喘模型,HE染色观察肺组织病理学改变,并进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.采用免疫组化法和明胶酶谱法测定MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达.结果 哮喘组病理切片显示明显的气道痉挛,大量炎性细胞浸润,BALF细胞计数中嗜酸性粒细胞明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);而MP治疗组病理切片显示气道痉挛程度和炎性细胞浸润均减轻,BALF中嗜酸性粒细胞减少,与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05).免疫组化和明胶酶谱分析均显示哮喘组较对照组MMP-9蛋白表达明显增加.RT-PCR结果 显示,哮喘组MMP-9 mRNA表达增多,而MP治疗组较哮喘组表达降低.结论 MMP-9在哮喘小鼠肺组织中表达增高可能是导致哮喘急性炎症的机制之一.MP也可能通过抑制MMP-9表达抑制哮喘的炎症反应.     

甲泼尼龙对哮喘模型MMP-9的表达及对气道炎症的影响

目的 探讨甲泼尼龙(MP)对哮喘小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和气道炎症的影响.方法 30只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为哮喘组、MP治疗组和生理盐水对照组,每组10只.采用鸡卵清白蛋白(OVA)腹腔注射和滴鼻的方法 建立小鼠急性哮喘模型,HE染色观察肺组织病理学改变,并进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.采用免疫组化法和明胶酶谱法测定MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达.结果 哮喘组病理切片显示明显的气道痉挛,大量炎性细胞浸润,BALF细胞计数中嗜酸性粒细胞明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);而MP治疗组病理切片显示气道痉挛程度和炎性细胞浸润均减轻,BALF中嗜酸性粒细胞减少,与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05).免疫组化和明胶酶谱分析均显示哮喘组较对照组MMP-9蛋白表达明显增加.RT-PCR结果 显示,哮喘组MMP-9 mRNA表达增多,而MP治疗组较哮喘组表达降低.结论 MMP-9在哮喘小鼠肺组织中表达增高可能是导致哮喘急性炎症的机制之一.MP也可能通过抑制MMP-9表达抑制哮喘的炎症反应.     

支气管哮喘小鼠模型肺组织和肺泡灌洗液高迁移率族蛋白B1的表达及地塞米松的干预作用

目的 探讨支气管哮喘小鼠模型肺组织和肺泡灌洗液的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达变化及地塞米松的干预作用.方法 18只雌性Balb/C小鼠,随机分成3组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,鸡卵白蛋白(OVA)组,OVA/地塞米松治疗组;制作支气管哮喘模型;全身体积描记法检测小鼠气道反应性,支气管肺泡灌洗液(BALD作细胞分类计数,酶联免疫吸附试验(EUSA)测定BALF上清中HMGB1含量,左肺行苏木精-伊红(HE)染色,蛋白免疫印迹方法检测右肺组织HMGB1表达.结果 1、成功制作支气管哮喘模型.2、BALF中HMGB1含量变化:OVA组肺泡灌洗液中HMGB1含量(6.31±4.05ng/ml)显著高于对照组(2.59±0.73ng/ml)(P=0.017);与OVA组比较,OVA/地塞米松组(3.39±0.50ng/ml)小鼠支气管肺泡灌洗液HMGB1含量无显著降低(P=0.052).3、肺组织HMGB1的表达情况:OVA组小鼠肺组织HMGB1相对表达量(HMGB1/TUBULIN)(2.08±0.87)显著高于对照组(0.93±0.18)(P<0.05);与OVA组比较,OVA/地塞米松组小鼠肺脏HMGB1表达量(1.15±0.48)无显著减低(P=0.133).结论 HMGB1在支气管哮喘小鼠的肺组织和支气管肺泡灌洗液中表达明显增加,但地塞米松无明显拮抗效果.提示HMGB1可能是哮喘防治的新靶点.     

砒石对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子6及嗜酸粒细胞趋化因子mRNA表达的影响

目的观察砒石对哮喘小鼠肺组织中信号转导和转录激活因子6(STAT6)、嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)表达的影响,探讨砒石防治哮喘的作用机制。方法56只昆明种雌性小鼠随机分为7组(n=8):正常对照组,哮喘模型组,地塞米松组,砒石0.575 mg/kg(AS0.575)组,砒石1.15 mg/kg(AS1.15)组,砒石2.3 mg/kg(AS2.3)组,砒石4.6 mg/kg(AS4.6)组;建立卵蛋白(OVA)哮喘模型,测定各组肺功能,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)计数;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中STAT6、eotaxin mRNA表达水平。结果小鼠致敏3周及激发3 d后,肺功能测定表现为呼气相时间明显延长,呼气相最大压力明显增大,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01);哮喘组BALF中白细胞总数及EOS计数,肺组织STAT6、eotaxin mRNA表达水平较正常对照组明显升高(P<0.01);经地塞米松和不同剂量砒石处理后哮喘小鼠BALF中白细胞总数、EOS计数、肺组织中STAT6和eotaxin mRNA的表达水平较哮喘组下降(P<0.01),砒石对STAT6和eotaxin mRNA表达的抑制作用呈剂量效应关系。结论STAT6和eotaxin在哮喘气道炎症的发生、发展中起重要作用;砒石可显著抑制哮喘小鼠肺组织中STAT6和eotaxin mRNA表达,降低哮喘小鼠BALF中白细胞总数及EOS计数,减轻哮喘气道黏膜炎症。     

地塞米松对哮喘小鼠Th17细胞因子IL-17表达的影响

目的 初步探讨地塞米松对哮喘小鼠肺组织中Th17细胞因子IL-17的影响及其机制.方法 采用卵清蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,Balb/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用EUSA检测小鼠肺泡灌洗液、IL-17水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症程度;RT-PCR检测肺组织IL-17、RORγtmRNA表达水平.免疫组织化学方法检测肺组织RoRγt脚蛋白表达水平.结果 哮喘组小鼠肺组织RORγt、IL-17mRNA和蛋白水平均高于对照组(P<0.01),地塞米松治疗组RORγt、IL-17mRNA和蛋白水平均低于哮喘组(P<0.05).结论 地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织RORγt表达,阻止Th17的分化,从而减少IL-17的分泌,减轻哮喘气道炎症反应.     

miRNA-26a在支气管哮喘患儿及哮喘小鼠模型中高表达

目的:探讨miRNA-26a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中的表达?方法:应用real-time PCR法检测支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞中miRNA-26a与正常儿童的表达差异?采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导支气管哮喘小鼠模型,通过检测肺泡灌洗液(BALF)中细胞数及组织病理验证模型建立?应用real-time PCR法检测支气管哮喘小鼠模型肺组织miRNA-26a与对照组的表达差异?采用Western blot 法检测小鼠肺组织GSK-3β的表达差异?结果:支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miRNA-26a显著高于正常对照组?OVA诱导的支气管哮喘小鼠模型组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数显著高于正常对照组?组织病理显示支气管哮喘模型组炎症细胞浸润明显高于正常对照组?支气管哮喘小鼠模型组肺组织miRNA-26a显著高于正常对照,GSK-3β蛋白水平明显低于正常对照组?结论:miRNA-26a在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达?     

小青龙汤加减对支气管哮喘慢性持续期患者PEF的影响

目的 观察小青龙汤加减治疗支气管哮喘慢性持续期寒饮停肺证对患者肺功能呼气峰流速(PEF)值的影响.方法 将80例支气管哮喘慢性持续期患者随机分为治疗组和对照组各40例.2组均采用西药常规治疗,治疗组同时加服小青龙汤加减.两组疗程均为2周.观察两组治疗前后的PEF值变化.结果 治疗后两组患者的PEF值均有改善(P<0.01),但治疗组的改善优于对照组(P<0.01).结论 小青龙汤加减对支气管哮喘慢性持续期寒饮停肺证患者的PEF值有显著的改善作用.     

小青龙汤治疗支气管哮喘急性发作期临床疗效观察

目的:探讨小青龙汤治疗支气管哮喘发作期的临床疗效和安全性评价。方法:将64例支气管哮喘急性发作期患者随机分为中药治疗组和对照组,两组均给予西医常规治疗,中药治疗组在西医常规治疗基础上给予小青龙汤口服,给药1周后,评价两组患者的疾病、证候积分、外周血嗜酸粒细胞计数、肺功能改善及安全性。结果:中药治疗组和对照组相比,疾病临床疗效、肺功能改善、外周血嗜酸粒细胞计数无显著性差异(P>0.05);但两组治疗后中医证候积分及主要症状喘息、咳嗽、胸膈满闷、哮鸣音单项计分比较有显著性差异(P<0.05),中药治疗组优于西药对照组。两组均未见不良反应。结论:加味小青龙汤治疗哮喘急性期有较好疗效,尤其对哮喘主要症状喘息、咳嗽、胸膈满闷、哮鸣音的改善方面具有优势,且用药安全。     

小青龙汤对哮喘炎性反应的作用及其机制探讨

目的：探讨小青龙汤对哮喘豚鼠免疫炎性反应介质—免疫球蛋白E（IgE）水平和嗜酸性粒细胞浸润的影响。方法：将48只荷兰种豚鼠随机分为正常对照组、模型组、氨茶碱组（50mg/kg）、小青龙汤高、中、低剂量组（4.5g/kg、1.5g/kg、0.5g/kg）,每组8只。采用卵清蛋白腹腔注射后雾化吸入建立豚鼠过敏性哮喘模型,通过酶联免疫方法测定血清中IgE的含量,逆转录-链式聚合酶法半定量测定肺组织白细胞介素5（IL-5）基因和巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因表达量。结果：与模型组比较,小青龙汤治疗组可降低血清IgE含量和IL-5、GM-CSF基因的表达量,且差异均有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）。结论：小青龙汤可通过降低哮喘豚鼠的血IgE含量和IL-5、GM-CSF基因的过度表达,减少肺内EOS的浸润,减轻IgE介导的气道炎症反应。     

小青龙汤治疗支气管哮喘急性发作期临床研究

目的：探讨小青龙汤治疗支气管哮喘发作期的临床疗效和安全性。方法：将40例支气管哮喘急性发作期患者随机分为小青龙汤组和西医常规治疗组，给药1周后，评价两组患者的病情、证候积分、外周血嗜酸粒细胞计数、肺功能改善及安全性情况。结果：小青龙汤和西医常规治疗相比，疾病临床疗效、证候积分、外周血嗜酸粒细胞计数、肺功能改善无显著性差异（P〉0．05）；但两组治疗后主要症状喘息、哮鸣音、胸闷、咯痰单项计分比较有显著性差异（P〈0．05），小青龙汤组优于西药对照组。两组均未见不良反应。结论：小青龙汤治疗哮喘急性期有较好疗效，尤其对哮喘主要症状喘息、哮呜音、胸闷、咯痰的改善方面具有优势，且用药安全。     

小青龙汤治疗小儿寒性哮喘32例临床观察

目的:观察小青龙汤加减治疗小儿哮喘的临床疗效。方法:将61例哮喘患儿随机分成两组。对照组29例给予常规西药治疗,治疗组32例给予口服小青龙汤加减治疗。比较两组病例治疗后临床疗效。结果:经治疗后对照组总有效率为79.31%,治疗组总有效率为93.75%,治疗后两组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小青龙汤加减治疗小儿寒性哮喘的临床疗效优于单纯应用西药治疗,值得临床推广。     

小青龙汤加味联合孟鲁司特钠治疗小儿咳嗽变异性哮喘患儿的效果

目的：观察小青龙汤加味联合孟鲁司特钠治疗小儿咳嗽变异性哮喘患儿的效果。方法：选取72例小儿咳嗽变异性哮喘患儿为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组各36例。对照组给予孟鲁司特钠治疗,观察组在对照组基础上联合小青龙汤加味治疗。比较两组治疗前后血清免疫球蛋白E(IgE)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和呼出气一氧化氮(FeNO)水平,用药第1、14天呼气峰流速(PEF)日间变异率,第1、2周PEF变异率及出院后4个月复发率。结果：治疗后,两组IgE、ICAM-1、TGF-β₁、FeNO水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);第14天,两组PEF日间变异率均明显低于第1天,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);第2周,两组PEF周变异率均低于第1周,且观察组第1、2周PEF周变异率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组复发率为2.78%,明显低于对照组的22.22%,差异有统计学意义(P<0....     

小青龙汤加减治疗过敏性鼻炎并哮喘42例疗效观察

目的:观察小青龙汤在治疗哮喘急性发作期合并过敏性鼻炎中的临床疗效。方法:将80例患者随机分为两组。治疗组42例在西医常规治疗基础上加用小青龙汤治疗,对照组38例予西医常规治疗。结果:两组总有效率相近,但治疗组临床控制率明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05),治疗组肺通气功能改善优于对照组,其血清IgE及外周血嗜酸细胞(EOS)较治疗前明显下降。结论:小青龙汤加减治疗过敏性鼻炎并哮喘有良好的疗效。     

服用小青龙汤后的变证及处理

小青龙汤作为《伤寒论》中的一首经典方剂,现临床多用于外寒内饮或里外皆寒之慢性支气管炎、支气管哮喘、顽固性喘咳及眩晕、水肿等病,若辨证准确,往往投剂辄效,立竿见影,因此临床中使用小青龙汤的机会较多。然而,或因医家辨证不准,识症不确,对小青龙汤的使用禁忌心中不明,或因病家不遵医嘱,见其有效,过服多用,往往会发生意想不到的变证,给临床诊治造成困扰,因此准确掌握小青龙汤的应用指征及变证处理很有必要。     

小青龙汤对小儿哮喘激素干预的增效作用及免疫调节观察

目的 研究小青龙汤对小儿哮喘激素干预的增效作用及免疫调节作用.方法 选择我院满足诊断标准的69例小儿哮喘者为研究样本,以随机数字表法分为观察组(n=35例)与对照组(n=34),两组均行舒利迭雾化吸入治疗,观察组另给予小青龙汤治疗,1周为1个疗程,采用中医证候积分评价两组治疗疗效,同时观察1个疗程后肺功能指标用力肺活量(FVC)、1s用力呼气容积(FEV1)、最大通气量(MVV)变化,比较两组免疫指标免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G(IgG),同时观察T淋巴细胞CD4+、CD8+、CD4+/CD8+治疗前后差异,比较两组治疗期间不良反应发生率,同时建立CD4+/CD8+对治疗疗效的评估模型.结果 观察组中医证候总有效率为97.1%,显著高于对照组82.4%(P<0.05);两组治疗后FVC、FEV1、MVV均高于治疗前(P<0.05),观察组FVC、FEV1、MVV高于对照组,其中FEV1与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后IgA、IgG较治疗前及对照组显著升高,IgE较治疗前及对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),对照组治疗前后免疫指标均无显著变化(P>0.05);治疗后两组CD4+较治疗前降低(P<0.05),观察组CD4+低于对照组,CD8+高于对照组,CD4+/CD8+低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组均未见严重不良反应,不良反应发生率对照组5.88%(2/34)与观察组8.57%(3/35)比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后无效患儿CD4+/CD8+较高,CD4+/CD8+值达2.17时,患儿无效率较高.结论 小青龙汤联合激素治疗小儿轻中度急性哮喘有良好的协同作用,用药无明显不良反应,对中医证候及肺功能的改善优于单一西药治疗,其机制考虑与增强患儿免疫力有关.