内质网应激在二十碳五烯酸抵抗棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡中的作用

目的:研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,E PA)抵抗棕榈酸(palimitate,PA L)诱导的心肌细胞凋亡中的作用。方法:将培养的心肌细胞随机分为对照组、PAL处理组、EPA+PAL组、毒胡萝卜素(thapsigargin)+EPA+PAL组、thapsigargin组及thapsigargin+EPA组。采用CCK-8检测细胞活力、Tunel染色检测细胞凋亡率、Western印迹检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和钙网蛋白(calreticulin,CRT),以及ERS促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、JNK和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达。结果:与对照组比较,PAL处理可显著降低心肌细胞活力,促进细胞凋亡,激活ERS应激相关GRP78和CRT,以及ERS促凋亡蛋白CHOP,p-JNK及活化的caspase-12(cleaved caspase-12)的表达(P<0.0 5)。相比于PA L组,E PA+PA L预处理可使PA L诱导的心肌细胞活力显著升高,GRP78,CRT,CHOP,cleaved caspase-12及p-JNK蛋白表达明显降低(P<0.05),且使细胞凋亡率由43.9%降低至24.07%(P<0.05)。添加ER S特异性激活剂thapsigarg in激活ERS后,与EPA+PAL组相比,thapsigargin+EPA+PAL组ERS应激相关蛋白GRP78和CRT蛋白表达比率显著升高,ERS促凋亡蛋白CHOP,JNK及caspase-12上调,心肌细胞活力下降,凋亡率增加。此外,与对照组比较,单独添加thapsigargin激活ERS,显著降低细胞活性,促进细胞凋亡,而EPA+thapsigargin组却明显逆转了thapsigargin对心肌细胞的促凋亡效应。结论:EPA可有效抑制PAL诱导的大鼠心肌细胞凋亡,其保护机制可能与抑制PAL诱导的心肌细胞ERS激活,进而抑制caspase依赖的级联凋亡反应有关。     

淀粉样β蛋白1-40对胚胎大鼠皮质神经前体细胞毒性损伤的c-Jun氨基端激酶信号转导的影响

背景：淀粉样β蛋白是阿尔茨海默病致病关键因素之一。近来的研究证明在成人中枢神经系统内存在能不断自我更新、多向分化潜能、终身神经修复的神经干细胞。但是在阿尔茨海默病脑内却未见到这些神经前体细胞的起到有效作用，其机制尚未清楚。淀粉样β蛋白1-40是否通过c-Jun氨基端激酶信号转导通路对胚胎大鼠皮质神经前体细胞造成神经毒性损害尚不清楚。 目的：体外实验淀粉样β蛋白1-40对胚胎中皮质神经前体细胞毒性作用中c-Jun氨基端激酶信号转导通路的可能作用机制，探讨c-Jun氨基端激酶抑制剂SP600125对淀粉样β蛋白1-40致胚胎中皮质神经前体细胞神经毒性作用的保护作用。 设计：以细胞为观察对象，随机对照实验。 单位：中国医科大学附属第一医院神经内科。 材料：实验于2005-05／10在中国医科大学中心实验室完成。选用10只孕14 d Wistar大鼠，取其胚胎以备实验。方法：取Wistar大鼠胚胎脑皮质组织神经前体细胞，体外培养、传代、鉴定。将生长状态良好的胚胎大鼠皮质神经前体细胞随机分为4组：淀粉样β蛋白1-40组（每孔加入10nmol／L β淀粉样蛋白1-40）；SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组（每孔先加入10μmol／LSP600125培养30min后再加入10nmol／L淀粉样β蛋白1-40）；SP600125组（每孔加入10μmol／LSP600125培养）；生理盐水组（每孔加入等体积的生理盐水），每组分别培养0，2，4，6，12，24h，每个时间点设8个孔。采用α甲基偶氮唑蓝法测定细胞生存率。流式细胞分析术检测细胞凋亡率。免疫印迹法检测c-Jun氨基端激酶，p-c-Jun氨基端激酶，c-Jun，p-c-Jun表达。计量资料差异比较采用t检验。 主要观察指标：①Wistar大鼠胚胎皮质神经前体细胞细胞生存率。②胚胎中皮质神经前体细胞细胞凋亡率。③胚胎中皮质神经前体细胞c-Jun氨基端激酶，P-c-Jun氨基端激酶，c-Jun，p-c-Jun表达结果。 结果：①淀粉样β蛋白1-40组和SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组细胞生存率随培养时间延长而下降，4h时下降最明显；培养0，2，4，6，12,24h时淀粉样β蛋白1-40组明显低于其他3组（P〈0.01），SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组培养2，4，6，12，24h明显低于SP600125组和生理盐水组（P〈0．01）。SP600125组细胞生存率无时间依赖性，与生理盐水组相比，差异不明显（P〉0．05）。②淀粉样β蛋白1-40组和SP600125＋淀粉样β蛋白140组细胞凋亡率随培养时间延长而上升，4h时上升最明显；培养0，2，4，6，12，24h时淀粉样B蛋白1-40组明显高于其他3组（P〈0．01）SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组培养2，4，6，12，24h明显高于SP600125组和生理盐水组（P〈0．01）。SP600125组细胞生存率无时间依赖性，与生理盐水组相比，差异不明显（P〉0．05）。③淀粉样β蛋白组：c-Jun氨基端激酶和c-Jun在培养0，2，4，6，12，24h均有表达，但无变化；p-c-Jun氨基端激酶和p-c-Jun在淀粉样β蛋白1-40作用0h时即有表达，逐渐增高，4h时达高峰，以后逐渐减少。 结论：淀粉样B蛋白1-40能明显抑制胚胎中皮质神经前体细胞细胞活性，降低细胞生存率，导致细胞凋亡，c-Jun氨基端激酶信号转导通路参与了此过程，这可能是阿尔茨海默病不能启动自我救活机制原因之一；使用SP600125，可抑制c-Jun氨基端激酶和c-Jun激活，明显减轻淀粉样β蛋白1-40对胚胎中皮质神经前体细胞的神经毒性作用。     

人参皂苷Rg3通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶对骨肉瘤细胞凋亡与自噬影响

目的探讨人参皂苷Rg3(G-Rg3)通过活性氧(ROS)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及可能机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞(MG63),用不同剂量G-Rg3(0、40、80、160μmol/L)进行干预。为分析G-Rg3的作用机制,将细胞分为对照(Con)组、G-Rg3组(160μmol/L G-Rg3干预)、G-Rg3+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(160μmol/L G-Rg3和ROS清除剂NAC进行干预)、G-Rg3+SP600125组(160μmol/L G-Rg3和JNK特异性抑制剂SP600125进行干预)。采用流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平;激光共聚焦显微镜观察细胞自噬;蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白(BAX、Bcl-2)、自噬蛋白(Beclin1和P62)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生凋亡,使BAX蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,且存在剂量依赖性(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察到不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生自噬,LC3 puncta数目形成增...     

肠道病毒71型激活人横纹肌肉瘤细胞中JNK1/2信号转导通路

目的探讨c-Jun N端激酶(JNK)信号转导通路在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法台盼蓝染色法检测不同浓度抑制剂SP600125对人横纹肌肉瘤细胞(RD)活性的影响;实时荧光定量PCR及western blot检测EV71感染RD细胞后VP1 mRNA及蛋白质的表达水平;western blot检测JNK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白及其磷酸化水平,并分析JNK1/2抑制剂SP600125对EV71复制及JNK1/2信号通路的影响。结果台盼蓝染色结果表明,与空白对照组比较,5和10μmol/L实验组存活率差异无统计学意义(P均0.05),而20μmol/L抑制剂组细胞存活率明显降低(P0.05);实时荧光定量PCR及western blot结果表明,与对照组相比,实验组在EV71感染RD细胞8 h后,其VP1 mRNA及蛋白质的表达水平均明显下降(P均0.01)。此外,western blot检测结果证实EV71感染RD细胞后,其JNK1/2、c-Fos和c-Jun的蛋白质磷酸化水平均明显升高(P均0.05)。而经抑制剂SP600125处理可明显下调其JNK1/2、c-Fos、c-Jun磷酸化水平(P均0.05)。结论 JNK1/2信号通路可被EV71感染有效激活,并与EV71复制有关。     

C-Jun氨基末端激酶与Activin A/Smads通路在体外脑缺血损伤中的相互作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)与Activin A/Smads信号在体外缺血性脑损伤中的相互作用机制。方法使用鼠神经生长因子诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞神经元样转化,利用连二亚硫酸钠(NaS2O4)构建细胞氧糖剥夺模型(OGD),计时0h和1h。Western blot检测外源性ActA或JNK磷酸化抑制剂SP600125干预后,OGD不同时间Smad3、JNK1总蛋白和磷酸化蛋白的表达情况。结果 OGD损伤后JNK1磷酸化蛋白表达升高27.1%。与对照组相比,外源性ActA下调JNK1蛋白的磷酸化水平,在OGD 0h和1h时分别下降了67.8%和56.4%。SP600125通过抑制JNK1磷酸化,上调Smad3的磷酸化水平。与DMSO对照组相比,在OGD 0h和1h时,SP600125组磷酸化Smad3表达分别升高了142.5%和60.5%。结论 JNK与ActA/Smads通路之间存在负性调控作用。     

淀粉样β蛋白1～40对胚胎大鼠皮质神经前体细胞毒性损伤的c-Jun氨基端激酶信号转导的影响

背景淀粉样β蛋白是阿尔茨海默病致病关键因素之一.近来的研究证明在成人中枢神经系统内存在能不断自我更新、多向分化潜能、终身神经修复的神经干细胞.但是在阿尔茨海默病脑内却未见到这些神经前体细胞的起到有效作用,其机制尚未清楚.淀粉样β蛋白1～40是否通过c-Jun氨基端激酶信号转导通路对胚胎大鼠皮质神经前体细胞造成神经毒性损害尚不清楚.目的体外实验淀粉样β蛋白1～40对胚胎中皮质神经前体细胞毒性作用中c-Jun氨基端激酶信号转导通路的可能作用机制,探讨c-Jun氨基端激酶抑制剂SP600125对淀粉样β蛋白1～40致胚胎中皮质神经前体细胞神经毒性作用的保护作用.设计以细胞为观察对象,随机对照实验.单位中国医科大学附属第一医院神经内科.材料实验于2005-05/10在中国医科大学中心实验室完成.选用10只孕14 d Wistar大鼠,取其胚胎以备实验.方法取Wistar大鼠胚胎脑皮质组织神经前体细胞,体外培养、传代、鉴定.将生长状态良好的胚胎大鼠皮质神经前体细胞随机分为4组淀粉样β蛋白1～40组(每孔加入10 nmol/L β淀粉样蛋白1～40);SP600125+淀粉样β蛋白1～40组(每孔先加入10 μmol/L SP600125培养30 min后再加入10 nmol/L淀粉样β蛋白1～40);SP600125组(每孔加入10 μmol/L SP600125培养);生理盐水组(每孔加入等体积的生理盐水),每组分别培养0,2,4,6,12,24 h,每个时间点设8个孔.采用α甲基偶氮唑蓝法测定细胞生存率.流式细胞分析术检测细胞凋亡率.免疫印迹法检测c-Jun氨基端激酶,p-c-Jun氨基端激酶,c-Jun,p-c-Jun表达.计量资料差异比较采用t检验.主要观察指标①Wistar大鼠胚胎皮质神经前体细胞细胞生存率.②胚胎中皮质神经前体细胞细胞凋亡率.③胚胎中皮质神经前体细胞c-Jun氨基端激酶,p-c-Jun氨基端激酶,c-Jun,p-c-Jun表达结果.结果①淀粉样β蛋白1～40组和SP600125+淀粉样β蛋白1～40组细胞生存率随培养时间延长而下降,4 h时下降最明显;培养0,2,4,6,12,24 h时淀粉样β蛋白1～40组明显低于其他3组(P＜0.01),SP600125+淀粉样β蛋白1～40组培养2,4,6,12,24 h明显低于SP600125组和生理盐水组(P＜0.01).SP600125组细胞生存率无时间依赖性,与生理盐水组相比,差异不明显(P＞0.05).②淀粉样β蛋白1～40组和SP600125+淀粉样β蛋白1～40组细胞凋亡率随培养时间延长而上升,4 h时上升最明显;培养0,2,4,6,12,24 h时淀粉样β蛋白1～40组明显高于其他3组(P＜0.01),SP600125+淀粉样β蛋白1～40组培养2,4,6,12,24 h明显高于SP600125组和生理盐水组(P＜0.01).SP600125组细胞生存率无时间依赖性,与生理盐水组相比,差异不明显(P＞0.05).③淀粉样β蛋白组c-Jun氨基端激酶和c-Jun在培养0,2,4,6,12,24 h均有表达,但无变化;p-c-Jun氨基端激酶和p-c-Jun在淀粉样β蛋白1～40作用0 h时即有表达,逐渐增高,4 h时达高峰,以后逐渐减少.结论淀粉样β蛋白1～40能明显抑制胚胎中皮质神经前体细胞细胞活性,降低细胞生存率,导致细胞凋亡,c-Jun氨基端激酶信号转导通路参与了此过程,这可能是阿尔茨海默病不能启动自我救活机制原因之一;使用SP600125,可抑制c-Jun氨基端激酶和c-Jun激活,明显减轻淀粉样β蛋白1～40对胚胎中皮质神经前体细胞的神经毒性作用.     

导痰汤通过c-Jun氨基末端激酶信号通路抑制人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的研究

目的通过体外实验研究导痰汤是否能通过调节c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路来干预细胞间黏附分子-1（ICAM—1）的表达,以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞（HuVEc）,并随机分为7组。空白对照组：正常培养HUVEC24h;导痰汤对照组：用20％导痰汤含药血清预处理HUVEC6h;肿瘤坏死因子-a（TNF-a）诱导组：用200kU／L TNF—a培养HuVEC12h;5％、10％、20％导痰汤干预组及JNK阻滞组：TNF—a诱导前分别给予5％、10％、20％导痰汤含药血清或25umol／L JNK特异性阻滞剂SP600125预处理。采用聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹法（western blotting）检测HUVEC中ICAM-1mRNA和JNK蛋白的表达。结果TNF—a诱导组ICAM-1 mRNA和JNK蛋白表达显著高于空白对照组和导痰汤对照组（均P〈0．01）;用导痰汤含药血清或SP600125预处理,ICAM-1mRNA和JNK蛋白表达显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。JNK蛋白与ICAM-1mRNA水平呈显著正相关（r=0．680,P〈0．01）。结论导痰汤可以有效抑制TNF—a刺激所致的HUVEC中ICAM-1的过度表达,这可能与导痰汤可抑制JNK信号通路有关。     

黑色素瘤抗原基因3在K562细胞内质网应激反应性凋亡中的表达及意义

本研究旨在探讨黑色素瘤抗原基因-3（melanoma antigen gene-3,MAGE-3）在内质网应激反应性凋亡中的表达及意义.应用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2/AM通过荧光分光光度计测定白血病细胞系K562及其多药耐药细胞株K562/A02经thapsigargin作用前后细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）变化;Western blot检测GRP78蛋白表达变化;荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测MAGE-3基因mRNA水平表达变化.结果显示：①毒胡萝卜素（thapsigargin）诱导K562和K562/A02细胞[Ca^2＋]i出现不同程度的升高并呈一定的浓度依赖性,同时诱导GRP78蛋白表达增加以及K562和K562/A02细胞典型的凋亡改变,细胞凋亡率亦呈一定的浓度依赖性;在静息状态下K562/A02细胞[Ca^2＋]i较K562细胞明显增高;②毒胡萝卜素诱导K562和K562/A02细胞凋亡过程中,MAGE-3 mRNA表达明显下调;此外,与K562细胞比较,K562/A02细胞MAGE-3 mRNA表达明显上调.结论：①毒胡萝卜素在一定浓度范围内可诱导K562及其多药耐药细胞株K562/A02发生内质网应激反应性凋亡,并可能与MAGE-3表达下调有关或MAGE-3基因可能参与此凋亡途径的调控;②MAGE-3可能具有抗凋亡活性,K562/A02细胞多药耐药性可能与细胞[Ca^2＋]i增高和MAGE-3表达上调有关.     

硫辛酸调节糖尿病大鼠肾脏内质网应激、足细胞蛋白表达及JNK通路的实验研究

目的研究硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏内质网应激(ESR)、足细胞蛋白表达及JNK通路的调节作用。方法选择清洁级雄性SD大鼠36只并随机分为对照组、糖尿病组、硫辛酸组,每组12只。糖尿病组、硫辛酸组采用链脲佐菌素腹腔注射的方式建立糖尿病模型,硫辛酸组给予硫辛酸灌胃干预,对照组和糖尿病组给予等剂量生理盐水灌胃,每日1次,连续8周。比较三组干预后血糖、肾功能以及肾脏组织中ESR标志基因、足细胞蛋白、JNK信号通路分子表达的差异。结果糖尿病组大鼠的空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、24 h尿白蛋白(24 h UAlb)水平及肾脏中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、丝/苏氨酸跨膜蛋白激酶α(IRE1α)的mRNA表达水平、磷酸化C-Jun N-末端激酶(p-JNK)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的蛋白表达水平均明显高于对照组(P 0. 05),肾脏中Podocin、CD2AP、Nephrin的蛋白表达水平均明显低于对照组(P 0. 05),肾脏中PERK、ATF-6的mRNA表达水平与对照组比较无显著性差异(P 0. 05);硫辛酸组大鼠的SCR、24 h UAlb水平及肾脏中GRP78、IRE1α的mRNA表达水平、p-JNK、TGF-β1、caspase-3、Col-Ⅳ的蛋白表达水平均明显低于糖尿病组,肾脏中Podocin、CD2AP、Nephrin的蛋白表达水平均明显高于糖尿病组(P 0. 05),FBG水平及肾脏中PERK、ATF-6的mRNA表达水平与糖尿病组比较无显著性差异(P 0. 05)。结论硫辛酸能够改善糖尿病大鼠的肾功能,且该效应与抑制内质网应激及JNK通路、增加足细胞蛋白表达有关。     

神经酰胺通过JNK/c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡

目的探讨神经酰胺对胶质瘤细胞87-MG和U251自噬性死亡的作用及机制。方法采用MTT和流式细胞的方法检测不同浓度神经酰胺刺激87-MG和U251细胞后细胞存活和凋亡的改变;电镜和Western blotting技术检测自噬和JNK/c-Jun信号通路的改变,JNK药理性抑制剂SP600125特异性抑制JNK通路,观察其对神经酰胺诱导自噬死亡的影响。结果神经酰胺刺激24 h后,87-MG和U251存活呈现时间依赖性下降(P0.05);相应的细胞死亡数目剂量依赖性升高(P0.05),但凋亡性死亡比例较低;神经酰胺刺激后镜下观察到的自噬小体计数,LC3B/LC3A和Beclin-1的表达以及JNK/c-Jun的磷酸化程度都增加(P0.05)。提前给予SP600125抑制JNK信号通路的活性后,可以阻断神经酰胺诱导的细胞自噬性死亡(P0.05)。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞87-MG和U251出现自噬性死亡,机制可能与JNK信号通路的活化有关。     

血管紧张素Ⅱ通过CaMKⅡ诱导心肌细胞自噬

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大过程中是否有细胞自噬的参与,以及钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在该过程中的作用。方法 体外培养H9C2细胞系,将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ处理组、坎地沙坦处理AngⅡ组、KN-62处理AngⅡ组。通过激光共聚焦观察心肌细胞肥大情况;荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测CaMKⅡmRNA表达情况;Western blot检测CaMKⅡ蛋白及相关蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1）的水平。结果 AngⅡ能够诱导心肌细胞肥大。与正常对照组相比,AngⅡ处理组CaMKⅡmRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;坎地沙坦能够抑制AngⅡ诱导的CaMKⅡmRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与正常对照组相比,AngⅡ处理组的LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平明显升高（P<0.05）;坎地沙坦和KN-62均能降低LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平（P<0.05）。结论 CaMKⅡ可能不仅参与AngⅡ诱导心肌肥大,而且参与细胞自噬。     

线粒体基于HUR/PIM1信号通路在高血压血管内皮细胞损伤中的机制

目的 基于HUR/PIM1信号通路探讨线粒体在高血压血管内皮细胞损伤中的机制。方法AngⅡ处理人脐血管内皮细胞（HUVCE）分为3组：control组、AngⅡ组和Mdivi-1组。CCK-8、流式细胞术和transwell检测细胞活力、凋亡及迁移率。线粒体选择性探针检测线粒体形态,JC-1染料测量线粒体膜电位。qPCR和Western blot检测细胞中Drp-1、ROS、HUR/PIM1 mRNA和蛋白含量,体外血管形成验证血管生成。结果 与control组比较,AngⅡ组细胞活力降低、Drp-1和ROS蛋白表达升高和线粒体形态改变及膜电位降低,HUR/PIM1信号通路mRNA和蛋白含量升高,血管生成增加,Mdivi-1组效果相反。结论 Mdivi-1降低线粒体的表达和AngⅡ诱导的细胞的HUR/PIM1通路的表达,可抑制AngⅡ诱导的细胞的凋亡、迁移及血管生成。     

丹参酮ⅡA预防血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌肥大的机制

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐（sodium tanshinone ⅡA sulfonate，STS）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响，以探讨STS在钙调神经磷酸酶（calcineurin，CaN）依赖的信号通路心肌肥大中的作用。方法：以培养的原代心肌细胞为模型，用AngⅡ刺激细胞外Ca^2＋内流，丹参酮ⅡA及钙离子拮抗剂雏拉帕米（Ver）进行干预，检测心肌细胞[Ca^2＋]i及CaN活性；[^3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标。用Western blot法检测心肌细胞CaN蛋白的表迭。结果：AngⅡ刺激组[Ca^2＋]i水平、CaN蛋白的表达及蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异有显著性（P〈0．01），而STS能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca^2＋]i增高（P〈0．01vs AngⅡ组），明显抑制AngⅡ诱导的蛋白质合成速率的增加（P〈0．01 vs AngⅡ组）。AngⅡ刺激组CaN活性及其蛋白表达明显高于对照组，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。STS及Ver抑制AngⅡ介导的心肌细胞CaN活性及其蛋白表达的增高。结论：CaN通路在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用；STS具有Ca^2＋阻滞剂的特点，能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca^2＋]i增高，导致CaN活性及其蛋白表达降低，阻滞心肌肥大的发生和发展。     

SP600125对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景:SP600125作为JNK激酶抑制剂,可特异性阻断JNK细胞转导通路,对肝脏缺血再灌注又起到怎样的作用,目前尚无相关研究.目的:应用SP600125对肝脏缺血再灌注进行干预,分析JNK信号转导通路在该病理生理过程中的作用.方法:将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组,假手术组、缺血再灌注组及SP600125组各10只.假手术组仅行进腹手术;缺血再灌注组行进腹手术,阻断肝左中叶的血供;SP600125组于术前半小时腹腔注射SP600125 15 mg,kg,其他操作同缺血再灌注组.于复灌后2 h取材,分别测定各组血清肝功能酶活性,通过苏木精伊红切片染色观察肝组织结构的病理变化,运用免疫组织化学法检测肝组织中p-JNK表达并进行半定量分析,以比色法检测肝脏丙二醛含量及髓过氧化物酶活性.结果与结论:相对于缺血再灌注组,SP600125组血清肝功能酶活性明显下降,肝脏p-JNK表达较低,肝脏髓过氧化物酶活性以及丙二醛含量下降,病理损伤有所缓解.提示JNK细胞信号转导通路在肝缺血再灌注损伤过程中被广泛激活,应用JNK抑制剂SP6001 25对缺血再灌注损伤有保护作用.     

血小板对人肺癌细胞株A549凋亡的影响及机制初探

目的探讨血小板(PLT)对肺癌细胞株A549的影响及其可能的机制。方法通过流式细胞术检测PLT对A549细胞的凋亡作用;Westernblot检测PLT和A549细胞共培养后A549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK、MMP–2、M M P–9、 B c l–2、 B a x蛋白的表达情况。结果应用流式细胞术的检测结果发现,血小板抑制A 549细胞的凋亡并能阻止化疗药物吉西他滨诱导的A549细胞凋亡。Westernblot结果显示PLT和A549细胞共培养48h后,A549细胞中ERK1/2、JNK、p-E R K、 p-J N K、 M M P-2、 M M P-9、 B c l-2蛋白表达明显增加, B a x蛋白表达明显降低。结论血小板可增加A 549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK磷酸化,增加MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达;降低Bax蛋白表达,并抑制肺癌细胞株A549的凋亡。血小板可抑制A549细胞的凋亡,且与血小板的浓度呈正相关。     

活性氧在热化疗抑制人肺肿瘤细胞生长中的作用

目的:研究热化疗抑制肺肿瘤细胞生长的可能机制及活性氧(ROS)在其中的作用.方法:采用6种不同热化疗联合方法处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照,用荧光法检测细胞内活性氧,蛋白免疫印记法检测JNK和Akt磷酸化水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,SPSS 13.0时数据进行统计分析.结果:热化联合组ROS高于对照组和单纯化疗组,NAC可抑制其表达(P<0.05),SP600125和Wortmannin 对其没影响(P>0.05);JNK磷酸化水平在热化联合组升高,NAC使其磷酸化水平降低(P<0.05);Akt磷酸化水平在热化联合组表达降低,NAC使其磷酸化水平升高(P<0.05);热化联合组细胞凋亡率升高,Wortmannin组细胞凋亡率增加,SP600125组和NAC组细胞凋亡率减少(P<0.05).结论:热化疗联合诱导ROS产生.通过激活JNK信号转导通路和抑制Akt通路的激活,导致细胞凋亡.     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞MCP-1表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达和蛋白合成的影响,并讨论其机制。方法试验分组：10%小牛血清MEM（含糖5.6 mmol/L,未加其他刺激因素）为对照组（C组）;A1组、A2组和A3组分别在培养液中加不同浓度AngⅡ（10-9mol/L、10-7mol/L和10-5mol/L）。培养48 h后收集各组细胞和细胞上清液,RT-PCR检测肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中MCP-1蛋白的浓度。结果①肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;②与C组比较,A1组、A2组和A3组肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达增强（P〈0.01）;③与C组比较,A1组、A2组和A3组细胞培养上清液MCP-1浓度明显增高（P〈0.01）;④与A1组比较,A2和A3组系膜细胞MCP-1mRNA明显增强,上清液MCP-1浓度显著升高（P〈0.01）,其中以A2组最明显。结论 AngⅡ可刺激肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成增加,并具有一定的浓度依赖性。     

L6大鼠成肌细胞胰岛素信号传导通路中磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的表达

背景：血管紧张素Ⅱ可损伤胰岛素信号中的下游信号分子引起胰岛素抵抗,但其机制不清。目的：观察血管紧张素Ⅱ对L6大鼠成肌细胞胰岛素信号传导通路中磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的影响。方法：L6细胞培养及诱导分化肌管,根据干预措施不同实验分为对照组、胰岛素组、胰岛素＋血管紧张素Ⅱ组及胰岛素＋血管紧张素Ⅱ＋H89组。采用RT-PCR检测4组磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B mRNA表达,免疫荧光检测胰岛素受体底物1、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1、葡萄糖转运蛋白4表达。结果与结论：胰岛素组、胰岛素＋血管紧张素Ⅱ组及胰岛素＋血管紧张素Ⅱ＋H89组的磷脂酰肌醇3激酶mRNA表达均较对照组显著升高（P〈0.05）。各组间蛋白激酶B mRNA表达差异无显著性意义（P〉0.05）。相比对照组,其余3组间胰岛素受体底物1、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白4（膜蛋白）表达均升高（P〈0.05）;胰岛素＋血管紧张素Ⅱ＋H89组酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白4表达低于胰岛素组但高于胰岛素＋血管紧张素Ⅱ组（P〈0.05）。结果显示,血管紧张素Ⅱ在骨骼肌细胞中通过JAK2-PKA通路引起胰岛素下游信号传导受阻,葡萄糖转运蛋白4表达减少,葡萄糖转运障碍,进而导致胰岛素抵抗。     

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及 caspase 12 表达的影响简

目的 研究川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12（caspase 12）表达的影响.方法 将48只SD大鼠随机分为假手术组（S）、脑缺血再灌注组（I/R）、川芎嗪低剂量组[10 mg/（mg/kg·d）,I/R ＋TMP组]、川芎嗪高剂量组[30 mg/（mg/kg·d）,I/R ＋TMP组],各组治疗7 d,1次/d,腹腔注射,S组和I/R组给予同剂量生理盐水,7 d后线栓法制备脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注22 h.检测各组大鼠神经行为学评分、TTC法测定脑梗死体积、TUNEL法检测细胞凋亡、western blot印迹检测GRP78及caspase 12蛋白表达含量.结果与S组相比,I/R组神经行为学评分较高,神经细胞凋亡及脑梗死体积增高,GRP78及caspase 12的蛋白表达含量上升（P＜0.05）;与I/R组相比,川芎嗪组可改善大鼠脑神经行为学评分,降低脑梗死体积及细胞凋亡百分率、抑制GRP78及caspase 12的蛋白表达（P＜0.05）.结论 川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与其抑制细胞凋亡及caspase 12 的表达有关.     

高糖、高同型半胱氨酸致足细胞内质网应激时白藜芦醇对CHOP通路的影响

目的观察体外高糖、高同型半胱氨酸(high homocysteine,hHcy)以及高糖和hHcy共同环境下,小鼠肾小球足细胞内质网应激相关蛋白:葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、转录因子CHOP/GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)的表达,探讨高糖、hHcy及hHcy和高糖共同诱导足细胞凋亡的内质网应激相关机制,观察抗氧化剂白藜芦醇(Resveratrol,RES)对足细胞的保护作用。方法分化后的条件永生化小鼠足细胞分组:正常对照组、高渗组(glucose 5 mmol/L+甘露醇15 mmol/L)、高糖组(glucose 20 mmol/L)、hHcy组(hHcy 200μmol/L)、hHcy+高糖组(hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L)、混合+RES组(RES20μmol/L预干预半小时+hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L),作用24 h。流式细胞术AnnexinV-FITC/PI测定各组细胞凋亡率。real-time PCR、Western blot分析各组细胞GRP78、CHOP的表达。结果高糖组与hHcy组的凋亡率、GRP78、CHOP的mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05);hHcy+高糖组的上述指标分别与高糖组、hHcy组比较均显著升高(P<0.05);混合+RES组较hHcy+高糖组上述指标显著下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论高糖、hHcy体外能诱导足细胞凋亡,hHcy和高糖共同环境下对足细胞损伤及致凋亡作用更明显,提示两者有协同作用,内质网应激参与其凋亡机制之中,抗氧化剂白藜芦醇能抵抗高糖和hHcy诱导的足细胞凋亡,阻断内质网应激CHOP通路为其机制之一。