当归补血汤载药血清干预后骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌

背景：实验表明,当归补血汤的有效成分多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,对造血微环境具有重要的调控作用。 目的：观察当归补血汤载药血清干预后小鼠骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌状况。 方法：分离骨髓基质细胞,于96孔板培养,在相差显微镜下观察细胞形态和生长状况;将细胞分4组,加含有不同剂量的当归补血汤载药血清进行干预,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,ELISA法检测粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的表达情况。 结果与结论：当归补血汤载药血清可明显促进骨髓基质细胞的增殖,促进骨髓基质细胞分泌粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3,呈剂量依赖性,含等效剂量载药血清组促增殖作用和促分泌作用优于其他各组,浓度过高可减弱细胞的增殖分泌效应。     

膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子预防造血干细胞移植后出血性膀胱炎发生

背景：出血性膀胱炎是造血干细胞移植后常见并发症之一。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子除影响造血干/祖细胞的增殖和分化外,还能调节炎性反应中单核细胞、粒细胞、淋巴细胞以及内皮细胞的功能。 目的：探讨膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对造血干细胞移植后出血性膀胱炎的预防作用。 设计：病例分析。 对象：中山大学附属中山医院2004-01/2006-08接受异基因造血干细胞移植的血液病患者15例作为常规治疗组,2006-09/2008-12接受异基因造血干细胞移植的血液病患者16例作为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组。 方法：常规治疗组采用常规方法即美司钠、水化、碱化尿液预防出血性膀胱炎,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组在其基础上,在应用环磷酰胺前24 h开始向膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,至环磷酰胺停用3 d后拔除导尿管,用生理盐水冲洗膀胱后排空膀胱,然后向300 μg粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子中加入生理盐水10 mL、利多卡因5 mL注入膀胱,保留60~120 min。 主要观察指标：出血性膀胱炎的发生及其与移植物抗宿主病的相关性,巨细胞病毒感染及泌尿系统感染的发生情况。 结果：与常规治疗组比较,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组出血性膀胱炎发生率明显降低(χ2=4.39,P < 0.05),出血性膀胱炎平均持续时间、患者平均住院时间均明显缩短(t＝3.97,P < 0.05;t＝3.13,P < 0.05),Ⅲ度以上出血性膀胱炎发生率明显降低(χ2=5.04,P < 0.05)。出血性膀胱炎严重程度与移植物抗宿主病严重程度、持续时间有关(r=0.76)。与常规治疗组比较,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组巨细胞病毒感染率略微下降但无明显差异(χ2=0.28,P > 0.05),巨细胞病毒感染阳性患者Ⅲ度以上出血性膀胱炎发生率升高。与常规治疗组比较,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组泌尿系统感染发生率略微下降但无明显差异(χ2=0.28,P > 0.05)。 结论：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子膀胱内灌注耐受性好,临床取得了较好疗效,是预防造血干细胞移植后出血性膀胱炎的有效措施。     

耐受性树突状细胞体外培养的基本特征

背景：树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,在免疫调节中扮演着免疫应答和免疫耐受的双重角色,对维持机体的免疫平衡起重要作用。 目的：探讨耐受性树突状细胞的体外培养方法,观察不同培养条件下耐受性树突状细胞的基本特征。 设计、时间及地点：以细胞为观察对象,随机分组设计,于2006-09/2008-02在南昌大学第一附属医院中心实验室完成。 材料：8周龄的Balb/c纯系雄性小鼠,体质量20~25 g,用于分离和制备骨髓单个核细胞。 方法：将小鼠骨髓单个核细胞分为5组在不同的培养体系中进行体外诱导培养：空白对照组(不加任何因子)、树突状细胞组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4)、血管活性肠肽组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽)、地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+地塞米松)、血管活性肠肽+地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽+地塞米松)。 主要观察指标：光镜下动态观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞CD80、CD86、CD40、CD11c表达,四甲基偶氮唑盐法检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的活性,特异性夹心酶联免疫分析测定树突状细胞上清液中白细胞介素10、白细胞介素12的水平。 结果：①利用粒-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4、血管活性肠肽、地塞米松、脂多糖等因子体外培养能生成具有典型树枝状突起的树突状细胞。②树突状细胞组、血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD11c的表达高于空白对照组(P < 0.05)。血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD40、CD80和CD86表达,淋巴细胞增殖活性及培养上清液白细胞介素12水平均低于树突状细胞组(P < 0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40 μg/L、地塞米松组以10 μg/L减低明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L、地塞米松为10 μg/L条件下为最低,差异具有显著性意义(P < 0.05)。③血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组细胞培养上清液中白细胞介素10水平均高于树突状细胞组(P < 0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40 μg/L,地塞米松组以10 μg/L升高明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L、地塞米松为10 μg/L条件下为最高,差异具有显著性意义(P < 0.05)。 结论：①小鼠骨髓单个核细胞体外经粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽或/和地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成致耐受性树突状细胞。②与常规诱导培养树突状细胞方法比较,耐受性树突状细胞具有CD40、CD80、CD86表达低,刺激淋巴细胞增殖弱的特点;耐受性树突状细胞培养体系上清液白细胞介素10水平高而白细胞介素12水平低。③粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽+地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成耐受性树突状细胞效果较佳,其中以血管活性肠肽40 μg/L、地塞米松10 μg/L的培养条件为最好。     

莲子多糖增强环磷酰胺致免疫抑制小鼠机体免疫功能

背景：多糖类成分在中药中普遍存在，具有广泛的生物活性，能激活T、B和NK细胞，调节细胞因子和补体等，可能是中药发挥调节机体免疫功能的重要物质基础之一。 目的：探讨莲子多糖对免疫抑制小鼠机体免疫功能影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，分子水平检测，于2001-02/07在河南中医学院药理实验室完成。 材料：清洁级昆明种4周龄小鼠30只，由河南省医学实验动物中心提供；莲子多糖为睡莲科植物莲的干燥成熟种子的提取物，由河南中医学院化学室提供；香菇多糖片为浙江普洛康裕天然药物有限公司产品。 方法：取6只小鼠作为正常对照组，剩余24只小鼠建立免疫抑制模型，分别于第1，2，3天腹腔注射环磷酰胺75 mg/kg，造模后随机分为4组，大、小剂量莲子多糖组分别灌服400，200 mg/kg莲子多糖水溶液，香菇多糖组灌服100 mg/kg香菇多糖混悬液，模型组灌服等体积生理盐水。每天给药1次，连续给药7 d。 主要观察指标：腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素1α的活性，脾细胞分泌白细胞介素2的活性，脾细胞体外增殖情况，血清可溶性白细胞介素2受体含量变化。 结果：小鼠30只均进入结果分析。与模型组比较，香菇多糖组能显著提高腹腔巨噬细胞上清液按1∶2，1∶4稀释时所分泌的白细胞介素1α活性（F=2.886，3.012，P < 0.05），大剂量莲子多糖组可明显提高腹腔巨噬细胞上清液按1∶2稀释时所分泌的白细胞介素1α活性（F=2.275，P < 0.05）；小剂量莲子多糖组可明显提高脾细胞上清液按1∶2，1∶4稀释时所分泌的白细胞介素2活性（F=2.405，2.574，P < 0.05）；香菇多糖组与大、小剂量莲子多糖组均能明显促进经刀豆素A或脂多糖刺激的脾细胞数量（F=2.489~6.207，P < 0.05或0.01）；香菇多糖组与小剂量莲子多糖组血清可溶性白细胞介素2受体水平均明显降低（F=5.298，P < 0.01；F=2.435，P < 0.05）。 结论：莲子多糖可提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞和脾细胞分泌的白细胞介素1α、白细胞介素2活性，促进经刀豆素A或脂多糖刺激的脾细胞增殖，并降低血清可溶性白细胞介素2受体水平，具有较好的增强免疫效果。     

粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合动员异基因造血干细胞移植

背景：目前FDA已批准应用于临床外周血造血干细胞移植的动员剂只有粒细胞集落刺激因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子,其中粒细胞集落刺激因子单药应用是目前最主要的动员方案,但可引起供者骨骼肌肉酸痛、发热等不良反应。 目的：回顾性分析以粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合应用为动员方案的异基因造血干细胞移植临床效果。 方法：选择2004-01/2009-10河南省人民医院血液科以粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子联合应用为动员方案进行血缘全相合异基因造血干细胞移植51例,分析移植物成分、造血重建及移植物抗宿主病的发生率。 结果与结论：动员96 h后 CD34+细胞占单个核细胞的比例为(0.97±0.13)%,CD34+CD38-细胞占CD34+细胞的比例为(37.49±4.03)%;移植后的快速造血重建与 CD34+细胞、CD34+CD38-细胞输入量呈负相关。Ⅰ度、Ⅱ~Ⅳ度急性移植物抗宿主病的发生率分别为25.5%,15.7%;局限性、广泛性慢性移植物抗宿主病的发生率分别为39.2%,21.2%。提示在血缘全相合异基因造血干细胞移植中,粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合可有效实现干细胞动员,所获CD34+细胞完全可以满足快速造血重建的需要;输入较多的CD34+细胞、CD34+CD38-细胞可能利于快速造血重建。     

早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响

背景：体内外研究已证实肺巨噬细胞合成和分泌肿瘤坏死因子α等参与肺组织局部损伤和炎症反应，但具体发生机制仍不明确。 目的：观察核转录因子早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响。 设计、时间及地点：随机分组设计，于2004-06/2006-12在湘雅医学院病理学系完成。 材料：标准石英粉尘(SiO2)为Sigma公司产品；早期生长反应基因1抗体为Santa Cruz公司产品；小鼠巨噬细胞系RAW264.7购自中科院上海生物细胞研究所细胞库。 方法：实验将巨噬细胞分为正常对照组、二氧化硅刺激组、Egr-1+二氧化硅组和IgG+二氧化硅组，前两组加无血清培养基，后两组分别加入5，10，20 mg/L不同浓度的Egr-1和IgG抗体干预。 主要观察指标：酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白的水平；反转录-聚合酶链反应检测细胞内肿瘤坏死因子α mRNA的表达。 结果：①与二氧化硅刺激组相比，不同浓度Egr-1+二氧化硅组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平均下降(P < 0.01)，且10 mg/L 组与5，20 mg/L组相比，差异有显著性意义(P < 0.05)。不同浓度IgG+二氧化硅组相比，上清液中肿瘤坏死因子α蛋白水平差异无显著性意义(F=1.008，P=0.438)。②二氧化硅刺激组肿瘤坏死因子α mRNA表达高于正常对照组(P < 0.01)，而Egr-1+二氧化硅组mRNA表达低于二氧化硅刺激组和IgG+二氧化硅组(P < 0.01)。 结论：二氧化硅致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α增加可能通过激活核转录因子早期生长反应基因1介导的信号通路而实现。     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑出血大鼠脑水肿及血管再生的影响

背景：研究表明重组人粒细胞集落刺激因子可以减轻脑缺血后的脑水肿，并且可动员内皮前体细胞增加脑缺血区域新生血管生成，促进患者神经功能恢复。 目的：探讨重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血后脑水肿及新生血管的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-03/11在泸州医学院中心实验室完成。 材料：健康雄性SD大鼠144只，随机分为假手术组、脑出血组、治疗组，48只/组。重组人粒细胞集落刺激因子为深圳新鹏生物工程有限公司产品。 方法：脑出血组与治疗组大鼠采用断尾取自体血方式建立脑出血模型，假手术组仅经注射点注入生理盐水。造模1 h后，治疗组大鼠腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子60 μg/kg。分别于干预后6 h，12 h，24 h，48 h，72 h，7 d时间点，每组各取8只大鼠，采用干湿重法测定大鼠组织脑含水量，采用SP、DAB显色法免疫组化检测CD34+血管的表达。 主要观察指标：脑组织含水量动态变化，CD34+血管免疫组化结果。 结果：与假手术组比较，脑出血组大鼠脑组织含水量显著升高(t=4.49，P < 0.05)，在48 h，72 h最明显；各时间点治疗组脑组织含水量均明显低于脑出血组(t=6.74，P < 0.05)。与假手术组比较，脑出血组CD34+血管数明显增加(t=3.42，P < 0.05)；治疗组CD34+血管数明显多于脑出血组(t=6.07，P < 0.05)，且在72 h，7 d时差异尤为明显。 结论：重组人粒细胞集落刺激因子作用于脑出血大鼠后，可减轻脑水肿程度，促进血肿周围新生血管生成。     

在兔外周血源性及骨髓源性单核细胞向树突状细胞转化过程中

背景：目前常用鼠作为动脉粥样硬化动物模型,但其体型较小,试验条件受限。兔也是常用的动脉粥样硬化动物模型之一,但其树突状细胞的培养和鉴定方式需要进一步摸索。 目的：探讨兔外周血源性及骨髓源性单核细胞体外向树突状细胞转化的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-12/2008-10在南方医科大学珠江医院儿科实验室、中山医科大学达安医学检测中心完成。 材料：6周龄雄性纯种新西兰大白兔12只,购自南方医科大学实验动物中心。人粒-巨噬细胞集落刺激因子、人白细胞介素4、脂多糖为美国PeproTech Inc产品。 方法：兔心尖穿刺抽取血液20 mL,同时行骨髓穿刺抽取骨髓10 mL,采用密度梯度离心法分离收集中间云雾状细胞层,加入适量的含双抗的胎牛血清的1640培养液,培养2 h后弃去未贴壁细胞,即为兔外周血源性和骨髓源性单核细胞。2种不同来源的单核细胞均分为2组：实验组以含有20 μg/L人粒-巨噬细胞集落刺激因子、20 μg/L人白细胞介素4的上述培养基隔日换液培养6 d,其中在第5天加入10 mg/L脂多糖刺激并孵育过夜;对照组未添加任何细胞因子。 主要观察指标：光镜及电镜观察细胞形态,流式细胞仪鉴定细胞表型。 结果：培养6 d后,外周血源性和骨髓源性对照组细胞呈圆形或椭圆形,表面有小杆状突起,符合巨噬细胞的特征;实验组细胞呈不规则形,表面粗糙,胞体有形态不一的突起,符合树突状细胞的特征。流式细胞仪检测结果显示,外周血源性和骨髓源性的实验组细胞均高表达HLA-DR,CD86,低表达CD14,组间比较差异无显著性意义（t=0.5187,t =1.7151,t =0.0250,P均> 0.05）;对照组细胞HLA-DR,CD86,CD14的表达则与实验组相反。 结论：在人粒-巨噬细胞集落刺激因子、人白细胞介素4及脂多糖联合作用下,兔外周血源性单核细胞及骨髓源性单核细胞均能转化为成熟树突状细胞。     

小鼠脾脏树突状细胞的体外扩增与培养

背景：脾脏来源的树突状细胞诱导周期长，产量相对较少，相关报道亦较少。 目的：建立简便的体外扩增小鼠脾脏树突状细胞的方法。 设计、时间及地点：细胞形态学观察实验，于2007-02/09在华北石油总医院中心实验室完成。 材料：健康BALB/C小鼠、C57小鼠及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4。 方法：无菌手术取C57小鼠脾脏，用1 mL注射器抽取Hanks液，刺入脾脏并反复冲洗，获取单个核细胞，用0.1 g/L粒-单核细胞集落刺激因子、白细胞介素4的H-DMEM培养，8 d后即得成熟的树突状细胞。同时无菌取BABL/C小鼠脾脏制备单细胞悬液，收集非黏附细胞调整密度后作为反应细胞。再将两种细胞混合培养。 主要观察指标：成熟树突状细胞的形态学观察，并对其表面CD11c，CD86及MHC-Ⅱ类分子进行检测。并计算两种细胞混合培养后的吸光度值。 结果：体外诱导培养8 d后获得大量成熟的树突状细胞，细胞表面具有典型的树枝状突起，高表达树突状细胞相对特异性表面分子CD11c（78.46%）、 CD86(87.24%)及MHC-Ⅱ(92.65%)，同时具有较强的刺激同种异基因混合淋巴细胞增殖的能力。 结论：联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素体外诱导培养小鼠脾脏细胞，可生成大量功能成熟的树突状细胞。     

海藻糖深低温保存外周血造血干细胞的可行性

背景：二甲基亚砜是目前造血干细胞深低温保存的经典保护剂，但其对细胞和患者均有一定的毒副作用。海藻糖是一种稳定的无毒副作用的非还原性双糖，已被广泛应用于红细胞、血小板和胚胎等的冷冻保存中。 目的：探讨海藻糖作为低温保存造血干细胞保护剂的可行性。 方法：外周血造血干细胞经重组人集落刺激因子动员后，用血细胞分离机采集连续单个核细胞，分为0.5 mol/L海藻糖组、1.0 mol/L海藻糖组、对照组。采用程序降温法液氮保存，冻存7 d后取出，立即置于40 ℃水浴箱内复苏。锥虫蓝拒染法检测细胞存活率；采用甲基纤维素半固体培养体系进行集落培养，计数粒-巨噬细胞集落形成单位的回收率；采用CD34-PE/CD45-FITC双标法，流式细胞仪检测CD34+细胞回收率。 结果与结论：与对照组比较，0.5，1.0 mol/L海藻糖组细胞存活率、粒-巨噬细胞集落形成单位回收率、CD34+细胞回收率均明显升高(P < 0.001)，且0.5 mol/L海藻糖组升高幅度尤为显著(P < 0.001或P < 0.01)。证实海藻糖对于短期内低温冻存的外周血造血干细胞有一定保护作用，浓度为0.5 mol/L的海藻糖保护冻存的造血干细胞效果较佳。 关键词：低温保存；粒-巨噬细胞集落形成单位；海藻糖；浓度；外周血造血干细胞；生物材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.12.008     

地黄多糖调控环状RNA0010729/miR-326通路对海马神经元缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨地黄多糖对海马神经元缺氧复氧损伤的影响及其保护机制是否与调控环状RNA 0010729(circ_0010729)和微小RNA-326(microRNA-326,miR-326)表达有关。方法 体外培养大鼠海马神经元建立缺氧复氧损伤模型; 将大鼠海马神经元分为对照组、模型组、模型+地黄多糖低剂量组、模型+地黄多糖中剂量组、模型+地黄多糖高剂量组、模型+小干扰RNA阴性对照(Small interfering RNA negative control,si-NC)组、模型+si-circ_0010729组、模型+地黄多糖高剂量+空载质粒(Empty plasmid,pcDNA)组、模型+地黄多糖高剂量+pcDNA-circ_0010729组; 流式细胞术检测细胞凋亡; 试剂盒检测丙二醛(Malonaldehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性; 实时定量聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测circ_0010729,miR-326表达水平; 荧光素酶报告实验确定circ_0010729和miR-326靶向关系。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA水平、circ_0010729表达水平升高(P<0.05),SOD活性、miR-326表达水平降低(P<0.05); 与模型组比较,模型+地黄多糖低剂量组、模型+地黄多糖中剂量组、模型+地黄多糖高剂量组细胞凋亡率、MDA水平、circ_0010729表达水平降低(P<0.05),SOD活性、miR-326表达水平升高(P<0.05); 与模型+si-NC组比较,模型+si-circ_0010729组细胞凋亡率、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05); 与模型+地黄多糖高剂量+pcDNA组比较,模型+地黄多糖高剂量+pcDNA-circ_0010729组细胞凋亡率、MDA水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05)。结论 地黄多糖能够有效抑制缺氧复氧诱导的大鼠海马神经元凋亡和氧化损伤,其机制可能与抑制circ_0010729/miR-326通路有关。     

金匮肾气丸对肾阳虚证雄性大鼠生精细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响**☆

背景：肾虚可导致不育,金匮肾气丸是治疗肾阳虚证的经典药物,但其作用机制尚不明确。 目的：观察金匮肾气丸对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax在肾阳虚证雄性大鼠生精细胞中表达的影响。 方法：成年雄性SD大鼠100只随机分成5组,采用氢化可的松注射液制备肾阳虚模型。金匮肾气丸低、中、高剂量组在造模基础上每天灌胃含生药0.625,1.250,2.500 g/kg的肾气丸混悬液,连续30 d。正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。检测各组大鼠左侧睾丸质量、血清睾丸酮水平、精子密度、精子活率改变情况。采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白在生精细胞中的表达。 结果与结论：模型组左侧睾丸质量、血清睾丸酮水平、精子密度、精子活率低于正常组、金匮肾气丸中、高剂量组(P < 0.05)。与模型组比较,正常组、金匮肾气丸低、中、高剂量组大鼠生精细胞中Bcl-2蛋白表达显著增高(P < 0.05),Bax蛋白表达显著降低(P < 0.05)。说明金匮肾气丸可使肾阳虚证雄性大鼠生精细胞中Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,从而抑制细胞凋亡,对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力有较好的治疗作用。     

脑出血后外周血白细胞计数变化与预后的相关性研究

目的探讨患者脑出血后外周血白细胞计数变化与预后的相关性。方法对2013-01—2016-06在我院神经内科治疗的560例急性脑出血患者的临床资料进行回顾性分析。入院12h后行神经功能缺损评分,其中0~15分249例为轻型组,16~30分201例为中型组,31~45分110例为重型组。所有患者在入院后24h内采集外周血,采用西门子全自动血细胞分析仪计数白细胞及中性粒细胞。比较不同预后患者白细胞及中性粒细胞平均升高率,比较不同神经功能缺损评分患者在入院时、入院后第3天、第7天及第14天外周白细胞水平,比较不同意识患者白细胞及中性粒细胞水平。结果重型组入院时外周白细胞计数水平最高,其次是中型组,3组间比较差异有统计学意义(P0.01)。入院后随着治疗时间的延长,各组白细胞计数均呈下降趋势(P0.05);但重型组及中型组在第3天、第7天、第14天的白细胞计数仍显著高于轻型组,差异有统计学意义(P0.05)。意识障碍患者白细胞计数及中性粒细胞比例显著高于意识清醒患者,差异有统计学意义(P0.05)。死亡患者白细胞计数平均升高率及中性细胞升高率显著高于存活组,差异有统计学意义(P0.05)。结论急性脑出血后患者外周血白细胞水平与患者病情以及预后有密切关系,临床上可以根据白细胞计数判断患者病情,评估预后。     

Influence of human myasthenia gravis thymus on the differentiation of human cord blood stem cells in SCID mice

The normal thymus contributes to T lymphocytes differentiation and induction of tolerance to self-antigens. Myasthenia gravis (MG) is characterized by abnormal thymic hyperplasia. To assess the potential influence of MG-thymus on the differentiation of T lymphocytes differentiation, we used the MG-thymus transplanted severe combined immunodeficiency (SCID) mice model to evaluate the human cord blood stem cells differentiation. Thymus fragments from MG patient and human cord blood stem cells were transplanted into SCID mice successively. SCID mice were observed to develop sustained human T lymphocytes and a functional anti-tumor immune. The levels of various T cell subsets in SCID mice with MG-thymus were different from that of control group. Among that, the frequency of CD4⁺CD25⁺ T cells was significant lower in SCID mice with MG-thymus. The deficiency of CD4⁺CD25⁺ T cells seens to contribute to the pathogenesis of MG.     

小檗碱对阿尔茨海默病转基因鼠空间记忆力的影响

目的 探讨小檗碱对AD转基因鼠空间记忆力的影响.方法 24只6月龄AD转基因鼠按随机数字表法分为模型组、小檗碱小剂量组、小檗碱中剂量组和小檗碱大剂量组,后三组小鼠分别每天灌胃给予小檗碱10 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和200 mg/(kg·d)至10月龄.通过Morris水迷宫试验和ELISA法检测不同剂量小檗碱对AD转基因鼠空间记忆力和脑组织β淀粉样蛋白40、42(Aβ40、Aβ42)水平的影响.结果 与模型组相比,各小檗碱组小鼠逃避潜伏期在测试第6天时均明显缩短,穿越平台的次数均明显增加,脑组织Aβ40、Aβ42水平均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05) 结论 小檗碱可能抑制小鼠脑组织Aβ40、Aβ42的产生从而改善AD转基因鼠的空间记忆力.     

四氧嘧啶型糖尿病模型小鼠糖耐量和肝糖原与大豆胰蛋白酶抑制剂的干预

背景：研究提示大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor，SBTI)对治疗糖尿病，调节胰岛素失调可能有一定效果。 目的：观察SBTI对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖、糖耐量及肝糖原的影响。 方法：采用腹腔注射四氧嘧啶方法制备小鼠糖尿病模型，将造模成功的32只小鼠随机等分为4组，另取正常8只小鼠作为对照组。造模后，SBTI-L、SBTI-H组每日分别灌胃0.27，0.80 mg/kg SBTI溶液，格列本脲组每日灌胃优降糖0.16 g/kg，模型组和对照组每日灌胃生理盐水，持续给药2周。给药第0，7，14天，采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠空腹血糖和糖耐量，改良蒽酮法测定小鼠肝糖原含量。 结果与结论：与模型组比较，格列本脲组、SBTI-L组、SBTI-H组血糖明显下降(P < 0.05)，糖耐量升幅明显减小(P < 0.05)，肝糖原含量明显增加(P < 0.05)，且SBTI-L组、SBTI-H组较格列本脲组起效快，作用时间长，以SBTI-H组效果最明显。表明SBTI有明显的降血糖、改善糖耐量、提高肝糖原含量的作用。     

大鼠肌源性干细胞植入糖尿病鼠胰腺后的存活能力及血糖调节

背景：肌源性干细胞易于提取、分离及扩增，在特定条件下可分化为骨软骨、肌肉等中胚层组织细胞，还可以跨胚层分化为神经细胞等。 目的：观察糖尿病鼠胰腺内植入的肌源性干细胞存活情况，及其调节血糖的效果。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-04/09在辽宁医学院科学实验中心完成。 材料：SPF/VAF级新生5 d龄SD大鼠31只，由辽宁医学院实验动物中心提供。造模使用的链脲佐菌素为星隆达公司产品。 方法：取5只大鼠的前肢肱三头肌与后肢腓肠肌，采用差速贴壁法纯化扩增大鼠肌源性干细胞，传至第3代用于移植，临用前以携带绿色荧光蛋白的腺病毒悬液进行转染。取20只大鼠，通过尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，15只成功造模，取12只随机均分为2组：细胞移植组胰腺被膜下移植肌源性干细胞约2×106个，模型对照组同法给予等量不含细胞的培养液。余6只大鼠作为正常对照组。 主要观察指标：肌源性干细胞移植至胰腺后的存活情况，移植后大鼠血糖浓度的变化。 结果：移植后1周，胰腺组织呈网架样结构，表达较强的黄绿色荧光；4周后仍有荧光表达，但强度减弱。与模型对照组比较，移植前2 d细胞移植组大鼠血糖浓度无明显差异（P > 0.05）；移植后4，8 d，大鼠血糖浓度一直处于较高水平；至移植后第4，8周大鼠血糖浓度明显下降（t=-2.416~8.372，P < 0.01）。 结论：肌源性干细胞移植后能在糖尿病模型鼠的胰腺部位存活，且一定程度上可下调大鼠血糖浓度。     

CCR5 deficiency does not prevent P0 peptide 180-199 immunized mice from experimental autoimmune neuritis

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is an inflammatory autoimmune demyelinating disease of peripheral nervous system (PNS) and represents an animal model of Guillain-Barré syndrome (GBS) in man. The inflammatory cell infiltrating into the PNS is a prerequisite for developing EAN. To explore the role of CC chemokine receptor 5 (CCR5) in the inflammatory process of EAN, we induced EAN in CCR5-deficient (CCR5(-/-)) mice with P0 protein peptide 180-199. We found that CCR5(-/-) mice showed a similar EAN clinical course and severity as well as profile of infiltrating macrophages and T cells in cauda equina (CE) of EAN and the same levels of spleen mononuclear cell (MNC) response to antigen and mitogen when compared with CCR5(+/+) control mice. However, increased IP-10 and MIP-1beta production in sciatic nerves were seen in CCR5(-/-) mice. These results suggest that CCR5 deficiency does not prevent P0 peptide 180-199-immunized mice from EAN. Increased MIP-1beta and IP-10 in sciatic nerves may compensate the CCR5 deficiency and contribute to inflammatory cells infiltrating to the PNS.     

假体置入患者外周血白细胞Toll样受体2和4的表达

背景：研究证实全髋关节置换后松动假体表面生物膜中表达Toll样受体,但其变化规律尚不清楚。 目的：观察关节假体置入患者外周血白细胞Toll样受体2,4的表达。 方法：选择关节置换患者和同期10例行关节镜检查患者,于入院次日和假体置入后第3天早晨空腹抽取肘静脉血,流式细胞术分析外周血白细胞中Toll样受体2和Toll样受体4的阳性表达,同时送血样至检验科检查白细胞、血沉、C-反应蛋白水平。 结果与结论：两组白细胞、血沉、C-反应蛋白均在正常范围内。Toll样受体2,4均主要表达于外周血单核细胞,而在外周血淋巴细胞和中性粒细胞的表达率较低;关节置换组术后外周血单核细胞Toll样受体2阳性表达率明显低于术前(P < 0.05);关节置换组Toll样受体4、关节镜组Toll样受体2,4手术前后阳性表达率差异无显著性意义(P > 0.05)。关节置换组手术前后外周血单核细胞Toll样受体2阳性表达率低于关节镜组(P < 0.05),两组Toll样受体4表达率无差异。提示在无感染的情况下,手术本身应激和局部损伤不影响Toll样受体2,4的表达,假体的置入下调了外周血Toll样受体2的表达。     

脐血间充质干细胞静脉移植治疗新生鼠脑血肿继发脑水肿*☆

背景：脐血间充质干细胞移植治疗新生动物脑血肿继发脑水肿的研究少见报道。 目的：探讨脐血间充质干细胞静脉移植治疗新生鼠实验性脑血肿继发脑水肿的可行性。 方法: 健康新生7 d SD大鼠分为未进行干预的空白对照组、仅制作脑出血模型的脑血肿对照组和制作脑出血模型后给予脐血间充质干细胞治疗的移植组。3组大鼠均于移植后1周处死,提取脑组织进行指标检测。 结果与结论：脑血肿形成后,脑系数和脑组织含水量均明显增加,脐血间充质干细胞移植组明显小于脑血肿对照组(P < 0.01),与空白对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。移植1周后,各组鼠死亡率无显著差异,均未见植入反应和其他任何负作用。提示,脐血间充质干细胞静脉移植治疗能有效减轻实验性脑血肿继发的脑水肿,对其具有明显的保护作用。其机制可能与脐血间充质干细胞能有效地透过血脑屏障,在病灶脑组织周围迁移、扩散、整合,从而在病灶脑组织存在并分泌大量保护性细胞因子有关。