髓鞘碱性蛋白的提取鉴定及其诱导口服耐受

目的：提取并纯化豚鼠脑、脊髓鞘髓碱性蛋白（ＭＢＰ），对其理化特征和致实验性自身免疫性脑脊髓为（ＥＡＥ）的活性进行鉴定，并初步探讨口服ＭＢＰ诱导免疫耐受防治ＥＡＥ的作用。方法：以豚鼠脑、脊髓为原料，通过去脂、抽洗、酸溶解、高速离心等步骤提了ＭＢＰ，并在Ｗｉｓｔａｒ大鼠中诱导ＥＡＥ和口服耐受。结果：所提取的ＭＢＰ具有与献报告结果类似的理化特征和诱发ＥＡＥ的活性；通过口服ＭＢＰ，成功诱导出对ＥＡＥ的免     

口服髓鞘碱性蛋白与T细胞疫苗接种联合诱导免疫耐受防治实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的：口服髓鞘碱性蛋白（ｍｙｅｌｉｎｂａｓｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＢＰ）与Ｔ细胞疫苗接种（Ｔｃｅｌｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ,ＴＣＶ）联合应用诱导免疫耐受,以提高特异性的免疫疗法对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ,ＥＡＥ）的防治效果。方法：从ｇｐＳＣＨ／ＣＦＡ诱发ＥＡＥ的ＤＡ大鼠体内取淋巴细胞,体外再以ＭＢＰ刺激,并用ｒＩＬ２促进增殖,反复数个循环,可获得ＭＢＰ特异的Ｔ淋巴细胞系。将此Ｔ细胞系经照射（１５Ｇｙ）灭活处理后,静脉接种至同基因正常ＤＡ大鼠体内,同时给此ＤＡ大鼠多次口服ＭＢＰ诱导耐受,最后以脊髓匀浆／完全福氏佐剂（ＳＣＨ／ＣＦＡ）攻击经上述处理的大鼠,以观察其ＥＡＥ的发病情况。结果：单独口服ＭＢＰ诱导耐受及单独ＴＣＶ处理的ＤＡ大鼠对随后诱发的ＥＡＥ的抑制率分别为６７％和５０％,而将二者联合应用,则抑制率可达８０％。结论：口服ＭＢＰ与ＭＢＰ特异的Ｔ细胞疫苗接种联合应用,可获得更深程度的耐受效果,多种手段联合应用可能成为临床今后通过诱导耐受防治自身免疫病的新策略。     

~1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。     

脑外伤患者血清髓鞘碱性蛋白测定的临床价值

作者采用酶联免疫吸附法测定脑外伤患者（56例）的血清髓鞘碱性蛋白（MBP）。不考虑治疗因素及时问过程，接影像学检查有无异常进行分组。发现不论影像学有无异常，血清MBP值均较对照组高（P＜0．05），有影像学异常组较无异常组高（P＜0．05），外伤6h内MBP增高不明显，与11h后各组比较有显著性差异（P＜0．05），11h后各组血清MBP值持续较高，统计学处理组间无差异（P＞0．05）。血清MBP检测可作为临床检验的一个重要指标，有助于临床医师判断脑外伤的严重程度。由于脑外伤后血清MBP浓度持续较高，在法医鉴定中可能有重要价值。     

髓鞘素的提取与鉴定

通过口服抗原诱导免疫耐受治疗自身免疫性疾病,是一种应用前景非常广阔的治疗方法。目前研究较多的是口服髓鞘素（myelin)、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP)、髓鞘碱性蛋白的多肽片段等,用以防治实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental allergic encephalovomyelitis,EAE),进而治疗多发性硬化（multiple sclerosis,MS)。本文介绍一种简便实用的方法,用以提取粗制的髓鞘抗原,以便用于实验和临床口服免疫耐受的研究。     

重组人Tum-5融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum-5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum-5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE-30中,转化感受态细胞DHSα,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析.结果:构建了重组融合表达质粒pQE-30-Tum-5,表达的蛋白经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,在约Mr10×103处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的40%,纯化后的蛋白灰度扫描检测,纯度为95%.结论:成功地构建了人Tum-5基因的原核表达载体,并纯化了该基因的原核表达产物.     

从体外培养的人角朊细胞中提取蛋白

０引言我们和其他作者先前的研究表明，在正常人血清中存在着抗角蛋白自身抗体．目前尚不清楚该抗体群的功能作用．但已有实验提示，血清抗角蛋白抗体量或质的变化与某些病变相关．体外实验证明，纯化的抗角蛋白自身抗体可以影响皮肤角航细胞的代谢活动和生长特性．为了深入开展对抗角蛋白自身抗体的实验研究，我们从培养的人角肮细胞中提取纯化了人角蛋白，报告如下．回方法１．１角航细胞取自包皮环切术切下的包皮组织，按以前报道的方法进行无血清培养‘”，使细胞融合生长，覆盖培养瓶壁．１．２抗角蛋白单克隆抗体共４株，即ＤＨＤ，Ｉ…     

水牛角四种不同提取方法的实验研究

本文用四种不同的提取方法对水牛角中的氨基酸进行了分类与定量测定，结果总氨基酸含量以酸碱混合水解法为最高。     

小鼠ERA蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的:对小鼠ERA蛋白(mERA)进行表达、纯化,为真核生物ERA功能研究奠定基础.方法:构建MBP-mERA融合表达载体.在大肠杆菌中诱导表达融合的小鼠ERA蛋白,经直链淀粉亲和层析纯化,Western Blotting鉴定所表达纯化的蛋白.结果:表达的MBP-mERA融合蛋白占菌体总蛋白的18 %;纯化后的融合蛋白纯度为70 %;Western Blotting证实了mERA蛋白的表达.结论:利用基因重组技术,在大肠杆菌中高表达了mera基因,并对融合蛋白进行了初步纯化.     

补骨脂中补骨脂素的提取及纯化

目的从中药材补骨脂中提取补骨脂素。方法补骨脂经粉碎后用50％乙醇浸渍提取，浸提液进行浓缩沉淀，得到膏状物，膏状物用甲醇溶解，活性碳脱杂质，再除去溶剂，放置过夜析出晶体。甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体，甲醇重结晶后得针状白色晶体。薄层分析、高效液相色谱分析其纯度。紫外吸收光谱、HI-NMR谱鉴定其结构。结果与结论晶体物得率0．147％．是一个单体，经过波谱分析确定其为补骨脂素。用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法。     

牛坐骨神经髓鞘碱性蛋白提取及初步应用

采用Y,London法,从牛坐骨神经中提取了髓鞘碱性蛋白(MBP),并对其理化特性和致实验性变态反应性神经炎(EAN)的活性进行鉴定。结果表明MBP分子量为15.3KD,由129个氨基酸组成,其中谷氨酸最多,以该MBP作为变应致敏10只兔,8只发生EAN,其临床表现与Guilliam-Barre综合征相似。我们还观察到MBP能有效地刺激EAN兔淋巴细胞发生特异性免疫应答,以MBP加不完全弗氏佐剂预处理兔再诱导EAN的发生率为20％明显低于未做预处理组的80％(P<0.05)。由于本法简便,提取的MBP活性损失小,适于临床应用。     

人血清及脑脊液髓鞘硷性蛋白放射免疫测定的临床意义

本文采用放射免疫分析法测定了各种神经系统疾病患者的血清标本90例,脑脊液标本61例,发现急性脑血管病、脱髓鞘疾病患者血清和脑脊液中 MBP 的阳性率较其它神经疾病患者高(P<0.05)。结合临床资料分析测定结果表明,在前两种疾病,血清和脑脊液中 MBP 水平高低可反映病情轻重和病情早晚,并有一定辅助诊断价值。     

格林巴利综合征患者脑脊液髓鞘碱性蛋白抗体测定及其抗原制备

目的探讨格林巴利综合征(GBS)是否存在中枢神经系统脱髓鞘现象.方法应用酸提法从胎儿大脑白质中提取髓磷脂碱性蛋白(MBP),经Sephdex-G150柱层析纯化和SDS-PAGE圆盘电泳分析,以纯化的MBP为抗原,用EUSA法测了44例GBS患者、38例其他神经疾病(OND)患者和33例正常人.结果经酸提后的碱蛋白,共有3个洗脱峰;SDS-PAGE证实第三峰中含1.7kD和2.1kD两条区带;GSF-MBP-EgG检测,GBS组阳性率为38.6%(17/44),OND组阳性率为34%(13/38),对照组阳性率为9%(3/33).结论MBP作为髓鞘的主要蛋白在GBS的自身免疫性脱髓鞘的过程中起重要作用.     

骨形态发生蛋白的提取、纯化及诱导成骨的实验报告

①目的提取、纯化牛骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）并验证其异位诱导成骨的活性。②方法采用生物化学方法提取并纯化出ＢＭＰ，植入家兔肌肉和豚鼠颅骨中进行动物实验研究。③结果植入ＢＭＰ组，１４ｄ即有成纤维细胞转化为成软骨细胞；第２１，２８天形成软骨和骨组织。成年豚鼠颅骨缺损修复实验中，植入ＢＭＰ后第２８天即有骨痂生成，８４ｄ时颅骨缺损修复完整。④结论ＢＭＰ有明显的异位诱导骨形成作用     

人脑脊液髓鞘硷性蛋白竞争性酶联免疫测定法

本文以人脑髓鞘硷性蛋白(MBP)为抗原免疫家兔获得单价特异抗血清,在国内首次建立了人脑脊液 MBP 竞争性酶联免疫测定法。本法灵敏度为0.3ng/ml,板内及板间变异系数分别为7.8及14.2％,回收率为94.2％。91份脑脊液标本测定结果表明,中枢神经系统有广泛性病变时伴有 MBP 释放至脑脊液,通过对该特殊成份的检测有助于对该类疾病的病情、病程的了解和辅助诊断,具有重要的临床应用价值。     

艾氏腹水癌免疫核糖核酸对小鼠淋巴细胞蛋白质合成的影响及其活性组份的分离

本文研究了艾氏腹水癌免疫核糖核酸(EAC-I-RNA)体外对小鼠脾淋巴细胞蛋白质合成的影响。结果表明,EAC-I-RNA能显著促进淋巴细胞蛋白质合成,此作用能被RNase所阻断。本文还用Oligo(dT)纤维素柱亲合层析法研究了EAC-I-RNA的活性组份,结果发现,PolyA(+)组份具有很强的促进活性。     

CLINICAL AND IMMUNOLOGIC STATUS OF VIRAL MYOCARDITIS AND ITS TREATMENT

The authors present an analysis of 23 cases ofviral myocarditis and 140 cases of viral cardiomyo-pathy. The anticoxsackie B antibody was l:64 0rmore in 74.2'70 (23/31) cases of acute myocarditisand 52.4To (22/42) of cardiomyopathy. Most ofthem had an increase of B2 0t B4. Five cases ofAdamsStokes syndrome and l inferior myocardialinfarction were associated with increased B2 titer.In viral cardiomyopathy, most had negative phyto-hemagglutinin (PHA) and OT skin tests, with lowOKT3, OKT4 and OKT8, low blastogenesis to PHA,increased serum inhibition factor and abnormaladhesive cell function. After treatment with immuneribonucleic acid (IRNA) or thymosine for 3 6 months,clinical manifestations ameliorated and cell-mediatedimmunity normalized in most of the patients especiallythose after thymosine treatment.     

rhTPO的分子克隆表达及活性测定

目的；分子克隆并表达具有生物学活性的人血小板生成素（rhTPO）。方法：采用PCR、序列测定、原核表达及亲和层析法。结果：以人全长的TPOCDNA为模板[1]，用PCR法获得了编码195个氨基酸残基的hTPO195cDNA并克隆至原核表达质粒pMal－p2中，以麦芽糖融合蛋白（MBP）方式进行了表达。经Amylose树脂系和层析纯化获得了较高纯度的rhTPO195融合蛋白。生物学活性测定结果显示，其促进体外培养的巨核细胞集落形成与日本麒麟（Kirin）公司产品类似。结论；获得了具有天然生物学活性rhTPO，并在原核细胞中获得表达。     

DNA引物酶的提取分离与引物合成活性的研究

以小鼠艾氏腹水癌细胞经超声破碎的提取液为材料，依次用ＤＥ５２和Ｐ１１层析柱进行离子线性洗脱，分别在ＫＣｌ浓度为０．１７～０．２ｍｏｌ／Ｌ和０．２５～０．２７ｍｏｌ／Ｌ处ＤＮＡ引物酶被洗脱下来。用大肠杆菌大片段ＤＮＡ多聚酶Ⅰ延长引物法检测ＤＮＡ引物酶比活性为８７５３Ｕ／ｍｇ，酶总获得为２２．１％。放射自显影法检测引物合成活性显示引物酶合成了不同长度的引物     

人重组骨形态发生蛋白Ⅲ在大肠杆菌中的表达及活性测定

本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组骨形态发生蛋白Ⅲ。运用ＰＣＲ技术，从质粒ｐＳＰ６４／ｈＢＭＰ３中扩增出约０．３３ｋｂ的ｈＢＭＰ３ｃＤＮＡ片断，然后亚克隆到表达质粒ｐＭＳ３１ｂ申，在大肠杆菌一成功地高效表达出人ＢＭＰ３融合蛋白，表达产物具有体内诱导异位化骨的趋势。