TS、DPD表达水平对5-FU疗效的预测价值

目的:探讨胸苷酸合成酶(TS)及二氢嘧啶脱氢酶(DPD)转录水平及其对5-氟脲嘧啶疗效的预测价值.方法:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从胃肠癌细胞株中扩增胸苷酸合成酶及二氢嘧啶脱氢酶的DNA片段,并与内参照基因GAPDH进行比较.结果:对5-FU敏感的细胞株MKN45 TS和DPD的表达水平较低,而其他对5-FU不敏感的细胞株则无此现象.结论:TS及DPD mRNA水平对应用5-氟脲嘧啶治疗胃肠癌的疗效具有一定预测价值.     

胸苷酸合成酶(TS)基因多态性及其与肿瘤的关系

胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是DNA合成的关键酶,也是5-FU为基础化疗的靶向酶。TS基因多态性可能导致酶活性或功能的改变,从而改变个体对肿瘤的易感性以及肿瘤患者对化疗药物的敏感性。因此,TS基因多态性的研究为化疗方案制订及预后评估提供了广阔的前景。本文就TS基因多态性的结构、对表达的影响及其与肿瘤易感性和预后的关系做一简要综述。     

胸苷酸合成酶（TS）基因多态性及其与肿瘤的关系

胸苷酸合成酶(thylnidylate synthase，TS)是DNA合成的关键酶，也是5-FU为基础化疗的靶向酶。TS基因多态性可能导致酶活性或功能的改变，从而改变个体对肿瘤的易感性以及肿瘤患者对化疗药物的敏感性。因此，TS基因多态性的研究为化疗方案制订及预后评估提供了广阔的前景。本文就TS基因多态性的结构、对表达的影响及其与肿瘤易感性和预后的关系做一简要综述。     

叶酸的喹唑啉类似物作为细菌和哺乳类胸苷酸合成酶的抑制剂

以[5-~3H)脱氧尿苷酸([5-~3H)duMP)、四氢叶酸和甲醛等为底物,分别用细菌和小鼠白血病细胞系L1210的胸苷酸合成酶催化,使转化成胸苷酸。作者用这种系统研究了三组叶酸喹唑啉类似物对细菌和小白鼠胸苷酸合成酶的抑制作用。其中还试验了某些化合物对几种哺乳动物肿瘤细胞系生     

5-氮杂胞苷与盐酸洛拉曲克体外联合用药的抗癌增效作用观察

目的 通过在体外分别对DNA甲基化转移酶（DNA methy ltransferase，DNMT）抑制剂5-氮杂胞苷（5-azacytidine，5-aza-C）和新型脂溶性胸苷酸合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克（nolatrexed dihydrochloride，Nolatrexed）联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B 的相互作用的性质观察，探讨DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药的可能性．方法 使用MTT法测定5-aza-C和Nolatrexed单独用药或联合用药的抗癌活性，用抑制浓度的分数之和（a sum of fractio nal inhibitory concentration，SFIC）值及等效剂量分析方法（Isob010gram）评价5-aza-C和Nolatrexed联合用药的作用性质．结果 在5-aza-C和Nolatrexed联合用药时其SFIC值均小于或等于l，由此得到的等效剂量曲线图形表现为凹形．结论 5-aza-C和Nolatrexed体外联合用药抗癌相互作用性质为明显的增效作用，DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药达到抗癌增效作用是可能的．     

5—氟脲嘧啶与醋酸安宫黄体酮联合治疗对二甲基苯并蒽诱导的肿瘤细胞中嘧啶核苷磷酸化酶和胸苷酸合成酶活性的影响

醋酸安宫黄体酮与 5 -氟脲嘧啶联合治疗 ,对二甲苯并蒽诱导的 SD大鼠乳腺肿瘤的体积、嘧啶核苷磷酸化酶活性及胸苷酸合成酶活性的影响。醋酸安宫黄体酮能增加 5 -氟脲嘧啶抗肿瘤活性 ,并能抑制因用 -氟脲嘧啶所致的体重下降。与单用 5 -氟脲嘧啶的对照组相比 ,醋酸安宫黄体酮组和醋酸安宫黄体酮与 5 -氟脲嘧啶联合用药组均能增加嘧啶核苷磷酸化酶的活性。与单用 5 -氟脲嘧啶组相比 ,醋酸安宫黄体酮与5 -氟脲嘧啶联合组 ,胸苷酸合成酶活性的抑制程度增加。这些结果提示 :醋酸安宫黄体酮能提高 5 -氟脲嘧啶的抗肿瘤活性 ,并能降低 5 -氟脲嘧…     

胸苷酸合成酶对结肠癌5-FU治疗耐药的影响

目的 探讨结肠癌对5-FU产生耐药的机制，揭示不同胸苷酸合成酶(TS)蛋白表达水平的结肠癌患者对5-Fu治疗的敏感性。方法 采用免疫组化S-P法检测60例结肠癌组织及正常对照组中TS蛋白的表达情况。结果 正常结肠黏膜组织中的TS表达水平高于结肠癌组织，结肠癌组织中TS表达水平与5-Fu化疗患者的预后呈负相关，与患者的性别、有无淋巴结转移及癌组织的分化程度无关。结论 结肠癌组织中TS的表达水平可以作为患者对5-Fu为主的化疗疗效及预后的判断指标。     

耐5-氟尿嘧啶的人结肠癌HT-29/5-FU细胞株的建立及其生物学特性

目的建立耐5-氟尿嘧啶人结肠癌细胞株(HT-29/5-FU)并观察其生物学特性。方法采用5-FU持续接触浓度递增法诱导;观察细胞形态变化和克隆形成率;MTT法测定生长曲线和药物敏感性;Western blot法分析胸苷酸合成酶(TS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果 HT-29/5-FU的耐药指数为3.59;与HT-29细胞相比,HT-29/5-FU细胞形态发生改变、生长缓慢、克隆形成率降低,TS和DPD高表达;S期细胞比例增多,更能耐受5-FU诱导的细胞凋亡。结论 HT-29/5-FU细胞株生物学性状的改变可能是5-FU化疗耐药机制的重要组成部分,有助于阐明肿瘤潜在耐药机制和逆转肿瘤耐药。     

用DNA分子克隆技术对RNA病毒的研究

由于产生重组体DNA的技术,有可能制得RNA病毒基因组的DNA复制品,已使对RNA病毒的研究有了革命性的变化,这样制得的DNA复制品就可用来进行限制性内切酶分析与序列分析。因而可以获得对RNA病毒基因组结构方面研究的详细资料。本文作者采用了重组体DNA方法对脊髓灰质炎病毒和逆转录病毒的基因组进行了研究。为了制备一种脊髓灰白质炎病毒RNA基因组的DNA复制品,作者利用寡聚脱氧胸苷酸作引物,逆转录RNA为一负链DNA,再让此单链DNA折回     

TS、DPD与5-FU耐药关系的研究进展

在肿瘤的化学治疗中,选择有效的药物是化疗成功与否的关键.5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是一种代谢拮抗剂类药物,广泛应用于胃肠、头、颈、胸和卵巢等部位恶性肿瘤的治疗.由于它疗效确切,目前仍是肠道恶性肿瘤的首选化疗药[1],但有些病例对5-FU为主的化疗并不敏感,从而导致化疗失败.为提高5-FU对原发性和继发性耐药患者的治疗效果,有必要阐明5-FU耐药机制,找出能用于评价5-FU化疗敏感性的指标.近几年来,国外一些学者对5-FU的耐药机制作了大量研究,认为胸腺嘧啶合成酶(TS)与二氢嘧啶脱氢酶(DPD)表达水平与肿瘤细胞对5-FU的敏感性密切相关[2-4],联合检测TS与DPD mRNA水平可以预测5-FU治疗的有效性[5].本文将对TS和DPD作一综述.     

胃癌干细胞对氟尿嘧啶敏感性及化疗药物耐受细胞的生物学机制

背景：氟尿嘧啶是胃癌化疗的基础药物,临床上耐药现象较为常见。肿瘤干细胞对化疗药敏感性较低,可能是导致化疗后肿瘤复发进展的重要原因。 目的：探讨胃癌干细胞对氟尿嘧啶敏感性,从细胞生物学角度分析胃癌的化疗耐药机制。 方法：利用免疫组织化学染色法检测69例胃癌组织内干细胞标志物CD44和耐药蛋白胸苷酸合成酶表达情况;基于克隆形态的分选策略,从AGS胃癌细胞系内分离胃癌干细胞克隆,检测CD44和胸苷酸合成酶的表达和自我更新能力;利用CCK-8法检测不同AGS细胞克隆的5-氟尿嘧啶半数抑制浓度(IC50)。 结果与结论：69例胃癌组织标本中,胸苷酸合成酶和CD44的表达阳性率分别为57%(39/69)和61%(42/69),CD44与胸苷酸合成酶的表达之间呈正相关关系(Kappa=0.41,χ²=11.59,P < 0.05)。AGS细胞系的克隆形成率为39%(29/69),其中,副克隆、次克隆、全克隆所占比例分别为 17%(5/29)、69%(20/29)、14%(4/29)。二代克隆形成后,采用胰酶消化克隆并再次低密度接种传代,副克隆均无法传代,次克隆仅少数可连续传代,全克隆均可连续传代。不同浓度5-氟尿嘧啶作用之后,全克隆的生长抑制率均显著低于次克隆和AGS细胞,经比较差异均有显著性意义(P < 0.05)。以上结果表明胃癌干细胞对5-氟尿嘧啶敏感性较低,其对化疗药物耐受,可能是临床胃癌化疗耐药的产生机制之一。     

寡脱氧胸苷酸磁珠的制备

与寡脱氧胸苷酸偶联的磁珠可用于mRNA的快速提取,但价格昂贵。本文介绍了一种将寡脱氧胸苷酸共价偶联于磁性颗粒的有效方法,偶联反应可在半天内完成,而且其价格大大低于商品磁性珠,可用于mRNA的提取和作为cDNA合成的引物。寡脱氧胸苷酸磁性珠的制备所需的试剂为:5′-氨基-寡脱氧胸苷酸(5′-amino-oligo(dT)_(30)),1-甲基咪唑,1-     

胃癌干细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

背景：5-氟尿嘧啶是一种常用的胃癌化疗药物,但临床治疗过程中较易出现耐药现象,影响治疗效果。研究表明肿瘤干细胞对化疗药敏感性较低,可能是导致化疗耐药的重要原因。 目的：体外环境下分析胃癌干细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,了解胃癌化疗耐药相关机制。 方法：基于克隆形态的分选策略,从人胃癌AGS细胞系内分离胃癌干细胞克隆,采用免疫细胞化学染色分析不同克隆CD44和胸苷酸合成酶的表达,克隆形成实验评估不同类型克隆的自我更新能力,CCK-8法检测不同浓度5-氟尿嘧啶作用下人胃癌AGS细胞克隆生长抑制率。 结果与结论：人胃癌AGS细胞经低密度接种培养后,可形成32个不同形态的克隆,其中,副克隆、次克隆、全克隆所占比例分别为19%(6/32)、66%(21/32)、16%(5/32)。全克隆高表达CD44和胸苷酸合成酶,接种后可再次形成大量二代克隆;次克隆弱表达CD44和胸苷酸合成酶,接种后形成少量的二代克隆;副克隆不表达或弱表达CD44和胸苷酸合成酶,接种后未形成二代克隆。在不同浓度5-氟尿嘧啶的作用下,次克隆以及人胃癌AGS细胞的生长抑制率均显著高于全克隆(P均 < 0.05)。结果表明,在体外条件下,胃癌干细胞对5-氟尿嘧啶敏感性较低,推测其可能为临床化疗耐药的重要机制。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

结肠癌细胞获得性5氟尿嘧啶耐药的机制研究

目的： 探讨结肠癌细胞获得性5氟尿嘧啶耐药的机制。 方法： 建立5-FU耐药的结肠癌细胞，通过免疫印迹法检测多种耐药相关蛋白的表达，分析耐药的可能机制。 结果： 反复用5-FU处理结肠癌DLD1和DLD1-TRAIL/R细胞，得到5-FU耐药的DLD1-5-FU/R和DLD1-TF/R细胞，进一步研究发现,5-FU不能诱导耐药细胞发生S期停滞和DNA损伤。接着发现耐药细胞中有过表达的Bik、Bcl-Xs和Bcl-XL蛋白，而DLD1亲代细胞过表达Bcl-XL后，能够部分抵抗5-FU诱导的凋亡，但仍不能耐受5-FU诱导的S期停滞和DNA损伤。结论： 过表达的Bcl-XL蛋白对结肠癌细胞获得性5-FU耐药具有一定作用，但过表达Bcl-XL不影响5-FU诱导的DNA损伤和细胞周期的改变，这提示结肠癌获得性5-FU耐药还存在着Bcl-XL之外的其它机制。     

蒽环类抗癌抗生素对DNA碱基顺序作用的研究

本文采用体外无细胞RNA合成系统对蒽环类中的代表药阿克拉霉素B(ACM-B)和阿霉素(ADM)抑制十种不同顺序排列的DNA模板的依赖DNA的RNA合成作了比较研究。实验结果表明两药对依赖DNA的RNA合成均有显著的抑制;抑制作用的强弱与不同的模板有关。抑制作用可被增加DNA模板的量逆转。这有力地表明两药抑制     

阿克拉霉素B和亚德里亚霉素对人胃癌细胞核仁作用的比较

阿克拉霉素B(Aclacinomycin B,AcM—B)为新抗肿瘤抗生素,与亚德里亚霉素(Adriamycin)(ADM)同属葸环类抗肿瘤抗生素。ACM—B为葸环类第Ⅱ类,抑制细胞DNA相RNA合成,尤以抑制RNA的合成特别明显;ADM为第Ⅰ类,抑制DNA和RNA合成的作用程度相近。ACM-B和ADM这种抑制DNA和RNA作用的差别的机制,尚未见报道。本文就ACM—B和ADM对细胞核仁作用的特点结合大分子合成的抑制作用作一初步的比较。     

结直肠癌中5-氟尿嘧啶代谢酶的表达及临床意义

目的：分析5-氟尿嘧啶（5-F1uorouraci1,5-FU）代谢酶在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系,为进一步探讨其在指导结直肠癌化疗中的潜在意义提供理论依据。方法构建含有72例结直肠癌、56例癌旁远端切缘的组织芯片,采用免疫组化EnVision两步法检测胸苷酸合成酶（ thymidy1ate synthetase,TS）、胸苷酸磷酸化酶（ thymidine phosphory1ase, TP）、二氢嘧啶脱氢酶（ dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD）在两种组织芯片中的表达,并分析三者表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中的TS表达水平低于癌旁远端切缘组织（ P=0.876）;其表达与TNM分期有关（P=0.043）;与患者总生存期呈正相关（P=0.027）。结直肠癌组织中TP表达水平高于癌旁远端切缘组织（P=0.315）;其表达与淋巴结转移有关（ P=0.009）;与患者预后呈负相关（ P=0.040）。结直肠癌组织中DPD表达水平高于癌旁远端切缘组织（P=0.071）;其表达与组织学类型有关（P=0.029）;DPD高表达的患者总生存期显著缩短（P=0.011）。结论在以5-FU为基础化疗的结直肠癌患者中,TS、TP、DPD可以作为预后的重要指标。TS表达与临床分期密不可分,可作为结直肠癌进展的生物学标志。TP表达与淋巴结远处转移及复发密切相关,是影响患者术后复发转移的重要因素。     

5-氟尿嘧啶和它的核苷对L5178Y细胞作用机制的差别

5-氟尿嘧啶(Fu)临床广泛用于治疗胃肠癌,故在细胞水平了解Fu对DNA和RNA的影响非常重要。本文试图在小鼠白血病L5187Y细胞用核酸前体掺入酸不溶部分和用正常核酸代谢物逆转的方法,说明Fu,5-氟尿嘧啶核苷(FuR)和5-氟-2’-脱氧尿嘧啶核苷(FudR)对DNA和RNA合成的影响。     

细胞外信号调节激酶在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的 :本研究主要从细胞外信号调节激酶 (ERKs)的角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在缓激肽 (BK)介导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法 :通过3H 胸苷 ( 3H TdR)掺入率与SMC3H 亮氨酸掺入率分别反映SMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率 ;并通过给予MAPK激酶 (MEK )特异性抑制剂PD0 980 5 9及ERKS抑制剂UO12 6预处理 ,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果 :①BK( 10 - 8mmol/L)处理 3 0minVSMC3H 胸苷掺入率和3H 亮氨酸掺入率均明显增高 ;②BK增高3H 胸苷掺入的作用可明显被PD0 980 5 9所抑制和部分被UO12 6所抑制 ;③BK增高3H 亮氨酸掺入的作用可部分被PD0 980 5 9和UO12 6所抑制。结论 :ERKs激活在缓激肽导致VSMC增殖反应中具有重要作用 ,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应 ,影响血管平滑肌细胞的增殖效应     

5-氟尿嘧啶通过促进miR-22表达抑制肝癌细胞增殖

目的研究5-氟尿嘧啶(5-FU)对miR-22在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法用Real-time PCR法检测肝细胞癌组织及细胞系中miR-22的表达;用Real-Time PCR法检测经不同浓度5-FU处理的肝癌细胞HepG2和Huh7中miR-22及其初始转录产物pri-miR-22的表达;用miR-22类似物及5-FU处理肝癌细胞HepG2和Huh7,并用Western blot法检测miR-22靶基因HDAC4的表达;设计拯救实验(rescue assay)研究5-FU、miR-22与肝癌细胞增殖的关系。结果 miR-22在肝细胞癌组织及细胞系中表达下调;5-FU可以诱导肝癌细胞系HepG2、Huh7内源性miR-22、pri-miR-22表达水平明显上调(P0.01);miR-22过表达及5-FU处理可以抑制HepG2、Huh7,HDAC4蛋白表达水平(P0.01)。结论 5-FU通过调控miR-22介导的HDAC4信号通路发挥抑制肝癌细胞增殖的作用。