TGF-β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响

目的 :研究TGF - β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响。方法 :人腹膜间皮细胞(HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 )和TGF - β1刺激组两组(F12 TGF - β15ng/ml) ,分别在 2 4 ,4 8h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)的含量 ;采用半定量逆转录多原酶链反应 (RT -PCR)检测HPMC细胞内FN ,PAI - 1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果 :HPMC表达FN ,PAI - 1和bFGF ;HPMC在 5ng/mlTGF - β1刺激下分泌FN及PAI - 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;HPMC经TGF- β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI- 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调18.5 4 % ,8.6 %和 6 6 .9%。结论 :TGF - β1可促进HPMC合成与分泌细胞外基质和bFGF。     

黄芪对TGF—β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

OBJECTIVE: To study the effect of huangqi on peritoneal sclerosis and its possible mechanism. METHODS: Isolated human peritoneal mesothelial cells (HPMC) was cultured. Cultured HPMC were treated with F12 without serum (control group), F12 with TGF-beta 1 (TGF-beta 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 100 micrograms/ml (huangqi 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 1 mg/ml (huangqi 2 group). Fibronectin(FN) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) were detected by ELISA method. The expression of FN mRNA, PAI-1 mRNA and bFGF mRNA was detected by RT-PCR method. RESULTS: 1. HPMC expressed FN, PAI-1, and bFGF. 2. Fn and PAI-1 significantly increased compared with control with 5 ng/ml TGF-beta 1 stimulated at 24 hours and 48 hours(P < 0.05); 3. The different concentration of huangqi decreased FN and PAI-1 expression compared with TGF-beta 1 group, especially 1 mg/ml huangqi at 24 hours(P < 0.05). 4. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were higher in 12 hours after stimulation with TGF-beta 1 compared with control. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were lower in 12 hours after stimulation with different concentration of huangqi (100 micrograms/ml and 1 mg/ml) than those in the TGF-beta 1 group. CONCLUSION: TGF-beta 1 promotes extracellular matrix synthesis and secretion of HPMC. Huangqi partly counteracts the synthesis of human peritoneal mesothelial cell's extracellular matrix by the stimulation of TGF-beta 1.     

TGFβ1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)细胞外基质合成与分泌的影响。方法 :将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC ,用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的蛋白质水平 ;用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测转染细胞内FN ,PAI 1和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达 ,并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。结果 :TGFβ1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4h后 ,FN ,ColⅠ ,PAI 1mRNA分别下调 17% ,2 6 % ,9.6 % ;转染 4 8h后FN ,PAI 1蛋白含量亦明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质 ,在腹膜纤维化的研究及防治中有潜在的应用价值     

TGFβ1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGFβ1）反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）细胞外基质合成与分泌的影响。 方法：将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC，用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的蛋白质水平；用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测转染细胞内FN，PAI-1和胶原Ⅰ（ColⅠ）的mRNA表达，并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。 结果：TGFβ1反义RNA转染HPMC后，与对照组相比，转染24 h后，FN，ColⅠ，PAI-1 mRNA分别下调17％，26％，9.6％；转染48ｈ后 FN，PAI-1蛋白含量亦明显下降（P<0.05）。 结论：人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质，在腹膜纤维化的研究及防治中有潜在的应用价值。     

糖尿病大鼠肾组织TGF-β1及细胞外基质表达

目的观察糖尿病早期大鼠肾组织TGF-β1的表达与肾功能改变的相关性.方法用AV1000全自动生化分析仪观察链脲菌素实验性大鼠肾功能变化情况;取糖尿病2、4周大鼠双肾称重后取材,常规制片HE及PAS染色观察组织学改变;免疫组化采用LSAB法分别测实验组及对照组大鼠肾组织TGF-β1、FN 、LN的表达.结果糖尿病组大鼠肾功能障碍,部分指标糖尿病4周组比糖尿病2周组显著增高(P＜0.05).组织学观察糖尿病组大鼠亦显示肾小球肥大,系膜区增宽及部分肾小球囊壁、近曲小管基底膜出现PAS阳性均质蛋白性物质.结论 DM大鼠肾小球TGF-β1表达上调,与两种ECM成分LF、FN过度聚集呈显著正相关,证实了TGF-β1对ECM的异常调节和促进肾小球硬化的作用.     

银杏内酯B对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及细胞外基质分泌的影响

目的观察银杏内酯B对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MC)转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)分泌增加的抑制作用。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组、银杏内酯B高、中、低剂量组,分别于6、12、24h后ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1、FN、LN、ColⅣ蛋白含量,荧光半定量RT-PCR法检测TGF-β1基因表达的变化。结果正常培养的大鼠肾小球系膜细胞可分泌一定量的FN、LN、ColⅣ及TGF-β1,LPS刺激后各成分分泌量均明显增加,银杏内酯B高、中、低剂量组在各个时间点相对于LPS刺激组各观察指标均受不同程度的抑制,并且银杏内酯B可抑制LPS刺激后TGF-β1mRNA的增高表达,而且这种抑制作用呈现剂量依赖效应。结论银杏内酯B能够抑制LPS刺激引起的系膜细胞分泌细胞外基质的增加,这种抑制作用可能通过TGF-β1调节。     

转化生长因子-β1对大鼠腹膜间皮细胞炎症因子及细胞外基质表达的影响

目的 研究转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠腹膜间皮细胞炎症因子表达和细胞外基质（ECM）积聚的影响。方法 体外培养SD 大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24h 后,采用RT-PCR 检测TGF-β1（10ng/ml）刺激后0、3、6、12、24、48h 单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白介素-6（IL-6）、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA 的表达情况;Western blot 检测TGF-β1（10ng/ml）刺激后0、4、12、24、48h CollagenⅠ和PAI-1 表达情况;ELISA 法检测MCP-1 和IL-6 表达情况。结果 TGF-β1处理6h 后MCP-1、IL-6 和PAI-1mRNA 即开始逐渐升高,与0h 组的差异均有统计学意义（均P＜0.05）,24h 后显著升高（均P＜0.01）;TGF-β1 处理12h 后CollagenⅠmRNA 表达开始明显升高,与0h 比较差异有统计学意义（P＜0.05）,24h 后有显著升高（P＜0.01）;TGF-β1 处理4h 后IL-6 表达水平升高（P＜0.05）,24h 后显著升高（P＜0.01）;处理12h 后MCP-1 和PAI-1 表达水平较0h 明显升高（P＜0.05）,处理24h 后CollagenⅠ表达水平显著升高（P＜0.05）;TGF-β1 显著增加MCP-1、IL-6、CollagenⅠ、PAI-1 及其mRNA 的表达上调。结论 TGF-β1可能通过诱导大鼠腹膜间皮细胞炎症因子上调表达和ECM积聚导致腹膜纤维化。     

己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤和TGF-β1、FN分泌的影响

目的研究己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞（HPMC）损伤和TGF-β1、FN分泌的影响。方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并体外培养HPMC。采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平以示细胞损伤程度 ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、FN的水平。结果与单纯对照组相比,2.5%L-PDS致培养液中LDH水平明显增高（P〈0.01） 同时培养液中TGF-β1、FN蛋白质水平增加。在2.5%L-PDS刺激下,100μg/ml己酮可可碱与下调培养液LDH,提高MTT渗入量,并减少TGF-β1、FN蛋白质水平。结论己酮可可碱可拮抗乳酸盐腹膜透析液致HPMC损伤并下调TGF-β1和FN的表达。     

雷公藤多苷对肾小球细胞外基质以及TGF-β1的影响

肾小球系膜细胞 ( MC)增殖以及细胞外基质( ECM)积聚是多种肾小球疾病共有的病理学特征 ,而 ECM过多积聚最终导致肾小球硬化以致肾功能衰竭[1] 。ECM积聚是多种因素参与的一个复杂的生物学过程 ,其中转化生长因子 - β1 ( TGF- β1 )是促进 ECM积聚的一个重要调控因子 [2 ]。所以抑制 MC增殖 ,减少 ECM的积聚 ,是延缓肾小球疾病进展 ,防止肾功能衰竭的重要环节。雷公藤多苷( TW)是临床上治疗慢性肾炎的常用药物 ,现已证实TW对 MC增殖有明显抑制作用[3 ] ,而 TW对 MC分泌 ECM和 TGF- β1的作用 ,目前尚未见报道。本实验利用 …     

糖尿病大鼠肾间质TGF-β1和α-SMA的表达与细胞外基质沉积的关系

目的：观察糖尿病大鼠肾小管间质中转化生长因子(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与纤维连接蛋白(FN)和胶原Ⅲ型(ColⅢ)沉积的关系。方法：大鼠随机分为正常对照组(A组)，糖尿病1周组(B组)，特尿病2周组(C组)，糖尿病1月组(D组)和糖尿病2月组(E组)。用免疫组化方法检测肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和ColⅢ，PAS染色观察肾组织形态学改变，生化法测定大鼠血糖、血脂、血尿肌酐以及尿蛋白。结果：糖尿病2周开始肾小管见TGF-β1表达，并随病程进展而逐渐增多。糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多，2月时更多，且可见肾问质中有α-SMA表达；FN和ColⅢ增多与TGF-β1、α-SMA呈正相关。结论：TCF-β1刺激α-SMA的表达，从而促进糖尿病大鼠肾小管问质FN和ColⅢ的沉积。     

TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

目的：探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF-β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法：取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养，经鉴定95%以上为人腹膜间皮细胞。用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞，采用免疫组织化学染色、Western blotting，ELISA以及RT-PCR等方法，分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达以及在细胞内的迁移；细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达；细胞外纤维连接蛋白（FN）的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原（COL1）的蛋白和mRNA表达。结果：人腹膜间皮细胞内p-Smad2/3的蛋白表达在TGF-β1刺激后15 min即开始显著增加，此时p-Smad2/3的阳性细胞率为29%，细胞着色主要分散在细胞质中，30 min阳性细胞率81%至1 h阳性细胞率84%增加最明显，细胞着色加深且集中在细胞核及周边，2 h蛋白表达明显回落，此时阳性细胞率为37%，细胞着色转淡并又分散至细胞质中；细胞内Smad7的蛋白表达在TGF-β1刺激后24 h明显增加，48 h时达高峰，mRNA表达呈时间依从性增强；细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF-β1刺激后24 h起均明显增加，且均显示一定的时间依从性。结论：人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能被TGF-β1特异性激活，并在TGF-β1致腹膜纤维化过程中发挥效应；经TGF-β1刺激后，在该通路中主要起抑制作用的Smad7蛋白和mRNA表达均反馈性增加。     

人腹膜间皮细胞的培养及特征

目的 :建立人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型 ,检测HPMC细胞外基质蛋白及白细胞介素 (IL - 8)的表达。方法 :采用胰蛋白酶 -EDTA消化法 ,从人的腹膜组织中分离HPMC。采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法 (即SP法 ) ,对培养细胞进行鉴定。采用SP法检测HPMC纤维连接蛋白 (FN)、胶原Ⅲ和胶原V及转化生长因子 (TGF) β1表达。采用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测HPMCIL - 8mRNA和FNmRNA的表达。结果 :光镜示细胞融合后呈多边形 ,超微结构下可见丰富的微绒毛和内质网 ,免疫组化染色结果示HPMC可表达角蛋白 ,波形蛋白 ,胶原Ⅲ ,FN ,TGFβ1蛋白 ,Ⅷ因子、胶原V表达阴性。人腹膜间皮细胞亦表达FNmRNA和IL - 8mRNA。结论 :HPMC培养模型的建立 ,可为进一步研究腹膜纤维化的防治及IL - 8在腹膜透析中的作用提供理论依据。     

高糖对大鼠腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1调节作用的研究

目的：观察高糖对体外培养的大鼠腹膜阐皮细胞（PMC）细胞膜上葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）含量的调节作用。方法：体外培养的Wistar大鼠PMC置于不同糖浓度培养液中；流式细胞仪定量检潮细胞膜上CLUT1的含量。生化分析便检测PMC对葡萄糖的撮入。结果：随着细胞外葡萄糖浓度增加，细胞膜上GLUT1的表达增加。同时伴有PMC对葡萄糖的转运坩加（P〈0．05）。结论：葡萄糖以浓度依赖方式上调PMC细胞膜上CLUT1的蛋白表达夏PMC对葡萄糖转运的增加导致PMC爱损。     

吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响

目的:探讨吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响。方法：用LPS或2.5%葡萄糖分别与不同浓度的吲哚美辛作用于体外培养的人腹膜间皮细胞，采用酶联免疫吸附法检测上清液中纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)的含量。结果：腹膜间皮细胞在2.5%葡萄糖或10mg/L LPS刺激下分泌FN及PAI-1明显增加，与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)；0.15mg/L及0.75mg/L吲哚美辛可明显抑制2.5%葡萄糖或10mg/L LPS刺激的腹膜间皮细胞24h内分泌FN及PAI-1蛋白水平(P<0.05)。结论：吲哚美辛可抑制人腹膜间皮细胞合成细胞外基质，在腹膜纤维化的防治中有潜在的应用价值。     

肝素和高糖对人腹膜间皮细胞合成细胞外基质的影响及可能机制

目的 探讨肝素和高浓度葡萄糖对体外培养的人腹膜间皮细胞（HMC)合成细胞外基质(ECM)的影响，肝素和高糖之间的相互作用及其可能的机制。方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测细胞培养上清液的纤维连结蛋白(FN)、I型胶原(COLI)、转移生长因子(TGF)—β1含量；采用免疫细胞化学法检测细胞核c—fos、c—jun蛋白的表达。结果 3．86％D-葡萄糖可明显促进FN和COLI的分泌，肝素可明显降低：HMC的FN和COLI的分泌，也可降低高糖环境下FN和COLI的分泌。3．86％D-葡萄糖对TGF—β1的分泌无明显影响，肝素对高糖环境下TGF—β1的分泌亦无明显影响。3．86％D-葡萄糖可促进细胞核c—fos、c—jun蛋白表达增加，肝素可减少高糖引起的c—fos蛋白增加，但对c—jun蛋白增加无明显影响。结论 高糖通过促进活化蛋白—1(AP—1，c—fos／c—jun)表达的增加来促进ECM分泌，可能是长期腹膜透析导致腹膜硬化的一个重要因素；肝素在高糖环境下可抑制高糖所致的AP—1(c—Ios／c—jun)表达增加及ECM分泌，对保护腹膜功能可能起一定作用。     

细胞外基质对内皮细胞粘附功能的影响及意义

目的：促进内皮细胞在聚氨酯材料上粘附，为实现人工心血管内皮细胞化探索条件和方法。方法：用荧光法观察细胞外基质成分对内皮细胞在聚氨酯材料上粘附的影响。结果：用胶原Ｉ，胶原Ⅳ，纤维粘连蛋白（ＦＮ）玻璃粘连蛋白（ＶＮ）等细胞外基质成分及对照组牛血清白蛋白（ＢＳＡ）分别预衬聚氨酯５０ｍｇ／Ｌ浓度组，内皮细胞与材料接触１５ｍｉｎ后，粘附率分别为３２．３１％，５４．４３％，４２．３４％，６３．７７％和２７．７     

葡萄糖PDS对单层人腹膜间皮跨细胞电阻及迁移修复能力的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖PDS（PDS）对单层人腹膜间皮细胞（HPMCs）跨细胞电阻（TER）以及迁移修复能力的影响。方法：用不同葡萄糖浓度PDS(1.5%,2.5%,4.25%)分别与DMEM以1∶1比例混合后体外培养HPMCs。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞增殖。使用双池培养皿(transwell)构建HPMCs单层细胞模型。采用TER技术测定PDS对HPMCs通透性的影响。划痕损伤实验观察葡萄糖对HPMCs修复再生能力的影响。结果：不同浓度葡萄糖PDS(1.5%,2.5%,4.25%)干预均可明显地抑制HPMCs的增殖(P＜0.05)。TER值随PDS干预时间的延长而逐渐下降,且与葡萄糖浓度呈负相关(P＜0.01)。葡萄糖PDS可明显抑制HPMCs迁移修复能力,且与葡萄糖浓度相关。结论：高糖PDS液抑制细胞增殖,降低单层HPMCs的TER值,并抑制HPMCs损伤后迁移修复能力。提示PDS中高糖成分是导致腹透患者腹膜高通透性和超滤衰竭的重要因素。