鞘内注射Quinpirole对骨癌痛大鼠镇痛及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的 探讨鞘内注射Quinpirole（QNP）对骨癌痛大鼠镇痛及脊髓小胶质细胞活化的影响。方法 选取健康成年雄性SD大鼠60只通过胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞液制备骨癌痛模型。将骨癌痛大鼠随机分为高剂量10μg/kg QNP（QNP-H）、低剂量5μg/kg QNP（QNP-L）及生理盐水（NS）3组,每组20只;QNP采用每日鞘内注射方式,注射体积为10μl。选取20只同周龄大鼠作对照（C）,NS组和C组仅给予等体积生理盐水。分别于治疗前、治疗1、3、5、7d后对各组进行行为学检测,分析以上观察时间点大鼠的机械缩足阈值（MWT）和缩足热潜伏期（WTL）;采用免疫组化法检测脊髓离子钙接头蛋白分子 1（Iba-1）染色以及特异表达补体C3受体（OX-42）和大麻素受体2（CB2）的荧光积分光密度（IOD）;酶联免疫吸附法检测脊髓肿瘤坏死因子（TNF）-α和白介素（IL）-1β水平;Western blotting检测脊髓Toll样受体-4（TLR-4）及受体-2（TLR-2）蛋白表达水平。结果 与C组相比,其余3组各观察时间点的MWT、WTL降低;Iba-1染色程度、OX-42和CB2的IOD、脊髓TNF-α和IL-1β水平、TLR-4和TLR-2水平均升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。在骨癌痛大鼠模型中,QNP-H组、QNP-L组在上述指标与NS组的差异均有统计学意义（P＜0.05）;且QNP-H组均优于QNP-L组（P＜0.05）。结论 鞘内注射QNP对骨癌痛大鼠有较好的镇痛作用,同时可降低脊髓小胶质细胞活化及炎症反应。     

华蟾素对骨癌痛大鼠的镇痛效应及对脊髓胶质细胞活化的影响

目的：探讨华蟾素对骨癌痛大鼠的镇痛效应及对脊髓胶质细胞活化的影响。方法：选用雌性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、假手术组（胫骨内注射20 μL PBS）、模型组和华蟾素干预组,每组12只。模型组与华蟾素干预组大鼠胫骨内注射20 μL Walker 256乳腺癌细胞构建骨癌痛模型。华蟾素干预组于造模第7天开始腹腔注射华蟾素注射液,其余各组每天予以等量生理盐水,各组于造模前以及造模后第2、5、7、9、13、15天分别测定热缩足阈值和机械缩足阈值,造模第7天行胫骨X线摄片观察骨质破坏程度,末次行为学检测后处死大鼠,取外周血、L4～L6节段脊髓,利用免疫组化检测星形胶质细胞标记物（GFAP）和小胶质细胞标记物（Iba-1）的表达情况,ELISA检测外周血及脊髓中相关炎性因子（TNF-α和IL-1β）的表达。结果：X线显示模型组大鼠胫骨骨皮质破坏明显、骨质连续性缺乏、骨组织肿胀明显,正常对照组、假手术组未见明显骨组织肿胀、骨连续性较好,提示造模成功。行为学检测结果表明与模型组比较,华蟾素干预可明显缓解骨癌所诱发的机械痛敏、热痛敏（P < 0.01）。免疫组化结果提示与假手术组相比,模型组大鼠脊髓胶质细胞活化明显增强（P < 0.05）;与模型组相比,华蟾素能显著抑制脊髓胶质细胞活化（P < 0.05）。ELISA检测结果显示与假手术组相比,模型组大鼠脊髓及血清中TNF-α和IL-1β表达增强（P < 0.05）;与模型组相比,华蟾素能降低TNF-α和IL-1β表达（P < 0.05）。结论：华蟾素对骨癌痛大鼠有较好的镇痛效应,其镇痛作用可能是通过抑制脊髓星形胶质细胞及小胶质细胞活化发挥作用的。     

大鼠骨癌痛模型中脊髓背角神经元与星型胶质细胞相互联系的研究

目的:研究大鼠骨癌痛模型中脊髓背角神经元与星型胶质细胞相互联系。方法:利用Walker256乳腺癌细胞建立大鼠骨癌痛模型后,分别鞘内注射药物阻断神经元的活化（c-Fos反义寡核苷酸探针,c-Fos ASO）和星形胶质细胞的活化（L-α-aminoadipate,L-α-AA）,然后分别检测大鼠痛行为学改变;利用免疫荧光染色法和Western blot实验检测大鼠脊髓背角神经元活化标记物c-Fos和星形胶质细胞标记物GFAP的表达变化。结果:骨癌痛大鼠出现了显著的痛行为学改变并激活了脊髓背角神经元和星形胶质细胞,表现为早期c-Fos和晚期GFAP的表达增加。鞘内注射c-Fos ASO或L-α-AA均有明显镇痛效果。免疫荧光染色提示c-Fos ASO不仅能显著抑制骨癌痛大鼠神经元的活化,而且对星形胶质细胞的活化也有抑制作用。与此同时,Western blot显示L-α-AA不但抑制了星形胶质细胞的活化,也缩短了神经元的活化时间。结论:神经元和星形胶质细胞相互联系伴随着骨癌痛的发生发展。因此,研究新的镇痛策略,应综合考虑两者的协调关系。     

鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002对小鼠骨癌痛的影响

[目的]了解鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002对小鼠股骨癌痛的影响。[方法]C3H／HeJ小鼠32只,随机分为对照组、假手术组、骨癌组和鞘内LY294002＋骨癌组（抑制剂组）,每组8只,分别于造模前和模型建立后的第8、10、12、14、17、21d测定各小鼠机械痛敏（机械缩腿阈值,mechanieal withdrawal threshold,MWT）和热痛敏（热缩腿潜伏期,thermal withdrawal latency,TWL）,LY294002术前鞘内注射。[结果]与术前相比较,骨癌组小鼠术后12、14、17、21d MWT明显下降（t=4．527,P=0．003;t=3．698,P=0．008;t=4．043,P=0．005;t=4．309,P=0．004）,TWL明显降低（t=5．946,P=0．001;t=5．214,P=0．001;t=6．786,P=0．000;t=5．758,P=0．001）;与假手术组相比较,骨癌组小鼠术后12、14、17、21d MWT明显下降（P=0．027;P=O．000;P=0．000;B=0．000）,TWL明显降低（P=0．000;P=0．000;P=0．000;P=0．000）。与骨癌组相比较,抑制剂组小鼠在12、14、17、21dMWT明显升高（P=0．031;P=0．001;P=0．002;P=0．000）,TWL明显延长（P=0．002;P=0．000;P=0．000;P=0．000）：与术前和对照组相比较,假手术组在各时间点的MWT和TWL均无明显变化（19〉0．05）。[结论]鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002能明显减轻骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏,提示PI3K在脊髓水平参与了骨痛痛信息侍涕．     

甘草酸治疗对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓炎症反应的影响

目的:探讨甘草酸对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓炎症反应的影响。方法:雄性C3H/HeJ小鼠共40只,4~6周龄,体重20~25 g,采用随机数字法,将其分为4组（n=10）:假手术组（Sham组）、肿瘤组（Tumor组）、低剂量甘草酸给药组（G1组）和高剂量甘草酸给药组（G2组）。小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种NCTC纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型。Sham组小鼠右侧股骨远端骨髓腔仅注射不含肿瘤细胞的α-MEM培养基,Tumor组小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种NCTC纤维肉瘤细胞,G1组和G2组股骨远端接种肿瘤细胞后2、24和48小时分别腹腔注射甘草酸100和200 mg/kg。于肿瘤细胞接种前两小时、肿瘤细胞接种后4、7、10、14、21和28天测量机械缩足阈值和自发抬足次数;肿瘤细胞接种后28天,采用Western blot法检测右侧脊髓L3~5节段HMGB1、IL-1β、IL-10、p-Akt、p-mTOR蛋白表达,免疫荧光法检测右侧脊髓小胶质细胞标记物脊髓背角Iba-1阳性细胞密度和Iba-1免疫荧光阳性面积。结果:与Sham组比较,Tumor组小鼠肿瘤接种后10、14、21和28天机械缩足阈值显著下降,7、10、14、21和28天自发抬足次数明显增多（P＜0.05）。与Tumor组比较,G1和G2组小鼠肿瘤接种后14、21和28天机械缩足阈值升高,且自发抬足次数减少（P＜0.05）;与Sham组比较,Tumor组小鼠肿瘤接种后28天损伤侧脊髓HMGB1、IL-1β、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,脊髓背角Iba-1阳性小胶质细胞密度和Iba-1免疫荧光阳性面积明显增加（P＜0.05）。与Tumor组比较,G1和G2组小鼠肿瘤接种后28天损伤侧脊髓HMGB1、IL-1β、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）,IL-10蛋白表达水平显著上调（P＜0.05）,脊髓背角Iba-1阳性小胶质细胞密度和Iba-1免疫荧光阳性面积下调（P＜0.05）。结论:甘草酸可缓解骨癌痛小鼠痛行为的形成并减轻脊髓炎症反应。     

鞘内应用阿米洛利对皮肤癌痛小鼠ASIC-3表达及痛行为影响的实验研究

目的 研究经鞘内阿米洛利给药对皮肤癌痛小鼠酸敏感离子通道3（ASIC-3）表达及痛行为的影响。方法 Balb／c小鼠随机分为正常组（N组）、皮肤癌痛组（C组）、生理盐水组（S组）和阿米洛利组（A组）,每组10只。除N组外,其余3组小鼠足趾皮下接种肿瘤细胞建立皮肤癌痛模型;N组、C组不予干预措施,S组、A组分别经鞘内注射10 μl生理盐水和15 μg/μl阿米洛利溶液。应用热痛刺激仪分别检测各组给药前和给药后30、60、120、180 min小鼠热痛爪回缩潜伏期（TWL）值,并提取小鼠脊髓背角组织,采用Western blotting检测ASIC-3蛋白的表达。结果 肿瘤细胞接种前,4组小鼠的TWL值差异无统计学意义（P＞0.05）。接种后2周, C、S和A组小鼠TWL值分别由（9.66±0.54）s、（9.96±0.39）s和（10.15±0.40）s缩短为（4.32±0.25）s、（4.16±0.33）s和（4.26±0.24）s,差异有统计学意义（P＜0.05）。C、S组于小鼠鞘内注射给药后60、120、180 min小鼠TWL值分别为（4.05±0.37）s、（3.91±0.48）s、（3.89±0.32）s和（4.73±0.17）s、（4.29±0.25）s、（4.50±0.21）s,均低于A组的（6.03±0.23）s、（7.09±0.24）s、（6.49±0.19）s,差异均有统计学意义（P＜0.05）。A组脊髓ASIC-3蛋白的相对表达量为1.88±0.11,低于C组的2.23±0.32和S组的2.43±0.24,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 阿米洛利对皮肤癌痛小鼠脊髓背角ASIC-3表达有抑制作用并参与痛觉形成。     

鞘内吗啡泵联合无线自控镇痛泵对于晚期癌痛患者的疗效及对T淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

目的 研究鞘内吗啡泵联合无线自控镇痛泵对于晚期癌痛患者的疗效及对T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(NK)的影响.方法 选取130例晚期癌痛患者为研究对象,常规药物止痛的65例患者作为对照组,鞘内吗啡泵联合无线自控镇痛泵止痛的65例患者作为观察组.比较2组患者止痛效果,治疗前、后的T淋巴细胞亚群和NK细胞水平,生活质量,不良...     

基于脊髓层面的骨癌痛发生机制

骨癌痛动物模型的不断出现和日渐完善为癌痛机制研究提供了有效的工具,癌痛的病理机制异于炎性痛和神经病理性痛,具有其独特性。全文以骨癌动物模型为载体,综述骨癌痛发生的脊髓机制。     

参芪注射液对肿瘤细胞及肿瘤组织的作用

[目的]观察补益中药参芪注射液对肿瘤细胞和小鼠肿瘤组织生长的促进作用.[方法]通过体外细胞培养计数、体内动物实验观察参芪注射液对肿瘤细胞和小鼠肿瘤组织的作用,并采用流式细胞技术检测小鼠肿瘤组织的凋亡指数、细胞增殖指数和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.[结果]参芪注射液在合适的浓度时对食管癌培养细胞生长有一定的促进作用;参芪组小鼠未见有保持体重和延长生存期的作用;参芪注射液组小鼠肿瘤组织的凋亡指数升高,而VEGF的表达却低于对照组.[结论]补益中药参芪注射液在合适的浓度下可促进体外培养的肿瘤细胞生长.对荷瘤小鼠无增加其体重和延长生存期的作用,反而有使体重下降的趋势.     

Effect of miR27a on Proliferation and Invasion in Colonic Cancer Cells

The aim of this study was to detect the expression of miR196a, miR146a, miR27a and miR200a in patientswith colon cancer, and investigate the effect of miR27a expression on proliferation and invasion in colonic cancercells. RT-PCR was employed to detect the expression levels in colon cancers. Then, colon cancer cells werecultured and transfected with 100 nM of miR27a mimics (80 nmol/L) or 80 nM miR27a inhibitors (80 nmol/L) in24-well plates. Proliferation and invasion of colonic cancer cells were then determined by CCK-8 and Transwellassays, respectively. Our data showed miR27a to be high-expressed in patients with colon cancer. In addition,proliferation and invasion in the miR27a mimic group were significantly higher than in the control group andnegative group (P<0.05), while, proliferation and invasion in the miR27a inhibitor group were obviously lowered(P<0.05). In conclusion, high expression of miR27a may play an important role in enhancing proliferation andinvasion of colon cancer cells.     

消癌平注射液增敏奥沙利铂抑制卵巢癌Caov-3细胞的增殖

目的研究消癌平是否增敏奥沙利铂（Oxaliplatin,OXA）抑制卵巢癌细胞的增殖,并探讨其药理机制。方法体外培养的卵巢癌Caov-3细胞,分别施以OXA、OXA＋消癌平干预,空白对照组给予PBS,采用MTT法测定OXA 单独应用或与消癌平联合应用的IC50及肿瘤细胞存活率;荧光显微镜观察Caov-3细胞胞核形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹方法检测caspase-3蛋白质表达。结果消癌平可明显降低OXA的IC50,抑制Caov-3细胞增殖;消癌平增敏OXA诱导的Caov-3细胞凋亡,增加细胞凋亡率,并促进caspase-3活化。结论消癌平增敏OXA抑制卵巢癌细胞Caov-3增殖,促进caspase-3活化可能是其增敏的机制之一。     

直肠黏膜下注射复方氟脲嘧啶多相脂质体对直肠癌细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨直肠黏膜下注射复方氟脲嘧啶多相脂质体(FPLC)对直肠癌细胞凋亡和增殖的影响。方法将40例直肠癌患者分为2个组:Ⅰ组化疗组(20例):于术前60h、36h,分2次直肠黏膜下注射FPLC,每次80mg。Ⅱ组对照组(20例):术前不用化疗。采用HE染色检测2组手术前后癌细胞的凋亡指数;S-P免疫组织化学法检测2组手术前后癌组织中PCNA、bcl-2和p53蛋白的表达,根据PCNA染色计算增殖指数,比较2组上述指标手术前后的变化。结果组患者术后癌细胞凋亡指数(apop-totic index,AI)(2.505±0.838)较术前(1.290±0.552)明显增加(P<0.001);癌细胞的增殖指数(proliferativeindex,PI)(41.335±18.778)较术前(45.755±21.478)明显下降(P<0.05);术后癌细胞bcl-2、p53蛋白的阳性表达均较术前明显下调(P<0.05)。Ⅱ组患者上述指标无明显改变。结论直肠黏膜下注射FPLC可使癌细胞AI明显增加,PI明显下降,bcl-2、p53蛋白阳性表达下调,说明FPLC可显著诱导直肠癌细胞的凋亡,抑制其增殖。     

长春新碱致神经病理性疼痛模型中胶质细胞及IL-1β、GDNF 表达的变化

 目的 研究长春新碱致神经病理性疼痛中胶质细胞是否活化及其作用机制。方法 大鼠腹腔内重复注射长春新碱建立模型。免疫组化检测脑及脊髓中星形胶质细胞和小胶质细胞特异性活化标志物GFAP和OX-42的表达。RT-PCR测定IL-1β和GDNF mRNA在脊髓腰段的表达。结果 给药大鼠分别在第8天和第5天出现机械痛闽降低和热痛耐受时间降低。给药大鼠中脑导水管周围灰质及脊髓灰质中见明显胶质细胞的活化。给药组较对照组IL-1β表达增加，GDNF表达减少。结论 胶质细胞在长春新碱致神经病理性疼痛中明显活化。IL-1β及GDNF与长春新碱引起的神经病理性疼痛有关。     

康莱特注射液对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖和凋亡影响的实验研究

目的：通过康莱特注射液作用于人胰腺癌细胞株 PANC-1,观察其对 PANC-1细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法倒置显微镜及电镜观察80μL·mL -1康莱特注射液作用 PANC-1细胞72 h 后细胞形态改变;采用 MTT 比色法检测不同浓度（10、20、40、60、80、100μL·mL -1）康莱特注射液对PANC-1细胞生长增殖抑制作用的影响;同时采用流式细胞术检测不同浓度（10、20、40、60、80、100μL·mL -1）康莱特注射液对 PANC-1细胞周期的影响。结果细胞形态学检查发现80μL·mL -1康莱特注射液处理 PANC-1细胞72 h 后细胞生长稀疏,细胞质透亮度下降,线粒体等细胞器功能障碍,细胞核功能上受到一定的抑制;不同浓度康莱特注射液作用于 PANC-1细胞株不同时段（24、48、72 h）后肿瘤细胞生长受到了一定的抑制且呈现时间和剂量依赖性;不同浓度康莱特注射液处理 PANC-1胰腺癌细胞72 h 后 PANC-1细胞周期均阻滞于 G2/ M 期,康莱特注射液可剂量依赖性的诱导 PANC-1细胞凋亡。结论康莱特注射液能够有效抑制人胰腺癌细胞株 PANC-1在体外的生长,其机制可能是通过抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡而实现,有望成为胰腺癌的有效治疗药物。     

丁丙诺啡与吗啡联合用于大鼠骨癌痛治疗的疼痛行为学观察

目的 观察不同剂量的丁丙诺啡与吗啡联合应用于大鼠骨癌痛的疼痛行为学变化,为临床合理应用阿片类药物治疗癌痛提供参考。方法 选择成年雌性Wistar大鼠进行实验,应用Walker256细胞建立骨癌痛模型,将骨癌痛大鼠分为5组,每组8只,分别于每日7:00 am和19:00 pm进行皮下注射,连续7日。吗啡组（M组）：吗啡10 mg/kg;吗啡+丁丙诺啡1组（MB1组）：吗啡10 mg/kg+丁丙诺啡20μg/kg;吗啡+丁丙诺啡2组（MB2组）：吗啡10 mg/kg+丁丙诺啡40 μg/kg;吗啡+丁丙诺啡3组（MB3组）：吗啡10 mg/kg+丁丙诺啡60 μg/kg;假手术组（Sham组）：皮下注射0.9%氯化钠溶液1 ml。全部大鼠于建模第15天开始,每日给药前30 min、给药后30 min进行疼痛行为学测定,包括甩尾实验、机械性痛觉敏感度测定、热痛觉敏感度测定。结果 给药7天内,机械痛阈和甩尾实验测定抗伤害痛阈结果显示,各MB组与M组给药后痛阈差异均无统计学意义;热痛阈结果显示：MB2组出现明显的热痛阈下降较M组晚（第6天vs.第5天）。结论 骨癌痛大鼠癌痛治疗时,丁丙诺啡与吗啡联合应用镇痛作用相似且可延缓吗啡的耐受发生。     

NG-Nitro-L-arginine Methyl Ester Inhibits Bone Metastasis after Modified Intracardiac Injection of Human Breast Cancer Cells in a Nude Mouse Model

We investigated the effects of N^G-nitro-L-arginine-methyI ester (L-NAME), a nitric oxide synthase (NOS) inhibitor, on hone metastasis of human breast cancer, MDA-231 cells. Tumor cells (2 × 10⁵ cells in 0.2 ml of phosphate-buffered saline; PBS) were injected through the diaphragm into the left ventricle of the heart of laparotomized nude mice (male 5-week-old ICR- nu/nu ). L-NAME (2 mg/ mouse/injection in 0.1 ml of PBS) was given intraperitoneally to mice 6 h and 3 h before and immediately, 3 h, 6 h, 18 h and 21 h after the intraeardlac injection of tumor cells. As a control, 0.1 ml of PBS was injected instead of L-NAME. The effect of N^G-nitro-D-arginine-methyl ester CD-NAME; 2 mg/mouse/injection), an inactive analogue of L-NAME, was also investigated to evaluate the specificity of L-NAME action. Radiographical examination 31 days after the tumor-cell injection showed that the incidence and number of osteolytic bone metastases and the number of bones with metastasis in L-NAME-treated mice were significantly reduced compared with those in PBS-treated mice (P<0,05). The differences between PBS-treated and D-NAME-treated mice were not significant. Our findings suggest that specific and appropriate NOS inhibitors may represent a new pharmacological approach to therapy for cancer patients at risk of developing osteolytic bone metastases.