PLC/PIP2信号通路在辐射诱导NRP1+Treg 细胞中的作用机制

目的 观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞数量及TGF-β1分泌量的变化,并探索PLC/ PIP2信号通路在其中的作用机制.方法 36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy的不同剂量组,X射线深部治疗机进行全身照射,于照射后16 h应用流式细胞仪分析小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞的变化,ELISA法检测胸腺细胞TGF-β1含量的变化.EL-4细胞株经PKC激动剂(PMA)、Ca2+阻断剂(TMB-8)作用2h后并经4 GyX射线照射,于照射后48 h应用流式细胞术及ELISA法分别检测CD4+CD25+ NRP1+ Treg细胞及TGF-β1含量的变化.结果 小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg在0.5 GyX射线作用后稍有下降,于1.0 Gy降至最低(t=6.96,P＜0.01),而后呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy升至最高(t =6.70,P＜0.01);胸腺细胞TGF-β1在0.5 GyX射线照射后显著下降(t=12.53,P＜0.01),而1.0～4.0 Gy照射后则呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy仍保持高水平(t=10.40 ～ 15.30,P＜0.01).PMA作用后,与假照组相比,单独PMA组NRP1+ Treg细胞表达显著降低(t=3.06,P＜0.01),而联合照射后表达则明显上调(t=8.27,P＜0.01),TGF-β1无论受照与否,其含量均明显降低(t=10.46 ～39.69,P＜0.01);而TMB-8作用后,无论受照与否CD4+ CD25+ NRP1+ Treg的表达及TGF-β1的分泌量均显著上调(t=5.53～44.26,P＜0.01).结论 高剂量电离辐射可以诱导小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg细胞表达并增加TGF-β1的含量,此现象可能与启动PLC/PIP2信号通路有关.     

外源表达miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响

目的 研究miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响.方法 采用pre-miR-34a瞬时转染H1299细胞,接受不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性.流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,real-time PCR检测miR-34a靶基因bcl-2、bax、CDK4、CDK6及cyclinD1的表达水平.结果 不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组各剂量点细胞活力明显降低(t=-2.39、-3.12、-4.98、-4.03、-3.06,P＜0.05),并与阴性对照转染组的差值呈剂量依赖性的增加.6 Gyγ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组细胞凋亡率明显增加(t=7.06,P＜0.05),细胞G0/G1期阻滞(t =3.94,P＜0.05),S期细胞减少(t=6.23,P＜0.05),bcl-2、CDK4及CDK6明显下调(t=3.39、12.88、6.21,P＜0.05),cyclinD1有下降趋势,但差异无统计学意义,而bax明显上调(t=-4.35,P＜0.05),是阴性对照转染组的1.94倍,bcl-2/bax比值下降.结论 miR-34促进H1299细胞凋亡,诱导细胞G0/G1期阻滞,抑制细胞活性,进而提高H1299细胞的辐射敏感性.     

不同照射方式对结直肠癌CL187细胞的抑制作用和分子机制初探

目的 研究单次、分次和125Ⅰ粒子持续低剂量率照射对结直肠癌CL187细胞生物学效应的影响.方法 实验分高剂量率单次照射组(400 cGy/min,单次组)、分次照射组(2 Gy/次/d,400 cGy/min,分次组)和125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组(2.77 cGy/h,125Ⅰ组).3组细胞照射0、2、4和8 Gy后,24和48 h进行细胞计数和锥虫蓝染色,比较细胞总数和细胞存活率的差异.利用克隆形成实验比较3组细胞增殖能力的差异.通过流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白免疫印迹法分析PHLPP2、PTEN和Bax蛋白表达的变化.结果 与单次组和分次组相比,125Ⅰ组细胞总数减少(t=34.28和29.48,P＜0.05)、存活细胞比例减少(t=-12.38和-14.61,P＜0.05),细胞克隆形成能力下降,相对生物学效应是1.41.照射后48 h细胞凋亡检测发现125Ⅰ组细胞凋亡比例增加(t=-15.08和-11.99,P＜0.05).蛋白免疫印迹法检测发现125Ⅰ组Bax表达量升高,PHLPP2和PTEN的表达量3组间差异无统计学意义.结论 单次、分次和持续低剂量率照射后细胞PHLPP2蛋白表达水平均升高,但剂量率的高低并不影响其表达水平.不同方式照射后,凋亡相关蛋白Bax的表达水平上升,125Ⅰ组升高更加明显,125Ⅰ持续低剂量粒子照射可能通过影响凋亡相关蛋白Bax的表达水平实现对结直肠癌CL187细胞的杀伤作用.     

microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响.方法 通过细胞转染获得Z138c-TMP2细胞株和稳定高表达miR-17-92的Z138c-TMP2-miR-17-92细胞株.采用锥虫蓝染色活细胞计数和3H-TdR掺入方法,观察两组细胞外照射后生长情况.采用流式细胞仪检测两组细胞照射后周期时相分布和细胞晚期死亡率.结果 随着照射剂量的增加,miR-17-92组较TMP2组有更多存活细胞(t=-3.12和-3.28,P＜0.05);TMP2组细胞出现G2/M期阻滞,miR-17-92组未出现明显周期阻滞(t=2.885,P＜0.05).2和4 Gy照射后培养96 h以上,TMP2组细胞PI单染阳性细胞百分比(24.02%和36.16%)明显高于miR-17-92组(6.49%和11.39%),差异有统计学意义(t=-17.59、-4.972,P＜0.05).结论 miR-17-92高表达可明显降低人套细胞淋巴瘤细胞株Z138c细胞的放射敏感性.改变细胞周期和抵抗照射诱导的凋亡是miR-17-92发挥作用途径之一.     

Ad-Rb94联合照射对体外人大肠癌细胞的抑瘤作用

目的 探讨人视网膜母细胞瘤Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-Rb94)联合γ射线照射对体外人大肠癌细胞生长的联合抑瘤作用及其机制.方法 将Ad-Rb94于体外转染大肠癌HT29细胞,转染后12h进行4Gy 137Csγ射线照射.实验分组为5组:对照组、β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒载体组(Ad-lacZ组)、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组.用噻唑蓝法检测HT29细胞的生长,用流式细胞术检测HT29细胞的细胞周期和细胞凋亡的变化.结果 当Ad-Rb94有效转染HT29细胞后,从转染第4日开始,照射组和联合照射组细胞生长速率较对照组和Ad-lacZ组缓慢;与Ad-Rb94组和照射组相比,Ad-Rb94联合照射组细胞的生长表现出更强的抑制效应(t=15.02、17.30,P＜0.01).细胞周期结果表明,与对照组、Ad-lacZ组和Ad-Rb94组相比,照射组大量细胞停留在G2期,各组间差异有统计学意义(t=18.65、15.23、16.38,P＜0.01);但Ad-Rb94联合照射组停留在G2期细胞更多(约40％),远高于照射组(t=7.78,P＜0.05).细胞凋亡结果表明,与对照组相比,Ad-Rb94组和照射组细胞凋亡率明显增加(t=16.19、10.72,P＜0.01);Ad-Rb94联合照射组细胞凋亡率最高(21％),与Ad-Rb94组和照射组相比,差异有统计学意义(t=6.17、9.25,P＜0.05).结论 腺病毒介导的Rb94基因联合照射对大肠癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,其机制可能是促进细胞G2期阻滞和凋亡.     

辐射对恶性脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制

目的 观察辐射对人脑恶性胶质瘤细胞株SHG-44辐射敏感性的影响,并探讨辐射抗性产生的机制.方法 使用胶质瘤细胞株SHG-44及经单次照射10 Gy后连续培养15代的辐射后细胞株SHG-4410 Gy,采用集落形成实验评估辐射对两种细胞株辐射敏感性的影响,流式细胞仪检测两种细胞株的辐射前后细胞周期时相分布及凋亡率,并用RT-PCR法检测cyclin B1 mRNA和miR-21的表达水平,Western blot法检测信号转导子和转录激活子3(Stat3)蛋白表达水平.结果 比较D0、SF2,SHG-44细胞(D0 =2.35、SF2=0.62),低于SHG-4410 Gy细胞(D0=3.22,SF2=0.74).与SHG-44细胞相比,SHG-4410 Gy细胞G2/M期比例减少,S期比例增多(F =22.21,P＜0.05).照射前后SHG-4410 Gy cyclinB1 mRNA相对量大于SHG-44细胞株(t=3.1、4.1,P＜0.05).照射前后的早期凋亡率分别为SHG-44 (17.60±0.26)％和(28.00±0.36)％,SHG-4410 Gy(4.20±0.30)％和(5.17±0.65)％,SHG-4410 Gy细胞与SHG-44细胞相比,早期凋亡率明显下降(t=58.0,P＜0.01).qRT-PCR及Western blot法检测SHG-4410 Gy细胞的miR-21表达及Stat3蛋白表达均较SHG-44升高.结论 照射后SHG-44细胞辐射抗性增加,可能与辐射上调细胞周期信号传导通路中的靶基因cyclinB1导致的G2/M期细胞比例减少有关;同时,辐射导致细胞miR-21表达增高,降低细胞的凋亡.     

脱氧胞苷激酶Ser-74位点在辐射诱导的乳腺癌细胞死亡中的作用

目的 研究脱氧胞苷激酶(dCK) S74位点在辐射诱导乳腺癌细胞MCF-7死亡中的作用.方法 采用脂质体转染方法在MCF-7中分别构建dCK-Vector(空载体)、dCK-WT(野生型)、dCK-S74A(非磷酸化型)及dCK-S74E(过磷酸化型)4种细胞模型,均分别予以0,2,4,6和8 GyX射线照射.实时定量PCR(QPCR)及Western blot验证细胞模型,CCK-8法和集落形成实验检测细胞存活率,单丹磺酰尸胺(MDC)检测自噬发生率,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 成功构建4种细胞模型;CCK-8结果显示,与0 Gy组相比,MCF-7和dCK-Vector经8 Gy照射后存活率下降(t=14.469和9.357,P＜0.05),dCK-WT、dCK-S74E和dCK-S74A没有改变(P＞0.05);与dCK-Vector比较,dCK-WT和dCK-S74E照射后的总死亡率降低(x2=3.857 ～3.971和3.857～3.859,P＜0.05),dCK-S74A则没有变化(P＞0.05);与各自0 Gy组比较,MCF7、dCK-Vector和dCK-S74A照射后凋亡发生率升高(t=-4.531、-3.688和-7.076,P＜0.05),而dCK-WT和dCK-S74E使照射诱导的凋亡率逆转了66％和68％;dCK-WT和dCK-S74E照射后自噬率分别增加22％和26％(t=-9.051和-8.411,P＜0.01),dCK-S74A、MCF-7和dCK-Vector照射后的自噬率没有明显变化(P＞0.05).结论 dCK-WT和dCK-S74E使电离辐射诱导的凋亡率增加发生逆转,同时使自噬率增加,总死亡率降低,提示dCK在Ser-74的磷酸化与乳腺癌细胞MCF-7的辐射敏感性有关.     

18F-FLT和18F-FDG评价食管癌细胞照射后超早期生物学反应

目的 比较18F-氟代脱氧胸腺嘧啶(18F-FLT)和18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)在反映食管癌细胞受照后超早期生物学反应的差异.方法 将人食管癌Eca-109细胞分别接受5、10、15 Gy剂量X射线照射,照射后2、4、8h检测细胞对18F-FDG和18F-FLT摄取率的变化,以及细胞相对存活率和ATP表达情况的变化.结果 5 Gy照射后2、4h,细胞对18F-FDG摄取率与对照组相比分别减少了9.45％和16.4％,差异无统计学意义;但15 Gy照后2h,对18F-FDG摄取率却增加了26.5％(=3.04,P＜0.05),其余照射组对18F-FDG摄取率均有明显减少(F=25.75,P＜0.05).5 Gy照后2h,18F-FLT摄取率(3.65±0.41)％与对照组(4.00±0.42)％相比,差异无统计学意义,其余照射组对18F-FLT摄取率与对照组比较均有明显减少(F=33.93,P＜0.05).在5、10、15 Gy照后2、4、8h,各组细胞相对存活率差异无统计学意义.经不同剂量照射后,细胞对18F-FLT摄取率与ATP浓度之间的相关性(r=0.887,P＜0.05)优于18F-FDG与ATP浓度之间的相关性(r=0.622,P＞0.05).结论 18F-FDG和18 F-FLT两者均可反映食管癌细胞照射后超早期生物学反应,18F-FLT比18F-FDG能较好地反映食管癌细胞照射后超早期生物学反应.     

大剂量γ射线照射对小鼠免疫系统损伤远期影响的研究

目的 探讨亚致死剂量6Gyγ射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对脂多糖刺激反应性的远期影响.方法 将实验小鼠分为假照射组和照射组,假照射组不接受照射,照射组给予6 Gyγ射线照射.照射后10周,分别将假照射组和照射组小鼠按组别腹腔注射脂多糖(20 mg/kg),对照组注射等量的生理盐水.分别于24 h和1 h后取材,进行外周血白细胞计数及CD4、CD8、B220细胞比例检测.取脾脏和胸腺称重,计算脏器指数.冲洗单侧股骨进行有核细胞计数.结果 与假照射刘照组小鼠相比,照射对照组小鼠的CD4细胞比例显著升高(t=2.940,P＜0.05),CD8和B220细胞比例显著下降(t=6.485和4.351,P均＜0.01).照射+脂多糖1h组小鼠的CD4 (t=2.510,P＜0.05)、CD8(t=2.862,P＜0.05)和B220(t=7.074,P＜0.01)细胞比例较假照射+脂多糖1h组小鼠显著降低,差异有统计学意义.与假照射+脂多糖24 h组小鼠相比,照射+脂多糖24 h组小鼠单侧股骨有核细胞计数显著升高,差异有统计学意义(t=2.078,P＜0.05).结论 6 Gyγ射线一次性全身照射后10周,小鼠免疫系统尚未完全恢复;与假照射组相比,在接受脂多糖刺激后照射组小鼠胸腺指数和外周血中CD8和B220细胞比例未见显著变化.辐射对小鼠免疫系统损伤的远期影响有待进一步研究.     

西妥昔单抗对人舌癌细胞系Tca8113的放射增敏作用

目的 探讨西妥昔单抗( C225)对人舌癌Tca8113细胞系的放射增敏作用.方法 体外培养人舌癌Tca8113细胞系,C225组用西妥昔单抗(C225) 100 nmol/L处理后,6MVX射线不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy)照射C225组和单纯照射组,照射后用细胞计数法及四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率,集落形成实验计算克隆数,采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡.结果 不同照射剂量时C225+照射组的细胞生长抑制率均高于单纯照射组(t=-15.6～-3.0,P ＜0.05);C225+照射组的放射生物学参数值(D0、Dq、N、SF2)较单纯照射组低.C225+照射组的SER为1.353;C225+照射组的G0/G1期细胞比例在4、6、8 Gy时均高于单纯照射组(t=-7.64、-7.89、-4.78,P＜0.05).随着照射剂量升高,C225+照射组和单纯照射组的细胞早期凋亡率皆先升高后下降,4 Gy时两组差异最大[(7.96±0.36)％和(4.13±0.29)％,t- 12.75,P＜0.01].结论 C225对人舌癌Tca8113细胞系具有放射增敏作用.C225可能通过Go/G.期阻滞和诱导凋亡来增加人舌癌Tca8113细胞系的放射敏感性.     

靶向siRNA抑制TLR9表达对放射抗拒肺癌A549细胞辐射敏感性的影响

目的 旨在研究抑制放射抗拒肺癌A549的TLR9表达对其辐射敏感性的影响。方法 以放射抗拒肺癌A549（R-A549）细胞为研究对象,利用脂质体转染技术将靶向siRNA转染至R-A549细胞,Western blot验证;给予0、2、4、6和8 Gy X射线照射后,进行细胞克隆集落计数并绘制细胞存活曲线,经过单击多靶模型拟合,得到A549细胞、R-A549细胞、阴性siRNA转染细胞和TLR9 siRNA转染细胞照射的D₀、D_q、N值;对4组细胞增殖能力进行测定。对R-A549细胞、阴性siRNA转染细胞和TLR9 siRNA转染细胞X射线10 Gy照射前后流式细胞周期分析,进一步说明抑制TLR9表达对R-A549细胞辐射敏感性的影响。结果 TLR9 siRNA成功抑制R-A549细胞TLR9表达,照射后其细胞克隆形成率降低,与R-A549细胞的放射增敏比（SER_D0）达到1.37,而A549细胞与R-A549 细胞的SER_D0为1.09;照射后TLR9 siRNA转染细胞较R-A549细胞G₂/M期分布增加（t=4.323,P<0.05）,而TLR9 siRNA转染细胞G₁/G₀期分布少于R-A549细胞,差异有统计学意义（t=7.616,P<0.05）。结论 siRNA可以抑制TLR9表达,降低照射后R-A549细胞的克隆形成,提高放射增敏比;照射后更多细胞发生G₂/M期阻滞,同时G₁/G₀期细胞减少也有效抑制了照射后细胞潜在致死性损伤的修复,因此,具有辐射增敏的作用。     

乙醇降低人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的研究

目的 研究乙醇对人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响及相关机制.方法 将人乳腺癌MCF-7细胞分为4组,对照组(不做任何处理)、乙醇组(乙醇处理)、单纯照射组(6 GyX射线处理)和联合组(乙醇与X射线联合作用).克隆形成法检测50或100 mmol/L乙醇对MCF-7细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测细胞周期变化;Annexin V-FITC法检测细胞凋亡.结果 50和100 mmol/L乙醇处理MCF-7细胞50 h,对生长无明显影响(t--0.82和1.15,P＞0.05);乙醇预处理2h,可明显增加X射线照射后MCF-7细胞克隆形成的能力(t=4.15和10.28,P＜0.05).相比于单纯照射组,乙醇降低了X射线照射诱导的细胞G2/M期阻滞(t=7.18,P＜0.05),以及sub-G1 峰的比例(t =5.39,P＜0.05).而且,Annexin V-FITC检测结果示,乙醇联合X射线照射的细胞晚期和早期凋亡减少(t=4.86和7.59,P＜0.05).结论 乙醇可以增加MCF-7细胞的辐射抗性,其机制可能与降低辐射诱导的细胞G2/M期阻滞及早、晚期凋亡的发生相关.     

塞来昔布对正常脑胶质细胞和脑胶质瘤细胞放射增敏效应的比较及其机制

目的 探讨塞来昔布对正常少突胶质细胞（oln93）及脑胶质瘤细胞（u373）的放射增敏作用及其作用机制。方法 将两种细胞按空白处理、单独接受塞来昔布或X射线、塞来昔布联合X射线4种不同处理方式分为对照组、给药组、照射组和联合组,MTT法、克隆形成法对比两种细胞的增殖和放射敏感性,流式法测细胞的周期分布,Western blot法分析相关蛋白表达。结果 与未加药物相比,塞来昔布能抑制oln93细胞和u373细胞生长（t=2.215~30.996,P<0.05;t=0.383~11.732,P<0.05）,但相同药物浓度下抑制两种细胞差异无统计学意义。放射增敏比SER分别为1.13和1.21,并诱导G₀/G₁期阻滞（t=-6.1~5.141,P<0.05）。联合组与照射组比较,oln93细胞发生S期阻滞（t=-18.174,P<0.05）,CyclinA蛋白表达增加（t=-8.087,P<0.05）;u373细胞发生G₂/M期阻滞,Cyclin B1、DNA-PKcs、MRE11蛋白表达下降（t=-8.838~10.45,P<0.05）。结论 塞来昔布对u373的放射增敏作用比oln93细胞明显,其机制与调节细胞周期分布及DNA损伤修复有关。     

硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤保护作用的初步研究

目的 探讨硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤的保护作用。方法 取新生大鼠神经干细胞进行培养,用免疫荧光法进行神经干细胞的鉴定后,用含有不同浓度硫酸镁的培养基培养神经干细胞,选择出硫酸镁的合适浓度为1.25 mg/ml。将神经干细胞分为空白对照组、单纯照射组及照射+硫酸镁组,照射+硫酸镁组神经干细胞加入1.25 mg/ml的硫酸镁培养24 h后,分别用2和4 Gy ⁶⁰Co γ射线对单纯照射组及照射+硫酸镁组进行照射,分别于照射后24、48和72 h用CCK-8对各组进行神经干细胞增殖情况的检测,同时用流式细胞仪对各组神经干细胞凋亡率进行检测。结果 与空白对照组比较,单纯照射组各时间点反映神经干细胞增殖情况的吸光度值明显降低(t=5.33～8.44,P<0.05),神经干细胞的凋亡率明显升高(t=30.60～71.22,P<0.05)。与单纯照射组比较,照射+硫酸镁组除24 h时间点外余各时间反映神经干细胞增殖的吸光度值有所上升(t=2.45～4.71,P<0.05),各时间点神经干细胞的凋亡率明显降低(t=6.73～41.12,P<0.05)。结论 硫酸镁具有减轻电离辐射后神经干细胞增殖损伤,降低电离辐射所致的细胞凋亡率。     

HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 研究HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术沉默辐射诱发基因组不稳定肝细胞中HAVCR2基因的表达,通过流式细胞术检测HAVCR2基因沉默对细胞周期及凋亡的影响;利用实时荧光定量PCR方法检测HAVCR2基因沉默后p53基因的表达变化。结果 慢病毒介导的RNAi技术能有效沉默HAVCR2基因的表达（t=19.21,P<0.05）,与对照组相比,HAVCR2基因的沉默可导致基因组不稳定肝细胞G₂期阻滞（t=-3.41,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=3.65,P<0.05）;实时荧光定量PCR检测结果表明,HAVCR2基因的沉默诱发基因组不稳定肝细胞p53基因的表达下调（t=4.82,P<0.05）。结论 HAVCR2siRNA使辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡率降低,使基因组不稳定肝细胞发生G₂期的阻滞。     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN) 7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变( ATM)激酶磷酸化在这一过程中的作用.方法 人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATM siRNA+CpG+X射线组.采用集落形成法观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.Western blot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)和P53蛋白的表达.结果 A549细胞经CpG ODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=13.41,P＜0.05);增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=17.32和7.71,P＜0.05);明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平;小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpG ODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义(t=26.84和2.98,P＜0.05).结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节.     

不同非小细胞肺癌细胞对碳离子放射敏感性的影响

目的 分析不同非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对碳离子照射放射敏感性的影响,并探讨其相关的分子机制。方法 采用¹²C⁶⁺对肺腺癌A549细胞、鳞癌H520细胞和大细胞癌PGCL3细胞进行照射,吸收剂量分别为0、2、4和6 Gy。通过克隆实验检测3种细胞系的存活率,流式细胞术检测细胞的周期分布,利用Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡率,实时RT-PCR方法检测细胞内DNA-PKcs基因的表达。结果 2、4、6 Gy照射后,A549、H520和PGCL3细胞的存活率明显下降,其中A549细胞辐射敏感性最低,其次是PGCL3细胞,H520细胞辐射敏感性最高。受照射后细胞均出现G₂/M期阻滞与凋亡,且随剂量的升高呈现上升的趋势。受照射H520与PGCL3细胞的阻滞率（t=4.813、20.738、25.654和t=2.790、2.977,P<0.05）和凋亡率（t=8.579、14.289、15.244和t=3.785、5.098、8.105,P<0.05）明显高于A549细胞。受照射细胞DNA-PKcs表达明显上调,A549细胞最高,其次是PGCL3细胞,H520细胞最低;并且随着剂量的升高,DNA-PKcs的表达呈现下降趋势。2、4 Gy照射后H520和PGCL3细胞DNA-PKcs的表达明显低于A549细胞（t=7.782、3.689和t=3.889、2.814,P<0.05）。结论 不同NSCLC细胞对¹²C⁶⁺离子的放射敏感性不同,H520鳞癌细胞最高,A549腺癌细胞最低。肺腺癌A549细胞放射敏感性较低可能与高表达的DNA-PKcs参与NHEJ途径修复DNA双链断裂有关。     

氡与亚砷酸钠致人永生化上皮细胞DNA损伤的联合毒作用

目的 探讨氡与亚砷酸钠联合染毒对人永生化上皮(HBE)细胞的DNA损伤作用.方法 以HBE细胞为研究对象,将HBE细胞暴露于20 000 Bq/m3氡浓度、不同时间(0～75 min)和不同浓度(0 ～ 50 000 μmol/L)亚砷酸钠以及联合作用,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率.通过中效原理,计算氡不同暴露时间和亚砷酸钠不同浓度联合作用联合指数(combination index,CI).以不同染氡时间(20 000 Bq/m3,10、20和40 min)和不同亚砷酸钠浓度(1.5、3.0和6.0 μmol/L)处理HBE细胞,应用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测氡、亚砷酸钠单独及联合染毒后HBE细胞的DNA损伤情况.结果 氡与亚砷酸钠单独或联合作用对HBE细胞均有抑制作用;氡不同暴露时间和亚砷酸钠不同浓度联合作用的联合指数CI =0.41,表明二者呈现协同作用.与对照组相比,染氡各组HBE细胞的尾部DNA百分含量、尾矩和Olive尾矩均显著增加(t=12.90 ～23.61,8.81 ～21.39,18.46～38.97,P＜0.05);亚砷酸钠染毒各组HBE细胞的尾部DNA百分数、尾矩和Olive尾矩均显著增加(t=18.46 ～39.67,17.41 ～ 27.42,28.03 ～ 46.32,P＜0.05),呈现剂量效应关系.氡与亚砷酸钠联合染毒后DNA损伤存在交互作用(F尾部DNA百分含量=76.07,P＜0.01;F尾矩=290.51,P＜0.01;Foliver尾矩=273.46,P＜0.01).结论 氡与亚砷酸钠联合染毒对HBE细胞的DNA损伤可产生协同作用.     

PKM2基因沉默对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达。设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量6 MV X射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率。每组实验重复3次。结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P<0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)%和(70.42±1.18)%;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞 D₀、D_q、N和SF₂值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P<0.01),放射增敏比(SER)为1.27。流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G₂/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P<0.01),经10 Gy X射线照射,G₂/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P<0.01)。两者联合使用后G₂/M期阻滞更加明显。siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P<0.01);PKM2 SiRNA干扰+IR组较空白对照+IR组和PKM2 siRNA干扰组差异均有统计学意义(t=9.42、65.21,P<0.01)。结论 特异性沉默PKM2基因表达能够增加A549细胞的放射敏感性,推测其机制可能与改变细胞周期分布及使射线诱导细胞凋亡的作用增强有关。