Survivin反义核酸对大肠癌HT-29细胞侵袭力的影响

目的观察反义Survivin寡核苷酸对人大肠癌HT-29细胞侵袭力的影响。方法 应用针对Survivin模板序列的反义寡核苷酸链处理大肠癌HT-29细胞, 观察细胞培养生长增殖状况, 半定量RT-PCR检测不同组别Survivin基因表达的水平, 应用Transwell小室检测体外侵袭力变化。结果 反义组细胞数量少, 生长稀疏, 细胞贴壁缓慢;大肠癌细胞的集落形成能力受到抑制, 经过RT-PCR扩增后半定量分析结果显示, 反义核酸治疗组的表达量低于对照组和正义组。侵过小室滤膜细胞数减小。结论 Survivin反义寡核苷酸作用后的大肠癌HT-29细胞株生长受到抑制, 细胞株侵袭力降低。     

阿司匹林对胃癌细胞株SGC-7901作用的相关机理研究

目的 :探讨阿司匹林 (ASA)对胃癌细胞株SGC 790 1作用的相关机理 ,为寻找其新的药物用途奠定理论基础。方法 :用MTT法检测药物对细胞的抑制率 ;用流式细胞仪测定细胞周期 ;用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡 ;3H TdR同位素示踪测定细胞DNA合成。结果 :ASA对SGC 790 1细胞株的细胞作用具有量效和时效依赖关系。ASA对细胞DNA合成有抑制作用 ,并可使SGC 790 1细胞周期中S期及G2 /M期比例升高 ,G1期比例下降 ,呈一定的剂量效应关系。琼脂糖凝胶电泳结果未见典型的阶梯状凋亡条带。结论 :阿司匹林对SGC 790 1细胞株存在着细胞毒作用 ,其细胞毒作用可能与抑制DNA的合成、阻止细胞周期有关系     

siRNA靶向沉默hyrdC基因对胃癌细胞SGC-7901生长作用的研究

目的:观察RNA干扰靶向沉默hyrdC基因对胃癌SGC-7901细胞生长的影响.方法:将已成功构建的携带hyrdC基因以及沉默hyrdC基因的重组腺病毒Ad-hyrdC、Ad-shyrdC分别转染胃癌SGC-7901细胞,台盼蓝细胞计数和MTT法观察各组胃癌细胞生长情况,将胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型观察各组胃癌瘤体的生长情况.结果:Ad-shyrdC组细胞生长明显慢于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,差异有统计学意义,P=0.02;Ad-shyrdC组细胞的MTT值明显低于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,P=0.03;Ad-shyrdC组胃癌瘤体生长率较Ad-hyrdC、Ad-null组以及正常对照组明显减慢,P=0.02.结论:hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而沉默hyrdC基因可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点.     

阿司匹林对胃癌细胞株SCG—7901作用的相关机理研究

目的：探讨阿司匹林（ASA）对胃癌细胞株SGC-7901作用的相关机理，为寻找其新的药物用途奠定理论基础。方法；用MTT法检测药物对细胞的抑制率；用流式细胞仪测定细胞周期；用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡，^3H-TdR同位素示踪测定细胞DNA合成。结果：ASA对SGC-7901细胞株的细胞作用具有量效和时效依赖关系。ASA对细胞DNA合成有抑制作用。并可使SGC-7901细胞周期中S期及G2/M期比例升高，G1期比例下降，呈一定的剂量效应关系。琼脂糖凝胶电泳结果未见典型的阶梯状凋亡条带。结论：阿司匹林对SGC-7901细胞株存在着细胞毒作用。其细胞毒作用可能与抑制DNA的合成，阻止细胞周期有关系。     

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的　观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法　采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果　显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。     

凋亡抑制基因Survivin的研究进展

细胞凋亡的抑制与恶性肿瘤的发生发展以及对化疗、放疗不敏感有密切关系。和ｂｃｌ -2家族一样 ,凋亡抑制蛋白 (ｉｎ ｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ ,ＩＡＰ)也是抑制细胞凋亡的重要成分。迄今为止 ,已经鉴定出ＩＡＰ家族中的 5个同族体 (ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ)。Ｓｕｒ ｖｉｖｉｎ是其中新近克隆的同族体 ,选择性表达于常见的恶性肿瘤 ,而在癌旁正常组织和成人分化组织并不表达[1] 。因此 ,Ｓｕｒ ｖｉｖｉｎ作为 1个潜在的分子靶 ,已经引起分子肿瘤学及相关学科的关注 ,现对其研究进展作一综述。1　Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的分子结构和抗…     

TGFBI对胃癌细胞SGC-7901转移潜能影响的研究

目的:探讨细胞外基质蛋白转化生长因子β诱导(TGFBI)对胃癌细胞SGC-7901转移潜能的影响。方法:牛血清白蛋白(BSA)、纤维粘连蛋白(FN)及细胞外基质蛋白TGFBI包被96孔板后,于其上培养SGC-7901细胞。MTT法检测其与TGFBI粘附能力及粘附后的增殖能力。同法包被Transwell小室滤膜下表面,检测其诱导SGC-7901细胞迁移的能力。结果:FN和TGFBI支持SGC-7901细胞粘附的能力明显高于BSA(P=0.023),FN和TGFBI之间差异无统计学意义,P>0.05;BSA、FN和TGFBI诱导SGC-7901细胞增殖的能力渐次增强,P=0.031;FN和TGFBI诱导SGC-7901细胞迁移的能力明显高于BSA(P=0.019),FN和TGFBI之间差异无统计学意义,P>0.05。结论:TGFBI可以增强胃癌细胞SGC-7901的转移潜能。     

反义Stathmin基因对胃癌细胞生长影响的观察

目的探讨反义Stathmin基因的核酸（antisense of stathmin ologodeoxynucleotides,ASODN）对人胃癌细胞系生长的影响及对裸鼠体内肿瘤生长的作用。方法免疫组化检测2010-01-2013-06山东省千佛山医院40例胃癌标本中癌组织及癌旁组织中Stathmin的表达;以人胃癌MCG803细胞系为靶细胞,分为ASODN转染细胞组、SODN转染组及未转染组3组,ASODN为阻断剂,观察ASODN对胃癌细胞的增殖的影响;40只腹腔种植胃癌细胞的裸鼠随机分为2组,观察转染ASODN在裸鼠体内对肿瘤生长的影响。结果Stathmin在胃癌组织中的阳性表达率为77.5%（32/40）,显著高于癌旁组织的32.5%（13/40）,差异有统计学意义,P〈0.001;未转染组及SODN转染组胃癌细胞倍增时间（20h）明显短于ASODN转染组（27h）;随时间进展,ASODN转染组细胞增殖能力均受抑制,差异有统计学意义,P〈0.001;转染ASODN胃癌细胞裸鼠的肿瘤组织体积平为（2.98±0.12）mm^3,小于未转染ASODN组肿瘤组织（7.61±0.21）mm^3,P=0.036。结论 ASODN对胃癌细胞的生长有抑制的作用,有望成为胃癌治疗的新靶点,以提高胃癌患者的生存时间。     

白杨素对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响

 目的 探讨白杨素（Chrysin,ChR）诱导人胃癌SGC-7901细胞株凋亡的作用及机制。方法 分别用10、20、40、80μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC-790148h,采用MTT比色法检测ChR对SGC-7901细胞的增殖抑制效应;采用丫啶橙（AO）染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC-7901细胞凋亡的发生;应用Western-blot法检测凋亡相关基因NF-κB、Bcl-2、Bax的蛋白表达,并用计算机图像分析软件进行半定量分析。结果 MTT比色法显示的10～80μM的ChR在体外对人胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制率为：9.71%～53.64%,该作用呈浓度依赖性;AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,出现早期凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞术检测结果显示：ChR呈浓度依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率为2.35%-20.8%;Western-blot检测结果显示：凋亡相关基因Bcl-2、NF-κB蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论 ChR对体外培养人胃癌细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,呈浓度依赖性。ChR对人胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用机制可能与其抑制NF-κB活化、下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达相关。     

稳定转染Bcl-2 shRNA对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响

目的:探讨稳定转染靶向Bcl-2基因的短发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的影响.方法:筛选出稳定转染Bcl-2 shRNA质粒的胃癌SGC-7901细胞株,将其与不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)作用,未转染的细胞作为对照.RT-PCR法检测稳定转染前后SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达水平,MTT法检测5-FU或DDP的IC50,流式细胞仪分析细胞的凋亡率.结果:稳定转染shRNA的胃癌SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达明显下降;shRNA联合5-FU的IC50为(14.36±1.63)mg/L,对照组为(35.62±1.95)mg/L,t=2.57,P＜0.05;shRNA联合DDP的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.46)mg/L,对照组为(6.89±0.52)mg/L,t=2.52,P＜0.05;流式细胞术检测显示,shRNA联合化疗明显提高SGC-7901细胞的凋亡率,t=2.60,P＜0.05.结论:稳定转染Bcl-2 shRNA的胃癌SGC-7901细胞株,其Bcl-2 mRNA的表达能够在较长时间内受到抑制,并提高对化疗药物5-FU及DDP的敏感性.     

外源一氧化氮对胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨外源一氧化氮(nitric oxide, NO)对胃癌细胞生长和增殖的影响.方法:应用MTT法评价NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)对胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用,RT-PCR和Western印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达,FCM法检测细胞周期的变化.结果:SNP使细胞周期发生变化,与对照组比较,S期细胞减少,G_0/G_1期细胞增多,细胞由IC50/G_1期进入S期延缓;SNP抑制SGC-7901细胞的生长,PCNA mRNA、PCNA蛋白和Caspase-3蛋白表达降低.而NOS抑制剂L-NAME预处理逆转了SNP的这种作用.结论:NO可抑制胃癌细胞生长和增殖,加速细胞凋亡.     

Survivin反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长的抑制

目的: 观察survivin反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide ，ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的抑制作用。方法：用ASODN与人胃癌细胞SGC7901共同温育一定时间后，PCR检测ASODN处理后肿瘤细胞survivin mRNA的表达，倒置显微镜、电镜观察细胞生长形态变化     

Cyclin D1反义寡核苷酸对SGC7901胃癌细胞生长和化疗敏感性的影响

目的 研究Cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901生长和化疗敏感性的影响，并探讨其内在机制。方法 采用脂质体lipoiect AMINE2000包裹硫代修饰的Cyclin D1 ASODN转染细胞，观察对SGC7901细胞的量效曲线及其生长曲线。0．2μmol／L Cyclin D1 ASODN转染细胞24小时后，给予梯度浓度的5—氟尿嘧啶(5—FU)、氨甲喋呤(MTX)、顺铂(DDP)，观察量效反应，计算IC50。应用RT—PCR检测细胞转染后24小时和48小时时Cyclin D1、胸苷酸合成酶(TS)、胸腺嘧啶磷酸化酶(TP)、二氢叶酸还原酶(DHFR) mRNA表达情况。结果 Cyclin D1 ASODN对SGC7901细胞产生剂量依赖性的抑制效应，0．2μmol／L Cyclin D1 ASODN转染24小时能显著抑制胃癌细胞生长，降低Cyclin D1 mRNA表达。Cyclin D1 ASODN增加了胃癌细胞对5—FU，MTX，DDP的敏感性，ASODN 化疗组对各化疗药物的IC50均有显著下降。RT—PCR显示Cyclin D1 ASODN转染后24小时时TS、DHFR mRNA表达较对照组下降，而TPmRNA表达较对照组升高，48小时时TS、TP、DHFR mRNA表达的改变更加明显。结论 Cyclin D1 ASODN能降低Cyclin D1 mRNA表达，抑制胃癌细胞SGC7901的生长，并通过改变5—FU，MTX代谢相关酶的表达提高细胞对它们的敏感性。     

转染FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

背景与目的:FRZB(frizzled motif associated with bone development)是sFRP(secreted frizzled related protein)家族的成员,在胚胎发育过程中起重要作用。有文献报道FRZB的表达能抑制基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9表达而与前列腺癌的侵袭能力相关。本研究拟探讨FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞成瘤性和侵袭能力的影响,及其可能的机制。方法:构建FRZB真核表达载体并转染SGC-7901细胞,经G418筛选获得稳定表达克隆。用MTT法检测并绘制细胞增殖曲线,软琼脂培养和裸鼠皮下注射的体外和体内实验检测细胞成瘤性变化。用细胞免疫化学检测转染FRZB后细胞中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达变化,体外侵袭和粘附实验检测细胞侵袭能力变化。结果:筛选稳定表达细胞株经定量PCR检测,FRZB表达显著提高。体内外实验证实,转染FRZB的细胞(SGC-7901/FRZB)生长抑制率约为60%,克隆形成能力和成瘤性减弱。免疫细胞化学显示MMP-2、MMP-7、MMP-9在细胞浆内的阳性表达降低或接近阴性,对细胞外基质成分(CollagenI、IV、Vitronectin、Fibronectin、Laminin)粘附能力均增高,比空载体转染对照组(SGC-7901/vector)增加12.8%、19.8%、59.8%、26.7%、15.2%,差异具有显著性(P<0.05),而空载体转染对照组与亲本细胞间差异无统计学意义(P>0.05)。SGC-7901、SGC-7901/vector和SGC-7901/FRZB细胞侵袭能力分别是每高倍视野55.90±5.68、54.80±6.97、6.60±2.63,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:FRZB高表达在体内体外均可抑制SGC-7901细胞的增殖、成瘤性和侵袭能力,具有肿瘤抑制基因的功能。FRZB抑制肿瘤细胞的生长和抑制MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达为抑癌功能相关机制之一。     

放射诱导胃癌细胞的凋亡及其相关基因的研究

目的观察放射诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的作用，并进一步研究bcl-2基因及家族、bax基因、p53基因在此过程中的作用。方法用不同剂量的9 MeV β线照射SGC-7901细胞，观察细胞在受照后的不同时间生长情况。电子透射电镜下观察细胞形态变化。琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带变化。流式细胞仪检测受照前后细胞周期及凋亡率的变化。免疫细胞化学法检测受照前后bcl-2、bax、p53基因的表达水平。结果单次剂量照射后，SGC-7901细胞凋亡率与时间、剂量有相关性。在放射诱导SGC-7901细胞凋亡的过程中，bcl-2基因表达水平下降，bax基因表达水平升高，而p53基因表达水平无变化。结论放射能够诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡，凋亡率在72h达高峰。bcl-2及bax基因参与了放射诱导凋亡的调控。细胞凋亡主要是通过p53基因非依赖途径。     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

重楼醇提取物含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡影响的观察

目的:观察重楼醇提取物含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:以重楼醇提取物不同浓度含药血清培养SGC7901细胞后,以MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化。结果:不同给药剂量组含药血清作用于SGC7901细胞24、48和72h后,细胞生存率显著降低,且与时间和剂量呈依赖关系。不同给药剂量组含药血清作用于SGC7901细胞24h后,细胞阻滞发生在S期;凋亡率分别为(6.67±1.34)%、(13.12±1.34)%和(20.43±1.24)%,联合用药组为(22.61±3.01)%,空白组动物血清组凋亡率(4.35±1.09)%及氟尿嘧啶(5-FU)组(19.22±1.66)%比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论:重楼醇提取物含药血清对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,并可诱导SGC7901细胞凋亡。     

HDAC5对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

  目的   探讨HDAC5在胃癌细胞中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  方法   通过Western blot检测HDAC5和Twist1在胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞中的表达。使用MTT及流式细胞术分别检测HDAC5和Twist1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。  结果   HDAC5和Twist1在胃癌细胞株中的表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞（P < 0.05）。沉默HDAC5的表达可使胃癌SGC-7901细胞中Twist1表达降低,并抑制其增殖、促进凋亡;而过表达HDAC5作用相反（P < 0.05）。此外,沉默Twist1可抑制SGC-7901细胞的增殖、促进其凋亡（P < 0.05）。  结论   HDAC5可能通过上调Twist1的表达水平促进胃癌细胞的增殖、抑制凋亡,从而促进胃癌的发生发展。      

细胞微缺氧模型的建立及其对胃癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:缺氧是实体瘤微环境的基本特征之一,体外制造微缺氧的细胞培养环境,对研究缺氧对肿瘤细胞的影响有重要意义。目前建立体外缺氧细胞培养模型的方法较为烦琐,尚缺少微缺氧对胃癌细胞影响较为完整的研究。本实验运用GasPaK产气袋法体外创建胃癌细胞微缺氧培养模型,并观察该状态下细胞生物学行为的变化。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,血气分析监测RPMI-1640培养液中PO2、PCO2和pH值变化。流式细胞仪分析微缺氧对SGC-7901细胞周期分布的影响,光镜及透射电镜观察微缺氧条件下SGC-7901细胞形态的改变,台盼蓝染色计数微缺氧对活细胞数的影响,MTT法检测微缺氧对SGC-7901细胞粘附能力的影响,游走实验检测微缺氧对SGC-7901细胞游走运动能力的影响。结果:GasPaK产气袋法在0.5～48h内PO2、PCO2和pH稳定,并能达到微缺氧细胞培养的条件。微缺氧处理SGC-7901细胞16h后未见细胞周期的变化。微缺氧导致部分SGC-7901细胞形态发生改变。微缺氧处理16h后活细胞计数无明显下降,微缺氧组SGC-7901细胞粘附能力增强,游走穿膜细胞数(196±9)是对照组(114±7)的1.71倍(P<0.05)。结论:通过GasPaK产气袋法制造的微缺氧肿瘤细胞培养环境,达到了条件稳定、重复性好的特点。微缺氧对SGC-7901细胞有影响,但这种影响相对较小,SGC-7901细胞对微缺氧有一定的耐受性。