嗜人按蚊不同发育阶段溴氰菊酯敏感性分析

目的 研究嗜人按蚊不同发育期溴氰菊酯敏感性动态变化。方法选用室内选育的嗜人按蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系，以浸渍法测试幼虫溴氰菊酯敏感性，以WHO推荐的接触筒强迫接触法测试成蚊溴氰菊酯敏感性。结果幼虫期，溴氰菊酯敏感品系和抗性品系对杀虫剂的敏感性由低至高依次均为Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ龄幼虫；成蚊期，两种品系的敏感性均以早期成蚊最低，中期成蚊次之，晚期成蚊最高。结论嗜人按蚊两品系不同生长期溴氰菊酯敏感性消长相似，敏感性水平随幼虫的发育而上升，随成蚊蚊龄增长而下降。     

增效醚混合溴氰菊酯杀灭媒介按蚊效果观察

目的观察增效醚混合溴氰菊酯杀灭媒介按蚊的效果,以探讨媒介按蚊对溴氰菊酯抗性的治理方法.方法采用增效醚(PBO)与溴氰菊酯混用,观察其对嗜人按蚊、中华按蚊敏感品系和抗性品系的增效效果.结果嗜人按蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系增效比分别为2.61和9.84,中华按蚊溴氰菊酯敏感品系和抗性品系增效比分别为1.69和3.28.结论增效醚能提高溴氰菊酯对实验按蚊的毒效,并随着蚊虫抗性的上升其效果也增加.     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性机理初步研究

目的　探讨嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性的生理生化机制。　方法　观察不同的增效剂—增效醚 (PBO)和磷酸三苯酯 (TPP)与溴氰菊酯混用后对嗜人按蚊敏感品系 (S)和不同抗性程度的抗性品系 (R1、R2、R3)的增效效果。　结果　两种增效剂对嗜人按蚊敏感品系和不同抗性程度的抗性品系都有增效作用 ,PBO对各个品系的增效比依次为 2 .6 1、3.17、7.5 5和 9.84 ;TPP的增效比依次为 1.0 2、1.10、1.0 7和 1.15。其中 ,抗性倍数较高的抗性品系嗜人按蚊的增效效果更明显 ;两种增效剂相比 ,PBO的增效效果比较明显。　结论　嗜人按蚊对溴氰菊酯的抗性机理可能是解毒酶活力增强 ,其中起主要作用的是多功能氧化酶     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性机理初步研究

目的 探讨嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性的生理生化机制。方法 观察不同的增效剂-增效醚(PBO)和磷酸三苯酯(TPP)与溴氰菊酯混用后对嗜人按蚊敏感品系(S)和不同抗性程度的抗性品系(R1、R2、R3)的增效效果。结果 两种增效剂对嗜人按蚊敏感品系和不同抗性程度的抗性品系都有增效作用，PBO对各个品系的增效比依次为2．61、3．17、7．55和9．84；TPP的增效比依次为1.02、1、10、1．07和1.15。其中，抗性倍数较高的抗性品系嗜人按蚊的增效效果更明显；两种增效剂相比，PBO的增效效果比较明显。结论嗜人按蚊对溴氰菊酯的抗性机理可能是解毒酶活力增强，其中起主要作用的是多功能氧化酶。     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅲ嗜人按蚊P450基因mRNA荧光半定量RT-PCR分析

目的探讨嗜人按蚊CYP6、CYP4基因与溴氰菊酯抗性的关系。方法采用荧光定量 RT-PCR方法,对嗜人按蚊体内CYP6和CYP4基因的mRNA进行半定量检测分析。结果嗜人按蚊抗性品系中CYP6基因mRNA的含量约为敏感品系的1．39倍。抗性品系中CYP4基因mRNA 的含量约为敏感品系的3．63倍。结论嗜人按蚊抗性品系体内的CYP6和CYP4的mRNA量高于其敏感品系,提示嗜人按蚊溴氰菊酯产生抗性机理可能与其细胞色素P450表达量增高有关。     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究：Ⅲ嗜人按蚊基P450因mRNA荧光半定量RT-PCR分析

目的 探讨嗜人按蚊CYP6、CYP4基因与溴氰菊酯抗性的关系。方法 采用荧光定量RT—PCR方法，对嗜人按蚊体内CYP6和CYP4基因的mRNA进行半定量检测分析。结果 嗜人按蚊抗性品系中CYP6基因mRNA的含量约为敏感品系的1．39倍。抗性品系中CYP4基因mRNA的含量约为敏感品系的3．63倍。结论 嗜人按蚊抗性品系体内的CYP6和CYP4的mRNA量高于其敏感品系，提示嗜人按蚊溴氰菊酯产生抗性机理可能与其细胞色素P450表达量增高有关。     

不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶（NSE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力在不同品系淡色库蚊（Cules pipiens pallens）各发育阶段的变化，为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫NSE和AChE活力，结果显示，敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育阶段有变化，I－Ⅲ龄幼虫较低，Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊较高，在各发育阶段均是DDVP抗性品系NSE活力最高，残杀威抗性品系次之，敏感品系最低，其中Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊阶段三个品系间NSE活力差别更明显；三个品系淡色库蚊AChE活力在I－Ⅳ龄幼虫和蛹期较低，3日龄雌成蚊较高，三个品系间AChE活力稍有差异，从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫NSE活力判断抗药性可选择Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄未吸血雌成蚊；测定蚊虫AChE不敏感性判断抗药性可选择3日龄未吸血雌成蚊；蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫阶段施药。     

沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性关系初步研究

目的 目的 探讨沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性间的相关性。 方法 方法 以PCR鉴定本实验室饲养的淡色库 蚊体内的沃尔巴克氏体, 采用实时定量PCR技术 （qRT?PCR） 测定并比较淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中沃尔巴克 氏体表达差异。 结果 结果 本实验室饲养的淡色库蚊体内含有沃尔巴克氏体。淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系卵、 一龄蚊、 二 龄蚊、 三龄蚊、 四龄蚊、 雌蚊、 雄蚊体内沃尔巴克氏体表达水平分别是敏感品系的18.42、 3.69、 4.43、 3.96、 6.31、 1.55、 3.76 倍, 差异均有统计学意义 （P均< 0.05）, 而抗性品系和敏感品系蛹中沃尔巴克氏体表达水平差异无统计学意义 （P > 0.05）。南京江心洲溴氰菊酯抗性雌蚊体内沃尔巴克氏体表达水平是敏感雌蚊的2.64倍。 结论 结论 沃尔巴克氏体可能与 淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性有关。     

嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性发生发展规律的初步研究

目的 研究嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性的发生发展规律。方法 在实验条件下,以嗜人按（Anopheles anthropophagus）幼虫为试虫,用溴氰菊酯乙醇液选育,至子35代后分别采用3种不同方法继续选育至子40代。结果 嗜人按蚊经溴氰菊酯选育至子27代时,LC50由0.0047mg/L上升至0.2822mg/L,抗性系数高达60,其后逐代下降,至子40代时,LC50为0.0165mg/L,抗性系数降至3.5;从子35代起分别用LC50逐代、LC50隔代、LC90逐代选育方法继续选育至子40代,抗性系数分别为敏感品系的9.96、18.85倍。结论 嗜人按蚊对溴氰菊酯抗性呈缓慢上升-稳定-趋于下降的态势;LC50隔代、LC90逐代选育方法可延缓抗性下降速度。     

江苏省传疟按蚊对菊酯类杀虫剂抗药性的监测

目的了解连续多年采用菊酯类杀虫剂处理蚊帐灭蚊后媒介按蚊的抗性情况.方法采用WHO成蚊滤纸接触法,以全国蚊类抗性监测网提供的区分剂量法来判定抗性级别.结果连续采用菊酯类杀虫剂处理蚊帐5年以上地区的中华按蚊对溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯均已产生初级抗性,5年以下地区中华按蚊对这两种杀虫剂尚未产生抗性;连续灭蚊5年以上地区未捕获嗜人按蚊,5年以下地区嗜人按蚊对菊酯类杀虫剂仍较敏感.结论嗜人按蚊对溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯尚未产生抗性,中华按蚊虽已产生抗性,但抗性水平仍较低,在今后的疟疾防治工作中应注意加强监测.     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅱ嗜人按蚊CYP4基因cDNA片段的克隆与序列分析

目的　获得嗜人按蚊CYP4基因家族成员的c DNA片段。方法　采用简并引物对嗜人按蚊溴氰菊酯敏感和抗性品系总RNA进行RT- PCR扩增,得到的特异性片段采用T/ A克隆法克隆并进行序列测定和分析。结果　敏感品系和抗性品系嗜人按蚊均能扩增得到4 5 0 bp和5 30 bp左右的2个片段。经克隆测序后,得到6个基因序列,其中4个来自敏感品系,2个来自抗性品系。其中1个来自敏感品系的序列和1个来自抗性品系的序列完全相同。所得的5个不同基因序列已被Gen Bank收录(登录号:AY2 0 814 1～AY2 0 814 5 ) ,并递交国际细胞色素P4 5 0命名委员会,经鉴定确认均为细胞色素P4 5 0超家族中的CYP4家族成员,其中4个为新基因,另1个为等位基因,分别属于CYP4家族的CYP4 C、CYP4 H和CYP4 J3个亚家族。结论　得到的5个c DNA新序列为CYP4家族新成员的基因片段。     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅰ嗜人按蚊CYP6基因cDNA片段的克隆与序列分析

目的获得嗜人按蚊CYP6基因家族成员的cDNA片断。方法采用简并引物对嗜人按蚊溴氰菊酯敏感和抗性品系总RNA进行RT-PCR扩增,得到的特异性片断采用T/A克隆法克隆并进行序列测定和分析。结果敏感品系和抗性品系中均扩增得到250bp左右的片断。进行克隆测序,得到10个CYP6新基因,2个来自敏感品系,8个来自抗性品系,被GenBank收录(登录号AY273927～AY273936)。递交国际细胞色素P450命名委员会,被鉴定为是细胞色素P450超家族中CYP6家族的7个新基因及其3个等位基因,分别属于CYP6Z、CYP6P、CYP6N和CYP6M等4个亚家族。结论得到的10个cDNA新序列为CYP6家族新成员的基因片断。     

淡色库蚊细胞色素P450基因的克隆、序列分析及表达差异的鉴定

目的克隆淡色库蚊细胞色素P450（CYP6F1）基因并进行表达差异的鉴定。方法采用RT—PCR技术和RACE策略，从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系4龄幼虫中克隆细胞色素P450基因（CYP6F1），用相应的软件进行生物信息学分析，并用实时定量PCR和RT—PCR分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定。结果成功克隆出CYP6F1基因，基因全长1639bp，开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸（GenBank登录号：AY662654）。序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因（AB001324）有99％的同源性，并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征，1个膜锚定信号、2个还原酶结合位点、1个典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等。实时定量PCR和半定量RT—PCR结果表明，CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系，且CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。结论CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关，并且在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。     

我国嗜人按蚊不同地理株基因鉴别的初步研究

目的　分析不同地区嗜人按蚊的基因特征。　方法　选择 13种随机引物对嗜人按蚊江苏、广西和四川实验株以及从湖北和广东现场捕获的嗜人按蚊进行随机引物 PCR扩增 ,并以中华按蚊江苏实验株为对照。　结果　 13种随机引物中有 7种随机引物对中华按蚊和 5个地区的嗜人按蚊 PCR扩增的结果存在差别。S-随机引物对中华按蚊和不同地区嗜人按蚊的扩增结果出现明显差异。中华按蚊和不同地区的嗜人按蚊均出现 4 5 0 bp较强扩增条带。但 2 4 0 bp的强扩增条带为中华按蚊所特有。嗜人按蚊江苏和四川实验株分别在 2 30 bp和 32 0 bp处有 1条强扩增条带 ,而从湖北和广东现场采集的嗜人按蚊分别在 4 0 0 bp和 2 6 0 bp处出现较强的扩增条带。　结论　采用随机引物 PCR技术对不同地区嗜人按蚊的基因分析已显示明显差异。已发现的一些特有的 DNA扩增条带可被用作进一步的基因特征分析和鉴别。     

中华按蚊、嗜人按蚊成虫前期发育时间的观察

本文报告了中华按蚊、嗜人按蚊在实验室条件下成虫前期各阶段发育时间的相互关系。在基本相同的饲养条件下，中华按蚊孵化率为７９．４８％，嗜人按蚊为８．５２％，卵期发育时间，中华按蚊平均为２．１６天，嗜人按蚊平均为１６．２７天。中华按蚊幼虫期发育所需时间的长短受卵期发育时间的影响，而嗜人按蚊无明显关系。     

嗜人按蚊和中华按蚊的ITS2区段序列分析和比较

目的 分析和比较不同地区中华按蚊和嗜人按蚊的ITS2区段的基因特征。方法 采用特异性ITS2引物对嗜人按蚊和中华按蚊江苏实验株以及从湖北省和越南现场捕获的嗜人按蚊和中华按蚊进行PCR扩增、克隆并对ITS2区段序列进行分析。结果 嗜人按蚊实验株的ITS2区段序列有452bp，与嗜人按蚊现场株的ITS2区段序列相同，中华按蚊实验株的ITS2区段序列有472bp，与中华按蚊现场株的ITS2区段序列也相同；但嗜人按蚊和中华按蚊的ITS2区段基因序列存在明显差异并存在不同的限制性内切酶位点。结论 可依据中华按蚊和嗜人按蚊的ITS2基因序列内限制性内切酶切位点不同的基因特征，采用PCR-RFLP技术建立中华按蚊和嗜人按蚊基因鉴别技术。