GADAb和ICA联合检测对成人晚发自身免疫性糖尿病的早期诊断价值

目的：探讨谷氨酸脱羧酶抗体对成人晚发自身免疫性糖尿病的早期诊断价值。方法：采用ELISA法对110例初诊为2例糖尿病患者血清谷氨酸脱羧酶抗体和胰岛细胞抗体进行了测定。结果：谷氨酸脱羧酶抗体阳性率为18．2％，胰岛细胞抗体阳性率11．7％，胰岛细胞抗体阳性患者全部检出谷氨酸脱羧酶抗体。谷氨酸脱羧酶抗体阳性的病人具有类似1型糖尿病的临床特点，低血浆C肽水平、低体重指数。结论：通过谷氨酸脱羧酶抗体测定可以从2型糖尿病中筛选成人晚发自身免疫性糖尿病患者，谷氨酸脱羧酶抗体和胰岛细胞抗体联合检测对成人晚发自身免疫性糖尿病具有早期诊断价值。     

双标记免疫荧光测定胃粘膜中抗体产生细胞的探讨

随着免疫学研究进展,免疫荧光技术已得到广泛应用。常规用异硫氰酸荧光素(FITC)标记荧光抗体只能测定一种抗原。要测定两种以上抗原必须连续切片,有时抗原较小,连续切片无法准确定位。本文介绍FUTC和若丹明B(RB)分别标记抗体,同时测定胃粘膜中两种抗体产生细胞,并与单纯FITC荧光染色加以比较,讨论RB荧光抗体标记和染色时应注意的问题,并对产生两种抗体的细胞也略加阐述。     

2种免疫荧光抗体检测运动员T细胞亚群、NK细胞的比较实验研究

目的通过用2种不同免疫荧光抗体标记运动员T细胞亚群和NK细胞,在流式细胞仪上测定并进行结果比较。方法采集50例运动员静脉血,分别用Coulter原抗体和Biolegend新抗体标记T细胞亚群和NK细胞,在流式细胞仪上检测T细胞（T3）、辅助性T细胞（T4）、抑制性T细胞（T8）、NK细胞（百分比）等指标,比较测试结果的差异。结果用2种荧光抗体检测运动员上述指标无统计学差异（P〉0.05）,结果具有高度可比性。结论 Biolegend新抗体高度适用于流式细胞仪上检测运动员T细胞亚群、NK细胞检测,而且长期使用更经济,建议作为首选标记抗体。     

从大容量人源噬菌体抗体库中筛选抗黑素瘤特异性抗体

目的：用黑素瘤（MM）细胞系筛选大容量人源噬菌体抗体库，获得能与MM细胞特异性结合的人源性单链抗体（scFv）．方法：用完整的MM细胞对大容量人源噬菌体抗体库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”筛选，并通过细胞ELISA法对随机挑选的克隆进行抗原结合活性测定，得到的阳性克隆进一步做DNA序列测定和免疫组化染色鉴定．结果：从80个随机挑选的克隆中，筛得1株抗MM细胞的抗体，该抗体对人的鳞癌细胞、角质形成细胞、黑素细胞、角蛋白、胰蛋白酶、转铁蛋白及小鼠igG等细胞或抗原的结合反应均呈阴性．免疫组化染色显示，该抗体与MM细胞系Libr的染色呈阳性，对黑素细胞和痣细胞的染色呈阴性．DNA测序结果表明，该抗体VH属于人IgG VH5亚群，VL属于人Vκ亚型．结论：通过筛选噬菌体抗体库获得到1株抗MM细胞的特异性抗体，为MM的靶向治疗研究奠定了基础．     

鼻咽癌31例EB病毒壳抗原免疫球蛋白A抗体的测定

本文应用免疫荧光细胞化学方法对31例鼻咽癌患者、13例非鼻咽癌患者进行了EB病毒VCA-IgA抗体测定,结果表明鼻咽癌患者血清EB病毒VCA-IgA抗体具有一定特异性,EB病毒可能具有病因学意义。EB病毒VCA-IgA抗体测定对鼻咽癌早期诊断和鉴别诊断有一定价值。     

角质细胞生长因子及其受体在CaSki细胞中的表达及其作用

目的 确定角质细胞生长因子(KGF)及受体(KGFR)在CaSki细胞中的表达及KGF对CaSki 细胞增殖、迁移的影响.方法 取对数增长期的CaSki细胞,ELISA和Western blot确定KGF及KGFR在CaSki细胞中的表达;3H-TdR掺入试验测定KGF、KGF抗体对CaSki细胞增殖的影响;Millicell测定KGF、KGF抗体对CaSki细胞迁移的影响.结果 ①KGF、KGFR 在CaSki细胞中有表达;②人重组KGF因子对CaSki细胞的增殖、迁移有促进作用(P＜ 0.05);③用KGF抗体中和CaSki细胞自分泌的KGF 后,CaSki细胞的增殖、迁移减弱(P＜0.05).结论 KGF和KGFR在CaSki细胞中有表达;人重组KGF及CaSki细胞自分泌KGF对CaSki细胞的增殖、迁移均有促进作用.     

粒细胞集落刺激因子及其McAb的研究

利用B细胞杂交瘤技术,用rhG-CSF免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地建立了3株能持续分泌特异抗rhG-CSF McAb的杂交瘤细胞。取其中2D_4-B_4杂交瘤细胞进行染色体数目测定,并将2D_4-B_4瘤细胞注入小鼠腹腔,获得抗体阳性腹水,测定提纯抗体IgG亚型、特异性、稳定性和亲和力,证实该McAb可以和hG-CSF及小鼠G-CSF特异结合。为进一步研究hG-CSF和人工合成G-CSF打下良好的基础。     

全人源抗前列腺癌ScFv抗体的筛选及生物学特性研究

目的 从已成功建立的前列腺癌噬菌体抗体库中筛选抗人前列腺癌单链抗体(ScFv),并分析其生物学特性。方法 以良性前列腺增生(BPH)细胞与噬菌体抗体库共孵育,去除抗体库中能够与BPH细胞结合的噬菌体抗体,再以前列腺癌细胞系DU145与去除非特异性结合后的噬菌体抗体库共孵育,通过“吸附-洗脱-扩增”对前列腺癌的噬菌体抗体库进行3轮的富集。采用流式细胞术筛选出对人前列腺癌细胞系DU145高亲合力的阳性克隆。阳性噬菌体克隆经亚克隆并转染大肠杆菌TG1,表达出可溶性ScFv抗体。采用流式细胞术、免疫荧光法分析其生物学特性。结果 以前列腺癌细胞系DU145为抗原,筛选出19个噬菌体抗体,经测定C11与DU145细胞亲合力最高,亚克隆至原核表达载体表达纯化为C11 ScFv抗体。流式细胞术和免疫荧光法检测结果均显示,C11 ScFv抗体与前列腺癌细胞DU145和PC3结合,与BPH细胞不结合。结论 通过噬菌体展示技术筛选到前列腺癌细胞系高亲合力的可溶性ScFv抗体,为进一步研究抗体的靶向性治疗奠定了基础。     

病毒性心肌炎巨细胞病毒特异性抗体和细胞免疫检测的意义

通过测定VMC患者血清中CMV特异性抗体和T细胞亚群及NK细胞活性，了解CMV特异性抗体和T细胞亚群夏NK细胞活性与VMC的关系。结果显示：956例临床拟诊为VMC的患者中，血清CMV中和抗体滴度≥1：64的病例中单-CMV感染者仅有22例，占总感染人数的2，30％，与其他肠道及呼吸道病毒混合感染者164例，占17．15％；33例CMV中和抗体滴度≥1：64者T细胞亚群、NK细胞活性均低于正常（P〈0．01）。     

吸烟对T,B淋巴细胞的影响

目的 探讨长期吸烟对免疫系统影响的机制。方法 分析于3mo和9mo对吸烟组及对照组大鼠行抗体形成细胞（AFC）试验和抗CD3抗体诱导的T细胞增殖试验以测定其体液和细胞免疫。结果 9mo后，吸烟组大鼠对绵羊红细胞的抗体形成细胞反应及抗CD3抗体诱导的增殖反应均较对照组显降低，而3mo时无显差异。结论 长期吸烟所引起的免疫抑制是与抗原刺激T细胞后，T细胞不能有效地活化、增殖和分化有关，T细胞自身的细胞免疫受到损伤，也使得它不能有效地辅助B细胞进行增殖及产生抗体，从而使体液免疫也变得无能。     

人脐带血采集数量和质量的影响因素研究

目的:探讨人脐带血采集数量和质量的若干影响因素及提高脐带血采集数量和质量的方法。方法:采集脐带血260例,分析产妇及胎儿的若干影响因素与脐血采集数量和质量的关系。结果:分娩方式、婴儿体重、胎盘娩出方式可影响脐血采集质和量(P<0.05)。另外,采集过程中的污染等也可影响脐血采集。结论:选择合适的供者和采集的方法可有效提高脐血采集数量和质量。     

成人脂肪源间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用

目的：研究人脂肪间充质干细胞培养上清对人脐带血（HUCB）中所含有间充质干细胞（MSCs）的影响。方法：取脐带血,肝素抗凝,Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育。流式细胞仪检测表面抗原。结果：脐带血的单个核细胞与人脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育经体外培养贴壁后出现形似纤维状细胞形态并表达与MSCs相关的抗原（CD13,CD44,CD71,CD166）,但不表达造血细胞抗原（CD34,CD45）,这与源于骨髓的MSCs一致。结论：人脐血间充质干细胞与脂肪源间充质干细胞培养上清共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。     

CD34+干细胞的分化及其在人工血管内皮化中的应用

目的:探讨外周血、骨髓和脐血中CD34 细胞作为人工血管内皮化的种子细胞来源问题.方法:采集犬外周血和骨髓及人脐血,经免疫磁珠分离出内皮细胞祖细胞,内皮细胞生长因子(VEGF)诱导分化为内皮细胞并扩增,光镜、扫描电镜和免疫细胞化学鉴定;将培养细胞种植于人工血管,扫描电镜观察.结果:经流式细胞仪测定,分离后的细胞中CD34 细胞:外周血(26.30±2.42)% 、骨髓(41.84±3.65)%、脐血(74.62±4.46)%,骨髓和脐血中CD34 细胞数量明显多于外周血,且增殖、分化能力强;CD34 细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈"铺路石"状排列.Ⅷ因子,CD31免疫细胞化学染色均为阳性,透射电镜细胞胞浆内可见W-P小体;扫描电镜下,内皮细胞平铺于人工血管表面,成单层排列,细胞排列无轴向性.结论:外周血、骨髓和脐血经免疫磁珠分离系统可分离出CD34 细胞,CD34 细胞经VEGF诱导可定向分化为内皮细胞.骨髓和脐血CD34 细胞可作为人工血管内皮化的种子细胞来源.     

产科因素对脐血心肌酶学的影响

目的了解产科因素对脐血心肌酶学的影响。方法采集2003年4月-6月间118例正常新生儿脐血,测定心肌酶学值。结果正常新生儿脐血心肌酶学值高于成人标准值,平均为SGOT54．88U／L、LDH543．5U／L、CK245．55U／L和CK—MB 92.73U／L。产程长短、羊水混浊、胎儿体重增加和分娩方式等因素对心肌酶学无影响。结论脐血心肌酶学的测定不受妊娠分娩等产科因素的影响,可以作为胎儿和新生儿心肌受损的监测指标,但其正常值不同于成人,需重新制定标准。     

剖腹产手术时新生儿脐血内麻醉药物含量的研究

用高效液相色谱法测定了28例硬膜外麻醉下剖腹产时脐血中利多卡因的含量。其结果表明硬膜外腔首次给药后胎儿娩出时间与胎儿脐血中麻醉药物含量之间有明显的正相关性,硬膜外腔用药量与脐血中麻醉药物的浓度有显著的正相关关系。提示:硬膜外给药后应尽快剖出胎儿,且给药不宜过多。     

人脐血单个核细胞的体外培养观察

目的对脐血间充质干细胞进行体外培养，以进一步阐明其生物学特性，为今后的基础研究和临床应用打好基础。方法采用DMEM培养基培养脐血单个核细胞，流式细胞仪检测细胞表面标志。结果脐血单个核细胞在体外培养24d时，细胞表面CD11b、CD34、CD44和CD45表达阴性，GFAP和nestin表达也为阴性。结论培养所得的单个核细胞区别于脐血中的造血干细胞。     

母亲血脂与脐血血脂水平探讨

[目的 ]探讨妊娠母亲分娩时的脐血与妊娠母亲血脂类水平之间的关系 .[方法 ]同时测定 172例妊娠母亲和脐血血清总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白 .[结果 ]妊娠母亲的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白显著高于脐血的 ,男女婴脐血血脂水平之间无差别 .男女婴脐血甘油三酯与母亲的相关血脂呈正相关 .[结论 ]脐血血脂水平明显低于母亲血脂水平 ,因此胎儿娩出后及时给新生儿补充脂类物质是必要的 ,母乳喂养是最佳的补充方式     

脐血红细胞免疫功能的研究

测定了脐血红细胞免疫Ｃ３ｂ受体花环率、免疫复合物花环率、血清红细胞Ｃ３ｂ花环促进率、血清红细胞Ｃ３ｂ花环抑制率和肿瘤红细胞免疫花环率。结果表明：脐血红细胞免疫复合物花环率明显高于成年人，血清红细胞Ｃ３ｂ花环促进率和肿瘤红细胞免疫粘附花环率明显低于成年人，脐血红细胞Ｃ３ｂ受体花环率和Ｃ３ｂ花环抑制率与成年人无明显差异。     

脐血间质干细胞移植后梗死心肌细胞的凋亡及意义

目的探讨脐血间质干细胞移植对梗死心肌残存心肌细胞凋亡的影响。方法无菌条件下采集成年杂种妊娠犬脐血,体外分离、纯化、培养、扩增脐血间质干细胞,经5-氮杂胞苷(5-aza)体外诱导向肌源性细胞分化,DAPI荧光标记,经左冠状动脉前降支灌注移植入成年杂种犬急性心肌梗死模型区域,2、4、8周取心肌标本,采用HE染色及TUNEL法检测犬心肌梗死模型中脐血间质干细胞移植后心肌细胞的凋亡情况。结果免疫组化法检测结果表明,培养的细胞为脐血间质干细胞,在5-aza诱导作用下可向肌源性细胞定向分化,2、4、8周后在移植区域观察到带荧光的心肌纤维和细胞核,排列方向与残留心肌组织基本一致,荧光标记的肌纤维相互连接。经TUNEL法检测可见在脐血间质干细胞移植组和对照组心肌梗死区域均有凋亡的心肌细胞分布,但移植组凋亡细胞明显低于非移植组;HE染色有相似的阳性率,阳性细胞多具有凋亡的形态特征。结论脐血间质干细胞移植梗死心肌除能形成心肌再生外,尚能减少心肌梗死后梗死区域的心肌细胞凋亡,达到延缓心室重构的目的。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡有较强的实用性。     

人脐血干细胞对局灶性脑缺血大鼠神经生长因子水平及神经功能的影响

目的探讨经静脉移植脐血干细胞治疗大鼠脑缺血模型的疗效以及对其神经功能恢复的影响。方法 LudmilaBelayev法建立大鼠大脑中动脉闭塞梗塞模型,33只大鼠随机数字表法分成生理盐水组、依达拉奉组和移植组。分别在造模1 d后经尾静脉注射生理盐水、依达拉奉和脐血干细胞进行观察。结果造模前3组血清NGF(OD值)比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后3～40 d,依达拉奉组和脐血干细胞组血清NGF(OD值)水平下降较生理盐水组差异有统计学意义(P<0.05);而在治疗后的7、14、21、28、40 d,脐血干细胞组血清NGF(OD值)水平明显高于依达拉奉组(P<0.05)。与此同时,造模前3组神经功能评分均为0分,治疗后3组神经功能评分均有所提高,其中依达拉奉组和脐血干细胞组较生理盐水组差异有统计学意义(P<0.05);而依达拉奉组和脐血干细胞组比较,治疗后的第3、5、7 d神经功能评分差异无统计学意义(P>0.05);但治疗后的第14、21、28、40天,脐血干细胞组的神经功能评分优于依达拉奉组(P<0.05)。结论实验提示经静脉移植的脐血干细胞可迁移至大鼠局灶缺血侧脑组织,提高大鼠神经生长因子水平,并显著改善大鼠神经系统功能。