新藤黄酸干预肺腺癌血管生成的细胞学研究

目的 通过对人脐静脉内皮细胞HUVEC和人肺腺癌A549的培养,检测含新藤黄酸(GNA)条件培养基对血管内皮细胞存活率、成管和生长的影响.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和平板克隆实验法研究GNA对HUVEC存活率和克隆形成率的影响;应用薄层胶原建立血管内皮细胞的二维培养模型,观察GN A对于血管内皮细胞成管现象的影响;采用细胞划痕愈合和小室迁移实验考察GNA对HUVEC的迁移能力影响;Westernblot检测血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,HUVEC细胞存活率和克隆形成率随GNA剂量增加而降低.GNA可抑制HUVEC细胞的迁移.还可抑制HUVEC管腔样结构形成.此外,GNA可下调HUVEC中VEGF和HIF-1α蛋白的表达.结论GNA可在体外抑制血管生成,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞分泌的HIF-1α和VEGF有关.     

蜈蚣藻多糖的体外抗血管生成作用

目的探讨蜈蚣藻多糖(GFP)的体外抗血管生成作用。方法应用MTT比色法测定GFP对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)存活率的影响;用Millicell小室测定GFP对HUVEC迁移能力的影响;用Matrigel测定GFP对HUVEC管腔形成的影响。结果GFP在5、10、20、50、100mg.L-1浓度下处理HUVEC48h,细胞存活率没有显著性变化;在50、100mg.L-1时能显著性地抑制HUVEC的迁移并呈剂量依赖关系;在100mg.L-1时能显著性地抑制HUVEC的管腔形成。结论GFP能够抑制HUVEC的迁移和管腔的形成。     

西妥昔单抗抑制血管生成的实验研究

目的 探讨西妥昔单抗(C225)对体内、外血管生成的抑制作用.方法 用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代培养模型,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验及流式细胞术,观察C225在体外对HUVEC增殖、迁移、小管形成和凋亡的影响;利用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察C225对CAM新生血管的抑制作用.结果 0.0625～2.0000μg/ml的C225作用HUVEC 48 h,细胞增殖抑制牢为12.34%～25.26%;体外迁移及小管形成实验显示,0.0625～1.0000 μg/ml C225的HUVEC迁移抑制率为15.51%～48.68%,HUVEC小管形成抑制率为22.91%～44.71%;0.25 μg/ml和1.00 μg/ml的C225诱导HUVEC细胞凋亡率分别为33.20%和35.05%.体内CAM试验表明,0.0625～1.0000 μg/ml的C225对新生血管抑制率为20.39%～36.18%.结论 C225在体内、外具有血管生成作用.     

毛萼乙素抑制人正常及肝癌血管生成的作用研究

目的:研究毛萼乙素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响以及对人肝癌血管生成的影响。方法:采用改良MTT法测试6个浓度的毛萼乙素在体外对原代培养的HUVEC增殖的影响;用人肝癌鸡胚尿囊膜血管复制模型,测定毛萼乙素在器官水平对血管生成的抑制作用。结果:毛萼乙素对HUVEC增殖具有显著的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)=7.27μg·mL-1;抑制效应呈剂量和时间依赖性。在剂量为25、50、100μg·mL-1时对人肝癌鸡胚尿囊膜血管面积比的抑制率分别为14.15%、48.72%、60.63%,抑制作用中等;其中剂量在50μg·mL-1时与阳性对照反应停相当(P>0.05)。结论:毛萼乙素对人脐静脉内皮细胞的增殖有显著的抑制作用,并能显著抑制人肝癌细胞诱导的鸡胚尿囊膜血管生成。     

siRNAs对原代人脐静脉内皮细胞血管生成的影响

目的 研究siRNA单独或多重沉默原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中血管内皮细胞生长因子A(VEGFA)及血管内皮细胞生长因子受体1/2/3(VEGFR1/2/3)表达对其血管生成的影响。方法 HUVECs分为空白对照组,阴性对照组与实验组。空白对照组不给予转染,阴性对照组转染100 nmol·L^-1siNC,实验组分为4组并分别转染100 nmol·L^-1siVEGFA及siVEGFR1/2/3。以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测siRNAs的沉默效率。HUVECs分为空白对照组,阴性对照组,沉默单靶点组和多靶点组,空白对照组不给予转染,阴性对照组转染100 nmol·L^-1siNC,沉默单靶点组分为4组并分别转染100 nmol·L^-1siVEGFA及siVEGFR1/2/3,沉默多靶点组分为4组并分别转染100 nmol·L^-1siVEGFA+siVEGFR1、siVEGFA+siVEGFR2、siVEGFA+siVEGFR3及siVEGFR1+siVEGFR2+siVEGFR3,以小管形成实验检测各组HUVECs小管形成情况。结果 siVEGFA组、siVEGFR1组、siVEGFR2组与siVEGFR3组沉默效率分别为(85.67±10.50)%,(71.67±7.02)%,(89.00±11.36)%与(90.00±3.60)%,与空白及阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。siVEGFA组血管总长度、分支管长度和血管交叉点分别为(32.67±3.79)%,(22.67±2.08)%及(25.33±6.43)%,在沉默单靶点组中抑制血管生成能力最强(均P<0.05);siVEGFA+siVEGFR3组血管总长度、分支管长度和血管交叉点分别为(28.33±5.51)%,(10.00±2.65)%,(8.33±2.31)%,siVEGFR1+siVEGFR2+siVEGFR3组分别为(27.00±4.00)%,(9.33±2.89)%,(10.00±3.60)%,在沉默多靶点组中抑制血管生成能力最强(均P<0.05)。结论 siRNAs沉默VEGF通路中单靶点的表达,可有效抑制HUVECs诱导的血管生成;同时沉默多靶点的表达,其抑制血管生成的功效更强。     

新绿原酸抑制血管生成的研究

目的 考察新绿原酸(5-caffeoylquinic acid, 5-CQA)对血管生成的影响。方法 应用人脐内皮细胞(HUVEC)、大鼠动脉环模型和转基因血管荧光斑马鱼模型考察5-CQA对血管生成的抑制作用。同时建立肿瘤细胞斑马鱼移植瘤模型,考察5-CQA对肠下静脉(subintestinal vein, SIV)生成的作用。结果 5-CQA在320μmol·L^-1及以下浓度对HUVEC的增殖无明显影响,5-CQA能够抑制HUVEC体外迁移及细胞中VEGF、bFGF mRNA的表达;与对照组比较,56和112μmol·L^-1的5-CQA具有显著抑制大鼠动脉环微血管生成的作用(P<0.05);在斑马鱼血管荧光模型中56和112μmol·L^-1的5-CQA具有显著抑制24 h斑马鱼节间血管(intersegmental vessel, ISV)生成的作用;同时5-CQA对斑马鱼移植瘤的肠下静脉生成具有明显抑制作用(P<0.05)。结论 5-CQA具有抑制血管生成的作用,其作用机制与抑制VEGFR2受体的表达有关...     

血管生成抑制剂研究进展

目的介绍近年来血管生成抑制剂的研究进展。方法查阅相关文献进行总结、归纳。结果血管生成抑制剂的研究取得很大进展。结论对寻找高效、低毒副作用的血管生成抑制剂具有重要意义。     

血管生成抑制剂研究进展

目的 介绍近年来血管生成抑制剂的研究进展。     

参麦注射液增强羟基喜树碱对肿瘤血管生成的抑制作用研究

目的研究参麦注射液联合羟基喜树碱对肿瘤血管生成的影响.方法:将人结肠癌细胞株(CW-2)细胞分为4组,即空白、参麦、羟基喜树碱、联合用药组.分组后的CW-2细胞培养12 h,制得条件培养液,条件培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),MTT法检测细胞生存率,并用细胞培养小室检测其细胞迁移活性.结果:与空白组比较,其他3个用...     

鬼箭羽提取物抑制血管生成的实验研究

目的 研究鬼箭羽氯仿提取物对血管生成的影响.方法 采用人脐静脉内皮细胞模型（HUVEC）、大鼠动脉环模型（rat aortic rings）和鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型研究鬼箭羽提取物抑制血管生成作用.结果 8μg·mL-1鬼箭羽提取物显著抑制人脐静脉内皮细胞的增殖,抑制率达到36.2%;2μg·mL-1和4μg·mL-1鬼箭羽提取物能够显著抑制大鼠动脉环新血管结构形成,抑制率分别达到56.41%和65.25%;鬼箭羽提取物20 μg·个-1与40μg·个-1.对鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管抑制率分别达到了22.6%与31.2%.结论 鬼箭羽提取物具有显著的抗血管生成活性.     

丹参酮ⅡA磺酸钠体内外促血管新生作用的研究

目的通过体外人脐静脉内皮细胞和海绵植入小鼠模型对丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的促进血管新生作用进行研究。方法体外采用人脐静脉内皮细胞HUVEC-12诱导模型,利用细胞迁移及小管生成实验评价丹参酮Ⅱ_A磺酸钠促血管新生的作用影响;体内实验采用海绵植入小鼠模型,通过QPCR测定不同剂量丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对VEGF-A mRNA表达的影响,采用免疫荧光染色法观察不同剂量丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对微血管生成及VEGF蛋白释放的影响。结果丹参酮ⅡA磺酸钠40、80μg/m L剂量组的迁移率显著高于对照组(P0.05、0.01);丹参酮Ⅱ_A磺酸钠与形成的结节数目呈现一定剂量相关性,且丹参酮Ⅱ_A磺酸钠80μg/mL剂量组的小管生成节结数显著高于对照组(P0.05)。丹参酮ⅡA磺酸钠12、24mg剂量组VEGF-Am RNA相对表达值显著高于对照组(P0.01),而丹参酮Ⅱ_A磺酸钠12mg剂量组作用最强,优于阳性药丹参多酚酸盐。丹参酮ⅡA磺酸钠12、16、24mg剂量组的VEGF蛋白表达量明显优于对照组(P0.05、0.01),丹参酮Ⅱ_A磺酸钠12mg剂量组,VEGF蛋白表达量最高,荧光面积最大,优于阳性药丹参多酚酸盐。结论丹参酮Ⅱ_A磺酸钠具有促血管新生作用,其作用机制可能通过上调VEGF-A mRNA的表达来影响。     

乳腺癌不同部位HIF-1α表达对肿瘤血管生成的研究

目的观察HIF-1α在乳腺癌不同部位表达对肿瘤血管生成的影响。方法选取乳腺癌大体标本30例,常规固定,HE染色、HIF-1αCD31免疫组化染色。结果乳腺癌组织内存在HIF-1α的表达,且肿瘤周边区域HIF-1α的表达水平较中央区域低（P〈0.01）,肿瘤周边区域及肿瘤中央细胞HIF-1α表达水平与微血管密度（micro vascular density MVD）密切相关（r值分别为0.8571和0.8346,P〈0.01）。结论乳腺癌中存在HIF-1α的表达,且与肿瘤血管生成密切相关。     

皮质醇对人脐静脉内皮细胞迁移功能的影响及机制研究

目的 探讨皮质醇抑制血管新生的机制.方法 将体外培养G0/G1期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为皮质醇组(无血清RPMI1640培养液中加入皮质醇)和对照组(仅用无血清RPMI1640培养液),细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率,细胞迁移实验观察皮质醇对细胞迁移的影响,酶联免疫吸附法测定细胞中人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和基质细胞衍生因子1(SDF1)含量,蛋白质印迹法测定细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达.结果 皮质醇组细胞活力与对照组相比无明显差异;细胞迁移数目明显少于对照组,差异有统计学意义[ (618 ±117)个比(1200 ±57)个,P=0.00011];bFGF、SDF1与NO水平明均明显低于对照组[bFGF为(69.7 ±5.7) ng/L比(99.3±11.0) ng/L,P＜0.01;SDF1为(10.2 ±2.1)ng/L比(12.4 ±2.5)ng/L,P＜0.05;NO为(58.5±10.3)μmol/L比(97.3±6.2)μmol/L,P=0.03407].结论 皮质醇对HUVEC细胞活力无明显抑制作用,但可以明显抑制其迁移功能,并降低细胞中NO、bFGF、SDF1的含量,这可能是皮质醇抑制HUVEC迁移的作用机制.     

重组人血管内皮抑制素对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺组织低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

<正>慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary dis-ease,COPD):是一种以气流受限为特征的肺部疾病,就世界平均水平,COPD居当前死亡原因的第4位,已成为一个重要的公共卫生问题[1]。肺血管重塑在COPD进展到肺动脉高压的过程中起重要作用[2]。重组人血管内皮抑制素(商品名:恩度,endostar)是一种特异性内源性血管生成抑制剂,     

缺氧诱导因子-1α、血管内皮因子与宫颈癌血管生成的关系

目的 探讨宫颈癌中缺氧诱导因子-1α(hypoxia include 1α,HIF-1α)的表达及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)的相关性,分析与宫颈癌等生物转移行为的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VEGF的表达;用CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管密度(MVD).结果 宫颈癌组织HIF-1α及VEGF与正常宫颈组织差异有显著性(P＜0.05);HIF-1α及VEGF表达呈一致性,呈正相关;HIF-1α或VEGF阳性肿瘤组织的MVD值显著高于阴性组织.结论 HIF-1α参与了诱导VEGF表达并促进肿瘤血管生成,提示检测HIF-1α和VEGF,对于早期诊断宫颈癌有重要意义.     

新藤黄酸大鼠在体肠吸收动力学研究

目的：探讨新藤黄酸在大鼠各肠段的吸收动力学特征,为设计新藤黄酸新型给药系统提供可靠的生物药剂学依据。方法：采用大鼠在体肠灌流吸收实验模型,并考察新藤黄酸在浓度为3．0、10、30ug／mL、以及不同肠段（结肠、回肠、空肠、十二指肠）对新藤黄酸吸收的影响,用HPLC－UV测定新藤黄酸的浓度。结果：在3．0～30ug／mL范围内新藤黄酸的浓度与吸收速率成线性关系,新藤黄酸在结肠、回肠、空肠、十二指肠的吸收速率常数（K。）分别为（0．03944±0．00158）、（0．04012±0．00103）、（0．04104±0．00124）、（0．08620±0．00272）h_。。结论：新藤黄酸在大鼠肠道符合一级动力学的吸收过程,在大鼠肠道为被动扩散的吸收机制。新藤黄酸在大鼠的各个肠道都有吸收,因此将新藤黄酸设计为控释制剂是可行的。     

卡立泊来德对K562细胞诱导的血管生成的影响

目的研究卡立泊来德(cariporide)处理对K562细胞诱导的血管生成能力的影响。方法应用MTT检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;transwell检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞迁移能力的影响;基质胶血管形成法检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞体外血管形成能力的影响;激光扫描共聚焦显微镜测定K562细胞的细胞内的pH;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测K562细胞上清中血管内皮生长因子的表达水平。结果cariporide处理可以明显降低K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞增殖,迁移和体外成管能力的诱导;cariporide处理后K562细胞的细胞内pH明显下降,分泌VEGF能力也受到抑制。结论 cariporide能抑制K562细胞的血管生成诱导能力,这种抑制是通过细胞内pH下降以及VEGF分泌减少引起的。     

川芎嗪联合顺铂对Lewis小鼠肺腺癌移植瘤与血管生成的影响

目的研究川芎嗪联合顺铂对Lewis肺腺癌小鼠移植瘤生长及抑制血管生成的作用机制。方法培养Lewis小鼠肺腺癌细胞,建立移植瘤模型。按照体重将成功制备的荷瘤小鼠模型随机分成4组,每组15只:模型组、顺铂组、川芎嗪组、联合组。模型组:0.9% NaCl,顺铂组:2 mg·kg^-1,川芎嗪组:100mg·kg^-1,联合组:两种药物相加。均每次0.2 mL,干预2周。称量瘤重,计算抑瘤率;用免疫组化方法检测每组血管内皮生长因子(VEGF)、血管抑制蛋白(VASH-1)的表达。结果给药后,联合组、顺铂组、川芎嗪组的抑瘤率分别为54.81%,32.36%,18.36%,与模型组(抑瘤率为0)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。联合组、顺铂组、川芎嗪、模型组的VEGF表达分别为20.37±2.02,28.07±4.29,26.43±4.69,62.14±6.78;这4组的VASH-1表达分别为9.04±1.01,10.10±1.61,11.53±1.96,12.94±1.10,3个给药组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析:VEGF与VASH-1成正相关(r=0.664,P<0.05)。结论川芎嗪联合顺铂协同抑制Lewis小鼠移植瘤生长,其作用机制可能为川芎嗪与顺铂可以直接作用癌细胞,同时降低VEGF与VASH-1表达,发挥抗血管生成作用。     

糖网明目颗粒对缺氧/高糖状态下血管内皮细胞相关因子表达的影响

目的观察糖网明目颗粒(TWK)对缺氧/高糖状态下血管内皮细胞EA.hy926相关因子的影响。方法用Co Cl250μmol·L-1和葡萄糖40 mmol·L-1干预人脐静脉内皮细胞EA.hy926复制缺氧和高糖模型;分别给予TWK 1.0和2.5 g·L-1干预24 h,MTT法检测细胞存活率;半定量逆转录(RT)-PCR法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因表达;ELISA法检测HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1蛋白含量。结果缺氧和高糖均能使EA.hy926细胞存活率升高,显著上调HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1 mRNA表达和蛋白含量(P<0.05)。TWK干预后,与模型组比较,细胞存活率显著下降,HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著降低(P<0.05),并且随着浓度的增加,药效有增强的趋势,但差异无统计学意义。TWK 2.5 g·L-1使缺氧细胞存活率由(109.9±6.9)%降至(69.6±2.2)%(P<0.05);HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1基因表达分别由0.292±0.017,0.210±0.013和0.724±0.027降低至0.204±0.014,0.061±0.010和0.476±0.018(P<0.05);HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1蛋白含量分别由56.2±4.9,1756±145和(339±33)ng·L-1降低至38.4±1.5,1057±118和(226±15)ng·L-1(P<0.05)。TWK 2.5 g·L-1使高糖细胞存活率由(111.4±7.3)%下降至(70.5±2.9)%(n=5,P<0.05);HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1 mRNA表达分别由0.397±0.021,0.289±0.034和0.755±0.031降低至0.247±0.015,0.079±0.005和0.531±0.025(P<0.05);HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1蛋白含量分别由56±4,1824±179和(339±31)ng·L-1降低至37±1,1170±110和(260±19)ng·L-1(P<0.05)。TWK 1.0 g·L-1也具有同样的作用效果。结论 TWK可能是通过调控内皮细胞HIF-1α,VEGFR-2和ICAM-1等新生血管相关因子的mRNA表达和蛋白分泌从而发挥防治糖尿病视网膜病变的作用。     

Dauricine inhibits insulin-like growth factor-Ⅰ-induced hypoxia inducible factor la protein accumulation and vascular endothelial growth factor expression in human breast cancer cells

Aim： To investigate the effects of dauricine （Dau） on insulin-like growth factor-Ⅰ （IGF-Ⅰ）-induced hypoxia inducible factor 1α （HIF-1α） and vascular endothelial growth factor （VEGF） expression in human breast cancer cells （MCF-7）. Methods： Serum-starved MCF-7 cells were pretreated for 1 h with different concentrations of Dau, followed by incubation with IGF-Ⅰ for 6 h. HIF-1α and VEGF protein expression levels were analyzed by Western blotting and ELISA, respectively. HIF-1α and VEGF mRNA levels were determined by real-time PCR. In vitro angiogenesis was observed via the human umbilical vein endothelial cell （HUVEC） tube formation assay. An in vitro invasion assay on HUVECs was performed. Results： Dau significantly inhibited IGF-Ⅰ-induced HIF-1α protein expression but had no effect on HIF-1α mRNA expression. However, Dau remarkably suppressed VEGF expression at both protein and mRNA levels in response to IGF-Ⅰ. Mechanistically, Dau suppressed IGF-Ⅰ-induced HIF-1α and VEGF protein expression mainly by blocking the activation of PI-3K/AKT/mTOR signaling pathway. In addition, Dau reduced IGF-Ⅰ-induced HIF-1α protein accumulation by inhibiting its synthesis as well as by promoting its degradation. Functionally, Dau inhibited angiogenesis in vitro. Moreover, Dau had a direct effect on IGF-Ⅰ-induced invasion of HUVECs. Conclusion： Dau inhibits human breast cancer angiogenesis expression, which may provide a novel potential mechanism for by suppressing HIF-1α protein accumulation and VEGF the anticancer activities of Dau in human breast cancer.