自噬相关基因Beclin1和MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达及其意义

目的 检测自噬基因Beclin1、MAP1LC3B在原发性胆囊癌组织中的表达情况,探讨细胞自噬在胆囊癌发生中的作用及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP方法,检测Beclin1、MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达情况,并以同期手术切除的胆囊炎性疾病组织为对照;统计Beclin1和MAP1LC3B的表达情况,并分析其与胆囊癌临床病理特征之间的关系.结果 胆囊癌组和慢性胆囊炎组Beclin1的阳性表达率分别为45.7％和78.3％,MAP1LC3B的阳性表达率分别为47.8％和71.7％,两组差异有统计学意义（P＜0.05）.Beclin1和MAP1LC3B在不同年龄、性别、癌组织分化程度患者中的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,但与周围脏器侵犯情况、病理TNM分期有关（P＜0.05）.Beclin1和MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达水平呈正相关（r=0.538,P＜0.01）.结论 胆囊癌组织中Beclin1和MAP1LC3B表达水平明显低于胆囊炎性疾病组织;Beclin1和MAP1LC3B的表达水平与胆囊癌侵袭能力及TNM分期有关,且两者表达呈正相关;提示Beclin1和MAP1LC3B是反映胆囊癌生物学行为的重要指标,两者之间可能存在着某种共同通路.     

Expressions of NDRG1and HPA in hepatic carcinoma and their correlation with the infiltration and metastasis of hepatic carcinoma

目的 探讨分化相关基因NDRG1和乙酰肝素酶(Hpa)在肝癌细胞中的表达及其与肝癌浸润、转移之间的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测46例肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达,并分析二者表达情况与肝癌临床病理特征的关系,以及二者在肝癌组织中表达的相关性.结果 NDRG1和Hpa在正常肝组织及癌旁组织中弱表达或不表达,在肝癌组织中高表达.NDRG1蛋白表达水平与肿瘤分化程度和肿瘤大小无关,而与门静脉有无癌栓,肝内或淋巴结转移相关(P<0.05).HPA蛋白表达水平与有无癌栓无明显相关性(P>.05),与肝癌组织分化程度,肿瘤大小,肝内或淋巴转移相关(P<0.05).肝癌组织中NDRG1和Hpa的表达呈正相关(r=0.617,P<0.01).结论 NDRG1和Hpa可能作为潜在癌基因在肝癌进展过程中起一定作用,联合检测NDRG1和Hpa蛋白的表达有助于判断肝癌生物学行为.     

自噬相关蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中的表达及相关性研究

目的：探讨自噬相关蛋白Beclin1、Atg1、mTOR在不同分化程度肺鳞癌(SCC)和腺癌中的表达情况及其相关性。方法：采用免疫组织化学方法,检测82例肺癌组织及17例癌旁正常肺组织Beclin1、Atg1、mTOR的表达情况。结果：癌旁组织中Beclin1、Atg1阳性率高,而mTOR的阳性率较低;SCC和肺腺癌组织中,随分化程度的降低,Beclin1、Atg1呈递减趋势,而mTOR的阳性表达呈递增趋势。相关性分析显示,不同分化程度SCC中Beclin1与Atg1表达呈正相关（R=0.609,P<0.01）,Beclin1、Atg1分别与mTOR呈负相关（R=-0.617,-0.444,P<0.01）;不同分化程度肺腺癌中,Beclin1与Atg1表达呈正相关（R=0.458, P<0.01）,Beclin1、Atg1分别与mTOR呈负相关（R=-0.497,-0.541,P<0.01）。结论: mTOR随SCC和肺腺癌分化程度的降低,表达逐渐增高,而Beclin1、Atg1表达逐渐降低,提示SCC和肺腺癌的恶变程度与自噬有关。     

维生素K_3通过下调mTOR信号途径而诱导HeLa细胞自噬

目的观察VitK3(维生素K3,vitaminK3)对HeLa细胞损伤过程中的自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法以HeLa细胞为研究对象,采用MTT检测细胞存活率,用Western blot方法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的变化和蛋白激酶B(PKB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化-Akt/mTOR表达的变化。结果30μmol·L-1剂量以上的VitK3可明显抑制HeLa细胞的增殖(P<0.05)。VitK3作用12h后增加Beclin1和LC3-Ⅱ的蛋白表达水平(P<0.05),降低磷酸化的Akt/mTOR的蛋白表达水平(P<0.05)。结论VitK3能明显抑制HeLa细胞增殖并具有诱导HeLa细胞发生自噬的作用,其机制可能与下调mTOR信号有关。     

长链非编码 RNA PCGEM1及信号传导转录激活因子 3在卵巢癌中的表达及意义

目的 研究长链非编码RNA PCGEM1(lncRNA PCGEM1)与信号传导转录激活因子3(STAT3)在卵巢癌中的表达及意义.方法 选取2013年3月至2014年12月南阳市第一人民医院行卵巢摘除手术的卵巢癌病人108例,术中留取卵巢组织,另选取行手术切除的卵巢囊肿病人108例,术中留取已证实无肿瘤细胞的正常卵巢组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌及正常卵巢组织中lncRNA PCGEM1、STAT3 mRNA表达水平,采用免疫组化法检测STAT3蛋白阳性表达率,采用Pearson法进行相关性分析,采用Kaplan-Meier生存曲线分析lncRNA PCGEM1、STAT3蛋白表达与病人5年生存率的关系;并以Cox回归分析影响病人预后的危险因素.结果 与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织lncRNA PCGEM1[(2.41±0.43)比(0.99±0.15)]、STAT3 mRNA表达水平[(2.69±0.52)比(1.02±0.16)]、STAT3蛋白阳性表达率(70.37％比35.19％)显著升高(P<0.05);卵巢癌组织lncRNA PCGEM1、STAT3蛋白阳性表达与病人年龄无关(P>0.05),与FIGO分期、病理分级、铂类耐药及淋巴结转移有关(P<0.05).卵巢癌组织lncRNA PCGEM1与STAT3 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05).lncRNA PCGEM1高表达组5年生存率为8.33％,显著低于低表达组54.35％(χ2=39.51,P<0.001),STAT3蛋白阳性表达组5年生存率为13.16％,显著低于阴性表达组68.75％(χ2=26.16,P<0.001).顺铂耐药、淋巴结转移、lncRNA PCGEM1高表达、STAT3蛋白阳性表达是影响卵巢癌病人预后的独立危险因素(均P<0.05).结论 卵巢癌组织中lncRNA PCGEM1、STAT3均高表达,且二者呈正相关,与卵巢癌病人病情及5年生存率有关,有望成为评估病人预后的生物标志.     

紫花前胡苷抗宫颈癌细胞作用研究

目的 探究紫花前胡苷抗宫颈癌HeLa细胞的作用效果及相关信号通路.方法 HeLa细胞在0、0.1、1和10 mmol/L浓度的紫花前胡苷作用24 h后,通过CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平;通过蛋白免疫印迹法检测细胞内凋亡相关cleaved-caspase 3(cle-caspase 3)、Cytochrome C(Cyto C)、Bax、Bcl2蛋白水平变化,以及自噬相关p-mTOR、mTOR、P62、Beclin1、LC3蛋白水平变化;结合Ad-GFP-LC3B腺病毒转染检测细胞内LC3B聚集状态.结果 对照组(0 mmol/L)、0.1 mmol/L组、1 mmol/L组、10 mmol/L组的HeLa细胞凋亡率依次升高,分别为(14.93±2.95)％、(15.43±2.13)％、(21.63±3.19)％、(31.42±5.01)％,且在10 mmol/L浓度处理下升高最为明显(P<0.05).10 mmol/L的紫花前胡苷作用24 h后,HeLa细胞内的促凋亡cle-caspase 3、Cyto C、Bax蛋白水平升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达下降,自噬相关蛋白p-mTOR/mTOR水平下降,Beclin1以及LC3-Ⅱ累积增多,自噬流相关蛋白P62表达下降,LC3B在紫花前胡苷处理组中呈颗粒性聚集,均差异有统计学意义(P<0.05).结论 紫花前胡苷具有较好的抗宫颈癌细胞作用,其机制可能与自噬相关细胞凋亡有关.     

苦参碱体外对人髓母细胞瘤D341细胞增殖、凋亡和自噬的作用

目的探讨苦参碱在体外诱导人髓母细胞瘤D341细胞增殖、凋亡和自噬的作用。方法体外培养细胞,随机分为对照组、苦参碱0.5,1.0,1.5和2.0 g·L-1组,作用时间为24,48和72 h。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞结构,Western蛋白质印迹法检测细胞Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Bcl-2同源结构域蛋白抗体beclin1蛋白表达。随后在苦参碱作用前1 h加入终浓度为5 mmol·L-1的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA),观察细胞beclin1和LC3蛋白表达的变化。结果苦参碱0.5~2.0 g·L-1能明显抑制D341细胞增殖,具有浓度效应关系(r24 h=0.994,r48 h=0.992,r72 h=0.996,P<0.01),而且可诱导D341细胞凋亡(r24 h=0.937,r48 h=0.947,r72 h=0.987,P<0.01);苦参碱浓度为2.0 g·L-1时,对D341细胞增殖的抑制作用(r=0.999,P<0.01)和凋亡的诱导作用(r=0.990,P<0.01)具有时间效应关系。透射电镜观察发现,苦参碱2.0 g·L-1作用24 h,D341细胞出现气穴样的空泡结构,细胞染色质浓缩、边缘化;作用48 h,细胞核染色质浓缩明显,细胞胞浆中可见空泡;作用72 h,细胞核固缩明显,部分细胞可见核裂解,空泡明显增大。Western蛋白质印迹法实验结果表明,苦参碱0.5~2.0 g·L-1增强D341细胞Bax蛋白表达(r24 h=0.981,r48 h=0.967,r72 h=0.998,P<0.01),抑制Bcl-2蛋白表达(r24 h=-0.977,r48 h=-0.989,r72 h=-0.968,P<0.01)。苦参碱作用48 h可增强D341细胞胱天蛋白酶3的表达(r48 h=0.995,P<0.01),作用24,48和72 h能增强D341细胞beclin1蛋白的表达,具有浓度效应关系(r24 h=0.989,r48 h=0.986,r72 h=0.966,P<0.01),自噬抑制剂3-MA可抑制此作用(P<0.05)。苦参碱能使D341细胞LC3-Ⅰ蛋白表达减少,LC3-Ⅱ表达增加,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低(r24 h=-0.795,r48 h=-0.886,r72 h=-0.901,P<0.05);自噬抑制剂3-MA可抑制苦参碱对LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响(P<0.05)。结论苦参碱体外具有抑制D341细胞增殖、诱导凋亡和促进自噬的作用。     

LCMR1在前列腺癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的相关性

目的 探讨前列腺癌组织中肺癌转移相关基因(LCMR1)表达与临床病理的关系及临床预后的意义.方法 采用免疫组化S-P法检测60例前列腺癌组织、癌旁组织和30例前列腺增生组织LCMR1的表达情况,并应用统计学方法对LCMR1的表达情况与临床资料、病理参数及生存预后进行分析.结果 LCMR1在前列腺癌组织、癌旁组织和前列腺增生组织的阳性表达率分别为51.7％、8.3％、6.7％,三者表达差异具有统计学意义(P<0.0001).LCMR1在前列腺癌组织中的表达与Gleason评分、TNM分期、切缘阳性率、淋巴结转移情况相关(P<0.05),与年龄、PSA无相关性(P>0.05),其高表达与无生化复发生存率显著负相关(P<0.05),COX比例风险模型结果表明Gleason评分(HR=3.194,P=0.013)及手术切缘阳性(HR=19.946,P<0.0001)是前列腺癌患者生化复发的独立预后影响因素.LCMR1表达不能独立预测生化复发危险性(HR=1.710,P=0.191).结论 LCMR1的上调表达与前列腺癌的恶性程度及早期诊断相关.     

The Expression and Clinical Significance of PPAR-γ, p27kip1 and Skp2 in Hepatocellular Carcinoma

目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)-γ、p27kip1和细胞S期激酶相关蛋白(Skp)2蛋白在肝癌发生发展过程中的作用.方法:肝细胞癌组织标本57例(肝癌组)和正常肝组织标本(对照组)20例.采用免疫组织化学方法检测2组PPAR-γ、p27kip1及Skp2蛋白的表达,分析它们之间及其与肝癌临床病理特征的关系.结果:肝癌组PPAR-γ及Skp2蛋白的阳性表达率高于对照组,p27kipl蛋白阳性表达率低于对照组(P＜0.05),PPAR-γ蛋白与Skp2、P27kip1蛋白在不同TNM分期中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05).PPAR-γ蛋白与Skp2、p27kip1蛋白表达无相关性(P＞0.05);Skp2与p27kip1蛋白的表达呈负相关(r=-0.307,P=0.020).Skp2蛋白低表达组的1、3、5年生存率高于高表达组(P＜0.001).结论:PPAR-γ和Skp2蛋白表达与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,Skp2可作为判断肝细胞癌预后的指标.     

结肠癌转移相关基因 1、磷酸化需肌醇酶 1蛋白在鼻咽癌组织中表达及与其临床病理特征、放疗敏感度及预后的关系

目的 探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)、磷酸化需肌醇酶1(p-IRE1)蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况及与鼻咽癌临床病理特征、放疗敏感度及预后的关系,为寻求个体化治疗提供依据.方法 选取2016年1月至2018年12月在南阳市中心医院行根治性调强放疗的鼻咽癌病人癌组织标本62例为鼻咽癌组,同时选取同期20例健康人鼻咽部黏膜组织标本作为正常对照组,应用免疫组化法分别检测组织中MACC1、p-IRE1蛋白的表达情况,分析其与鼻咽癌病人临床病理特征、放疗敏感度及预后的关系,以及鼻咽癌组织中MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达的相关性.结果 鼻咽癌组织标本MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达率均明显高于正常鼻咽部黏膜组织标本,均差异有统计学意义(70.97％比15.00％,66.13％比10.00％,P<0.05).鼻咽癌组织MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达与TNM临床分期和分化程度密切相关(P<0.05),鼻咽癌组织MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达者放疗敏感度均明显低于阴性表达者,差异有统计学意义(P<0.05).鼻咽癌组织MACC1及p-IRE1蛋白阳性表达呈显著正相关(χ2=12.18,P<0.001,列联系数=0.405).放疗后随访期间有12例(19.35％)出现局部复发,14例(22.58％)出现远处转移;死亡24例(38.71％),均死于局部复发或远处转移.鼻咽癌病人放疗后死亡与TNM临床分期、分化程度及鼻咽癌组织MACC1、p-IRE1蛋白表达情况密切相关(P<0.05).多因素COX回归分析结果显示,TNM临床分期、鼻咽癌组织MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达是鼻咽癌病人放疗后死亡的独立危险因素(P<0.05).结论 鼻咽癌病人MACC1及p-IRE1蛋白检测可能有助于鼻咽癌病人临床分期、病理分化程度以及放疗敏感度的判断,其阳性表达是鼻咽癌预后的独立危险因素,可能成为鼻咽癌基因治疗的新靶点.     

三种蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的 检测PIK3CA、AKT2、FFEN在上皮性卵巢癌中的表达情况,分析其与临床病理参数的关系,探讨三者在上皮性卵巢癌发生发展中的可能作用机制.方法 采用免疫组织化学S-P法及半定量分析法检测29例正常卵巢及64例上皮性卵巢癌组织中PIK3CA、AKT2、PTEN蛋白的表达情况,分析在上皮性卵巢癌中三者与临床病理特征之间的关系以及三者之间的相关性.结果 PIK3CA蛋白表达部位主要在细胞质内.在正常卵巢组织及上皮性卵巢癌组织中灰度值分别为(85.21±4.74)、(46.68±10.22),差异有统计学意义(P<0.01).AKT2蛋白表达部位主要在细胞质内.在正常卵巢组织及上皮性卵巢癌组织中灰度值分别为(85.72±4.29)、(46.17±9.29),差异有统计学意义(P<0.01).PTEN阳性染色主要定位于细胞质,有少量定位于细胞核.在正常卵巢组织及上皮性卵巢癌组织中灰度值分别为(41.49±4.67)、(73.74±11.33),差异有统计学意义(P<0.01).PIK3CA与AKT2蛋白在上皮性卵巢癌中的表达均高于正常卵巢组织,PTEN蛋白表达低于正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P<0.01);上皮性卵巢癌中,PIK3CA与AKT2蛋白在中低分化及Ⅲ～Ⅳ期组织中表达高于高分化及Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05),PTEN蛋白在中低分化及Ⅲ～Ⅳ期组织中表达低于高分化及Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05),三者在患者的年龄、组织学类型分组中表达差异无统计学意义(P>0.05);上皮性卵巢癌中,PIK3CA与AKT2蛋白表达呈正相关(r=0.674,P<0.01),PIK3CA与PTEN表达呈负相关(r=-0.514,P<0.01),AKT2与PTEN表达呈负相关(r=-0.589,P<0.01).结论 PIK3CA、AKT2蛋白的表达升高和PTEN蛋白表达降低在卵巢癌的发生、发展中起重要作用,P13K/AKT信号通路参与卵巢癌的演进过程.联合检测PIK3CA、AKT2、PTEN有助于卵巢癌的临床早期诊断和治疗,为生物靶向治疗提供新的线索.

Abstract：

Objective To investigate the expression of PIK3CA, AKT2 and PTEN in epithelial ovarian cancer, to analyze their relation to clinical and pathologic features and prognosis of epithelial ovarian cancer. Methods The expression of PIK3CA, AKT2 and PTEN protein were studied by immunohisto chemical methods in 29 normal o-vary tissues and 64 epithelial ovarian carcinoma. The correlation between clinical and pathologic features in ovarian cancer was also analyzed. Results The expression of PIK3CA and AKT2 protein in epithelial ovarian cancer was significantly higher than that in normal ovary tissues ( P <0. 01). In epithelial ovarian cancer, the expression of PIK3CA and AKT2 protein in mid and low histological grade and Ⅲ-Ⅳ clinical stage was significantly higher than that in high histological grade and Ⅰ-Ⅱ clinical stage (P <0. 05). In epithelial ovarian cancer, the expressions were not related with age and histological type(P >0.05). The expression of PIK3CA protein was positively correlated with the expression of AKT2 protein (r =0.674, P <0.01). The expression of PTEN was negatively correlated with the expression of PIK3CA(r= -0.514, P<0.01)and the expression of PTEN was negatively correlated with the expression of AKT2 (r =- 0.589, P < 0.01). Conclusions The high expression of PIK3CA and AKT2 protein as well as the low expression of PTEN protein are closely related to the occurrence and development of ovarian cancer. PI3K/AKT signal pathway takes part in the evolvement process of ovarian cancer. To-investigate the expression of PIK3CA, AKT2 and PTEN protein are helpful for the clinical diagnosis and treatment of ovarian cancer.     

Livin在胃癌中的表达及与Caspase 3的关系

目的:研究凋亡抑制基因Livin在胃癌发生发展中的作用,并探讨其与Caspase3的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测Livin和Caspase3在60例胃癌、10例良性病变和10例正常胃组织中的表达情况,并分析它们之间的相关性。结果:Livin蛋白在正常胃组织、胃良性病变及胃癌组织中阳性率分别为0,20%,66.7%,Caspase3蛋白在上述组织中的阳性表达率分别为70%,50%,18.3%,差异均有统计学意义。而且Caspase3与Livin蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关。Livin蛋白的表达与性别、年龄、病理类型以及淋巴结转移无关,与肿瘤浸润的深度显著相关。结论:Livin在胃癌组织中表达上调,也许可以作为判断胃癌预后新的分子标志物。     

苍附导痰丸含药血清调控大鼠卵巢颗粒细胞自噬的作用

目的:研究苍附导痰丸含药血清调控大鼠卵巢颗粒细胞(GCs)自噬的作用。方法:将3月龄SD大鼠分为生理盐水组(生理盐水,灌胃)、卵巢刺激素(FSH)注射组(10.71 IU/kg,皮下注射)和苍附导痰丸高、中、低剂量灌胃组[0.5、1、2 mg/g(以生药量计),灌胃],每组6只,每天皮下注射/灌胃给药1次,连续3天;末次给药后,于腹主动脉采血,获取各组大鼠的含药血清。将大鼠GCs分为空白对照组、模型组、FSH组(阳性对照)和苍附导痰丸高、中、低剂量组,除空白对照组直接加入生理盐水组大鼠血清100μL外,其余各组均先给予丙酸睾丸酮诱导以复制自噬模型,然后模型组加入生理盐水组大鼠血清100μL,各给药组分别加入对应药物组含药血清100μL。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中雌二醇(E2)、孕激素(P)的含量,采用Western blot法检测各组GCs中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白的相对表达量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组细胞中PI3K、Akt、mTOR和自噬相关因子Beclin 1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA的相对表达量。结果:与空白对照组比较,模型组细胞上清液中E2含量以及细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.01),Beclin 1、LC3Ⅰ、LC3ⅡmRNA的相对表达量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,FSH组和苍附导痰丸中、高剂量组细胞上清液中E2含量显著升高,细胞中Beclin 1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA的相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);各给药组细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:苍附导痰丸可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白及其mRNA的表达,从而抑制GCs的自噬。     

褪黑素对自然衰老大鼠肾脏保护作用的研究

目的:探讨mTOR信号介导的自噬在褪黑素(melatonin,Mel)减轻自然衰老SD大鼠肾脏损害的作用及机制.方法:将40只8周龄SD大鼠随机分为4组,空白对照组(A组)、单纯褪黑素处理组(褪黑素10 mg·kg-1·d-1,B组)、老年模型组(C组)和褪黑素干预老年模型组(褪黑素10 mg·kg-1·d-1,D组)...     

灯盏花素通过激活线粒体自噬途径减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨灯盏花素对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)及线粒体自噬途径的影响.方法 采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素制备糖尿病模型,糖尿病模型成功后再制备MIRI模型,具体分组为对照组(不做任何处理)、模型组(糖尿病+MIRI)、假手术组(糖尿病),均ip等体积生理盐水;灯盏花素低、高剂量组(糖尿病+MIRI),分...     

膜联蛋白A1基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A1(ANXA1)基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响及其机制.方法 应用免疫组化法检测100例胆囊癌组织中ANXA1基因的阳性表达,分析其与临床病理特征的关系.培养人胆囊癌GBC-SD细胞,分别将ANXA1小干扰RNA(ANXA1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染效果;细胞转染后培养48 h,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、STAT3、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)蛋白表达.结果 ANXA1基因在胆囊癌中的阳性表达率显著高于癌旁组织(69.0%比7.5%,χ2=43.261,P<0.01);ANXA1在胆囊癌中的表达与性别和年龄不相关(P>0.05),与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴转移显著相关(P<0.01).siRNA-NC组中ANXA1、Cleaved caspase3、STAT3、p-STAT3蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);ANXA1-siRNA组ANXA1蛋白表达、细胞存活率及p-STAT3蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),STAT3蛋白表达在三个组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 ANXA1基因的表达参与了胆囊癌的生长、分化和迁移过程,下调ANXA1的表达能抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的增殖,并通过下调Cleaved caspase3蛋白促进细胞凋亡,其机制与STAT3信号通路的调控有关.     

幽门螺杆菌通过NF-κB信号通路调控胃上皮细胞自噬及凋亡的机制研究

目的 研究幽门螺杆菌通过NF-κB信号通路调控胃上皮细胞自噬及凋亡的机制.方法 体外培养幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)及人胃上皮AGS细胞株,收集Hp处理0 h、3 h、6 h、9 h及对照组、18μmol·L-1 NF-κB特异性抑制剂SN50处理6 h、18μmol·L-1 SN50+Hp处理6 h的AGS细胞,利用流式细胞仪分别检测各组细胞的自噬率及凋亡率;收集Hp梯度时间处理后的AGS细胞,提取各组总蛋白,蛋白质印迹法(Western Blot)检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ),凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及NF-κB通路相关蛋白p65、p-p65的表达.结果 AGS细胞的自噬率与凋亡率均随着Hp作用时间的延长逐渐升高,各时间点与0 h相比均差异有统计学意义(P<0.01).自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ、凋亡相关蛋白Bax及NF-κB通路相关蛋白p-p65的表达随着Hp作用时间的延长逐渐增高,自噬相关蛋白LC3Ⅰ及凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达随着Hp作用时间的延长逐渐降低,与0 h相比,各检测时间点蛋白表达差异有统计学意义(P<0.01).NF-κB通路相关蛋白p65的表达未出现显著性变化(P>0.05).与对照组相比[(6.56±1.40)%、(11.76±1.70)%],Hp处理后,AGS细胞自噬率(9.86±1.78)%与凋亡率(13.25±1.56)%显著增强(t1=11.054,P1=0.000;t2=10.456,P2=0.000);SN50处理后,AGS细胞自噬率(19.65±2.14)%与凋亡率(28.65±2.14)%显著减弱(t1=3.403,P1=0.009;t2=2.799,P2=0.023);Hp与SN50联合处理后,AGS细胞自噬率(20.65±2.14)%与凋亡率(29.65±2.14)%显著高于对照组,但低于Hp单独处理组,差异有统计学意义(t1=5.164,P1=0.001;t2=5.890,P2=0.000;t3=4.718,P3=0.002;t4=5.738,P4=0.000).结论 Hp刺激显著促进AGS细胞的自噬与凋亡,作用机制可能与NF-κB通路的活化有关.     

COX-2在肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的：研究环氧合酶-2（COX-2）在肝细胞癌中的表达及其与基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测43例肝细胞癌组织和6例肝硬化组织及10例正常肝组织中COX-2、MMP-2和MMP-9的表达。结果：肝癌组织中的COX-2表达高于肝硬化组织和正常肝组织中的表达；在不同性别、年龄、肿瘤大小、包膜、门静脉癌栓、甲胎球蛋白（AFP）和组织分化者癌组织中COX-2蛋白的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。COX-2与MMP-2和MMP-9的表达有相关性（r分别为0．508和0．368，P〈0．01）。MMP-2和MMP-9蛋白表达之间呈正相关（r=0．472，P〈0．01）。结论：COX-2可能通过增加MMP-2和MMP-9的表达而促进肝细胞癌的侵袭和转移。