NO对内毒素诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB活化和TNF -α的调节

目的 探讨一氧化氮对内毒素（lipopolysaccharide,LPS）诱导肺泡区噬细胞核因子－κB（NF－κB）活化及肿瘤坏死因子α（TNF－α）基因表达的调节。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞（pulmonary alveolar Macrophages,PAM）进行培养，分正常对照组，LPS组，NO＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和ELISA法分别检测核提取物中NF－κB活性和细胞培养上清中TNF－α含量。结果 LPS组NF－κB活性和TNF－α含量在刺激24h后明显高于正常对照组（P＜0.01）；NO＋LPS组NF－κB活性和TNF－α含量均显低于LPS组（P＜0.01）。结论 LPS诱导PAM的NF－κ活化，导致TNF－α基因表达增强；NO可抑制NF－κB活化而减少TNF－α的释放。     

大黄对体外内毒素诱生的肺泡巨噬细胞分泌功能的影响

采用细胞分离及培养技术观察了中药大黄对内毒素（LPS）体外诱生的肺泡巨噬细胞分泌细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF－α），白细胞介素-1（IL－1）和白细胞介素-6（IL－6）的作用。结果表明，大黄能够明显抑制LPS诱生的肺泡巨噬细胞分泌TNF－α、IL－1和IL－6，与对照相比P＜0．01。从而减轻由于TNF－α、IL－1、IL－6过度分泌所致的肺脏损害，这可能是大黄对肺脏具有保护作用的分子机制。     

脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子的影响

目的　研究脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响 ,探讨LBP多抗对LPS炎症反应减敏作用的部分机制。方法　将从 4 0只大鼠分离、培养的肺泡巨噬细胞随机分为 4组 ,A组为正常对照组 ,B组为LPS刺激组 ,C组为LBP LPS刺激组 ,D组为LBP多抗 LBP LPS组。运用RT -PCR和ELISA的方法 ,分别检测LBP多抗对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后IL - 1β ,IL - 18的mRNA表达与TNF -α分泌量的变化。 结果　B组细胞分泌的TNF -α和IL -1β,IL - 18的mRNA表达显著高于正常对照A组 ,而C组细胞显著高于B组 ,D组却低于C组。LBP多抗显著减少LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子TNF -α的分泌和IL - 1β ,IL - 18mRNA表达。 结论　LBP多抗可能降低LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后炎症因子表达 ,减少炎症因子分泌 ,对LPS炎症反应起减敏作用     

核因子κB及其在失血性休克时对血液循环的影响

核因子κB（nuclear factor-klappa B,NF-κB）是一种具有转录激活功能的蛋白质，正常情况下，以非活化形式存在于细胞质中，当其接受特定的信号刺激后，转位进入细胞核，启动多种基因的转录，失血性休克时，可通过活性氧、内毒素（LPS）、TNF－α和IL－1β激活NF－κB，从而启动TNF－α、IL－1β、多种趋化因子、IL－8、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）等炎性酶，细胞间粘附分子1（ICAM－1）等黏附分子和E选择素（E－sel）等多种蛋白因子的基因转录，通过这些蛋白因子及二级炎性介质的作用，影响血液循环的各个环节。     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

细胞因子活性与小儿肺炎关系的探讨

目的：探讨小儿肺炎的发病及病情变化与细胞因子活性的关系。方法：采用化学发光酶免疫分析法检测47例肺炎患儿（其中单纯性肺炎40例,重症肺炎7例）及40例正常健康儿童血清白细胞介素1β（interleukin1β,IL－1β）、白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNFα）的水平。结果：入院第1天肺炎患儿血清IL－8、TNFα含量高于正常健康儿童（P＜0．01）,重症肺炎组血清IL－8含量高于单纯性肺炎组（P＜0．01）。治疗过程中,单纯性肺炎患儿随病情的减轻IL－8、TNFα含量逐渐下降（P＜0．01）;而重症肺炎患儿则随病情的加重IL－1β、IL－8和TNFα含量明显升高,与治疗前比差异显著（P＜0．01）。结论：血清IL－1β、IL－8和TNFα水平的变化与肺炎患儿病情的严重程度有关;连续检测血清IL－1β、IL－8和TNFα水平对肺炎患儿病情及预后的估计有一定的价值。     

大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性与炎症因子表达的变化

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (lipopolysaccharide,LPS)重复刺激的耐受性与炎症因子IL -1β,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达变化 ,研究二者之间的联系。 方法　将从 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,随机等分为正常对照组 (A) ,LPS单次刺激组 (B)和LPS二次重复刺激组 (C)。运用ELISA和RT -PCR方法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF -α及IL - 1β ,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达的变化。 结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α分泌和IL - 1β ,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达A组分别为 :(0 . 4 5± 0. 0 1) ,(0 . 91±0 . 0 5 ) ,(0 6 0± 0 . 0 7) ,(0 . 80± 0. 0 6 ) ,(0 . 75± 0. 0 5 ) μg/L;B组分别为 :(0 .76± 0 . 0 3) ,(1 .4 2± 0 . 11) ,(1. 2 3± 0. 0 8) ,(1 .77± 0 . 15 ) ,(1 .2 2± 0 . 12 ) μg/L,B组与A组比较显著增加 (P <0 .0 1) ;C组分别为 :(0 .4 9± 0 . 0 5 ) ,(0 . 84.± 0 0 6 ) ,(0 . 70± 0 . 0 5 ) ,(0 . 95± 0 .16 ) ,(0 . 87± 0. 0 5 ) μg/L,C组与B组比较 ,明显减少 (P <0 . 0 5 ,或 <0. 0 1)。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与IL - 1β,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达下降相关     

丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

目的 探讨脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的协同调节作用及其分子机制。方法 用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264．7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法研究LPS诱导的TNF－α基因转录的分子机制。结果 LPS刺激RAW264．7细胞可引起细胞外信号调节激酶1（ERK1）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和p38MAPK的一过性激活,用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW264．7均可不同程度地诱导TNF－α启动子转录活性;而且,这些MAPK通路激活诱导的TNF－α启动子转录活性表现出明显的协同效应;三种MPAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF－α启动子转录激活的抑制效应;RT－PCR的结果证实,ERK、JNK和p38MAPK的特异性抑制剂对TNF－αmRNA表达具有不同程度的抑制作用。结论 LPS刺激引起的TNF－α启动子转录活性增加,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF－α基因表达的调控。     

腹膜炎幼龄大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF、IL—1的变化

目的：观察幼龄大鼠腹腔感染性炎症后肺泡巨噬细胞TNF、IL－1的分泌变化。方法：健康6周龄Wistar大鼠，随机分成对照组（18例）和模型组（22例）。分离和培养大鼠肺巨噬细胞，收集培养上清液，测定细胞 因子活性。结果：模型组肺泡巨噬细胞分泌IL－1、TNF的水平显高于对照组（P＜0．001）。结论：腹腔感染导致肺损伤的过程中定居于肺内的巨噬细胞激活，在局部分泌IL－1和TNF。     

慢性阻塞性肺病急性期IL－1活性变化

通过支气管肺泡灌洗术（ＥＡＬ）获取肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）．用大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导及胸腺细胞增殖反应法，检测２８例慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）患者ＰＡＭ释放白细胞介素１（ＩＬ－１）活性，并与１２例健康非吸烟者对照。结果，经ＬＰＳ刺激和未经刺激ＣＯＰＤ组的ＰＡＭ产生ＩＬ－１活性均明显高于对照组，ＣＯＰＤ组中，经ＬＰＳ刺激后ＰＡＭ产生ＩＬ－１活性，肺心病组＞肺气肿组＞慢支组。提示，ＩＬ－１在ＣＯＰＤ的发生和发展中起重要作用。     

白藜芦醇对小鼠肺泡巨噬细胞释放IL-8的影响

目的:观察白黎芦醇对小鼠肺泡巨噬细胞释放细胞因子IL-8的影响,探讨白黎芦醇对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用。方法:经支气管肺泡灌洗获得肺泡巨噬细胞并进行培养,在内毒素(LPS)刺激同时加入0μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,150μg/ml的白黎芦醇,12h后提取上清液,应用EL ISA法测定上清液中IL-8含量。结果:应用白黎芦醇后,上清液中IL-8含量分别为1639±228ng/L,1072±85ng/L,1024±132ng/L,明显低于只有内毒素刺激组2667±324ng/L(P<0.01)。结论:白黎芦醇对炎性细胞因子IL-8释放具有明显抑制作用。     

特异性抑制转化生长因子β激活激酶1活性对妊娠期糖尿病孕妇外周血单核细胞炎症通路的影响

目的  探讨特异性抑制转化生长因子β激活激酶1（TAK1）活性的变化对妊娠期糖尿病（GDM）孕妇外周血单核细胞炎症通路的影响。方法  选取GDM孕妇及正常孕妇各30例,采集外周静脉血,分离单核细胞和血浆。依据细胞加药组别的不同,分为LPS刺激组（L组）、脂多糖组（LPS组）、TAK1抑制剂组（LT组）、TAK1抑制剂组（T组）及空白对照组（W组）,培养、加药后Western blot检测TAK1及核转录因子-κB（NF-κB）蛋白的表达量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中LPS浓度及各组炎症因子[白介素-1（IL-1）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]水平,比较各组结果的差异,探讨TAK1的作用。结果  GDM孕妇与正常孕妇比较,血浆LPS浓度升高;TAK1及NF-κB蛋白表达量增加,炎症因子（IL-1、IL-10、TNF-α）水平升高,差异有统计学意义（P <0.05）。各小组间比较,L组相较于其他组的TAK1、NF-κB蛋白表达量增加,炎症因子（IL-1、IL-10、TNF-α）表达水平升高,差异有统计学意义（P <0.05）;正常孕妇中,LT组、T组、W组NF-κB蛋白表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）,LT组、T组未检测到TAK1明显表达,可检测到W组少量表达,LT组相对于T组,TNF-α、IL-1、IL-10表达水平升高（P <0.05）,LT组、T组与W组上清炎症因子表达水平比较,差异无统计学意义（P >0.05）;GDM孕妇中,LT组、T组、W组TAK1及NF-κB蛋白表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）,LT组相对于T组,TNF-α、IL-1、IL-10表达水平升高（P <0.05）,Pearson相关性分析发现,TAK1、NF-κB蛋白表达量与炎症因子（IL-1、IL-10、TNF-α）水平呈正相关（P <0.05）。结论  TAK1可能参与GDM孕妇外周血单核细胞炎症通路的形成,抑制TAK1的活性,可以下调通路下游关键介质NF-κB及炎症因子的表达。

     

白细胞介素-9在慢性阻塞性肺病发病中的作用

目的:探讨白细胞介素-9(IL-9)在慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)气道炎症中的作用.方法:分别对30例COPD稳定期患者(A组)、31例哮喘缓解期患者(B组)、15例正常对照者(C组)进行诱导痰检查,用夹心酶联免疫吸附法测定诱导痰上清液IL-9、IL-5、IL-8浓度;采用免疫组织化学SP法染色及图象分析技术测定IL-9阳性细胞百分数及含量.结果:A、B组IL-9浓度与C组差异有显著性.IL-9阳性细胞主要分布在巨噬细胞的胞浆内,A、B组IL-9阳性细胞百分数与C组差异有显著性(x2=20.821、19.908,P均<0.001).A组中性粒细胞百分数、IL-8水平明显高于B、C组;A组IL-9与巨噬细胞呈正相关(r=0.407,P=0.039).结论:IL-9在COPD患者较正常人明显增高,且与气道内的巨噬细胞、IL-8水平有关,可做为COPD气道炎症的又一检测指标.     

核转录因子κB及其抑制基因在自体移植静脉中的表达

目的　研究核转录因子 κB (NF κB)及其抑制因子IκB基因在自体移植静脉中的表达 ,及其在内膜增生中的作用。方法　Wistar大鼠 80只 ,建立自体移植静脉模型 ,术后随机分为 6、2 4h ,3、7d ,2、4、6、8周等 8组 ,于相应时点取材 ,进行病理形态学研究 ,半定量逆转录PCR检测NF κBp6 5mRNA和IκBβmRNA表达的变化 ,原位杂交方法检测NF κBp6 5mRNA表达 ,联合应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测p6 5、IκBα和IκBβ的蛋白质表达。 结果　移植静脉术后 6h即出现p6 5mRNA和IκBβmRNA表达增强 ,基因表达值分别为 16 %± 4 %和 31%± 9% ,与正常静脉比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;p6 5mRNA表达 3～ 7d达高峰 ,术后 3、7d的表达值分别为 37%± 12 %和34%± 10 % ,IκBβmRNA表达则于术后 1～ 2周达到高峰 ,表达值分别为 5 3%± 17%和 4 9%± 10 % ,与其余各时点比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。p6 5蛋白质阳性表达 1周达高峰 32 %± 13% ,IκBα、IκBβ蛋白质术后 2周达高峰 ,阳性率分别为 35 %± 11%和 4 4 %± 13% (P <0 0 1)。IκBα、β蛋白质术后 6～ 2 4h表达量有所降低 ,为正常静脉的 1/3～ 1/2。结论　移植静脉中存在NF κB系统及其抑制因子IκB基因的活化。核转录因子κB可能     

肝X受体激动剂上调人肾小球内皮细胞血栓调节蛋白表达的机制和作用

目的  探讨肝X受体（LXR）激动剂T0901317上调人肾小球内皮细胞（HRGEC）血栓调节蛋白（TM）表达的机制和作用。方法  Western blot检测25 mmol高糖和2μmol T0901317刺激后的HRGEC上IκBα、磷酸化IκBα、核转录因子-κB（NF-κB）p65、磷酸化NF-κB p65表达;免疫共沉淀法检测LXR与P300之间有无结合;重组腺病毒AdTMshRNA转染HRGEC,观察其对高糖下HRGEC分泌炎症介质的影响。结果 T0901317能显著降低高糖刺激后的IκBα和NF-κB p65磷酸化（P <0.05）,LXR-α沉默后NF-κB活性增强;2μmol T0901317刺激HRGEC 24 h后以Co-IP检测LXR与P300的表达上调;T0901317明显抑制高糖刺激下的HRGEC培养上清中TNF-α、IL-1β浓度（P <0.05）,AdTMshRNA转染HRGEC后,有或无T0901317刺激,HRGEC培养上清中TNF-α、IL-1β浓度与高糖组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论  LXR可能通过与P300发生相互作用阻断了NF-κB与P300之间的竞争性结合而提高TM的表达并抑制炎症介质的分泌。

     

Entamoeba histolytica modulates TNF-alpha, IL-1 alpha/beta and c-fos gene expression in macrophages.

E. histolytica infections induce a state of transient suppression of cell-mediated immunity. As macrophages are involved in host defense in amebiasis, we determined whether soluble amebic lysates (Eh) can modulate TNF-alpha, IL-1 alpha/beta and c-fos gene expression in naive bone marrow-derived macrophages (BM delta). By Northern analysis, the RNA production of these genes after 0, 0.5, 1 and 3 h exposure to Eh was determined and compared to lipopolysaccharide (LPS) stimulation. In response to Eh, TNF-alpha mRNA was increased two fold while IL-1 alpha/beta RNA levels were increased 6- and 19-fold, respectively. Pretreatment of BM delta with H7, a PKC inhibitor, abrogated Eh induced TNF-delta gene expression and reduced IL-1 alpha/beta gene expression 3.5- to 4-fold over control levels. We conclude that E. histolytica stimulates BM delta to induce TNF-alpha gene expression through a PKC-dependent pathway and IL-1 alpha/beta gene expression partially through PKC and another yet undetermined pathway(s).     

PGRN缺失型腹膜巨噬细胞对细菌脂多糖的体外炎症应答

目的   观察颗粒蛋白前体(PGRN)对细菌脂多糖(LPS)诱导腹膜巨噬细胞(PM)炎症应答的影响。方法   诱导提取野生型(WT)小鼠及PGRN基因敲除小鼠(KO)腹膜细胞(PEC),观察PEC数目、形态和类型;流式细胞术检测PEC的巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80。LPS分别处理WT或KO小鼠PM,LPS、重组PGRN或LPS加重组PGRN分别处理WT小鼠PM,培养24h后收集细胞上清,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素12(IL-12),Griess法检测一氧化氮(NO)。 结果   PGRN缺失对小鼠PEC的数目、成分及巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80的表达无明显影响;与WT组相比,LPS诱导PGRN KO来源的PM分泌较高水平的TNF-α、IL-1β、IL-12及NO。外源给予重组PGRN后,LPS诱导WT组PM分泌TNF-α、IL-1β、IL-12及NO的水平降低。结论   PGRN缺失使PM对LPS的刺激产生了更强的炎症反应;外源性给予重组PGRN则可抑制LPS诱导PM 释放前炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-12及炎症介质NO。     

重组人肠三叶因子减轻烧伤后肠源性高代谢的实验研究

目的探讨重组人肠三叶因子(rhITF)对烧伤后肠源性高代谢的作用及期机制。方法采用30%体表面积Ⅲ度烧伤小鼠模型,将72只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(C组,8只)、烧伤对照组(B组,每个时相点8只)和rhITF治疗组(ITF组,每个时相点8只)。观察伤前及烧伤后1、3、5、7d小鼠静息能量代谢率(REE)的变化,同时检测伤后血浆内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-6(IL-6)的含量。结果两组烧伤小鼠的REE、TNFα、LPS、IL-1和IL-6水平均明显高于烧伤前水平(P<0.05),两组比较,ITF组小鼠REE明显低于B组,平均降幅达25%左右。与之对应,血浆LPS、TNF-α、IL-1和IL-6含量也明显低于B组(P<0.05)。结论 rhITF能减轻烧伤后肠道受损程度,降低烧伤小鼠血中炎症介质水平,从而减轻烧伤后肠源性高代谢。     

冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变.结果 冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10 μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少.结论 冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关.