“益坤宁”对自然老化大鼠性激素的调节及卵巢修复的研究

目的：研究中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢功能和结构的影响。方法：选用11～13月龄雌性围绝经期wistar大鼠32只。随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组。另选青年大鼠10只，月龄4个月，作为青年对照组，采用血清性激素分泌水平、血管内皮生长因子（VEGF）、颗粒细胞调亡及细胞形态等指标来观察益坤宁对卵巢结构和功能的影响。结果：益坤宁组与模型组比较，各项指标差异均有显著性或极显著性（P〈0．05或P〈0．01）。结论：研究证实益坤宁可升高围绝经期大鼠血清E2、P水平，降低血清FSH、LH水平；对围绝经期大鼠卵巢VEGF有促进作用；对卵巢颗粒细胞凋亡有抑制作用，提示益坤宁可以阻止卵泡闭锁，从而达到预防和延缓卵巢衰老的作用机制。     

中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:采用自然老化法建立围绝经期大鼠模型。选择处于围绝经期的雌性Wistar大鼠(12~14月龄)30只,随机分为老年对照组、西药对照组和中药实验组,分别以生理盐水、利维爱和益坤宁灌胃4周;另取5月龄大鼠10只作为青年对照组,生理盐水灌胃4周。通过免疫组化观察大鼠卵巢VEGF蛋白质的表达确切部位;Western Blot定量检测大鼠卵巢VEGF蛋白质的表达;RT-PCR检测各组大鼠卵巢VEGF mRNA的表达。结果:VEGF蛋白主要表达于卵巢的黄体细胞中,老年对照组大鼠卵巢的VEGF表达明显高于青年组,中药实验组大鼠卵巢VEGF表达明显下降;青年对照组、中药实验组和西药对照组VEGF164和VEGF120的mRNA表达量均低于老年对照组(P<0.05),此结果与VEGF蛋白表达的结果相一致。结论:益坤宁能够下调围绝经期大鼠卵巢VEGF mRNA及蛋白的表达,这可能是其治疗围绝经期综合征的机制之一。     

"坤宁安"对围绝经期大鼠卵巢功能的影响

目的:研究中药坤宁安对卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:选用13～16月龄雌性wistar大鼠,经阴道脱落细胞涂片检查,呈现出无动情周期确定为围绝经期鼠.随机将其分为模型组、坤宁安高、低剂量组、西药对照组、中药对照组.另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,观察坤宁安对caspase-3在卵巢颗粒细胞表达的影响.结果:Casepase-3蛋白在坤宁安高、低剂量组均呈弱表达,与围绝经期组相比,差异分别呈极显著性和显著性(P＜0.01;P＜0.05).结论:本研究在以往实验基础上进一步证实坤宁安对卵巢颗粒细胞凋亡有抑制作用,证实在人卵巢颗粒细胞中也有Caspase-3的蛋白表达,从而为卵巢颗粒细胞凋亡的细胞内机制与Caspase凋亡途径有关提供了证明.     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶的调节作用和血清雌二醇水平的影响

目的：观察中药益坤宁方对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶（AromatasecytochromeP450,P#50arom）的调节作用。方法：建立自然衰老的大鼠模型,将模型分为青年对照组、模型组、益坤宁组和西药对照组4组,益坤宁组和西药对照组分别给予中药益坤宁汤剂和西药利维爱混悬液治疗。4周后,采用免疫组织化学及WesternBlot方法检测大鼠卵巢P450arom蛋白表达情况;采用放射免疫法测定大鼠空腹血清雌二醇（E2）水平。结果：P450arom蛋白在益坤宁组大鼠卵巢上均多呈阳性表达,与模型组比较均具有显著性差异（P〈0．01）;与西药对照组比较差异不具有统计学意义（P〉0．05）。益坤宁组大鼠空腹血清雌二醇（E2）水平升高,与模型组比较差异显著（P〈0．01）,与西药对照组比较差异不具统计学意义（P〉0．05）,但其E2水平仍然低于青年对照组,差异具有显著性（P〈0．05）。结论：中药益坤宁可促进围绝经期大鼠卵巢P450arom蛋白的表达。中药益坤宁可提高大鼠血清雌二醇（E2）的水平。中药益坤宁可通过促进卵巢P450arom的表达而利于雌激素的生成。     

更年汤对围绝经期模型大鼠E_2、LH、FSH、GnRH的干预作用研究

目的:通过构建围绝经期大鼠模型,观察更年汤对模型大鼠内分泌相关指标的影响,探讨更年汤延缓卵巢衰老的作用机制。方法:将SD雌性大鼠随机分为更年汤组、教材方组、模型组、青年组、老年组各10只。前三组采用自然老化的围绝经期大鼠模型,青年和老年组为正常青年、老年模型。分别灌胃更年汤、教材方和生理盐水15日,于末次给药24h后麻醉,颈动脉取血5mL,剖取子宫、卵巢,观察血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)、促性腺激素释放激素(GnRH)和子宫、卵巢指数。结果:与模型组比较,治疗组、对照组E2含量均升高,治疗组有非常显著性差异(P<0.01);治疗组、对照组均能显著降低血清LH含量(P<0.01),组间比较有非常显著性差异(P<0.01);治疗组、对照组FSH含量均显著降低(P<0.01)组间比较无显著性差异(P>0.05);治疗组能显著降低血清GnRH含量(P<0.01),组间比较有非常显著性差异(P<0.01);治疗组、对照组均使卵巢、子宫指数升高,有非常显著性差异(P<0.01),卵巢组间比较差异无显著性差异(P>0.05),子宫组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论:更年汤可明显提高模型大鼠E2水平,升高大鼠卵巢、子宫指数,降低血清FSH、LH、GnRH水平,从而达到延缓卵巢功能衰退的作用。     

益肾助孕颗粒对围绝经期大鼠卵巢VEGF表达的影响

目的:观察中药益肾助孕颗粒对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:通过自然老化法构建围绝经期大鼠模型,选择处于围绝经期的大鼠(12 ～ 14月龄)40只,随机分为老年大鼠对照组、益肾助孕颗粒高、中、低剂量组.每组10只,分别用生理盐水2 mL灌胃、益肾助孕颗粒按等效剂量高剂量10 g·kg-1 ·d-1,中剂量5 g·kg-1 ·d-1,低剂量为2.5 g·kg-1 ·d-1,灌胃0.2 mL·g-1·d-1灌胃4周;另取5月龄大鼠10只作为青年大鼠对照组,生理盐水2 mL灌胃4周.免疫印迹法定量检测各组大鼠卵巢VEGF蛋白质的表达;RT-PCR检测各组大鼠卵巢VEGF mRNA的表达.结果:治疗前,与青年大鼠组VEGF蛋白、VEGF mRNA比较,老年对照组和研究组大鼠卵巢的VEGF蛋白、VEGF mRNA都表达明显高于青年组,差异显著,有统计学意义(P＜0.05),用药4周后,与老年对照组大鼠卵巢VEGF蛋白、VEGF mRNA表达比,研究组大鼠卵巢VEGF蛋白、VEGF mRNA表达明显下降,差异显著,有统计学意义(P＜0.05),并存在剂量依赖性.结论:益肾助孕颗粒能够下调围绝经期大鼠卵巢VEGF蛋白、VEGF mRNA的表达,可能通过调节VEGF治疗围绝经期综合征.     

中药益坤宁方调节围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶mRNA的实验研究

目的：探讨细胞色素P450芳香化酶（aromatase cytochrome P450,P450arom）mRNA在围绝经期自然老化大鼠卵巢上的表达及意义。方法：选用11-13月龄雌性围绝经期Wistar大鼠32只。随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组。另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,用原位杂交方法检测大鼠卵巢上的P450arom mRNA的表达。结果：P450arom mRNA在模型组卵巢上呈阴性或弱阳性表达,在青年组呈强阳性表达,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。而在益坤宁组及西药对照组均呈阳性表达,与模型组比较差异均具有统计学意义（P〈0.01）。结论：中药益坤宁可促进大鼠卵巢P450arom mRNA的表达,有利于雌激素的合成。     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的从细胞凋亡角度研究针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法将围绝经期大鼠随机分为围绝经期组、针刺组和药物组,并设青年对照组。围绝经期组大鼠不治疗,作为空白对照;针刺组大鼠针刺肾俞、足三里、三阴交治疗;药物组大鼠采用更年安药物治疗;青年对照组大鼠不治疗。应用原位杂交法检测卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达,并进行图像分析。结果与青年对照组比较,围绝经期组大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.01);针刺治疗后围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显提高(P<0.01)。结论针刺能够下调围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达。     

淫羊藿总黄酮和薯蓣皂苷元联合用药对自然围绝经期大鼠影响的实验研究

目的:观察中药有效组分淫羊藿总黄酮、薯蓣皂苷元对围绝经期大鼠内分泌激素水平、卵巢病变等影响。方法:自然衰老围绝经期雌性SD大鼠30只,随机分为3组,各10只,分别是中药低、高剂量组,老年模型组,另设6月龄左右雌性SD大鼠10只为青年对照组。中药组给予中药复方有效成分8周,观察阴道涂片变化,检测大鼠血清雌二醇(E_2)、促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)值,免疫蛋白印迹法检测卵巢凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白含量变化。结果:与老年模型组比较,青年对照组阴道涂片中有核上皮细胞百分率、E_2水平明显较高,LH、FSH、Caspase-3、VEGF的水平明显较低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);中药高剂量组阴道涂片中有核上皮细胞百分率、E_2、VEGF水平明显升高,Caspase-3的水平明显降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);中药低剂量组阴道涂片中有核上皮细胞百分率明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:淫羊藿总黄酮、薯蓣皂苷元合用能升高血清E_2和卵巢VEGF水平,降低卵巢Caspase-3的表达,从而延缓大鼠围绝经期的进程。     

更年宁神汤对围绝经大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的影响

目的探讨更年宁神汤对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的影响。方法选用雌性wister大鼠40只,月龄13~15月,随机分为4组:模型组、更年宁神汤高剂量组、更年宁神汤低剂量组、西药利维爱组,每组各10只。另选5月龄、体质量(180±20)g的雌性wister大鼠10只作为青年对照组。中药高剂量组灌服更年宁神汤5.68 g/(kg.d),中药低剂量组更年宁神汤1.42 g/(kg.d),围绝经期模型组灌服等量生理盐水,西药对照组每日灌服3mL西药利维爱溶液0.26 mg/(kg.d),连续治疗4周。采用免疫组织化学法及Westernblot方法检验各组大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的表达。结果模型组大鼠卵巢中caspase-3蛋白表达高于青年对照组,治疗组caspase-3蛋白表达水平较模型组降低,更年宁神汤高剂量组、利维爱组大鼠卵巢中caspase-3蛋白表达低于模型组差异显著;中药高剂量组与中药低剂量组比较有统计学意义;中药高剂量组与利维爱组比较比较,差异无统计学意义。结论更年宁神汤治疗围绝经期综合征的机制可能是通过抑制卵巢颗粒细胞分泌caspase-3凋亡因子,延缓卵巢衰老,疗效与利维爱相当。     

逆灸“关元”穴对大鼠更年期血浆、子宫一氧化氮合酶的影响

目的:通过生物化学途径观察逆灸对大鼠更年期机体的影响。方法:选用SD雌性大鼠80只,其中4月龄10只,为年轻正常组;10月龄70只,根据阴道细胞涂片按动情周期随机分为7组,每组10只。这7组分别为逆灸12月龄组、逆灸14月龄组、逆灸16月龄组、12月龄对照组、14月龄对照组、16月龄对照组及10月龄对照组。逆灸组在10月龄时预以艾炷灸“关元”穴,每次1壮,每周2次,共灸8周。分别于12、14、16月龄时与同月龄对照组及年轻正常组、10月龄对照组一起取血浆、子宫,以硝酸还原酶法检测一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:①大鼠更年期血浆NOS活性的变化及逆灸“关元”穴对其影响:对照各组与年轻正常组比较,14月龄组NOS活性明显下降,P<0.01;逆灸各组与年轻正常组比较无显著性差异,P>0.05;逆灸14月龄组比同月龄对照组NOS活性增加,P<0.05。②大鼠更年期子宫NOS的变化及逆灸“关元”穴对其影响:对照各组与年轻正常组比较,14、16月龄组NOS活性明显降低,有非常显著性差异,P<0.01;逆灸各组与年轻正常组比较,14、16月龄组NOS活性降低,有显著性差异,P<0.05;逆灸16月龄组比16月龄对照组NOS明显升高,P<0.05。结论:逆灸能升高更年期大鼠血浆及子宫中NOS活性,其早期类似于预处理效应,中后期表现为明显的调节效应,类似预适应的延迟效应,体现了逆灸“关元”穴的保健作用。     

补肾活血、泻下及开窍活血方药对老龄大鼠脑缺血再灌注肝脏损伤的保护作用

将老龄大鼠分为老龄对照组,老龄模型组,尼莫地平组,益元活血丹大小剂量组,大黄组和血栓心脉宁组,观察大鼠全脑缺血30min,再灌注60min后肝脏形态和组织中TXB2,6-Keto-PGF1a,TNF含量,ATP酶活性及组织和血清中ALT活性的变化。结果表明：老龄模型组肝脏出现明显的病理和功能损伤,用药各组肝脏组织和功能损害具有不同程度减轻。     

交通心肾法对老龄雌性大鼠性激素水平的影响

目的：探讨交通心肾法中药对老龄雌性大鼠性激素水平的影响。方法选用15月龄雌性SD大鼠,将其分为空白组、中药治疗组、西药对照组和中药对照组,分别给予生理盐水、宁更丹、戊酸雌二醇和更年安灌胃,另选3月龄大鼠作为青年对照组。采用放射免疫法检测大鼠促卵泡刺激素（ follicle stimulating hormone,FSH）、促黄体生成素（ luteinizing hormone,LH）、雌二醇（ estradiol, E2）。结果与空白组比较,中药治疗组雌激素明显升高,有显著性差异（P〈0．05）,且与西药对照组结果类似。中药对照组雌激素水平略有升高,但与空白组相比无显著性差异。中药治疗组、西药对照组、中药对照组FSH均有降低,与空白组均有显著性差异（P〈0．05）,但是西药对照组下降更为显著。结论交通心肾法可以升高老龄雌性大鼠雌激素,降低FSH水平,可能是其治疗更年期综合征的作用机制之一。     

外用绞股蓝对自然衰老小鼠皮肤组织中CAT活性、MDA含量影响的实验研究

[目的]观察绞股蓝提取液对自然衰老小鼠皮肤组织中过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响,并研究不同的给药途径对自然衰老小鼠皮肤组织的改善作用。[方法]昆明种3月龄雌性小鼠10只,作为青年对照组(A);昆明种12月龄雌性小鼠40只,随机分为4组,每组10只:老年外用空白组(B)、老年外用阳性对照组(C)、老年外用绞股蓝组(D)、老年(外用+内服)绞股蓝组(E)。A、B组外涂赋型剂0.5g/t,C组外涂维生素E20mg/t,D组外涂绞股蓝霜剂0.5g/t,E组外涂绞股蓝霜剂(剂量同D组),同时灌胃绞股蓝提取液0.8mL/t。30天后以生化分析方法测定皮肤组织中CAT活性、MDA含量,并观察皮肤组织结构改变。[结果]与A组比较,B、C、D、E组小鼠皮肤组织CAT活性均明显降低(P<0.01),MDA含量明显增加(P﹤0.01);与B组比较,C、D、E组CAT活性提高(P﹤0.05),MDA含量降低(P﹤0.01);与D组相比,E组CAT活性明显提高(P﹤0.05),MDA含量明显降低(P﹤0.05)。[结论]绞股蓝提取液具有拮抗小鼠皮肤自然衰老的作用;外用配以灌胃绞股蓝提取液该种给药方式能更好的起到延缓自然衰老对小鼠皮肤的损害。     

调坤汤性激素样作用的实验研究

目的：探讨调坤汤对雌二醇（E2）、孕酮（P）等性激素调节的机理。方法：用同龄SD雌性大白鼠30只，随机分为空白对照组、高剂量给药组、低剂量给药组，每组10只，空白对照组不用任何药物，高剂量给药组每天给调坤汤煎液3ml含原生药9g，低剂量给药组每天给调坤汤煎液稀释液3ml含原生药6g，共给药10天（约2个生理周期），用药结束后采血样测性激素。结果：经检验，高剂量给药组、低剂量给药组的E2和P与空白对照组比较差异有显著性（P〈0．05、P〈0．01）。结论：调坤汤有升高血清E2和P的作用。     

仙灵骨葆对切除卵巢骨质疏松模型大鼠腰椎骨抗压生物力学性能的影响

为探讨仙灵骨葆对大鼠去卵巢骨质疏松模型松质骨生物力学性能的影响,将４０只１０月龄Ｗｉｓｔａｒ月龄Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,仙灵骨葆组和倍美力组,每组１０只,正常对照组做假手术,其余３组做卵巢切除术,术后３个月开始给药,连续用药满９０天,处死,取出第３腰椎,测定其骨量并进行压应力测试与分析。结果显示,仙灵骨葆能明显增加骨质疏松大鼠腰椎骨的整体骨量,改善其生物力学抗压性能。     

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的：通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法：取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果：治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。     

益骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究

目的 :运用中药血清药理学方法 ,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞 (OB)体外增殖的影响 ,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法 :雌性 12月龄SD大鼠 80只 ,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量 (11 6g/kg)、中剂量 (34 8g/kg)、高剂量 (10 4 4g/kg)组 ,每日灌胃一次 ,连续 12天 ,分别在灌胃后的 0 5h、1h、1 5h、2h采血 ,分离血清 ,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB ,MTT法检测细胞增殖情况。结果 :末次灌胃后 1 5h采血组的吸收度 (A)值明显高于各组其它时间 (P <0 0 5 ) ;不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用 ,其中以高剂量组的稀释比为 2 5 %的血清浓度最佳。结论 :益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用 ;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量 9倍连续 12天灌胃、末次灌胃后 1 5h采血 ,血清添加浓度以 2 5 %为宜。     

祛异康对子宫内膜异位症大鼠腹腔液IL-2、IL-6的影响

目的:观察中药祛异康对子宫内膜异位症大鼠腹腔液IL-2、IL-6的影响,探讨其治疗子宫内膜异位症的机理。方法:将40只健康雌性SD大鼠随机分为4组:A组只行开关腹,B、C、D组均行内膜移植,造模完成后,A、B组以生理盐水灌胃,C、D组分别给予中药祛异康、西药丹那唑灌胃,4周后开腹收集腹腔液测定IL-2I、L-6表达水平。结果:祛异康可以降低异位症大鼠腹腔液中IL-2及IL-6浓度(P<0.05;P<0.01)。结论:祛异康能明显改善腹腔微环境,其治疗子宫内膜异位症的作用机理可能是通过改变腹腔液微环境,降低细胞因子IL-2、IL-6的水平,从而抑制异位内膜生长来实现的。