天麻总DNA提取的研究

采用CTAB、SDS两种提取法及液氮、玻璃砂两种研磨方法提取干天麻总DNA，并进行了比较，同时讨论了相关问题，为解决如何从天麻干品中快速提取总DNA进行了探索。     

组织培养法保存新鲜天麻样品对天麻块茎总DNA提取效果的影响

目的以天麻块茎为材料,研究组织培养法用于保存新鲜天麻样品对天麻块茎DNA提取的纯度和浓度的影响。方法将新鲜天麻块茎切割成为1cm3形状,接种于MS培养基中,在温度T=21℃的条件下暗培养。分别在培养10d,20d,30d,40d,50d和60d的时候取出样品,再用改良的CTAB法提取其总DNA,测定DNA浓度及纯度。结果组织培养法保存10d,20d,30d后的天麻样品DNA提取,获得的DNA浓度和纯度都较为理想,而保存40d以后提取的样品DNA虽纯度不理想,但浓度较高。结论经过组织培养法保存的天麻样品,能够长时间的保持一定的生长状态,同时也能提取出浓度较高的基因组DNA。     

药材天麻ITS2 特异性引物的筛选

目的：药材天麻由于隶属于单子叶植物兰科天麻属,天麻中含有大量多糖、蛋白质以及大量次生代谢物质,使其提取的DNA 质量不高,影响后续的PCR 扩增。且ITS2 通用引物在单子叶植物部分物种通用性很差。本研究通过对DNA 提取过程、PCR 扩增过程进行优化,设计出一对用于鉴别天麻药材的ITS2 引物,为中药材天麻的鉴定提供一种新方法。方法：以通用ITS2 引物扩增出的两条序列为研究对象,经Primer Premier 5.0 设计出3 对特异性引物,通过对22 份样品进行研究,筛选出一条高特异性的ITS2引物。结果：在54益的退火温度下,TM2F-2R 对天麻的鉴定效率高达90.9%。结论：TM2F-2R 可作为天麻ITS2 序列的特异性引物,为天麻的分子鉴定提供了一套准确、稳定的鉴定方法。     

均匀设计法优选天麻中天麻苷和天麻总苷的提取工艺

目的:研究天麻中有效部位天麻总苷和活性成分天麻苷的最佳提取工艺。方法:用均匀设计实验对天麻总苷和天麻苷的提取工艺进行优选,选用U9(96)进行均匀设计实验,以出膏率及天麻总苷和天麻苷的提取率为指标,考察乙醇浓度、液固比、提取时间及提取次数对天麻总苷和天麻苷提取的影响。结果:最佳的工艺条件为:加10%乙醇8倍量,提取3次,每次3 h。结论:均匀设计法是优化多因素与多水平实验的有利工具。     

贵州野生与栽培天麻种质资源的SSR分析

目的 对贵州省野生和栽培共24个天麻基因组DNA的遗传多态性进行分析,构建其SSR指纹图谱.方法 采用改良的CTAB法提取天麻基因组DNA,采用NTSYSpc软件进行UPGMA聚类分析和遗传相似度分析.结果 改良的CTAB法能够获得纯度和浓度较高的天麻基因组DNA,PCR扩增获得较清晰的SSR指纹图谱,UPGMA聚类可...     

市售鹿茸片基因组DNA提取方法的比较

目的建立一种稳定高效获得鹿茸片DNA基因组的提取方法,为相似形态中药总DNA提取奠定基础,便于应用分子生物学进行药材鉴定。方法将乌鲁木齐市售鹿茸饮片选取3份为材料,通过两种试剂盒和CTAB三种不同方法提取,提取的DNA再进行琼脂糖凝胶电泳法、紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。结果 3种方法均可以从市售鹿茸饮片中提取到基因组DNA,但天根组织提取试剂盒得到的基因组DNA的纯度和浓度最高,提取效果最佳;CTAB法提取效果相对最差。结论天根组织提取试剂盒基因组DNA提取方法操作简便、稳定、高效,提取的DNA效果较好,纯度和浓度检查均合格。     

广山药总DNA提取方法的比较

目的:建立一种稳定高效获得广山药总DNA基因组的提取方法,为同科属及同类植物总DNA提取提供参考依据,便于应用分子生物学进行鉴定。方法:通过采用试剂盒法、改良CTAB法和SDS法对广山药的新鲜叶子、新鲜块茎、干燥块茎和新鲜嫩茎进行DNA提取,在进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法进行纯度检测。结果:3种方法均可以从不同的提取部位中提取到基因组DNA,但通过天根新型植物DNA提取试剂盒提取到的DNA纯度最高,CTAB法次之,SDS法最差。结论:利用市售总DNA提取试剂盒提取DNA,方法简便高效,所提DNA效果好。     

天麻抗氧化成分的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

目的通过响应面法优化天麻抗氧化成分回流提取工艺,并研究其体外抗氧化活性。方法选择料液比、提取温度、提取时间为考察因素,羟基自由基清除率为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优化提取工艺。通过羟基自由基清除率和DNA氧化损伤保护作用评价天麻体外抗氧化活性。结果天麻抗氧化成分回流提取最佳工艺为:料液比1∶55 (g/ml),提取时间66 min,提取温度65 ℃。羟基自由基清除能力较好,IC_(50)值为13.018 mg/ml。浓度为0.15 g/ml时具有最佳的DNA氧化损伤保护作用。结论该方法稳定可行,可用于提取天麻抗氧化成分,并且该成分具有一定的抗氧化活性。     

中草药干品和鲜品基因组总DNA提取及质量比较研究

目的 探讨中草药干品和鲜品总DNA的提取方法,并比较干、鲜品总DNA质量之间的差别,为后续研究奠定基础.方法 分别采用SDS法和改良的CTAB法提取6种中草药干品和鲜品总DNA,并对其进行核酸含量测定、电泳检测和酶切反应检测. 结果改良CTAB法提取的DNA质量要高于SDS法,在干品和鲜品样品间,干品提取的DNA质量要高于鲜品.利用CTAB法提取鲜品和干品的各6种DNA样品,进行酶切反应得到了清晰的酶切条带.结论 改良的CTAB法能够获得高质量的中草药总DNA,且该方法得到的干品DNA比鲜品DNA质量更高,酶切验证二者都可以用于进一步的实验分析.     

利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的研究

目的研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化,分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分天麻素。方法采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,通过紫外扫描法、PCR扩增筛选转化植株,对转化植株进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)蛋白分析,通过TLC法检测天麻素。结果(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220 nm有明显吸收峰。(2)5株经PCR扩增出野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因。(3)转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差异,并且在转基因马铃薯中有一条与GAFP相同的条带。而正常马铃薯中无此条带。(4)通过薄层色谱法检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效药用成分天麻素。结论采用浸苗法进行外源总DNA导入是可行的。     

广地龙药材DNA提取方法的优选

目的建立一种适合于广地龙干燥药材DNA的提取方法。方法参考陈旧皮张标本的DNA提取方法,并对样品预处理、酶解条件、沉淀时间等对影响DNA质量的重要因素,进行了筛选和优化。结果按优选的方法提取的总DNA的含量和纯度完全符合引物扩增分析的要求。结论该提取方法不仅解决了地龙类动物干燥药材DNA提取的难题,而且操作简便实用、DNA提取效率高,所得DNA的质量也满足后期DNA分子鉴定。     

微波真空干燥对天麻有效成分含量及提取效率的影响

目的:考察天麻经过微波真空干燥后,对其有效成分在饮片中的含量和饮片提取过程中转移率的影响。方法:鲜天麻经蒸透切片后分别进行烘箱干燥、真空干燥、冷冻干燥、微波真空干燥,用HPLC法测定不同方法干燥所得饮片有效成分天麻素和对羟基苯甲醇总含量,以及饮片提取过程中不同提取时间的转移率。结果:比较不同干燥方法所得天麻饮片中的含量和饮片提取过程中有效成分转移率曲线图,微波真空干燥天麻饮片中的有效成分含量更高,饮片提取效率更高。结论:将微波真空干燥技术应用到天麻的干燥中,有利于提高天麻饮片中有效成分的含量及饮片提取过程中的提取效率,更加省时节能。     

海风藤、山药的RAPD鉴别研究

目的 以确定海风藤、山蒟的DNA扩增谱带的相似性,用RAPD技术对两种药材进行分子水平的鉴定.方法 用植物基因组DNA提取试剂盒提取海风藤、山蒟药材的总DNA,以随机引物进行随机扩增.结果 从20条随机引物中筛选出13条有效引物能够证明二者扩增谱带的相似性.结论 RAPD技术能快速、有效地从DNA水平上确定海风藤、山蒟的相似之处.     

海风藤、山蒟的RAPD鉴别研究

目的确定海风藤、山蒟的DNA扩增谱带的相似性,用RAPD技术对两种药材进行分子水平的鉴定。方法用植物基因组DNA提取试剂盒提取海风藤、山蒟药材的总DNA,以随机引物进行随机扩增。结果从20条随机引物中筛选出13条有效引物能够证明二者扩增谱带的相似性。结论RAPD技术能快速、有效地从DNA水平上确定海风藤、山蒟的相似之处。     

天麻药酒渗漉法与冷浸法工艺比较

运用渗漉法与冷浸法提取天麻药酒中的有效成分天麻素 ,就两种方式对提取物之提取量 ,薄层色谱进行研究 ,结果显示动态提取的渗漉法提取效率、产品质量与生产效益等方面明显优于使用静态提取冷浸法工艺     

复方天麻咀嚼片提取工艺研究

复方天麻咀嚼片由<中华人民共和国卫生部药品标准>收载复方天麻颗粒剂型改进而来,具健脑安神功效,用于失眠健忘,神经衰弱,以及高血压引起的头昏头痛.为进一步提高制剂制备工艺稳定性及产品质量,本实验以浸膏收得率、天麻素及麦冬总皂苷含量为评价指标对复方天麻咀嚼片提取工艺进行了研究.     

不同产地及变型天麻有效成分差异性分析

目的分析不同产地及变型天麻有效成分差异性。方法利用HPLC法测定不同产区天麻中8种天麻素类成分,比较其含有量差异,并进行差异性、相关性、主成分、因子载荷分析。结果天麻有效成分含有量之间存在一定的相关性,可能有相互转化或累积代谢途径的相互影响。不同产区样品之间有效成分及总天麻素含有量具有一定差异,对羟基苯甲醇、腺苷对绿天麻分类分别具有较大正、负贡献,提取的特征成分可在主成分空间内有效识别不同产区样品。结论天麻有效成分及总天麻素可用于不同品种的差异性识别,尤其是巴利森苷E、巴利森苷A,可作为乌天麻与其他天麻品种差异性分析的标志物。另外,对羟基苯甲醇、腺苷可作为绿天麻识别的模式物质。     

天麻多糖水提及脱蛋白工艺优化

目的:摸索天麻多糖水提和脱蛋白工艺条件,为天麻多糖提取纯化的工业化提供理论依据。方法:采用正交实验研究了温度、物料比、时间对天麻多糖(GPS)提取工艺的影响;对比了两种不同的脱蛋白方法(Sevag法和酶-Sevag法)在天麻多糖纯化工艺中的应用。结果:水提最佳工艺为物料比1∶40,浸提温度120℃,浸提时间3 h。酶-Sevag法相对于Sevag法除蛋白效果好,且多糖得率高。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

拉萨蒲公英基因组DNA不同提取方法的比较及PCR检测

目的比较不同研磨方式、不同提取方法提取的拉萨蒲公英叶片基因组DNA的效果。方法分别用液氮和提取缓冲液两种研磨方式对拉萨蒲公英叶片进行研磨处理,用5种方法提取拉萨蒲公英叶片基因组DNA,分别用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的质量。结果用提取液研磨可以充分除去色素、酚类、蛋白质等物质,提取的DNA纯度高,降解少,用液氮研磨提取的DNA杂质多,降解严重;高盐低p H法提取的DNA的A260/A280接近1.8,A260/A230为1.93,Ezup柱式试剂盒法提取的DNA的A260/A280为2.01,A260/A230大于2.0,说明这两种方法提取的DNA的纯度比较高,其余3种方法提取的DNA的纯度都比较低。结论用提取缓冲液研磨提取的DNA的质量高于液氮研磨,并且缓冲液研磨能降低DNA提取成本,操作安全,因此是一种经济适用的方法;Ezup柱式试剂盒法操纵简单,但是价格昂贵,且DNA的得率低,高盐低p H法成本低,但是提取时间比试剂盒长,两种方法提取的DNA的PCR效果相差不大,高盐低p H法适用于需要大批量提取拉萨蒲公英叶片DNA的研究。