温阳化饮益气活血法对慢性心功能不全大鼠心肌α-MHC、β-MHC基因表达的影响

目的：探讨温阳化饮益气活血法对慢性心功能不全大鼠心肌α-MHC、β-MHC基因表达的影响。方法：采用腹腔注射阿霉素法复制慢性心功能不全大鼠动物模型，利用RT—PCR技术检测心肌重构的相关调控因素α-MHC、β-MHC在慢性心功能不全发病中的作用，同时观察温阳化饮益气活血法对其干预作用。结果：慢性心功能不全大鼠模型组心肌组织α-MHC基因表达下调，β-MHC基因表达上调；温阳化饮益气活血法治疗组心肌组织α-MHC基因表达上调，β-MHC基因的表达下调。结论：温阳化饮益气活血法能上调慢性心功能不全大鼠α-MHC基因的表达，下调β-MHC基因的表达，为温阳化饮益气活血法的临床应用提供了实验依据，这可能是温阳化饮益气活血法防治慢性心功能不全的作用机制之一。     

参白注射液对病毒性心肌炎模型大鼠α-MHC基因表达的影响

目的:探讨参白注射液调节病毒性心肌炎心肌肌凝蛋白重链α-MHC基因表达的作用机制.方法:无菌分离、切取新生1～3天Wistar大鼠的心室肌,制备和培养心肌细胞,建立病毒性心肌炎(VMC)感染模型--体外培养大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3(CVB3)病毒,通过免疫组化实验,检测参白注射液对α-MHC基因表达的影响.结果:正常组α-MHC基因表达可见明显阳性信号,病毒感染组蛋白阳性信号表达减少,病毒感染加参白注射液组能明显上调α-MHC基因的表达含量.结论:参白注射液通过减轻自身免疫损伤,使具有ATP酶活性的MHC表型发生变化的几率减少,从而上调α-MHC的表达,进而增强心肌收缩力.     

补中益气法对甲减大鼠心肌α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响

目的:研究补中益气法对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌肌球蛋白重链α和β(myosin heavy chain alpha and beta,α-MHC和β-MHC)mRNA表达的影响。方法:将甲减Wistar大鼠随机分为模型对照组、L-T4组、补中益气汤组。实时定量RT-PCR法测心肌α-MHC和β-MHC mRNA。结果:给处理因素8周,L-T4组、补中益气汤组的α-MHCmRNA的表达分别为正常组的1.77倍、2.32倍,补中益气汤组较L-T4组上升明显(P<0.05);L-T4组、补中益气汤组β-MHCmRNA的表达分别为正常组的2.61倍、1.17倍,补中益气汤组下调明显(P<0.05)。结论:补中益气法在甲减心肌损伤的修复中起重要作用,其机制与其提高心肌α-MHC mRNA的表达、降低β-MHCmRNA的表达有关。     

益气温阳活血方对慢性心衰大鼠心室重构基因表达谱的影响

目的:利用基因表达谱芯片研究益气温阳活血方对慢性心衰大鼠心室重构的作用机制。方法:用含588个基因克隆的大鼠基因芯片研究慢性心衰大鼠经益气温阳活血方治疗前后心肌组织及心肌细胞基因表达谱的变化,并以RT-PCR法和Wester-blot法验证部分差异基因。结果:慢性心衰大鼠心肌组织及心肌细胞以益气温阳活血方治疗后差异表达基因共有27条,其中上调基因7条,下调基因20条。结论:益气温阳活血方通过对多基因、多靶点的调控,可改善慢性心衰心室重构。     

鹿茸多肽诱导心肌干细胞分化作用及对心肌细胞特征性MHC基因表达的影响

目的从新生大鼠心脏中分离得到心肌干细胞,体外培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察鹿茸多肽诱导前后心肌细胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β心肌肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,探讨鹿茸多肽对心肌干细胞分化的促进作用。方法胰酶消化法分离心肌干细胞(CSCs),并进行传代培养,流式细胞法及免疫组化染色鉴定,于第3代CSCs培养液中加入不同浓度的(50,100,200,400,800,1 600μg/mL)鹿茸多肽进行体外诱导,3周后,用细胞刷收集细胞,利用RT-PCR技术观察心肌细胞特征性基因MHC的表达情况。结果鹿茸多肽对CSCs的MHC基因表达有促进作用,在一定范围内存在量效关系,并随着鹿茸多肽浓度的增加,α-MHC和β-MHC基因的表达均有所增加。结论鹿茸多肽对心肌干细胞分化心肌细胞有促进作用,表明其在心肌损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步全面深入的研究。     

温肾方对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌肌球蛋白重链基因表达的影响

目的:观察温肾方对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌肌球蛋白重链基因表达的影响。方法:采用"甲状腺全切术+术后皮下注射L-T4"法制备亚临床甲减大鼠模型,设定空白对照组、模型组、西药组、中药低剂量组及高剂量组、中+西药组,RT-PCR法按照试剂盒说明测定心肌肌球蛋白重链基因表达,同时观察温肾方对其指标的干预情况。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠心肌肌球蛋白重链α-MHCmRNA表达降低(P0.05),β-MHCmRNA表达显著增加(P0.01);与模型组比较,中+西药组和中药高剂量组在上调大鼠心肌α-MHCmRNA表达,下调大鼠心肌β-MHCmRNA表达方面效果显著(P0.05);中+西药组及中药高剂量组心肌α-MHCmRNA、β-MHCmRNA表达水平接近于空白对照组(P0.05)。结论:亚临床甲状腺功能减退可引起心肌肌球蛋白重链基因表达的改变,温肾方能逆转心肌肌球蛋白基因的异常表达,从而具有防治亚临床甲减心脏并发症的作用。     

丹参多酚酸盐对心力衰竭大鼠心肌肌球蛋白重链的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心力衰竭(心衰)大鼠心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)的影响。方法采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠分成6组:正常对照组、模型组、卡托普利组、丹参多酚酸盐低剂量组、丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(下称中西药联合组),每组10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用阿霉素腹腔注射法制备心衰模型,正常对照组大鼠给予等体积生理盐水腹腔注射,每周1次,共6周。从注射阿霉素第5周开始,各用药组给药干预,卡托普利组予100 mg/(kg·d)的卡托普利水溶液灌胃;丹参多酚酸盐低、高剂量组分别以24.219 mg/(kg·d)及48.438 mg/(kg·d)的丹参多酚酸盐溶于2 m L 5%葡萄糖溶液中腹腔注射。中西药联合组予高剂量的丹参多酚酸盐腹腔注射,同时予卡托普利水溶液灌胃,模型组予腹腔注射生理盐水2 m L,每日1次,均连续干预8周。采用生物信号采集处理系统检测心功能、心肌肥厚指数;荧光定量PCR法检测心肌α-MHC及β-MHC mRNA表达;Western blot法检测心肌蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表达。结果与正常对照组比较,模型组心脏质量指数(heart mass index,HMI)及左室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)明显增高(P0.01);与模型组比较,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组HMI及LVMI均下降(P0.05,P0.01),中西药联合组较卡托普利组下降更明显(P0.05)。与正常对照组比较,模型组心肌组织α-MHC mRNA水平降低,β-MHC mRNA水平及心肌组织PKC表达升高(P0.01);与模型组比较,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组及中西药联合组心肌组织α-MHC mRNA水平升高,β-MHC mRNA水平及心肌组织PKC表达水平均降低(P0.05,P0.01),且中西药联合组与卡托普利组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论丹参多酚酸盐能上调α-MHC并下调β-MHC mRNA水平,其机制可能降低PKC的表达有关。     

益气活血方对大鼠肺组织基因表达谱的影响

目的 用数字化基因表达谱分析益气活血方作用前后大鼠肺组织基因表达的变化,了解益气活血方作用的分子机制.方法 Wistar大鼠20只,随机分为中药组与对照组各10只.中药组大鼠每日灌胃益气活血方1 mL,对照组大鼠每日灌胃蒸馏水1mL,两组均于6、12周末随机处死5只大鼠,取其右肺,并提取肺组织总mRNA,经过处理后进行数字化基因表达谱分析,对比两组基因差异表达情况.结果 中药组、对照组在6周末的差异表达基因有1338个,上调基因为705个,下调基因为633个;上调基因主要与细胞分裂增殖相关,下调基因主要与脂代谢、炎症因子相关.12周末差异基因有2001个,上调基因为775个,下调基因为1226个.上调基因主要与免疫、DNA损伤修复相关,下调基因主要与脂代谢、炎症因子、纤维化功能相关.结论 益气活血方可以调控脂代谢、炎症因子、免疫功能、DNA损伤修复、纤维化相关基因的表达,具有一定抗辐射功能,对机体有性保护作用.     

温阳活血化痰法对心力衰竭大鼠心功能及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的：研究温阳活血化痰法对异丙肾上腺素（ISO）诱导的充血性心力衰竭（CHF）大鼠心功能及心肌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达的影响,探讨TNF-α在CHF发病中的作用及该法防治CHF心肌重塑可能的作用机理。方法：采用ISO皮下注射法制备CHF模型,药物治疗6周后,进行血流动力学及病理形态学检测,采用免疫组化法测定心肌TNF-α蛋白表达变化。结果：温阳活血化痰法能提高CHF模型大鼠dp/dtmin、dp/dtmax和LVSP水平、降低LVEDP水平;降低心脏重量指数,抑制CHF模型大鼠心肌上调的TNF-α蛋白表达。结论：温阳活血化痰法能明显改善CHF大鼠心肌收缩和舒张功能,抑制细胞重塑,可能与其下调TNF-α蛋白表达有关。     

白及多糖对胃溃疡模型大鼠胃组织TNF-α、IL-1β、IL-6及JNK、p38 MAPK基因蛋白表达水平的影响

目的:探讨白及多糖对胃溃疡(GU)模型大鼠胃组织JNK、p38 MAPK基因、蛋白及其介导炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,模型组大鼠采用乙酸直接烧灼法复制GU模型,将GU模型大鼠按随机数字表法分为模型组、盐酸雷尼替丁0. 3 g/kg组和白及多糖0. 125、0. 25、0. 5 g/kg组,每组10只。各组灌胃相应药物或蒸馏水,连续15日。采用ELISA法检测各组大鼠胃溃疡病灶组织炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6含量,RT-PCR法检测胃溃疡病灶组织TNF-α、IL-1β、IL-6、JNK及p38 MAPK基因表达水平,WB法检测JNK及p38 MAPK蛋白表达水平。结果:与空白组比较,GU大鼠病理见胃底腺结构紊乱,胃黏膜上皮细胞脱落等,溃疡长度显著增加,胃组织炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,基因表达显著上调,JNK及p38 MAPK基因及蛋白表达水平显著上调;与GU模型组比较,白及多糖0. 5 g/kg组大鼠病理见胃黏膜出现较多腺体,炎症细胞浸润、坏死层明显减少,组织病理学检查评分明显降低;白及多糖各剂量组TNF-α、IL-1β及IL-6含量明显降低,基因表达均下调,JNK及p38 MAPK基因及蛋白表达水平均下调,以白及多糖0. 5 g/kg组最显著。结论:白及多糖可通过下调JNK及P38 MAPK基因和蛋白表达水平,抑制炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用。     

寒饮蕴肺证COPD大鼠模型肺组织AQP1、Muc5ac表达的动态研究

目的:动态研究寒饮蕴肺证慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中水通道蛋白1(AQP1)、黏蛋白5ac(Muc5ac)的表达与证候之间的关系,以及温阳化饮方对以上指标的影响。方法:130只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、自然演变组和温阳化饮方治疗组,采用免疫组化法动态检测(观察60 d,每隔10 d检测1次)肺组织中AQP1、Muc5ac的表达。结果:在撤除造模因素后60 d内,自然演变组肺组织中AQP1表达持续降低,Muc5ac表达持续升高。温阳化饮方治疗组肺组织AQP1表达升高,Muc5ac表达降低,治疗10~40 d后疗效显著,40 d后疗效不明显。结论:肺组织AQP1表达的降低,Muc5ac表达的升高与证候的演变关系密切,温阳化饮方能够上调肺组织中AQP1的表达和下调Muc5ac的表达,对COPD寒饮蕴肺证有明显的治疗作用,但治疗存在时效性。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Igfbp-3mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(Igfbp-3mRNA)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的Igfbp3mRNA进行报道。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因Igfbp3mRNA表达下调,中药复方肾消康治疗组心肌组织基因Ig-fbp3mRNA表达上调。结论:Igfbp-3mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因膜联蛋白A4 mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测膜联蛋白A4(annexin A4)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:本文仅对筛选出差异表达基因谱中的annexin A4 mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达下调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达上调。结论:annexin A4 mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达且表达下调,而中药复方糖心康可使其上调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad 2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响.[方法]采用单侧输尿管结扎致.肾间质纤维化大鼠模型.将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组.术后14 d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达.[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad 2/3和α-SMA的表达.[结论]益气活血法可通过下调TGF-α、Smad 2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化.     

黄芪对慢性心衰大鼠心功能及心肌肌浆网钙泵基因表达的影响

目的:探讨黄芪对慢性心衰大鼠心功能及心肌肌浆网钙泵基因(SERCA2a)表达的影响.方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪组(20 g/kg)和卡托普利组(0.05 g/kg).采用缩窄腹主动脉法制备慢性心衰模型,造模后第13周开始灌胃给药,连续给药12周后测定大鼠在体血流动力学指标,并采用RT-PCR、Western blot方法检测左室组织SERCA2a基因的表达.结果:模型大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)均较假手术组显著升高(P＜0.01或P＜0.001),卡托普利和黄芪均能降低模型大鼠LVSP(P＜0.05或P＜0.01)、LVEDP(P＜0.05或P＜0.01);模型组大鼠左心室SERCA2a基因表达较假手术组下调(P＜0.05),黄芪能上调模型大鼠SERCA2a基因表达(P＜0.05),而卡托普利对其表达无明显影响.结论:黄芪能改善慢性心衰大鼠心功能障碍,并以改善舒张功能为主,其机制可能与上调心肌SERCA2a基因表达有关.     

温阳化饮、益气活血法对心衰大鼠心功能及血浆内皮素和肿瘤坏死因子的影响

以温阳化饮、益气活血法组方进行动物实验,结果表明该药能明显降低心衰大鼠血浆内皮素(ET)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平.提示该药能通过降低血浆ET、TNF-α水平而发挥改善心功能的作用.     

基于Wnt/β-catenin大鼠心肌损伤的修复作用通路探讨益气活血方对急性心肌梗死

【目的】 探讨益气活血方对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌损伤的修复作用及机制。【方法】 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、Wnt-C59（Wnt/β-catenin信号通路抑制剂）组,每组15只。模型组、中药组、Wnt-C59组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法建立 AMI 模型,假手术组大鼠仅打开胸腔后缝合。成功造模后,中药组大鼠灌胃益气活血方药液6.48 g·kg-1·d-1,Wnt-C59组大鼠灌胃Wnt-C59 30 mg·kg-1·d-1,假手术组和模型组大鼠灌胃0.9% 氯化钠（NaCl）溶液20 mL·kg-1 ,共4周。给药结束后,评价大鼠心功能变化,采用苏木素-伊红（HE）法和Masson染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,脱氧核苷酸末端转移酶（TdT）介导的核苷酸（dUTP）缺口末端标记法（TUNEL）染色检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-qPCR）法检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）mRNA表达,酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、CK同工酶（CK-MB）的含量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测心肌组织 Wnt3a、β-catenin 及 β-catenin 靶基因细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）、C-myc蛋白表达水平。【结果】 与正常组比较,模型组大鼠心功能显著降低,出现明显心室扩张和重构,心肌组织排列紊乱、纤维化明显、细胞凋亡增加,Caspase-3、Bax mRNA表达水平上调,Bcl-2 mRNA表达水平下调,血清心肌损伤因子含量显著升高,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,中药组和Wnt-C59组大鼠心功能指标得到显著改善,心肌组织排列较为整齐,胶原纤维沉积减少,细胞凋亡减少,Caspase-3、Bax mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平增加,血清心肌损伤因子含量降低,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平降低（P＜0.05）。【结论】 益气活血方可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善AMI大鼠心肌损伤。     

益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心肌NCX与SERCA2a mRNA及蛋白表达水平的影响

目的观察益气活血方(由丹参、黄芪、香加皮等组成)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌钠钙交换蛋白(Sodium-calcium exchanger,NCX)与肌浆网钙泵-2a(SR calcium ATPase-2a,SERCA2a)mRNA及蛋白表达水平的影响,初步探讨益气活血方改善慢性心衰大鼠心功能的作用机制。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法制备急性心肌梗死后慢性心力衰竭模型。实验分6组:假手术组,模型组,卡托普利组,益气活血方高、中、低3个剂量组,连续ig给药4周后取材,检测心肌组织NCX与SERCA2a mRNA及蛋白表达。结果各给药组均可不同程度的下调NCX mRNA的表达,上调SERCA2a mRNA的表达,其中益气活血方高、低剂量组以及卡托普利组与模型组比较有显著性差异(P<0.05);各给药组均能降低NCX/SERCA2a mRNA的比值,与模型组比较差异显著(P<0.05)。各给药组均有下调NCX蛋白、上调SERCA蛋白表达的趋势,但与模型组相比无显著差异(P>0.05)。结论益气活血方能够降低CHF大鼠NCX mRNA的表达,升高SERCA mRNA的表达,降低NCX/SERCA mRNA的比值,调节心肌细胞内钙循环,从而改善心肌的舒缩功能,其可能为益气活血方改善心脏功能、抗心力衰竭的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因fgl2mRNA表达的影响

目的：比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测凝血酶原酶（fgl2mRNA）在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法：（1）差异表达基因的筛选;（2）荧光定量RT-PCR的检测。结果：本文仅对筛选出差异表达基因谱中的fgl2mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因fgl2mRNA表达上调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因fgl2mRNA表达下调。结论：fgl2mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

温阳益气活血方对慢性心功能不全炎症因子的影响

目的观察温阳益气活血方对慢性心功能不全炎症因子的影响。方法选择符合诊断标准的慢性心功能不全患者60例,随机平均分成两组,即对照组和中西医结合治疗组。对照组给予常规西药治疗,中西医结合治疗组在常规西药治疗的基础上给予中药温阳益气活血方治疗,疗程均为15天,观察两组治疗前后彩色多普勒超声心功能和炎症因子hsCRP、TNF-α和IL-18的变化。结果两组治疗后彩色多普勒超声心功能均有改善,炎症因子hs-CRP、TNF-α和IL-18含量均降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。中西医结合治疗组彩色多普勒超声心功能较对照组明显改善,炎症因子hs-CRP、TNF-α和IL-18含量较对照组降低,二者差异具有统计学意义(P0.05)。结论温阳益气活血方对慢性心功能不全具有改善心功能,降低炎症因子hs-CRP、TNF-α和IL-18含量的作用。对炎症因子hs-CRP、TNF-α和IL-18的影响可能是该药治疗慢性心功能不全的作用机制之一。