HPLC—UV检测北细辛及数种中成药中的马兜铃酸A

目的：检查北细辛药材及数种中成药中的马兜铃酸A。方法：采用高效液相色谱法,紫外检测器,以Hypersil C18柱（250mm×4．6mm,5μm）测定马兜铃酸A的含量,流动相为甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（25：13：1：1,v／v）,流速1．0mL·min^-1,检测波长315nm,柱温35℃。结果：在所选定的色谱条件下,细辛药材及含细辛药材的中成药未检出马兜铃酸A。结论：该检测方法测得马兜铃酸A最低检出量为1．8×10^-4μg,为马兜铃酸A的检测提供了一种灵敏、经济、可行的科学方法。北细辛药材及含细辛药材的中成药中均未检出马兜铃酸A。     

微量马兜铃酸A检测方法的建立及其应用

目的:建立微量马兜铃酸A的标准检测方法,并对目前合法使用的含马兜铃酸A的药材、易与含马兜铃酸药材相混淆的中药材及其中成药进行检测。方法:采用高效液相色谱法,Alltima C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水-乙酸(68∶32∶1.5)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测波长390 nm。结果:马兜铃酸A在0.016~0.51μg线性关系良好,r=0.999 3,最低检测限为4 ng,平均加样回收率为101.2%。采用建立的标准限量检测方法,对11批市售细辛药材和15批中成药样品中马兜铃酸A进行分析;11批细辛中马兜铃酸A的质量分数在3.1~26.6μg.g-1,其中只有3批符合《中国药典》2010年版细辛药材项下的限量规定;15批中成药样品中只有1批检出了马兜铃酸A。结论:方法灵敏度高,重复性好,适合于含痕量马兜铃酸的药材及成药中马兜铃酸A的限量检测。     

细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨

目的：探讨细辛及其中成药中马兜铃酸的HPLC限量检测。方法：采用HPLC与MS分别检测北细辛中的马兜铃酸A，并比较对照品和供试品的检测限。结果：用HPLC从北细辛中未能检出马兜铃酸A，用MS可检出马兜铃酸A。结论：用HPLC难以检测，北细辛中含有微量马兜铃酸A。所含微量成分的限量检测须考虑供试液的基线噪音。     

从马兜铃酸含量影响因素探讨含马兜铃酸中药的风险控制

马兜铃酸广泛地存在于马兜铃科马兜铃属Aristolochia和细辛属Asarum等植物中,由于具有很强的肾脏毒性和对泌尿系统的致癌性而引起了广泛关注。我国于2003—2004年禁止关木通、广防己和青木香的使用,其他的含马兜铃酸中药均按照处方药管理使用。该文检索了近十年发表的有关马兜铃酸含量分析的文献,提示细辛属Asarum药材尤其是其根和根茎中的马兜铃酸含量较低,含细辛的中成药多数未检出马兜铃酸Ⅰ,个别中成药品种可检出微量马兜铃酸Ⅰ。而马兜铃属Aristolochia药材如马兜铃、朱砂莲、寻骨风等药材中的马兜铃酸含量相对较高,含这些药材的中成药马兜铃酸含量研究文献较少。影响中药材及中成药中马兜铃酸含量的因素较多,包括药材的使用部位、药材的产地、炮制方法、提取工艺等。建议重视含马兜铃酸中药尤其是马兜铃属Aristolochia中药的毒性,对相关的饮片和中成药的使用要慎重。加强含马兜铃酸中药的基础研究,选择合适的产地、炮制方法及提取工艺,同时加强相关中药材、饮片及中成药中马兜铃酸含量的监测,以降低用药风险,保证临床用药安全。     

细辛药材不同部位中马兜铃酸A含量的高效液相色谱法测定

目的高效液相色谱法测定细辛药材不同部位中马兜铃酸A的含量。方法建立高效液相色谱法,采用C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-2%乙酸水溶液(42∶58),检测为波长320nm,柱温40℃,流速1m L·min-1。结果马兜铃酸A浓度在0.5040~50.40μg·m L-1之间呈良好的线性关系,r=0.9999。马兜铃酸A平均回收率为100.6%,RSD为2.88%。细辛药材叶子中马兜铃酸A的含量明显高于根和根茎中的含量,其根和根茎中含有微量的马兜铃酸A。结论该方法灵敏、快速准确,可用于细辛药材中马兜铃酸A的含量测定。     

3种马兜铃酸和2种马兜铃内酰胺在北细辛、华细辛及汉城细辛不同部位的分布及含量分析

目的 考察3种马兜铃酸和2种马兜铃内酰胺在《中华人民共和国药典》（简称“《中国药典》”）收载的北细辛、华细辛及汉城细辛不同部位中的分布和含量。方法 采用HPLC-DAD测定北细辛、汉城细辛和华细辛的果、叶、根及根茎中马兜铃酸I等3种马兜铃酸和2种马兜铃内酰胺的含量,并以LC-MS检测细辛根及根茎中马兜铃酸I是否存在。结果 通过对30份细辛果、97份细辛叶和97份细辛根及根茎样品检测的结果表明：3种细辛的果中均分布较高含量的马兜铃酸I（0.095-2.200 mg ?g-1）、9-羟基马兜铃酸I（0.012-0.103 mg?g-1）、马兜铃内酰胺I（0.025-0.147 mg?g-1）和马兜铃内酰胺II（0.120-0.144 mg?g-1）,未检测到马兜铃酸II;3种细辛的叶中（除了2份样品）均分布有马兜铃酸I,含量为0.010-0.140 mg?g-1,其它4种成分未检测到;HPLC法在细辛根及根茎的97份样品中均未检测到3种马兜铃酸和2种马兜铃内酰胺中的任何1种,但经过灵敏度更高的LCMS检验,所测定的4份细辛根及根茎样品中均分布极微量的马兜铃酸I（0.4-2.4 μg?g-1）。结论 本研究通过检测大量的细辛采集样品和多省市的细辛商品,报道了3种马兜铃酸和2种马兜铃内酰胺在《中国药典》收载细辛不同部位中的分布和含量情况,为《中国药典》（2005年版）把细辛药用部位由“全草”修订为“根及根茎”而保证细辛的临床用药安全提供了科学数据的支撑。     

北细辛全草和根中马兜铃酸A的含量测定及小鼠急性毒性实验研究

目的:测定北细辛全草及根中马兜铃酸A的含量及其急性毒性。方法:马兜铃酸A的含量测定采用反相高效液相色谱法,色谱柱为phenom enex C18(4.6mm×250mm),流动相为甲醇-水-醋酸(63:36:1),检测波长为390nm,流速1.0mL/m in,柱温35℃;急性毒性试验采用小鼠灌胃给药最大给药量法。结果:HPLC法测定细辛中马兜铃酸A含量,线性范围为20.2~121.2ng,北细辛全草及细辛根的平均回收率分别为97.2%和98.1%;北细辛全草及根中马兜铃酸A的平均含量分别为61.40μg/g和45.80μg/g;北细辛全草及根1g/mL水提取物给小鼠灌胃给药,LD50不能测出,耐受量大于40g/kg。结论:马兜铃酸A的含量测定法准确、可靠,重现性好,精密度高;北细辛全草中马兜铃酸A的含量高于细辛根中马兜铃酸A的含量;小鼠对北细辛全草和细辛根的水提取物具有较高的耐受性,耐受倍数相当于药典规定的临床剂量的800倍,比较安全。     

RP-HPLC测定不同产地青木香和细辛中马兜铃酸A的含量

目的 :测定不同地区市售青木香、细辛中马兜铃酸A的含量 ,用于指导临床用药和相关研究。方法 :应用高效液相色谱法 ,选用AlltechC₁₈色谱柱 (4.6mm× 250mm ,5 μm) ,甲醇 水 醋酸 (68∶32∶1)为流动相 ,流速为 1.0mL·min^-1,柱温为 35℃ ,紫外检测波长为 390nm。结果 :马兜铃酸A在 0.119～ 1.89μg有良好的线性关系 ,平均加样回收率为 101.8% ,RSD为 2.09%。不同产地青木香中马兜铃酸A的含量在 0.916 9～ 1.907 6mg·g^-1,其中以河北安国产青木香的含量较高 (1.90 76mg·g^-1) ;细辛中马兜铃酸A的含量在 0～ 35 1g·g^-1,其中以吉林市售品含量较高。结论 :本方法精密度高 ,重现性好 ,可用来含马兜铃酸类中药材中马兜铃酸A的含量测定 ;含马兜铃酸的中药中以关木通中马兜铃酸A的含量最高 ,青木香中的含量约为关木通中的含量的 1/3,细辛的含量最低。     

细辛不同部位马兜铃酸A的含量测定

目的:考察细辛不同部位应用的合理性。方法:用高效液相测定细辛不同部位马兜铃酸A的含量。结果:细辛药材根及根茎中不含马兜铃酸A或含量极低,叶中均含马兜铃酸A,含量稍高。结论:细辛以根及根茎入药比全草入药更好,与在古代细辛以根入药相一致。     

北细辛不同提取物中总马兜铃酸的含量测定

目的:测定北细辛不同提取物中总马兜铃酸的含量,为其临床应用提供实验依据。方法:以水、乙酸乙酯、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇提取北细辛药材,以马兜铃酸A为对照,采用紫外分光光度法,检测波长为390 nm。结果:马兜铃酸A含量在3.0～30.0 mg.L-1与吸收度呈良好线性关系,Y=19.844X+0.027 2(r=0.999 6),平均回收率为98.51%,RSD 1.32%。北细辛不同提取物中总马兜铃酸的含量为1.34%～3.15%,以水提取物含量最低,95%乙醇提取物含量最高。结论:方法测定结果准确可靠,重复性好,可用于北细辛提取物中总马兜铃酸的含量测定。     

不同来源细辛属药材中马兜铃酸A的定量分析

细辛为马兜铃科植物北细辛Asarum heterolropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum (Maxim.) Kitag.、汉城细辛A. sieboldii Miq. var. seoulense Nakai或华细辛A. sieboldii Miq.的根及根茎［1］。具有祛风散寒，通窍止痛，温肺化饮之功，临床用于风寒感冒，头痛，牙痛，鼻塞鼻渊,风湿痹痛，痰饮喘咳诸病的治疗，是一味常用中药，尚含有微量的肾毒性成分马兜铃酸A［2］。倪美华等［3］测定了北细辛地上、地下部分马兜铃酸A质量分数，分别为7956～11312 ng·g-1和0867～1767 ng·g-1；高钧等［4］测定华细辛不同部位马兜铃酸A为079～115 mg·g-1，其中以根部最低为079 mg·g-1，叶片为464 mg·g-1，较高；张萍等［5］对19批细辛进行了含量检测，其中北细辛为4～8 μg·g-1，华细辛为10 μg·g-1。上述测定结果显示，细辛根及根茎中马兜铃酸A含量较地上部分低，这可能是除细辛应用历史原因之外［6］，2005年版《中国药典》将细辛全草入药改为根及根茎入药的另一个主要原因。但从文献显示，马兜铃酸A的含量测定结果差异较大，相差约1 000倍。为较全面了解细辛中肾毒性成分概况，本实验采用HPLC测定了全国9省市(直辖市)36批细辛根及根茎药材中的马兜铃酸A含量，以期为细辛药材质量标准的增定提供科学依据。     

秦巴山区马兜铃科两种常用药材中马兜铃酸含量分析

目的 分析测定秦巴山区产细辛Aristolochia sieboldii Miq.和汉中防己A.heterophylla Hemsl.两种药材中马兜铃酸A的含量.方法 色谱柱:Agilent ODS (5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇-乙腈-1%冰乙酸(47:17:36);流速1.0 ml/min;柱温:室温;检测波长315 nm.结果 细辛中马兜铃酸A的平均含量为74.1 μg/g,汉中防己中马兜铃酸A的平均含量为2.14 mg/g.结论 汉中防己中的马兜铃酸A含量是细辛中马兜铃酸A含量的30倍左右.     

HPLC法同时测定马兜铃中4种成分

目的建立同时测定马兜铃Aristolochia debilis Sieb.et Zucc.中马兜铃酸III、7-羟基马兜铃酸Ⅰ、马兜铃内酰胺Ⅰ、马兜铃酸Ⅰ的HPLC方法。方法马兜铃70%甲醇提取液的分析采用Agilent Extend C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃,检测波长254 nm。结合大鼠口服马兜铃酸I的半数致死量(LD50)及细辛药材中马兜铃酸I的限量,确定马兜铃中马兜铃酸的限量。结果马兜铃酸Ⅲ、7-羟基马兜铃酸Ⅰ、马兜铃内酰胺Ⅰ、马兜铃酸Ⅰ分别在0.34~31.90、0.32~30.20、0.12~28.10和0.21~41.30μg/mL范围内线性关系良好。马兜铃中马兜铃酸Ⅰ或马兜铃总酸的限量为0.000 3%。结论该方法准确可靠,可用于马兜铃中马兜铃酸的限量测定。     

配伍滋阴养血中药对关木通马兜铃酸A含量的影响

目的:通过反相高效液相色谱法观察比较关木通配伍不同滋阴养血中药后马兜铃酸A的变化趋势,探讨各中药组配伍对马兜铃酸A的影响。方法:以DiamonsilTM(钻石)C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(体积比74∶24∶1)为流动相,检测波长315nm。结果:与关木通组相比,各配伍组马兜铃酸A含量均有降低;其中配伍当归组,以3∶1比例配伍马兜铃酸A含量最低。结论:在方剂配伍理论指导下,通过合理配伍降低关木通的毒性是可行的。复方配伍减毒理论有一定的科学依据。     

细辛减毒增效提取工艺初探

目的:结合药理学指标及马兜铃酸A含量,初步探讨细辛减毒增效提取工艺。方法:采用高效液相色谱法,对不同溶媒提取物中马兜铃酸A含量进行测定,结合止咳、祛痰效应指标,对细辛减毒增效工艺进行初步评价。结果:细辛挥发油及正己烷提取物均未检出马兜铃酸A,止咳效果显著。结论:细辛挥发油及正己烷提取物止咳效应增强,肾毒性成分降低。     

10种微生物对含马兜铃酸A中药材的生物减毒研究

利用微生物对含马兜铃酸A中药材进行生物转化脱毒,筛选出合适的菌种,为后期进一步研究微生物法对含马兜铃酸类中药材的"去毒存效"奠定基础。采用UPLC对12种含马兜铃酸类中药材进行检测,其中有4种中药材检测到含有马兜铃酸A,分别是关木通、青木香、马兜铃和寻骨风,另外8种则未检测到。选取了黑曲霉、米曲霉等10个菌种,以关木通、青木香、马兜铃和寻骨风药材粉末为原料,运用液体发酵技术,在一定条件下进行生物转化脱毒,观察菌种的生长情况,采用UPLC测定发酵前后药材中马兜铃酸A的含量。结果表明有1个菌种对降低关木通、青木香、马兜铃、寻骨风中的马兜铃酸A含量均有一定的效果。     

HPLC法测定4种细辛中马兜铃酸Ⅰ和细辛脂素

目的采用HPLC法测定华细辛、铜钱细辛、毛细辛和辽细辛不同部位马兜铃酸Ⅰ和细辛脂素的量。方法分析在MERCK C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)上实施;流动相为乙腈-0.05%磷酸水,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min,检测波长为260 nm,柱温30℃。结果马兜铃酸Ⅰ和细辛脂素的线性范围分别为0.01～250μg/mL(r=0.999 7)和0.6～200μg/mL(r=0.999 7),其平均回收率分别为98.8%(RSD为1.1%)和99.8%(RSD为0.7%)。结论 4种细辛中均检测到马兜铃酸Ⅰ,叶中含有量均大于根茎。细辛脂素在毛细辛茎中未检测到.细辛脂素在华细辛和辽细辛根及茎中含有量较叶中高。     

HPLC法检查新生颗粒中马兜铃酸A的含量

目的建立新生颗粒中马兜铃酸A的限量检查方法,以保证临床用药的安全性。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Phenomenex Luna C18(2)(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-3.3%醋酸(75∶25);流速:1.0mL/min;柱温:室温(25℃);检测波长:320nm。结果马兜铃酸A在0.1092～0.9828μg范围内线性良好(r=0.9999),平均回收率为96.00%,RSD为1.43%,最低检测限为0.819ng,3批新生颗粒中均未检出马兜铃酸A。结论该方法简便,专属性强,灵敏度高,可用于新生颗粒中马兜铃酸A的限量检查。     

青木香和冠心苏合胶囊中马兜铃酸A的药动学研究

目的研究青木香及复方制剂冠心苏合胶囊中马兜铃酸A在小鼠体内的药动学特点及小鼠在ig给予含相同量马兜铃酸A的青木香和冠心苏合胶囊后,马兜铃酸A的吸收、分布规律的差异。方法采用RP-HPLC法测定血浆中马兜铃酸A的量。色谱条件色谱柱为DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(72∶27∶1),体积流量为1.0mL/min,检测波长为315nm,柱温为20℃。结果药动学实验结果显示小鼠分别ig给予青木香和冠心苏合胶囊(相当于2.5mg/kg马兜铃酸A)后,其体内的药动学房室模型均符合一室模型,青木香中马兜铃酸A主要药动学参数t1/2ka、t1/2ke,tmax、AUC、Cmax分别为5.103min、43.63min、17.89min、80.45(μg·min)/mL、0.9168μg/mL;冠心苏合胶囊中相应的参数分别为5.294min、43.50min、18.32min、33.08(μg·min)/mL、0.3818μg/mL。结论小鼠给予含马兜铃酸A相同剂量的青木香和冠心苏合胶囊后,冠心苏合胶囊中马兜铃酸A的Cmax明显低于青木香中的Cmax,说明复方配伍作用可减少马兜铃酸A的吸收。     

不同产地马兜铃药材中马兜铃总酸的含量

目的测定不同产地马兜铃药材中马兜铃总酸的含量,为马兜铃总酸限量标准的制定提供必要的数据支持。方法以马兜铃总酸含量为指标,采用L9(34)正交试验方法考察提取溶剂、溶剂用量和提取方法 3个因素,对提取条件进行优化,用紫外分光光度法检测马兜铃总酸的含量,检测波长为319 nm。结果马兜铃总酸最优的提取条件为用含1%甲酸的甲醇,料液比1∶40,超声提取30 min,提取2次;马兜铃酸Ⅰ浓度在0.005~0.030 mg·ml-1与吸光度呈良好的线性关系,A=38.046C+0.0109,r=0.9999,平均回收率为97.79%,RSD=2.09%;不同产地马兜铃种子的马兜铃总酸含量为0.357%~0.597%,果皮的马兜铃总酸含量为0.170%~0.258%。结论不同产地马兜铃药材中马兜铃总酸含量存在明显的差异,并且种子中马兜铃总酸含量明显高于果皮。