氢气对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤内质网应激及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨吸入高浓度氢气(H2)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(IRI)内质网应激(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸蛋白酶12 (Caspase-12)及脑皮质神经细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响.方法 选取72只健康成年SPF级雄性SD大鼠,将其分为对照组(Ⅰ组:不作任何处理)、假手术组(Ⅱ组)、脑IRI组(Ⅲ组)、氢气治疗组(Ⅳ组),每组18只.采用线栓法建立大鼠局灶性脑IRI模型.于再灌注24 h后行神经功能缺损评分(NDS),采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠脑缺血梗死程度并计算脑梗死面积,原位末端标记法(TUNEL)技术检测各组大鼠脑皮质神经细胞凋亡并计算凋亡指数(AI),Western blot法和免疫组织化学法检测大鼠脑皮质GRP78、Caspase-12、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 与Ⅰ、Ⅱ组比较,Ⅲ、Ⅳ组大鼠脑IRI后NDS、脑梗死面积、AI均明显增加,GRP78、Caspase-12、Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组大鼠NDS、脑梗死面积、AI及Caspase-12、Bax蛋白表达明显减少,GRP78、Bcl-2表达明显增加(P＜0.05).结论 再灌注同时吸入高浓度H2可通过增加脑IRI后内质网GRP78蛋白表达,并抑制Caspase-12的激活进而抑制ERS并促进内质网功能修复,对大鼠脑IRI起到一定的保护作用.     

牛磺酸对缺血-再灌注大鼠血浆心肌肌钙蛋白T及心肌GRP78、Caspase-12表达的影响

目的探讨牛磺酸(taurine,Tau)对心肌缺血-再灌注损伤时血浆心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cT-nT)及心肌葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、胱天蛋白酶(Caspases)-12表达的影响及其意义。方法将50只大鼠按随机数字表法分为5组:假手术组(对照组,Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和Tau保护1组(Tau 1组)、Tau保护2组(Tau 2组)、Tau保护3组(Tau 3组),每组10只。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支1h,随后再灌注24h以建立心肌缺血-再灌注损伤动物模型;Tau 1组、Tau 2组、Tau 3组分别在结扎冠状动脉前1h腹腔注射Tau 100、200、300mg·kg-1,余操作同I/R组;Sham组大鼠冠状动脉左前降支仅穿线,不结扎。采用酶联免疫法测定血浆cTnT水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT-PCR法和免疫组织化学法分析心肌细胞GRP78、Caspase-12基因表达,荧光分析法测定Caspase-3活性。结果与Sham组比较,I/R组大鼠血浆cTnT、心肌组织中GRP78、Caspase-12mRNA和蛋白表达、细胞凋亡指数及Caspase-3活性均显著升高(均P<0.01);与I/R组比较,Tau 1组、Tau 2组、Tau 3组大鼠血浆cTnT水平、心肌组织中GRP78mRNA、Caspase-12mRNA和蛋白表达、细胞凋亡指数及Caspase-3活性均呈显著降低(均P<0.05)。结论 Tau可显著减轻心肌缺血-再灌注损伤,其作用机制可能是Tau能下调缺血-再灌注心肌中GRP78和Caspase-12过表达。     

丹红注射液预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞损伤的影响

目的研究丹红注射液预处理对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的作用。方法体外培养大鼠心肌细胞,将丹红注射液以2%、4%、8%、16%四种浓度分别加入培养基中,预处理24 h后,置于缺血再灌注（I/R）环境中培养,采用流式细胞仪技术检测各组细胞的凋亡率,免疫组织化学法检测凋亡基因Bax及Bcl-2蛋白表达变化。结果与正常对照组比较,缺血再灌组细胞凋亡率及Bas表达明显升高,Bcl-2表达则显著降低;而用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性地下调凋亡率及Bas表达,上调Bcl-2表达。结论丹红注射液对缺血再灌心肌细胞有保护作用,且与浓度有一定的依赖关系,其作用可能是通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达实现的。     

大鼠肢体缺血再灌注对脊髓神经元细胞凋亡的影响及机制探讨

目的：观察在大鼠肢体缺血再灌注脊髓神经元损伤的过程中,细胞凋亡以及Bcl-2、Caspase-3蛋白质表达的变化。方法：复制实验性大鼠肢体缺血再灌注损伤模型,观察脊髓L1-5节段的病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化检测脊髓神经元Bcl-2、Caspase-3蛋白质表达的变化。结果：肢体缺血再灌注后Bcl-2、Caspase-3表达明显增多,Bcl-2在12h达高峰,之后下降;Caspase-3在24h达高峰,24h的凋亡细胞数最多,Caspase-3的表达与凋亡细胞数呈正相关关系,r=0．946。结论：肢体缺血再灌注后出现脊髓神经元损伤,并有细胞凋亡发生。     

Bcl-2基因转染对大鼠皮层神经细胞内质网凋亡的影响

目的研究bcl-2基因转染对保护体外培养缺血再灌注损伤的大鼠皮层神经细胞的影响。方法体外培养24h大鼠大脑皮层神经细胞,随机分为正常对照组(Control)、缺血再灌注组(Ischemia-reperfusion,I/R)和bcl-2基因转染组(bcl-2)。建立缺血再灌注模型,应用脂质体将bcl-2基因转入神经细胞。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,MTT法测定细胞活力。Western-Blot法检测各组细胞bcl-2、葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78)的蛋白含量。结果缺血再灌注组细胞凋亡率较对照组明显升高,bcl-2转染后细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。I/R组细胞活力较对照组明显下降,转染组细胞活力较I/R组显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。I/R组bcl-2比对照组明显表达减少,转染后细胞bcl-2蛋白高表达;I/R组细胞GRP78含量比对照组明显增多,bcl-2转染后GRP78显著下降。结论 bcl-2基因转染对缺血再灌注的鼠大脑神经元有明显保护作用,可能与其降低内质网相关性凋亡蛋白表达有关。     

参麦注射液对毒胡萝卜素诱导神经元内质网应激的影响

目的探讨参麦注射液对毒胡萝卜素诱导大鼠皮层神经元内质网应激的保护作用。方法体外培养SD乳鼠皮层神经元细胞,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度,流式细胞术Annexin Ⅴ、PI双标检测凋亡率,western—blot免疫印迹分析GRP78、Bcl-2、细胞色素C蛋白表达,Fura-2／AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度（[Ca^2＋qi）。结果sD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养,2umol／L毒胡萝卜紊作用神经元24h、48h细胞凋亡率分别是17．88％、21．38％,参麦治疗组分别是7．42％、8．16％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。胡萝卜紊诱导神经元GRP78表达上调,使细胞色素C蛋白表达增加,Bcl-2表达减少。参麦注射液促进细胞Bcl-2表达,抑制细胞色素C释放,降低游离钙浓度。结论参麦注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡,这种作用可能与其降低细胞内钙浓度有关。     

丹红注射液对脑细胞AIF表达及神经元凋亡的影响

目的:探讨丹红注射液对脑缺血再灌注后脑细胞凋亡诱导因子(AIF)表达以及神经元凋亡情况的影响.方法:将20只大鼠随机分为假手术组2只,脑缺血再灌注组9只,丹红注射液组9只.建立脑缺血再灌注动物模型,并于再灌注24h、48h、72h时分别检测脑缺血再灌注组和丹红注射液组大鼠的AIF阳性和神经细胞凋亡阳性情况.结果:假手术组大鼠术后24h脑组织切片AIF检测未见阳性,脑缺血再灌注组术后24hAIF阳性数极显著高于丹红注射液组(P＜0.01),术后48h显著高于丹红注射液组(P＜0.05),术后72h两组无显著差异(P＞0.05).假手术组神经元凋亡检测未见阳性,脑缺血再灌注组24h凋亡量明显高于丹红注射液组(P＜0.05),48h和72h两组无显著差异(P＞0.05).结论:丹红注射液有助于减少脑缺血再灌注后的神经元凋亡,提高对缺血脑细胞的保护作用,拮抗神经元凋亡的最佳时机在灌注的24h内.     

参附对大鼠肠缺血再灌注时肠上皮细胞Caspase-3,Bcl-2基因表达的影响

目的研究参附注射液(简称参附)对大鼠肠缺血再灌注期间黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法采用大鼠肠缺血再灌注模型.24只大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附治疗组(SF组),SF组于阻断前30 min静注SF液2 mL/100g.再灌注2 h检测回肠黏膜上皮细胞Cas-pase-3,Bcl-2蛋白的表达及细胞凋亡;同时观察小肠黏膜病理形态学改变.结果凋亡细胞检测显示I/R组凋亡细胞显著增多,SF组凋亡细胞数较I/R组显著减少而多于C组(均P＜0.05);Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达Caspase-3表达I/R组显著多于SF组和C组(P＜0.01),SF组与C组无明显差异;Bcl-2表达SF组显著高于I/R组(P＜0.05),后者显著低于C组(P＜0.05);SF组小肠黏膜病理损伤程度明显减轻I/R组(P＜0.01).结论参附注射液通过抑制Caspase-3表达和促进Bcl-2基因表达减少缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而减轻肠黏膜缺血再灌注损伤.     

参附通过抗凋亡途径对大鼠肝脏缺血再灌注的影响

目的：研究参附注射液对大鼠肝缺血再灌注期间肝细胞凋亡的影响，并探讨其机制。方法：采用Pringle’s法建立大鼠肝缺血再灌注模型。54只Wistar大鼠随机分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）和参附治疗组（SF组）。在规定时间检测肝细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达、细胞凋亡，同时观察病理形态学改变。结果：细胞凋亡指数在各时间点IR组显著增多，SF组较IR组显著减少而高于S组。与IR组比较，SF组的Bcl-2蛋白表达在再灌注6h、24h提高的显著；而Caspase-3蛋白表达在再灌注2h、6h下降的显著。结论：参附注射液通过抗细胞凋亡途径保护肝脏缺血再灌注损伤。SF通过下调Caspase-3表达，同时上调Bcl-2表达而抑制再灌注时肝细胞凋亡，减轻肝缺血再灌注损伤。     

IGF-1对大鼠缺血、缺氧神经元p-JNK及p-P38表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对缺血、缺氧大鼠脑皮质神经元凋亡的保护作用及作用机制。方法原代培养新生大鼠脑皮质神经元,建立缺血、缺氧细胞模型,观察IGF-1及IGF-1受体抑制剂(AG1024)对该模型细胞存活率(MTT试验)、细胞凋亡(流式细胞法)、JNK、P38表达(Western blot法)和Caspase-3活性(荧光测定法)的影响。结果 IGF-1(HII组)及AG1024(HIIA组)干预细胞模型24h后,模型细胞存活率分别为(77.00±3.80)%、(62.00±4.40)%;凋亡率分别达到14.58%、24.97%。IGF-1组可明显抑制p-JNK及p-P38的表达及Caspase-3的活性。结论 IGF-1对缺血、缺氧神经元损伤有一定的保护作用,并通过调控p-JNK、p-P38及Caspase-3的表达抑制缺血、缺氧神经元的凋亡。     

SSTF预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元的保护作用

目的：探讨黄芩茎叶总黄酮（SSTF）预处理对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元的保护作用。方法：线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,Longa评分标准对各组大鼠进行神经功能缺损评分,透射电镜观察大鼠脑皮质神经元超微结构的变化。结栗：SSTF预处理可明显降低缺血再灌注大鼠的神经功能缺损评分,改善脑皮质神经元的超微结构。结论：SSTF预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元具有一定的保护作用。     

缺血预处理经抑制线粒体释放细胞色素C减轻大鼠海马神经元缺血再灌注损伤

目的：探讨线粒体细胞色素C的释放在缺血预处理（IPC）保护大鼠海马神经元缺血再灌注损伤中的作用。方法：动物随机分为单纯缺血再灌组（IR组）、IPC加缺血再灌组（IPC+IR组）和对照组。HE染色观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测该区神经元凋亡;免疫组化测定该区神经元细胞色素C的表达。结果：IPC+IR组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,细胞色素C 的释放明显少于IR组(P均＜0.001)。结论：IPC可经阻止线粒体释放细胞色素C抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

针刺对脑缺血再灌注大鼠皮质缺血半暗带细胞超微结构的影响

目的：观察脑缺血再灌注后,针刺对脑缺血再灌注大鼠皮质缺血半暗带细胞超微结构的影响。方法采用改良 Longa 氏线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,用多聚甲醛灌注,戊而醛固定,醋酸铀和枸橼酸铅双重染色后,HU-12A 型电镜下观察大鼠皮质缺血半暗带细胞超微结构的变化。结果模型组6 h 神经元轻度损伤,染色质边集凝固,血管周围水肿,水肿渗出明显,毛细血管管腔狭窄,脑组织散在水肿,脑细胞破坏;针刺组5 d 后神经元结构正常,血管通畅,毛细血管内皮细胞无损伤,脑组织无水肿、渗出、无坏死区域,新生毛细血管增多。结论针刺能够减轻脑水肿,较少神经元细胞的损伤,促进新生毛细血管的增生,从而达到保护脑组织的目的。     

内源性NGF在缺血性老年大鼠部分脑区及小脑中的表达

目的 探讨缺血性老年大鼠部分脑区及小脑与神经生长因子（neve growth factor,NGF)之间的关系。方法 用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、假手术组（B组）、缺血30min，再灌注6h（C组）、12h（D组）、24h（E组）、48h（F组）、7d(G组）和14d（H组），用免疫组织化学SLAB染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。结果 除A，B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，各组海马均有少量表达，各组额叶少量表达，小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿。结论 老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用。     

脑缺血再灌注大鼠脑SI区及视上核nNOS免疫阳性神经元的变化

目的：观察大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质第一躯体感觉运动区（SI区）、视上核神经元型一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase,nNOS）免疫阳性神经元形态、数量变化以探讨nNOS在缺血性脑损伤中的变化规律和作用。方法：健康SD大鼠84只,体重220—250g,随机分为2组：（1）脑缺血再灌注损伤模型组：用双侧颈总动脉阻塞法建立脑缺血再灌注损伤模型。（2）假手术组：只分离双侧颈总动脉而不阻断血流。分别于术后即刻、1、2、3d、1、2、4周灌注取脑,nNOS免疫细胞化学染色,观察大脑皮质SI区、视上核内nNOS免疫阳性神经元形态及数量变化。结果：结扎双侧颈总动脉后1、2d和2周,SI区nNOS免疫阳性神经元数量显著低于假手术组（P〈0．05）;结扎双侧颈总动脉后1周,视上核nNOS免疫阳性神经元数量显著低于假手术组（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后,SI区、视上核内nNOS免疫阳性神经元数量的减少可能参与了再灌注损伤的保护机制。     

缺血早期Genistein对海马CA1区神经元保护作用机制的研究

目的 探讨缺血早期Genistein对脑缺血/再灌注后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组、缺血/再灌注组、溶剂对照组、Genistein处理组.缺血5 min时,溶剂对照组、Genistein处理组分别尾静脉注射二甲基亚砜（l ml/kg）和Genistein（1 mg/kg）.Western blot和免疫荧光法检测大鼠海马CA1区HAX-1蛋白的表达,焦油紫染色法观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 与对照组比较,Genistein处理组在再灌注3h时HAX-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,免疫荧光实验结果与此一致.焦油紫染色结果显示,Genistein处理组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加（P＜0.05）.结论 缺血早期Genistein对脑缺血造成的神经元损伤有明显的保护作用,这一作用可能是通过增加HAX-1蛋白表达水平来实现的.     

葛根素对大鼠缺血性脑损伤的保护作用

［摘要］目的: 观察葛根素对大鼠全脑缺血/再灌注后神经元的保护作用,并探讨其可能的机制。方法： 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型, 缺血15 min后再灌注。将50只大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、给药组(细分为高、低剂量组)和对照组。给药方式为静脉注射。使用蛋白质印迹、焦油紫染色法及TUNEL法检测神经型一氧化氮合酶（neuronal NO synthase, nNOS)表达、nNOS活化水平及神经元细胞的存活情况。结果： 给药组大鼠海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组明显增加(P<0.05),TUNEL法检测结果与其一致;给药组nNOS(Ser847)磷酸化水平较缺血/再灌注组明显增强(P<0.05),而其表达量没有明显变化。结论： 葛根素通过负向调节nNOS催化活性,减少NO生成,降低其神经毒性,对大鼠缺血性脑损伤有保护作用。     

预缺血再灌注通过NMDA受体介导海马CA1区ERK5激活的研究

目的 研究脑缺血及预缺血再灌注后大鼠海马脑区细胞外信号调节激酶5（ERK5）的磷酸化（激活）规律以及NMDA受体抑制剂盐酸氯胺酮（开他敏）对其激活的影响.方法 采用SD大鼠四动脉结扎缺血及预缺血模型,给药组大鼠在缺血前20 min腹腔给予盐酸氯胺酮30 mg/kg.用免疫印迹法分析不同条件下大鼠海马ERK5的蛋白表达量和激活情况;焦油紫染色观察缺血及预缺血对大鼠海马神经元的作用.结果 盐酸氯胺酮显著抑制了预缺血再灌注后ERK5的激活,而ERK5的蛋白表达量在以上相同处理条件下无明显变化;焦油紫染色观察示预缺血对大鼠海马神经元具有保护作用.结论 预缺血再灌注具有神经元保护作用,这种保护作用与NMDA受体有关,为临床治疗脑中风提供理论依据.     

中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层神经元的保护作用

目的观察中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层神经元的保护作用.方法体外培养的大鼠大脑皮层神经元,模拟脑缺血再灌注损伤中缺血4 h及再灌3、18、24、48、72 h,观察其活性、存活率、死亡率、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率和一氧化氮合成酶(NOS)的活性变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响.结果体外培养的大鼠大脑皮层神经元随缺血和再灌注时间的延长,细胞存活率逐渐下降、死亡率逐渐升高、培养液中LDH的漏出率逐渐升高,细胞NOS的活性在缺血4 h和再灌3 h时显著增高.抗呆Ⅰ号可影响其上述指标的变化.结论抗呆Ⅰ号可能通过防止氧化磷酸化脱偶联而保护线粒体,防止脂质过氧化及通透性增加而保护细胞膜,抑制NOS活性的反应性增强而防止NO及其衍生的毒性自由基的损伤等,而发挥对神经元的保护作用.     

全脑缺血复灌不同时间对大鼠海马神经元损伤及JNK通路的影响

目的探讨大鼠全脑缺血和复灌不同时间对海马神经元损伤、C-Jun氨基末端激酶（JNK）表达以及JNK激活的影响。方法采用四血管法（4-vessel-occlusion,4-vo）法制作大鼠全脑缺血模型,随机将51只SD大鼠分成假手术组、缺血组和缺血再灌注组,用Western blot检测海马组织JNK的表达和P-JNK的含量。另取9只大鼠缺血10min或缺血20min后复灌7d,甲醛灌注固定后取海马组织用于组织学评价。结果JNK在全脑缺血10min表达明显增加,缺血20min时达到峰值;全脑缺血20min复灌阶段JNK在复灌6h表达明显增加并达到-高峰,复灌12h到达最高峰;P-JNK含量在全脑缺血20min后复灌1h达到高峰,复灌12h再次出现高峰。结论20min全脑缺血后JNK高表达持续时间延长,JNK激活时间更早,更为显著,表明长时间缺血时JNK通路介导的损害作用更大。