LAK,A—LAK体外对人肝癌细胞株的杀伤研究

ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法是肿瘤生物治疗中常用的疗法,因其有局限性,故寻找高效低毒价廉的新型抗瘤免疫活性细胞成为目前生物治疗的新方向。Ａ－ＬＡＫ细胞（ａｄｈｅｒｅｎｔＬＡＫＣｅｌｓ）是指在培养过程中能粘附塑料培养器皿表面的一种以大颗粒淋巴细胞为主的一组ＬＡ...     

VM26及10-HCPT对人肝癌细胞株的体外联合杀伤作用

目的：研究VM26及10－HCPT等化疗药物对有肝癌细胞的体外联合杀伤作用。方法：采用MTT比色分析法测定不同组合的化疗药物对人肝癌细胞株SMMC－7721的抑制率。结果：以VM26加10－HCPT对人肝癌细胞株的抑制率最高，呈明显的协同作用，且抑制率随药物浓度的增加而增加。结论：VM26加10－HCPT对人肝癌细胞株具有明显的抑制作用，可作为临床用药的参考。     

蝎毒对人大肠癌细胞株体外抑制杀伤作用的观察

目的：观察蝎毒不同组分对人大肠癌细胞株的体外抑制杀伤作用。方法：采用噻唑蓝（MTT法），集落形成抑制实验，以丝裂霉素C（MMC）为阳性对照药品，以蝎毒提取物SVCI，SVCⅡ，SVCⅢ，SVCⅣ各组分（浓度分别为45μg/ml,60μg/ml,75μg/ml,90μg/ml),分别处理人大肠癌细胞Lovo，观察Lovo的生长情况。结果：SVCⅢ对Lovo细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组，与对照组比较有非常显著性差异（γ＝0．98，P＜0．01），SVCI，SVCⅡ，SVCⅣ对细胞Lovo的影响，在所用药物浓度内与对照组比较，无显著性差异，细胞毒性作用不显著。结论：SVCⅢ对人大肠癌细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用。     

环氧合酶-2抑制剂对人肝癌细胞株的体外研究

目的:观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂Celecoxib对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响以及COX-2、Survivin和MDR1/P-gp表达水平的变化,探讨COX-2抑制剂治疗肝癌的作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖状态;免疫组化法测定细胞中PCNA和COX-2表达;透射电镜及流式细胞仪观察Celecoxib诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响以及P-gp表达的变化;进一步用RT-PCR检测Survivin和COX-2mRNA在药物处理前后表达的变化。结果:人肝癌细胞系Hep-G2和BEL-7402中COX-2均有显著表达,Celecoxib呈时间和剂量依赖性抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞周期分布改变,G0/G1期细胞比例增加;肝癌细胞凋亡过程中,COX-2和Survivin基因的表达显著下调,P-gp表达减弱。结论:COX-2抑制剂Celecoxib可能通过下调COX-2、Survivin和P-gp表达,改变细胞周期分布,抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

CD3单克隆抗体活化的杀伤细胞对人胃癌细胞株MNK45体外杀伤及…

用人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２，共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞，ＰＢＭＣ与ｒＩＬ－２共同培养制备ＬＡＫ细胞，用单纯ＰＢＭＣ作为对照细胞。对这三种细胞的增殖及在体外和裸鼠体内的抗人胃癌细胞株ＭＮＫ４５作用进行了实验研究。体外试验结果表明，ＣＤ３ＡＫ对ＭＮＫ４５有明显杀伤作用，而ＬＡＫ细胞杀伤率较低，二者差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；用ＭＴＴ法和台盼蓝     

阿霉素诱导人肝癌细胞株HCC－9204肝癌细胞凋亡的实验研究

阿霉素诱导人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞凋亡的实验研究张晓东，王文亮第四军医大学病理学教研室（西安２１００３２）细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）与肿瘤之间具有非常密切的关系。肿瘤细胞凋亡的研究对进一步探讨肿瘤发病机理及肿瘤的预防和治疗具有十分重要...     

外周血淋巴细胞对BEL7402肝癌细胞株的杀伤作用

微量淋巴细胞细胞毒性试验是一种细胞免疫试验,可以反映机体的细胞免疫状态,该试验能在体外直接检测效应细胞(包括天然杀伤细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞等)对癌细胞的杀伤作用,因此国外用此方法来检测肿瘤患者的免疫功能及患者的治疗效果以及预后的关系。     

人脐带血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响

目的研究人脐带血树突状细胞(DC)对LAK细胞杀伤活性的影响.方法从人脐带血中分离出DC,以不同浓度与LAK细胞共育,检测其杀伤活性变化.结果加入低于1×105/mlDC的LAK杀伤活性显著增强,高于此浓度则对LAK活性呈不显著或负面影响.结论该结果提示脐血DC对LAK细胞杀伤活性可能具双向调节作用.     

TIL细胞与LAK细胞体外杀伤活力的比较

应用改良ＬＤＨ释放法，对ＴＩＬ细胞与ＬＡＫ细胞的前体及培养激活的细胞进行杀伤活力的检测，结果显示无论前体细胞或培养激活的细胞，对自体瘤细胞及Ｋ５６２细胞的杀伤活性均以ＴＩＬ细胞为高，表明ＴＩＬ细胞对肿瘤的特异识别及杀伤力均较ＬＡＫ细胞为强。     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用

目的 研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用及其可能的机制.方法 将不同浓度的沙利度胺作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用四甲摹偶氮唑蓝(MTT)法检测沙利度胺对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用.将SMMC-7721细胞培养至对数生长期,采用DNA琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜观察、流式细胞仪检测等方法 观察沙利度胺处理后SMMC-7721细胞的凋亡梯度、形态学变化和凋亡率,并对凋亡调控蛋白caspase-3的表达进行测定.采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度的沙利度胺处理后SMMC-7721细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的变化.结果 沙利度胺的浓度从3.125μg/ml增至200μg/ml时,其对SMMC-7721细胞的增殖抑制率从11.7%增至34.2%;当沙利度胺的浓度>25 μg/ml时,其对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用明显强于空白对照组(P<0.05).200 μg/ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞24 h后,行琼脂糖凝胶电泳,可见到DNA梯形条带;48 h后梯形条带更明显,并且在荧光显微镜下可见SMMC-7721细胞出现核固缩和核裂解现象.200μg/ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞12、24、48和72 h时,碘化丙啶(PI)法检测SMMC-7721细胞的凋亡率分别为3.1%±0.5%、8.4%±1.3%、19.4%±3.5%和25.8%±2.1%,24 h起的凋亡率均明显高于空白对照组SMMC-7721细胞48 h的自然凋亡率(1.6%±0.6%,均P<0.05).50、100和200μg/ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞48 h时,Annexin V-FITC/PI双标法检测SMMC-7721细胞的凋亡率分别为8.7%±1.2%、16.8%±2.5%和25.4%±4.5%,均明显高于空白对照组SMMC-7721细胞48 h的自然凋亡率(2.1%±0.5%,均P<0.05).随着沙利度胺浓度的增加,表达caspase-3蛋白的SMMC-7721细胞数量不断增加,而SMMC-7721细胞中VEGF的含量却逐渐下降.结论 沙利度胺可能通过诱导肝癌细胞的凋亡、抑制肿瘤血管的生成而发挥双重抗肿瘤生长的作用.     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对大肠癌细胞株LOVO体外杀伤作用的研究

目的研究树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对大肠癌细胞株LOVO的杀伤及诱导凋亡作用。方法 从健康供者外周血中提取出单个核细胞, 用不同的细胞因子诱导出DC及CIK细胞, 待DC成熟后将DC与CIK混合培养。细胞计数法测定细胞的增殖、MTT法测定细胞杀伤活性、透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡、Western Blot法检测效应细胞表面FasL表达。结果 DC细胞对CIK细胞具有很强的促增殖作用, 且DC-CIK细胞共培养组在各效靶比的杀伤活性均明显高于单独CIK细胞培养组(P＜0.01)。DC可以促进CIK诱导肿瘤细胞发生凋亡, 且DC-CIK、CIK细胞均大量表达FasL。结论 DC细胞可以显著提高CIK细胞的增殖活性和细胞毒活性, 其共培养的作用机制之一可能是通过Fas/FasL途径而实现。     

人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402对放射敏感性的体外实验研究

目的　采用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG 2和BEL -740 2对放射的敏感性。方法　对人肝癌细胞株HepG2和BEL -740 2进行体外培养 ,应用集落形成法和MTT法测定 6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率 ,计算 2株细胞放射敏感性参数 (D0 )。结果　HepG 2的D0 值为 1.5 ,SF2 为 (0 .45± 0 .0 5 ) ;BEL -740 2的D0 值为 1.6,SF2 为 (0 .63± 0 .0 5 )。MTT法与集落形成法相关性较好 (γ =0 .946,P <0 .0 5 )。结论　HepG2具有较高的放射敏感性 ,BEL -740 2的放射敏感性较低 ;MTT法可替代集落形成法作细胞放射敏感性的快速测定。     

CD_3单克隆抗体活化的杀伤细胞对人胃癌细胞株MNK_（45）体外杀伤及裸鼠体

用人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２，共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂＡｃｔｉｖａｔｅｄＫｉｌｌｅｒＣｅｌｌｓ），ＰＢＭＣ与ｒＩＬ－２共同培养制备ＬＡＫ细胞，用单纯ＰＢＭＣ作为对照细胞。对这三种细胞的增殖及在体外和裸鼠体内的抗人胃癌细胞株ＭＮＫ４５作用进行了实验研究。体外试验结果表明，ＣＤ３ＡＫ对ＭＮＫ４５有明显杀伤作用，而ＬＡＫ细胞杀伤率较低，二者差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；用的ＭＴＴ法和台盼蓝活细胞计数法测定这三种细胞的增殖能力和细胞数量的增加，表明ＣＤ３ＡＫ的增殖能力和扩增数量均明显高于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。裸鼠体内试验结果显示，对照组及ＬＡＫ组全部长出瘤结节，而ＣＤ３ＡＫ组无一例长出皮下结节，且生存期明显长于前者。     

CD基因对人胰腺癌细胞株Patu 8988杀伤作用的研究

目的　探讨腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶 (CD )基因对人胰腺癌细胞株Patu 8988的杀伤作用。方法　采用细菌内同源重组方法 ,构建含胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因重组腺病毒载体 ,经 2 93细胞包装、扩增 ,氯化铯密度梯度离心制备纯化高效的重组腺病毒 ,体外转染人胰腺癌细胞株Patu 8988,并给予前药 5 Fc ,观察其体外杀伤效果。结果　含CD基因的腺病毒载体经酶切鉴定正确 ,包装纯化后 ,检测病毒滴度为 2× 10 11pfu/ml ,将重组腺病毒转染胰腺癌细胞株Patu 8988,加用前药 5 Fc后 ,转染CD基因的Patu 8988细胞及混育的胰腺癌细胞生长明显受抑制。结论　CD腺病毒不仅转染效果强 ,而且可直接或通过旁观者效应杀伤胰腺癌细胞。自杀基因治疗有可能成为治疗胰腺癌的有效方法     

人脐带血树突状细胞对LAK细胞杀伤活笥的影响

目的研究人脐带血树突状细胞(DC)对LAK细胞杀伤活性的影响.方法从人脐带血中分离出DC,以不同浓度与LAK细胞共育,检测其杀伤活性变化.结果加入低于1×105/mlDC的LAK杀伤活性显著增强,高于此浓度则对LAK活性呈不显著或负面影响.结论该结果提示脐血DC对LAK细胞杀伤活性可能具双向调节作用.     

黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移及侵袭的影响

  目的  通过观察黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移侵袭能力及Ezrin、MMP-9、VEGF表达的影响, 探讨黄芩素对人肝癌细胞株SMMC- 7721体外迁移侵袭的作用及其可能机制。  方法  体外培养SMMC-7721, 经黄芩素干预后用划痕愈合实验和侵袭小室实验分别检测黄芩素对SMMC-7721细胞迁移运动能力和侵袭能力的影响; RT-PCR和免疫细胞化学法检测黄芩素作用于SMMC-7721细胞48h后对Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。  结果  划痕愈合实验显示各浓度实验组划痕愈合宽度占原宽度的比例比对照组明显下降（P < 0.05）; 体外侵袭实验显示实验组穿过人工基底膜胶的细胞数明显减少（P < 0.05）; 实验组Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达均明显下调（P < 0.05）。  结论  黄芩素可能通过直接或间接下调Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白的表达而抑制人肝癌细胞株SMMC- 7721体外迁移侵袭, 传统中药黄芩可望为肝癌临床治疗提供新的安全、有效、价廉的治疗方法。      

奥曲肽对人肺癌细胞株A549化疗增效作用的体外研究

目的：探讨生长抑素类似物奥曲肽能否提高化疗药物对于人肺癌细胞株A549敏感性。方法：以体外培养的人肺癌细胞株A549为靶细胞,运用四氮唑盐法（MTT法）观察奥曲肽单独作用及与化疗药物顺铂共同作用对于A549生长的影响,并以流式细胞仪分析其对细胞周期的影响。结果：MTT法结果显示奥曲肽抑制A549的生长,浓度0.098mg/L-25mg/L范围内,呈剂量依赖性,与顺铂共同作用后,能够增强顺铂对于A549的敏感性。流式细胞仪测定结果显示：奥曲肽作用后,G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,二者共同作用后,此趋势更加明显。结论：奥曲肽能够抑制体外培养的人肺癌细胞株A549增殖,且与顺铂有协同作用,其机制可能是发生G0/G1期阻滞。     

奥曲肽对人肺癌细胞株A549化疗增效作用的体外研究

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽能否提高化疗药物对于人肺癌细胞株A549敏感性.方法:以体外培养的人肺癌细胞株A549为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察奥曲肽单独作用及与化疗药物顺铂共同作用对于A549生长的影响,并以流式细胞仪分析其对细胞周期的影响.结果:MTT法结果显示奥曲肽抑制A549的生长,浓度0.098mg/L-25mg/L范围内,呈剂量依赖性,与顺铂共同作用后,能够增强顺铂对于A549的敏感性.流式细胞仪测定结果显示:奥曲肽作用后,G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,二者共同作用后,此趋势更加明显.结论:奥曲肽能够抑制体外培养的人肺癌细胞株A549增殖,且与顺铂有协同作用,其机制可能是发生G0/G1期阻滞.