高糖增强兔血管平滑肌细胞对内皮素-1的增殖反应性(英文)

观察高糖对内皮素－１（ＥＴ－１）促兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响．方法： ＶＳＭＣ分别培养于含正常葡萄糖、高糖或高渗（５．５，２５，葡萄糖 ５．５＋甘露醇 １９．５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１）的培养基中［３Ｈ］胸腺嘧啶掺入法检测ＤＮＡ合成速率，蛋白质印迹法检测磷酸化 ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的表达．结果：在 １０至 １０－８ｍｏｌ·Ｌ－１浓度范围内， ＥＴ－１以浓度依赖方式增加 ＶＳＭＣ的［３Ｈ］胸腺嘧啶掺入及磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的表达，从 １０－１１到 １０－８ｍｏｌ·Ｌ－１，培养于高糖的 ＶＳＭＣ对相同浓度 ＥＴ－１的增殖反应性高于正常糖或高渗培养条件下的ＶＳＭＣ（Ｐ＜ ０．０５，或 Ｐ＜ ０．０１），而在后两种条件下，ＶＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应无显著差别．同样，在高糖条件下，ＥＴ－１诱导的ＶＳＭＣ磷酸化ｐ４４／４２ＭＡＰＫ的表达较正常糖和高渗ＶＳＭＣ增加 ６０％－６５％结论：高糖增强ＶＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应性，可能与磷酸化的 ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ高表达有关     

甘草次酸钠对培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

观察甘草次酸钠（ＳＧＡ）对培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。结果：ＳＧＡ０．１０、０．２０和０．４０ｍｍｏｌ·Ｌ－１能减少缺糖缺氧６和９ｈ心肌细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放；ＳＧＡ０．１０，０．２０和０．４０ｍｍｏｌ·－１对缺氧再给氧损伤６、９ｈ的心肌细胞有相似的保护作用；ＳＧＡ０．１０、０．２０和０·４０ｍｍｏｌ·Ｌ－１亦可减少氯丙嗪和黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶损伤６，９ｈ及丝裂霉素Ｃ损伤２４ｈ心肌细胞ＬＤＨ的外漏。     

烟碱对白细胞介素1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达E-选择素的增强作用

目的··：观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）表达Ｅ－选择素的影响。方法··：离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定ＢＣＭＥＣ粘附大鼠血单核细胞（ＭＮ）的数目;应用ＥＬＩＳＡ法检测ＢＣＭＥＣ表达Ｅ－选择素的量。结果··：高浓度烟碱（１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）单独作用于ＢＣＭＥＣ２ｈ后,使ＢＣＭＥＣ对ＭＮ的粘附率从１２．９％±ｓ０．４％增至１５．７％±ｓ０．６％,且ＢＣＭＥＣ也可表达少量的Ｅ－选择素;而当烟碱与ＢＣＭＥＣ作用２ｈ后,再经白细胞介素１β（ＩＬ－１β）诱导４ｈ,烟碱可浓度依赖性（１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１－１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）地增强ＩＬ－１β的诱导作用,增加ＢＣＭＥＣ对ＭＮ的粘附率以及Ｅ－选择素的表达量;抗Ｅ－选择素单克隆（ＡＥｍＡｂ）能显著阻断ＩＬ－１β诱导ＢＣＭＥＣ后对ＭＮ的粘附率。结论··：烟碱增强ＩＬ－１β诱导的脑微血管内皮细胞表达Ｅ－选择素的作用。     

已酮可可碱与蛋白激酶C抑制剂对佛波醇酯诱导脑微血管内皮细胞？…

目的：研究佛波醇酯（ＰＭＡ）地大鼠脑微血管内皮细胞（ＲＢＭＥＣ）表达细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）及ＰＫＣ抑制剂Ｈ７与已酮可可碱（ＰＴＸ）的抑制作用。方法：采用ＥＬＩＳＡ方法测定培养ＲＢＭＥＣ表达ＩＣＡＭ－１。结果：ＰＭＡ在１０－１００．Ｌ＾－１范围内剂量依赖性地诱导ＲＢＭＥＣ表达ＩＣＡＭ－１;在４－１６ｈ范围内时间依赖性诱导ＲＢＭＥＣ表达ＩＣＡＭ－１。Ｈ７和ＰＴＸ分别在５－５０μｍｏｌ．Ｌ＾     

Menadione reduced doxorubicin resistance in Ehrlich ascites carcinoma cells in vitro

目的：研究维生素Ｋ３（Ｍｅｎ）降低ＥＡＣ／Ｄｏｘ细胞对阿霉素（Ｄｏｘ）的抗药性．方法：测定谷胱甘肽（ＧＳＨ），细胞膜流动性及谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）活性．细胞存活力以甲基四唑蓝法测定．结果：ＥＡＣ／Ｄｏｘ细胞ＧＳＨ，ＧＳＴ及膜流动性均较ＥＡＣ细胞增加（Ｐ＜００１）．Ｄｏｘ对ＥＡＣ／Ｄｏｘ细胞ＩＣ５０为２２３（１５８－２８８）ｍｇ·Ｌ－１．Ｍｅｎ５或１０ｍｇ·Ｌ－１可降低ＥＡＣ／Ｄｏｘ细胞ＧＳＨ（Ｐ＜００１），１ｍｇ·Ｌ－１对ＧＳＨ无影响（Ｐ＞００５），但可降低细胞膜流动性（Ｐ＜００５）．Ｍｅｎ１，５或１０ｍｇ·Ｌ－１可使ＤｏｘＩＣ５０降低到９．６（７８－１１３），６０（２８－９２），或５３（３９－６７）ｍｇ·Ｌ－１（Ｐ＜００１）．结论：Ｍｅｎ在体外降低ＥＡＣ／Ｄｏｘ细胞对Ｄｏｘ抗药性与对ＧＳＨ的耗竭有关．     

洛之达治疗高脂血症的临床观察

高血脂症３４例，服洛之达２０ｍｇ，ｑｎ，疗程８周，服药８周后与服药前比较，血清ＬＤＬ－Ｃ，（ＴＣ－ＨＤＬ－Ｃ）／ＨＤＬ－Ｃ及ＡｐｏＢ分别下降２６．８％，２４．１％及２２．２％，ＴＣ下降１９．５％，ＴＧ下降１４．５％。血清ＨＤＬ－Ｃ，ＡｐｏＩＡＩ及ＡｐｏｉＡＩ／ＡｐｏＢ分别上升６．７％，１０．１％及４０．０％。     

虎杖苷对CCl_4损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的研究虎杖苷（ＰＤ）对ＣＣｌ４损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法原位灌流法分离大鼠肝细胞，培养２４ｈ后加入ＰＤ，同时造成ＣＣｌ４损伤，分别于损伤后６，１２，２４和４８ｈ测培养液中谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、丙二醛（ＭＤＡ）和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）活性，４８ｈ后用ＭＴＴ比色法测肝细胞存活率。结果ＰＤ１×１０－７～１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１能不同程度地抑制ＡＬＴ和ＭＤＡ的上升，提高ＧＳＨ水平，显著提高细胞存活率，以１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１效果最好。结论ＰＤ１×１０－７～１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１能有效保护ＣＣｌ４造成的原代培养大鼠肝细胞损伤     

Effects of heparin on growth factor-induced mitogenic and proliferative responses of rat pulmonary a

目的：探讨肝素是否能抑制生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）分裂和增殖．方法：应用含１０％ＦＢＳ的Ｍ１９９培养液培养大鼠ＰＡＳＭＣ．细胞分裂及细胞增殖分别用［ｍｅｔｈｙｌ３Ｈ］ＴｄＲ和细胞计数监测．结果：ＦＢＳ（１０％），以及ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），或ＩＬ１α（１００ｎｇ·Ｌ－１）联合应用均能增加大鼠ＰＡＳＭＣ分裂．肝素（１００ｍｇ·Ｌ－１）抑制１０％ＦＢＳ诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ增殖（２８％±６％）和胸腺嘧啶摄取反应（２７％±７％），抑制ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），或ＩＬ１α（１００ｎｇ·Ｌ－１）联用诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ增殖（２５％±６％，２７％±７％，２０％±４％），以及胸腺嘧啶摄取反应（２３％±７％，２６％±６％，２０％±６％）．结论：肝素抑制生长因子诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ的分裂与增殖．     

Antisense oligodeoxynucleotides downregulated c sis mRNA expression to inhibit proliferation of vascular smooth muscle cells 1

目的：研究ｃｓｉｓ反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对ｃｓｉｓ表达及血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖抑制效应．方法：用合成ｃｓｉｓ正、反义ＯＤＮ培养ＶＳＭＣ;用液闪测定［３Ｈ］ＴｄＲ掺入并细胞计数,观察细胞增殖;用逆转录ＰＣＲ,评价ｃｓｉｓ表达．结果：ｃｓｉｓ反义ＯＤＮ２,４,６,８,１０μｍｏｌ·Ｌ－１抑制ＶＳＭＣ（１０３％±０７％,２２６％±０９％,３１０％±１１％,３５４％±０９％,４３３％±１２％）和降低［３Ｈ］ＴｄＲ掺入（６８％±０３％,９７％±０７％,２９０％±０６％,３２０％±０７％,５０６％±１３％）呈有剂量依赖性．反义ＯＤＮ１０μｍｏｌ·Ｌ－１培养细胞４ｄ,最大抑制率达６０３％±１０％,［３Ｈ］ＴｄＲ掺入降低５６３％±０９％,ｃｓｉｓｍＲＮＡ表达明显降低;而正义ｃｓｉｓＯＤＮ对ＶＳＭＣ无抑制,细胞数和［３Ｈ］ＴｄＲ掺入及ｃｓｉｓｍＲＮＡ水平与对照无差异．结论：ｃｓｉｓ反义ＯＤＮ明显下调ｃｓｉｓｍＲＮＡ表达,显著抑制ＶＳＭＣ增殖     

Inhibitory effects of α-methyl-4-(3-oxo-2H-1,2-benzoisoselenazol-2-yl)benzeneacetic acid on Cu~(2+) and Fe~(2+) induced oxidative modification of human low density lipoprotein

为观察α－甲基－４－（３－氧－２Ｈ－１，２－苯并异硒唑－２－基）苯乙酸（ＭＢＢＡ）对Ｃｕ２＋及Ｆｅ２＋氧化修饰低密度脂蛋白（ＬＤＬ）的保护作用及其作用机理，采用分光光度法测定ＬＤＬ中丙二醛（ＭＤＡ）和共轭双烯（ＣＤ）的产生量．ＭＢＢＡ（０．２－２μｍｏｌ·Ｌ－１）能以剂量依赖性抑制Ｃｕ２＋及Ｆｅ２＋诱导的ＭＤＡ和ＣＤ生成．２μｍｏｌ·Ｌ－１的ＭＢＢＡ对Ｃｕ２＋诱导ＬＤＬ产生ＭＤＡ和ＣＤ的抑制率分别为８９．７％和６０．３％．０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＧＳＨ对ＬＤＬ产生ＭＤＡ无影响，但能显著增强ＭＢＢＡ对ＭＤＡ生成的抑制作用．上述结果表明ＭＢＢＡ对ＬＤＬ氧化修饰的抑制作用可能依赖于其ＧＳＨ－Ｐｘ样活性的作用和（或）直接还原脂质氢过氧化物的作用．     

重组人白细胞介素21表达条件的探讨

目的探讨重组人白细胞介素21工程菌诱导表达的最佳条件。方法用摇瓶发酵的方法探索不同诱导条件(诱导温度、诱导时间、接种量I、PTG浓度等)对目的蛋白质表达的影响。结果该工程菌表达目的蛋白质的最佳温度是42℃;高密度接种更有利于目的蛋白质的表达。结论建立了BL21/pET-30a(+)-IL21工程菌最佳诱导表达条件,为重组人白细胞介素21的制备奠定了基础。     

重组人源白介素-1β发酵条件的优化及其产品的纯化

目的初步建立重组人源IL-1β巴斯德毕赤酵母的培养体系;进一步优化大规模培养重组人源IL-1β巴斯德毕赤酵母的条件;探讨大规模纯化重组人源IL-1β巴斯德毕赤酵母表达产物的条件;鉴定酵母表达产物及纯化样品。方法在菌体湿重达190g.L-1左右时开始甲醇诱导表达;选用了SP Sepharose XL阳离子交换层析和反相疏水柱层析进行纯化。结果在pH4.5的含0.5%蛋白胨的FM21培养基中发酵时,放罐时间在30h较为适宜;经过纯化蛋白纯度即可达95%以上。结论最终经过鉴定,表达和纯化的样品就是我们想要得到的IL-1β。     

重组人白细胞介素-6包涵体精制工艺研究

目的 建立重组人白细胞介素-6(recombinant human interleukin-6,rhIL-6)包涵体精制工艺,获取高纯度的包涵体蛋白.方法 采用超声破碎法和生物酶解法破碎细胞;摸索洗涤缓冲液中尿素的适当浓度,经多次洗涤获取高纯度的包涵体蛋白.结果 成功建立了rhIL-6包涵体蛋白的精制工艺,其中尿素浓度为2.0 mol/L,溶菌酶浓度达到0.8 mg/g菌体.包涵体蛋白洗涤后纯度达到90%以上.结论 建立合理的精制工艺,包涵体蛋白纯度达到90%以上.     

重组复合干扰素摇瓶发酵条件的研究

目的对表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coli DH5α的摇瓶发酵条件进行研究。方法利用单因素比较实验及正交试验等方法考查工程菌摇瓶发酵条件,探讨发酵条件对工程菌的生长和con-IFN表达的影响。结果优化后条件为培养基含玉米粉6%、牛肉膏5.5%、谷氨酸钠0.5%,发酵液初始pH 7.2,30℃培养7 h后升温至42℃诱导表达6 h,转速220r/min,装样量10%,接种量2%。结论优化后平均蛋白质表达量达到36.39%,和LB培养基相比,目的蛋白质表达量提高了4.8%,为工程菌的大规模发酵提供参考。     

人乳头状瘤病毒表达在尖锐湿疣诊断中的应用研究

目的　研究人乳头状瘤病毒 (HPV)在尖锐湿疣 (CA)中的表达 ,并探讨 HPV表达在 CA诊断中的价值。方法　 1对 2 0 0例标本行甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色。 2采用 SABC免疫组织化学法 ,一抗为兔抗 HPV抗体 ,检测 CA中 HPV的表达。结果　 1HE染色 2 0 0例 CA中 ,具有典型 CA组织结构者 180例、具有不典型 CA组织结构者 2 0例。其中 1例伴有癌变。 2用 HPV抗体检测 2 0 0例 CA标本 ,阳性为 190例 ,占 95 %,其中女性 180例中阳性 174例 ,占 96 .6 %;男性 2 0例中阳性 16例 ,占 80 %。另外在典型组织学结构的 CA中 ,有2例 HPV阴性 ,其余 8例 HPV阴性均在不典型组织学结构中。结论　 CA是由 HPV所引起 ,应依据 HPV免疫组织化学法或原位杂交法的阳性表达做出病理诊断。 CA要与假性湿疣、寻常疣、乳头状瘤相鉴别。 CA可能癌变。     

重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白基因工程菌高密度发酵及分离纯化

目的研究重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白(Tα1-HSA)基因工程菌在30 L发酵罐中高密度发酵表达Tα1-HSA融合蛋白的发酵工艺及产物的分离纯化方法。方法采用两步发酵法进行重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌的高密度发酵。发酵液经超滤浓缩,阴离子交换色谱,亲和色谱,凝胶过滤色谱等步骤进行分离纯化。结果发酵结束后,菌体细胞湿重达到350 g/L,发酵液中蛋白产量达到2.0 g/L。发酵液经分离纯化后获得了纯度较高的重组Tα1-HSA融合蛋白,HPLC分析纯度达97.5%。结论重组毕赤酵母Tα1-HSA基因工程菌高密度发酵的成功及分离纯化方法的建立为Tα1-HSA的进一步研究和开发奠定了基础。     

亲和层析介质性能分析及其在单抗纯化中的应用

对6种商品化蛋白A亲和层析介质进行了性能分析,包括动态载量、洗脱条件等,并对含有单抗药物Mab-HS006的实际料液进行了捕获分离,对宿主细胞蛋白及蛋白A的残留进行了分析。结果表明,Prosep Ultra Plus和Mabselect SuRe亲和介质的载量最高,而Protein A Sepharose CL-4B和r-Protein A Sepharose的洗脱条件最温和。一步层析捕获分离Mab-HS006单抗的结果表明,各种介质的纯度均可达90%以上,Prosep Ultra Plus的宿主细胞蛋白残留最高,Mabselect SuRe蛋白A的脱落最低。     

rhIL-6表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

通过PCR技术扩增出约0.5kb的IL-6基因片段,并且采用含有P_RP_L串联启动子及SD区的高效表达载体pBV_220,经DNA重组技术,成功地构建了rhIL-6的基因工程菌E.coli DH_5a/pBV_220IL-6。所表达的IL-6经SDS-PAGE证明约17.5kD,表达量占菌体总蛋白的30%以上。以IL-6依赖细胞株MH_60·BSF_2检测,表达产物粗提物1:100复性后效价可达到5×10~8u/ml,每升发酵菌液可获10~12u IL-6粗品。     

重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨

目的研究表达重组人白细胞介素15(rhIL-15)工程菌高密度发酵的条件。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白质表达的因素进行优化。结果以甘油为碳源可明显抑制有害物质乙酸的积累,提高工程菌的表达量和收获率。高密度发酵明显提高了目的蛋白质的表达量和工程菌的产量。结论该发酵工艺大大提高了rhIL-15工程菌的产量和表达水平,为rhIL-15的规模化生产打下了基础。     

重组人白细胞介素12的纯化与鉴定

目的探索重组人白细胞介素12(rhIL-12)的纯化与鉴定方法。方法采用Millipore超滤浓缩系统对含rhIL-12的无血清培养上清进行浓缩,用阴离子交换色谱柱,阳离子交换色谱柱和尺寸排阻色谱柱纯化出rhIL-12;并对rhIL-12的纯度、活性及氨基酸序列进行检测。结果纯化后产物经Western blot鉴定(P35、P40)为rhIL-12,毛细管电泳法测得其纯度在98%以上;生物学活性达8.0×106IU/mg,且氨基酸序列与已报道的序列相一致。结论建立了获得高纯度、高生物活性的rhIL-12的纯化与鉴定方法。