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目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU.mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU.mg-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。 相似文献
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摘 要 目的:建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇血凝酶的方法。方法: 先后采用分子筛层析法、离子交换色谱法、肝素 Sepharose亲和层析法从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一种具有有凝血活性的酶成分,并采用SDS-Page法、RP-HPLC法测定其纯度,凝胶电泳法(SDS-Page)考察其对牛纤维蛋白原的作用方式、高效空间排阻色谱法(HPSEC)测定其相对分子质量,等电聚焦电泳分析法(IEF)测定其等电点,Lowry法测定其蛋白浓度。结果: 从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化了一种凝血酶成分,SDS-Page显示为一条带,HPLC得到单一的色谱峰,该酶只作用于纤维蛋白原的α链,其相对分子质量为32.2 kD,等电点为5.21,此酶具有体外凝血活性。结论:该方法可用于长白山白眉蝮蛇血凝酶的分离纯化。 相似文献
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豆豉溶栓酶的分离纯化及其体外溶栓作用 总被引:66,自引:4,他引:62
目的:从豆鼓中分离具有纤溶活性的酶,并对其体外溶栓作用作初步研究。方法:采用SephadexG100和 Sephadex G50柱层析法纯化该酶,以纤维蛋白平板法测定该酶的纤溶活性;两点法测定该酶对发色底物H2251的水解活性;体外试管法测定该酶对天然人血凝块的溶解作用。结果:经过两次柱层析得到在PAGE中呈单一区带的纤溶酶。SDS-PAGE初步测定其分子量为 36 000。该酶在平板中可直接溶解纤维蛋白,对S-2251的水解活力与牛纤溶酶相当,并能溶解天然人血凝块。结论:豆鼓中存在一种具有较强纤溶活性的溶栓酶,值得进一步深入研究。 相似文献
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目的:尖吻蝮蛇(DA)和蝮蛇(AH)蛇毒凝血酶样酶(TLE)对促凝作用的协同效果。 方法:柱层析分离纯化TLE并进行体外凝血试验。 结果:一个凝血单位DATLE为2.7μg,AHTLE为304.4μg。它们单独作用形成的凝块很松脆,合用时凝血时间缩短,凝块的尿素溶解性下降。再配伍阈下浓度的凝血酶或生理浓度的Ca^2+,凝血时间进一步缩短,凝块能够回缩,不溶于尿素5mol·L^-1,对纤溶酶降解的抵 相似文献
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蛇毒降纤酶多克隆抗体的制备及其某些性质 总被引:4,自引:0,他引:4
为制备长白山白眉蝮蛇蛇毒降纤酶的多克隆抗体 ,以期获得酶免疫测定所需的反应试剂 ,供药剂学的研究应用。经免疫兔获得高效价的抗长白山白眉蝮蛇蛇毒降纤酶的抗血清 ,以环状沉淀反应、琼脂免疫双扩散 ,以及酶联免疫吸附法 ,验证了产生的抗体。免疫双扩散及ELISA测定的结果表明 ,长白山白眉蝮蛇蛇毒降纤酶与日本克栓酶有着不同的抗原决定簇结构。 3只兔的抗血清以 1∶7 2万的倍数稀释时 ,其在ELISA测定中的光密度 (OD4 90nm)仍比空白对照高出 0 2以上 ,具有较高效价 ;该抗体与精制蝮蛇抗栓酶有一定的交叉反应 (比率为 0 0 2 4) ,与江浙蝮蛇蛇毒粗品及日本克栓酶间的交叉反应微小 (比率小于 0 0 0 1) ,具有较好特异性 相似文献
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目的从黑眉蝮蛇蛇毒中纯化出无出血毒的纤溶酶。方法用DEAE-Sepharose FF阴离子交换树脂、CM-sepharose FF阳离子交换树脂和Sephacryl S-100凝胶过滤树脂三步分离方法,从黑眉蝮蛇蛇毒中纯化出一种纤溶酶活性成分。结果经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为单一蛋白质,相对分子质量为31 800,小鼠皮下注射无出血反应。该酶与纤维蛋白原保温15 min能迅速水解Bβ(β)链,随后缓慢水解Aα(α)链,而对γ(γ-γ)链无影响。结论此工艺可以快速纯化黑眉蝮蛇蛇毒纤溶酶。 相似文献
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可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)纤溶酶PFE的分离纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的从可口革囊星虫中分离纯化纤溶酶,并初步研究其酶学性质。方法实验以纤维蛋白平板法检测纤溶活性,采用匀浆、抽提离心、G-25脱盐、DEAE梯度洗脱等方法从可口革囊星虫中分离纯化出纤溶酶PFE,并进一步研究pH、温度、金属离子及抑制剂对该酶活性的影响。结果分离纯化得到纤溶酶PFE,SDS-PAGE法测得相对分子质量为35kDa左右。此外,其酶学性质研究结果表明:PFE的最适反应pH为7.4,酶活力在pH6.6~9.0时相对稳定;PFE在20~40℃条件下,酶活力保持相对稳定。Fe3+对酶活性有强烈的抑制作用,Ca2+、Mg2+、Fe2+、K+、EDTA和β-巯基乙醇对酶活性均具有一定的抑制作用。结论可口革囊星虫中存在纤溶酶PFE,此酶可直接降解纤维蛋白,具有重要的临床开发价值。 相似文献
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蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究 总被引:2,自引:2,他引:0
目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6~ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化研究 总被引:1,自引:2,他引:1
目的从赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)中分离纯化出一种相对分子质量(Mr)较小的纤维蛋白溶解组分———蚯蚓纤溶酶(EFE),为其注射剂的研制开发打下基础。方法采用盐析、透析、凝胶过滤色谱、离子交换色谱等方法分离纯化EFE,用SDS-PAGE对纯化的活性组分进行Mr测定,用酶谱分析方法初步探讨蚯蚓中存在的其它纤溶酶活性组分。结果分离纯化得到了EFE单一组分,经SDS-PAGE EFE呈单一条带,Mr约为25 000。经酶谱分析发现纤溶酶活性组分Mr分布在25 000~50 000之间。结论反复使用色谱技术可分离纯化EFE,并得到单一组分。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究 总被引:11,自引:2,他引:11
目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;体内抗栓活性比尿激酶作用显著 相似文献
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