两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＰＳ）或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：①不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响：实验组三组细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ＜０．０１）；其中扩增倍数最高者为ＭＰＳ组，与ＣＤ３组相比，Ｐ＜０．０５。②不同免疫调节剂诱导的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性比较：在培养一周时，实验组三组对ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性均高于对照组，以ＣＤ３组及ＭＰＳ组杀伤活性最高，其杀伤活性均为５５．５％；于培养第二周，ＣＤ３组杀伤ＨＥＰ－２细胞活性仍较高，其他实验组细胞杀伤活性均明显下降。结论：免疫调节剂ＭＰＳ和ＣＤ３单克隆抗体均可通过增强ＬＡＫ细胞体外增殖和杀瘤活性而提高肿瘤过继免疫治疗效果。     

分枝杆菌多糖促人LAK细胞增殖及对喉癌HEP—细胞杀伤活…

为探讨分枝杆菌多糖在体外对ＬＡＫ细胞活性的影响，以提高ＬＡＫ细胞杀瘤活性，减少ＩＬ－２用量和毒副作用，通过ＭＴＴ法测定不同浓度ＩＬ－２，不同浓度ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞促增殖能力的影响；以细胞计数法测定不同浓度ＩＬ－２，ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞扩增倍数的影响；应用乳酸脱氢酶法测定不同条件刺激的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性的作用。     

两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：（１）不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响。实验组三且细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ〈０     

喉癌患者不同来源淋巴细胞毒性的对比研究

应用细胞生物学方法，从１２例喉癌患者分离的外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）、肿瘤引流淋巴结淋巴细胞（ＴｄＬＮＬ）和肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）在体外经重组务细胞介素２（ｒＩＬ－２）诱导５－７天后，成为具有杀瘤活性的淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）或激活的ＴＩＬ。采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，检查它们对Ｋ５６２靶细胞的杀伤能力。实验结果显示：加入ｒＩＬ－２栖外培养的ＰＢＬ、ＴＤＬＮＬ和ＴＩＬ细胞体积增大，呈不     

Nd-YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL-2R、IL-2水平及NK活性的影响

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）、白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞（ＮＫ）活性分别进行测定。结果表明鼻咽癌患者在接受激光光动力学治疗后ＳＩＬ－２Ｒ水平呈明显下降（Ｐ＜０．０００５），而ＩＬ－２水平和ＮＫ活性显著上升（Ｐ＜０．０００５）。结果提示激光光动力学治疗对恢复鼻咽癌患者免疫功能起促进作用。     

肿瘤过继免疫疗法新进展

ＬＡＫ／ＩＬ－２疗法是目前临床上最常应用的肿瘤过继免疫疗法，ＴＩＬ／ＩＬ－２疗法也在一定范围内得到应用。但这两种方法都尚存在一些不足。ＣＤ３ＡＫ细胞是一种集ＬＡＫ，ＴＩＬ优点于一身的新型肿瘤免疫杀伤细胞。基础试验已表明它具有细胞前体来源丰富，扩增及杀伤力强，ＩＬ－２依赖性低等诸多优点，不失为一种安全可靠，经济有效的免疫细胞。     

CD3A细胞体内,外抗喉鳞癌细胞株（Hep—2）的实验研究

为探索理理想的过继免疫治疗手段，对由健康人外周血分离、经ＣＤ３单克隆抗体与白细胞介素－２共同诱导激活的ＣＤ３Ａ细胞的体外扩增情况及其杀２务喉癌细胞Ｈｅｐ－２的活性水平进行了观察和研究，并与ＬＡＫ细胞作了比较。研究发现，ＣＤ３ＡＫ细胞除具有体外扩增能力强，存活时间长、ＩＬ－２依赖性等特点外，其体内、外抗喉癌作用亦十分显著。培养早期，ＣＤ３ＡＫ细胞的抗瘤活性与常规培养的ＬＡＫ细胞相似，延长培养时间至７     

γ—干扰素对喉癌细胞株HEP—2增殖活性的影响

用单克隆抗体Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ），以链霉菌素－生物素技术（ＬＳＡＢ）检测喉癌细胞株ＨＥＰ－２增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达。人重组γ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ）抑制ＰＣＮＡ表达（即抗增殖活性）强弱与其剂量有关；雌激素对ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ抗增殖作用无影响。提示：ｒｈｕ－ＩＦＮ－γ对喉癌细胞株ＨＥＰ－２有抗增殖作用，因而在喉癌的治疗中具有应用价值的。     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ－３染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下、加入高Ｋ＾＋液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ＾２＋ｉ的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ＾２＋存在时,７５ｎｍｏｌ／ＬＫ＾     

人LAK细胞在体外和裸鼠体内抗头颈部肿瘤细胞的研究

报道人ＬＡＫ细胞对头颈疗肿瘤细胞的影响。结果发现：①ＬＡＫ细胞，在体外对人喉鳞癌细胞系ＨＥＰ－２、人鼻鳞癌细胞系ＣＮＥ－２和人口腔鳞癌细胞系ＫＢ均表现出明显的杀伤活性，与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。②ＬＡＫ细胞在移植瘤裸鼠体内同样具有很强的抑瘤作用。本实验结果提示临床上运用ＬＡＫ细胞治疗头颈部肿瘤可能是一种较新的有效方法。     

血管内皮生长因子及其受体对喉癌细胞生长的影响

为探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在喉癌中的作用及可能的作用方式，用抗ＶＥＧＦ抗体及其受体ｆｌｔ抗体通过微波处理暴露抗原后，进行标准化的ＥｌｉｔｅＡＢＣ染色；将不同浓度的抗ＶＥＧＦ及抗ｆｌｔ抗体分别加入ＨＥＰ－２细胞的培养液中，培养５ｄ后测ＨＥＰ－２细胞的活性（ＭＴＴ法）。结果：免疫组化染色显示ＶＥＧＦ及其受体ｆｌｔ主要在喉癌细胞和血管内皮细胞表达；不同浓度的ＶＥＧＦ抗体及抗ｆｌｔ抗体对ＨＥＰ－２     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP 的影响

目的　探讨离体前庭毛细胞（ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ ｈａｉｒｃｅｌｌｓ,ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法　采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６ μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ３ 染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ,ＬＳＣＭ） 记录静息状态下、加入高Ｋ＋ 液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ２＋ ］ｉ 的荧光强度相对值的变化。结果　细胞外有Ｃａ２＋ 存在时,７５ ｍｍｏｌ／ＬＫ＋ 可引起所观察５ 个ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ均升高,细胞体和皮板区的［Ｃａ２＋］ｉ 变化一致;在细胞外无Ｃａ２＋ 的情况下,所观察的５ 个ＶＨＣ 中,高Ｋ＋ 并不能引起细胞内［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高。在细胞外存在Ｃａ２ ＋ 时,不同浓度（１ ．０ ｍｍｏｌ／Ｌ,０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ）ＡＴＰ可引起绝大多数（１８／１９）ＶＨＣ 内［Ｃａ２＋ ］ｉ 迅速升高,达高峰后下降,恢复至静息时的水平;细胞外无Ｃａ２ ＋ 时,ＡＴＰ仅引起极少数（１／１０）ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ 升高;而对照组加入与ＡＴＰ等体积的Ｈａｎｋ 液,不引起ＶＨＣ 内［Ｃａ     

分泌性中耳炎患儿腺样体免疫状态的探讨

本文通过体外细胞培养的方法，研究了１０例分泌性中耳炎（ＯＭＥ）患儿腺样体的免疫状态，测定体外腺样体淋巴细胞自发性ＤＮＡ合成（ＳＤＳ）及在植物血凝素（ＰＨＡ）刺激下可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）释放，并以阻塞性睡眠性呼吸暂停综合征患儿作对照。结果，ＯＭＥ患儿腺样体淋巴细胞ＳＤＳ（１７３３５±７０１２ｃｐｍ）较对照组（９３８２±４５５４ｃｐｍ）明显增高（Ｐ＜０．０５），ｓＩＬ－２Ｒ的释放（８６４±２４１ｕ／ｍｌ）也较对照组（４３８±１４５ｕ／ｍｌ）增高（Ｐ＜０．０５），说明ＯＭＥ患儿腺样体淋巴细胞活性较高，可能导致局部免疫异常而引起ＯＭＥ。     

Myc基因家族在喉癌中的异常扩增及其意义

目的探讨Ｍｙｃ基因家族在喉癌中的异常扩增及其临床意义。方法应用ＰＣＲ非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳激光扫描技术检测了３２例喉癌组织、１２例癌旁组织和６例正常组织。结果正常组织细胞Ｍｙｃ基因无扩增，３２例喉癌中４７％（１５／３２）有Ｃｍｙｃ和Ｌｍｙｃ扩增，４１％（１３／３２）有Ｎｍｙｃ基因扩增。Ｍｙｃ基因扩增率与年龄、性别、喉癌临床分期及分化程度无关（Ｐ＞０．０５），但有淋巴结转移的患者的Ｎｍｙｃ扩增率明显高于无淋巴结转移者（Ｐ＜０．０１）。结论Ｍｙｃ基因３个成员异常扩增是喉癌发生的原因之一，Ｎｍｙｃ扩增在喉癌淋巴结转移过程中可能起正性调控作用。     

新型平阳霉素杀伤喉癌细胞系Hep—2细胞的体外实验研究

采用两种方法观察平阳霉素（ＰＹＭ）对喉癌细胞系Ｈｅｐ－２的杀伤作用，为应用ＰＹＭ治疗喉癌提供实验依据。①ＭＴＴ比色法：结果随ＰＹＭ浓度增加，ＰＹＭ深度增加，ＰＹＭ对Ｈｅｐ－２细胞增殖活性抑制作用增强，其ＩＣ５０值为３５μｇ／ｍｌ；②活细胞计数测得ＰＹＭ深度在３０μｇ／ｍｌ时Ｈｅｐ－２细胞存活率为４６％。同时，对ＰＹＭ诱导Ｈｅｐ－２细胞的凋亡进行了初步观察，发现ＰＹＭ可在一定程度上引起Ｈｅｐ－２细胞     

Myc基因家族在喉癌中的异常扩增及其意义

目的 探讨Ｍｙｃ基因家族在喉癌中的异常扩增及其临床意义。方法 应用ＰＣＲ－非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳－激光扫描技术检测了３２例喉癌组织、１２例癌旁组织和６例正常组织。结果 正常组织细胞Ｍｙｃ基因无扩增，３２例喉癌中４７％（１５／３２）有Ｃ－ｍｙｃ和Ｌ－ｍｙｃ扩增，４１％（１３／３２）有Ｎ－ｍｙｃ基因扩增。Ｍｙｃ基因扩增率与年龄、性别、喉癌临床分期及分化程度无关（Ｐ〉０．０５），但有淋巴结转移的患者的     

Nd—YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL…

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ），白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞活性分别进行测定。     

水杨酸钠豚鼠耳蜗单离外毛细胸游离钙浓度影？…

目的 观察水杨酸钠对豚鼠耳蜗外毛细胞（ｏｕｔｅｒ ｈａｉｒ ｃｅｌｌｓ，ＯＨＣ）内游离钙浓度「Ｃａ＾２＋」ｉ的影响，并对钙通道调控药物的拮抗作用进行观察，以深入探讨水杨酸钠耳毒性的分子生物学机制。方法 豚鼠全身麻醉后断头活杀，酶－机械法分离获得耳蜗单离ＯＨＣ。１０ｕｍｏｌ／Ｌ的Ｅｌｕｏ－３／ＡＭ负载３０ｍｉｎ后用ＡＣＡＳＵｌｔｉｍａ型激光扫描共聚焦显微镜观察不同药物灌流下ＯＨＣ「Ｃａ＾２＋」ｉ的变     

P物质对变应性鼻炎动物模型鼻粘膜上皮短路电流的影响

目的观察Ｐ物质（ＳＰ）作用于变应性鼻炎动物模型鼻粘膜引起的离子分泌改变导致的上皮表面短路电流（Ｓｈｏｒｔ－ｃｉｒｃｕｉｔｃｕｒｒｅｎｔ，Ｉｓｃ）的变化。方法以鸡蛋清蛋白致敏大鼠后，用Ｕｓｓ－ｉｎｇ室技术测定鼻粘膜上皮表面短路电流。并观察神经激肽受体（ＮＫ１）拮抗剂ＣＰ９６３４５、组胺Ｈ１受体拮抗剂吡拉明、Ｈ２受体拮抗剂雷尼替丁和河豚毒素对ＳＰ的阻断作用。结果经ＳＰ刺激，致敏大鼠鼻粘膜表面Ｉｓｃ显著增高。经四种物质预处理均能显著阻断ＳＰ引起的Ｉｓｃ变化。结论ＳＰ经感觉神经末梢释放后，可引起上皮表面离子电位变化、上皮通透性增高等一系列鼻粘膜病理变化。     

喉癌病人血清中白细胞介素－2受体和腺苷脱氢酶检测

本文应用双抗体夹心法检测喉癌病人血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ），同时还应用次氯酸钠测氨法检测血清中腺苷脱氢酶（ＡＤＡ）活性，检测结果表明，喉癌病人ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。差异非常显著，而腺苷脱氢酶活性则低于对照组（Ｐ＜０．０１），尤其是ｓＩＬ２Ｒ水平与喉癌分型、分期有关。