精子蛋白质组的研究进展

蛋白质组学及其技术是新世纪最具有价值的生命科学研究手段之一。它标志着生命科学已经进入了后基因组时代。双向凝胶电泳和质谱分析方法在蛋白质组学中的成功运用,创造出更受研究者欢迎的新研究策略,并提高了研究者探索未知领域的效率。将其运用在精子蛋白质的研究后,已经取得了不少令人惊喜的成果。本文在简要概括蛋白质组及蛋白质组学的相关信息后,着重介绍近年全精子蛋白的研究情况,获能相关精子蛋白,精卵结合相关精子蛋白,以及蛋白质组学及技术在精子免疫方面的研究与应用。     

化学修饰蛋白质类尿毒症毒素的检测方法与评价

慢性肾衰竭时，化学修饰的蛋白质，包括晚期糖基化终产物(AGE)修饰的蛋白质、氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)和晚期氧化蛋白产物(AOPP)等，在循环和组织中蓄积。已证实这些被修饰的蛋白参与慢性肾衰竭并发症的形成，如透析相关性淀粉样变、动脉粥样硬化、神经系统和免疫功能异常等。因此，最近有学者提出更加广泛的“尿毒症毒     

人胰液蛋白质组的双向电泳方法初步研究

目的 在已有实验基础上进一步建立优化的用于人胰液差异蛋白质组研究的双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)方法;探讨利用混合胰液进行胰腺疾病的胰液差异蛋白质组学的可行性.方法 通过ERCP术中放置鼻胰管引流收集5例胰腺癌(其中2例手术病理分别为胰腺中分化导管腺癌及导管内乳头状瘤癌变,另外3例经影像学检查结合临床诊断)和6例慢性胰腺炎胰液标本,取其中一例慢性胰腺炎胰液标本,通过改进胰液标本的处理方法、泡胀液的组成和一向等电聚焦条件后进行双向凝胶电泳,并和先前实验条件下的胰液2-DE图谱进行比较分析;同时利用优化后的双向凝胶电泳方法比较单份胰液和同病种混合胰液标本的2-DE图谱.结果 应用优化的2-DE方法,在胰液蛋白质加样量为200 μg时,可见凝胶上约有280个蛋白质点,有较好分辨率,较原条件下电泳图谱有较大改进.单份胰液和同病种混合胰液标本的2-DE图谱有较高程度的相似性(>75%).结论 优化后的胰液2-DE方法切实可行,通过各不同胰腺疾病混合胰液的2-DE图谱差异比较可为胰腺疾病的胰液差异蛋白质组学研究建立良好的基础.     

免疫共沉淀联合质谱法筛选和鉴定TS-CBP86-IV相互作用蛋白

目的利用免疫共沉淀联合质谱分析方法,分别从人精子总蛋白和重组BL21细胞总蛋白中筛选和鉴定与TS-CBP86-IV相互作用的蛋白质。方法用克隆技术得到TS-CBP86-IV c DNA编码基因,构建原核表达载体,导入大肠杆菌BL21中诱导表达纯化重组蛋白;另外收集人精子细胞,提取总蛋白,用特异抗体通过免疫共沉淀法分离出TS-CBP86-IV蛋白复合体,再用质谱鉴定可能与其相互作用的蛋白质。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析筛选到16个与TS-CBP86相互作用的候选蛋白质,数据库检索发现部分蛋白具有相同功能注释,参与精子运动调控。结论免疫共沉淀联合质谱分析方法成功筛选和鉴定出TS-CBP86-IV相互作用蛋白质,为进一步研究TS-CBP86-IV的功能奠定了良好的基础。     

蛋白质分步提取法的建立及在大肠癌蛋白质组研究中的应用

利用等电聚焦/聚丙烯酰胺双向凝胶电泳(2-DE)对蛋白质进行分离是蛋白质研究的核心技术之一。目前常用的蛋白样品制备和提取方法存在一定缺陷,直接影响蛋白质组的分析结果。我们在大肠癌发生、发展的蛋白质组研究中,采用分步提取法,以3种分别适于溶解高、中、低、亲水性蛋白质的裂解液提取正常结直肠黏膜组织和癌组织中的蛋白质组成分,进行双向电泳,提高了蛋白质提取率和2-DE分辨率,现报道如下。 一、材料与方法     

酶制剂在蛋白质加工行业的应用

蛋白质的加工是食品行业中发展最快的领域之一，蛋白质加工的主要用酶是蛋白质水解酶，以蛋白质加工和研究的几个热点领域，如大豆分离蛋白、米蛋白、谷朊蛋白等为例，对酶制剂在蛋白质加工中的应用进展情况进行了回顾并对未来发展进行了展望。     

血管疾病的蛋白质组学研究进展

在后基因组时代,生物学家们的研究重心已经从解释生命的所有遗传信息转移到在整体水平上对生物功能的研究。生物功能的主要体现者是蛋白质,而蛋白质有其自身特有的活动规律,仅仅从基因的角度来研究远远不够。例如蛋白质的修饰加工、转运定位、结构变化、蛋白质与蛋白质的相互作     

复杂生物网络分析的图聚类方法研究进展

基因组学和高通量技术提供了大量生命系统组成元件(如蛋白质)之间相互关系的数据,由这些关系数据构成的复杂生物网络蕴含着丰富的生命系统运行机制的知识,挖掘这些隐蔽的知识成为当前系统生物学的主要任务之一.作为知识发现重要手段的图聚类方法,在复杂生物网络分析上受到了普遍关注,在远同源性探测、蛋白质功能预测、代谢途径发现等方面取得了令人瞩目的结果.同时也注意到,由于生命系统的高度复杂性,其他领域中卓有成效的方法往往在复杂生物网络分析中遇到困难.评述了近年来图聚类算法在复杂生物网络分析中的进展,简要分析了复杂生物网络研究的图聚类途径所面临的主要问题.     

蛋白质间相互作用在门静脉高压症动脉的内皮型一氧化氮合酶过度活化中作用

门静脉高压症(portal hypertension,PHT)是由多种病因引起的临床综合征,以门静脉系统血流动力学紊乱为主要临床表现,其中内脏高动力循环相关的并发症仍是临床常见的难题,如食管胃底静脉曲张等。研究证实,PHT表现为高动力循环,其特点是由全身血管阻力降低引起的心排血量增加以及总的循环血容量增     

小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体蛋白质谱图的建立

目的通过聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,全面展示小鼠成熟卵丘卵母细胞复合体(COC)的蛋白质表达谱。方法采用13cmpH3～10的非线性胶条进行双向凝胶电泳,分离成熟雌鼠COC总蛋白,并作质谱鉴定。结果获得了较高分辨率的小鼠成熟COC蛋白质表达谱图,并对胶上的3个蛋白点进行了质谱鉴定。结论蛋白质组学是全面分析COC蛋白表达的有效手段。成熟COC蛋白质表达谱的建立为研究卵泡发育机理提供了依据。     

脂肪活性检测方法的研究进展

脂肪细胞活性检测方法用于在体外判断脂肪细胞的活性,包括一般细胞活性检查法,和脂肪细胞特异性检验法。我们对常用的脂肪细胞活性检测方法的原理、特性,以及相关应用情况进行综述。     

结直肠癌肝转移蛋白质组表达差异及其意义的研究

目的利用蛋白质组研究技术分离、鉴定结直肠癌肝转移相关蛋白,探讨结直肠癌肝转移分子机制。方法用等电聚焦/SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对比分析结直肠癌原发灶、癌旁肠黏膜和肝转移灶中蛋白质组表达差异,经MALDI-TOF-MS质谱分析、鉴定差异蛋白点,采用Western杂交检测结直肠癌肝转移相关蛋白表达。结果经双向电泳图像对比分析,癌旁肠黏膜组织中蛋白质斑点为(390±28)个,结直肠癌原发灶和肝转移灶中蛋白质斑点分别为(206±22)个和(236±19)个。结直肠癌肝转移灶中蛋白质表达与癌原发灶、癌旁肠黏膜相比差异有显著性意义(t=17.321、t=29.637,P<0.01)。对肝转移灶中一个特异蛋白质点行质谱检测,经Profound检索同源分析,确定该蛋白点相对分子质量为21.25×103,等电点为6.8,与细胞周期蛋白42(Cdc42)同源。Western杂交检测25例结直肠癌标本,癌旁肠黏膜中Cdc42表达检测为阴性。在癌原发灶中Cdc42表达阳性率为16%(4/25)。肝转移灶中检测Cdc42表达阳性率为100%(25/25)。结论结直肠癌肝转移蛋白质组表达差异研究有助于鉴定在肝转移中起重要作用的蛋白质,Cdc42作为结直肠癌肝转移相关蛋白,对癌细胞生物学行为改变有重要影响,可促进肝转移的发生。     

瘢痕疙瘩分泌性卷曲相关蛋白2与骨母细胞特异性因子2的相互作用

目的 验证分泌性卷曲相关蛋白2(SFRP2)与骨母细胞特异性因子2(OSF-2)的相互作用.方法 构建能在哺乳动物细胞中表达带人膜联蛋白(HA)标签的OSF-2融合蛋白重组载体pCMV-HA-OSF-2,经酶切鉴定确认后,与Myc-SFRP2重组真核表达载体pCMV-HA-SFRP2单独或共转染人HK293细胞,利用免疫共沉淀技术及蛋白质印迹法验证OSF-2与SFRP2的相互作用.结果 重组载体经酶切电泳后,显示近800 bp处的条带为酶切后的目的 片段SFRP2编码基因,近2500 bp处的条带为酶切后目的 基因OSF-2.表明pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-OSF-2均构建成功.HK293细胞单独转染pCMV-Myc-SFRP2或pCMV-HA-OSF-2后,未检测到HA-OSF-2的表达;当pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-OSF-2共转染后,经Myc抗体进行免疫沉淀可见HA-OSF-2表达.结论 HA-OSF-2的重组载体能在哺乳动物细胞中表达,HA-OSF-2与SFRP2间存在相互作用.     

梅毒相关免疫学检测方法研究进展

本文简要阐述了梅毒螺旋体的结构特点,感染免疫学,以及梅毒的免疫学检测方法。     

去极化与非去极化肌松药间的相互作用

传统的观点认为去极化与非去极化肌松药间的作用相互拮抗,但在某些情况下两者间可产生增效作用。本文综述临床上三种混合使用去极化与非去极化肌松药情况下两类肌松药之间的相互作用。     

人胆汁蛋白质组双向电泳图谱的建立与初步分析

目的建立人胆汁蛋白质组双向电泳图谱,用于胆汁比较蛋白质组学研究。方法A、B两例胆汁标本分别取自于一例肝门部胆管癌及一例胆总管结石病人。标本经脱盐、脱脂、去除核酸纯化处理后,分别各取350μg以固相pH梯度等电聚焦(IEF)为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE)。应用图像分析软件对银离子染色的2-DE图谱进行图像分析。结果经纯化处理的胆汁样本双向电泳图谱中的各个蛋白质点分离清晰,无明显的横向及纵向拖尾;A、B两例胆汁样本2-DE图谱中分别分离出250和216个蛋白质点。其中仪在A例出现的有187个,仅在B例出现的有153个;A、B两例均出现但表达量存在明显差异的有63个。结论本实验建立了一种较为理想的人胆汁蛋白质纯化制备及双向电泳技术;通过对良、恶性阻塞性黄疸胆汁2-DE图谱的匹配分析发现了大量的差异蛋白质点,为开展胆汁比较蛋白质组学研究筛选胆道疾病相关标志物奠定了前期实验基础。     

HBV表面抗原大蛋白与C53蛋白在肝细胞内的相互作用研究

目的 采用酵母双杂交方法筛选出肝细胞内HBV表面抗原大蛋白(LHBs)的结合蛋白,并验证LHBs与C53蛋白在肝细胞内的相互作用.方法 构建pGBKT7-LHBs作为诱饵质粒,从人肝脏cDNA文库中筛选与其相互作用蛋白的编码基因,发现其中包括C53基因.分别构建pCMV-5a-C53和pACT-C53质粒,采用哺乳动物双杂交及免疫共沉淀的实验方法验证肝癌细胞系HepG2内这两种蛋白之间的相互作用.结果 成功从肝脏cDNA文库筛选出C53蛋白;成功构建了pCMV-5a-C53和pACT-C53质粒,并通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀方法明确了LHBs及C53在肝细胞内的相互作用.结论 肝癌细胞系HepG2中LHBs及C53存在明确的相互作用,为进一步研究二者的相互作用及对相关生物学功能的影响奠定了前期基础.     

结肠癌及其肝转移的蛋白质组学研究进展

蛋白质组学是研究蛋白质的组成和动态变化的一门新兴学科。目前,蛋白质组技术已成为研究肿瘤发生和发展机制及寻找肿瘤标志物的重要工具。现综述蛋白质组学在结肠癌及其肝转移的研究,有望在结肠癌发生机制、早期诊断、新标志物发现和药物治疗靶点,以及肝转移特殊蛋白标志物发现等方面发挥重要作用。     

蛋白质芯片检测少精症患者精浆的临床意义

目的通过蛋白质芯片寻找少精症患者精浆中特异性生物标志物。方法用蛋白质芯片(SELDI-TOF-MS)对20例少精症患者和20例已育正常男性精浆标本进行检测,比较两者间蛋白质谱表达差异。结果在SAX2蛋白质芯片上,少精症患者精浆较正常男性精浆蛋白质谱相比有1处蛋白质峰明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),检测发现其分子量16 751.6Da。结论少精症患者精浆中特异性蛋白质的发现,对探究由少精症引起的男性不育机理及其临床筛查皆具重要意义。