改良的新生大鼠海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法

目的:介绍一种经济实用的海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法.方法:选出生8～10 d的SD乳鼠,分离大脑海马,切成400μm厚的脑片,转至带有Millicel微孔膜插件的培养皿中.分别培养7 d、14 d、20 d和30 d.倒置显微镜观察形态.碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)染色后荧光显微镜下检测脑片活力.充入氮气于不同时相点观察脑片缺氧状况.结果:①培养7 d和14 d的脑片中所有细胞PI染色呈阴性,培养30 d时脑片中部分神经元PI染色阳性,细胞变性坏死.②充入氮气时间越长,海马脑片的死亡细胞越多.③充入氮气1.5 h后正常培养24 h可观察到海马脑片CA1、CA3、DG均出现强荧光显色.结论:脑片存活时间约30d,充入氮气1.5 h可建立稳定的缺氧缺糖模型.     

Bcl-2、Bax蛋白在NRs抗体预处理后缺氧缺糖海马脑片CAl区的表达变化

目的 :探讨盐酸氟桂利嗪 (Flunarizine ,Flu)和N -乙酰半胱氨酸 (N -Acetyloysteine ,NAC)对帕金森病 (ParkinsonDisease ,PD)移植后中脑多巴胺能神经元存活的作用。方法 :用 6-OHDA单侧毁损大鼠中脑腹侧被盖区 (VTA)与黑质致密部 (SNC)建立PD模型。选取 48只PD模型大鼠 ,随机分组 ,第一组 :单纯VM移植组 (n =12 ) ;第二组 :Flu处理组 (n =12 ) ;第三组 :NAC处理组 (n =12 ) ;第四组 :Flu和NAC处理组 (n =12 )。四组又分为移植后 1、7、14天三个时间点 ,将E14天中脑腹侧组织 (VM )细胞悬液经药物处理后植入PD模型鼠尾壳核内 ,分别在 1、7、14天检测PD鼠旋转行为。运用TUNEL法 ,TH组化 ,HE染色来观察移植后不同时程DA神经元的存活情况。移植后一天取 1只 ,沿针道取移植细胞作流式细胞术 (flowcytometry ,FCM )检测。 结果 :移植后 14天其功能改善较显著 (P <0 0 5 ) ;其中药物处理组的大鼠旋转行为较单纯VM移植组明显好转 (P <0 .0 5 )。TH免疫组化显示四组移植后 1、7、14天的THir细胞存活数存在显著性差异 (P <0 0 1) ,而且药物处理组与单纯VM移植组之间也存在显著差异 (P <0 .0 5 ) ,且细胞体积随移植时间延长而增大 ,移植后一天各组的凋亡率为 :单纯VM组 46.11% ,Flu组 2 9.16% ,NAC组 2 6.12 % ,F     

血晶素对缺氧缺糖海马脑片血红素加氧酶-1表达的影响

目的 观察血晶素(hemin)对缺氧缺糖(OGD)海马脑片损伤的保护作用及其对血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达的影响.方法 取新生8～10d SD大鼠海马脑片,培养2周.将脑片分为正常培养对照组(HOTC),缺氧缺糖组(OGD),预加Hemin再缺氧缺糖组(Hemin+OGD),预加HO-1抑制剂锌原卟啉(Znpp)再缺氧缺糖组(Znpp+OGD).应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片HO-1蛋白表达,并观察神经元和星形胶质细胞形态学改变.结果 HO-1在正常海马脑片的神经元和星形胶质细胞中均有弱阳性表达.与对照组比较,OGD组海马已失去正常结构,锥体细胞发生坏死,HO-1蛋白表达增强.与OGD组相比,Hemin+OGD组海马脑片形态基本正常,锥体细胞数较多,HO-1蛋白的表达明显增强.Znpp+OGD组海马结构消失,HO-1蛋白表达明显减弱.结论 血晶素对缺氧缺糖海马脑片损伤有明显的保护作用,其机制可能与其诱导神经元和星形胶质细胞表达HO-1蛋白密切相关.     

海马脑片氧糖剥离模型中血晶素对脑红蛋白表达的影响

目的:观察血晶素(Hemin)对海马脑片氧糖剥离(Oxygen/glucose deprivation,OGD)模型的保护作用及其对脑红蛋E(Neuroglobin,Ngb)表达的影响.方法:取新生8-10d SD大鼠,制备厚约400um海马脑片,培养2周后筛取完好无特异荧光着色的脑片,随机分为3组:正常培养对照组(HOTC),单纯缺氧缺糖组(OGD),预加Hemin再缺氧缺糖组(Hemin+OGD).除HOTC组外,其余各组在5%CO2、95%N2的混合气体中培养1.5 h,其后恢复培养24 h.冰冻连续冠状切片,分别作尼氏染色、Ngb 的免疫组织化学染色.应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片Ngb蛋白表达,并观察神经元形态学改变.结果:OGD组锥体细胞发生坏死,锥体细胞数量明显减少;Hemin+OGD组坏死较前者轻,锥体细胞数较前者多.OGD组海马脑片中形态结构正常的阳性细胞少,多数阳性神经元结构模糊、肿胀,Ngb的表达强于HOTC组,二者相比有显著性差异(尸<0.05)Hemin+OGD组海马脑片中大部分细胞形态结构正常,少数阳性神经元结构模糊、肿胀,Ngb蛋白的表达较HOTC组和OGD组明显增强(P<0.01).结论:血晶素可减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤,其机制可能与其诱导神经元表达Ngb密切相关.     

血晶素对缺氧缺糖海马脑片的保护作用及其分子机制

目的观察血晶素（Hemin）对海马脑片氧糖剥离（OGD）模型的保护作用并探讨其机制。方法取新生8～10dSD大鼠,制备厚约400μm海马脑片,培养2周后筛取完好无特异荧光着色的脑片,分为正常培养对照组（HOTC）、缺氧缺糖组（OGD）、预加Hemin再缺氧缺糖组（Hemin＋0GD）和预加血红素加氧酶-1（Heme oxygenase-1,HO-1）抑制剂锌原卟啉（Znpp）再缺氧缺糖组（Znpp＋OGD）。除HOTC组外,其余各组在5％C02、95％N2的混合气体中培养1．5小时,其后恢复培养24小时。海马脑片冰冻连续冠状切片,应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片脑红蛋白（Neuroglobin,Ngb）和HO-1表达变化,并观察神经元形态学改变。结果海马脑片发生缺氧缺糖时,神经元中Ngb蛋白和HO-1蛋白表达增加,血晶素促进神经元Ngb蛋白和HO-1蛋白表达,并减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤。Znpp抑制神经元Ngb蛋白和HO-1蛋白表达,并加重海马脑片缺糖缺氧性损伤。结论血晶素可减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤,其机制可能通过诱导HO-1表达从而增加神经元Ngb表达发挥作用。     

一种定量评价离体海马脑片缺糖/缺氧损伤的新方法

目的 :建立一种定量评价离体脑片缺糖 /缺氧损伤的简便、快速、灵敏的方法。方法 :离体海马脑片缺糖 /缺氧不同时间后以 2 % 2 ,3,5 -三苯基氯化四氮唑 (TTC)染色 ,用乙醇∶二甲亚砜 (5 0∶ 5 0 )抽提 TTC红色结晶产物 ,分光光度法测定 OD490 值 ,并与 LDH释放率进行比较。结果 :随着缺糖 /缺氧时间的延长 ,TTC染色 (OD490 值 )逐渐下降 ,而 LDH释放率逐渐上升 ,两结果呈负相关 (r=- 0 .933,P<0 .0 1) ,提示脑片缺血性损伤。尼莫地平、地塞米松和氯胺酮可减轻脑片缺血性损伤 ,但 ONO- 10 78无效。结论 :TTC染色法简单易行 ,且客观灵敏 ,可用于离体脑片损伤的评价及药物初筛。     

黄芩苷对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨黄芩苷对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制.方法建立大鼠离体脑片缺氧缺糖和谷氨酸损伤模型,设立对照组、缺氧缺糖(OGD)或谷氨酸(Glu)组、黄芩苷10mg/L和30mg/L组.通过脑片病理切片、HE染色、TTC染色以及乳酸脱氢酶(LDH)测定,评价不同浓度黄芩苷对脑损伤的保护作用.结果不同浓度黄芩苷(10 mg/L和30mg/L)抑制了脑片缺血缺氧或谷氨酸所致的TTC染色吸光度的降低,减少LDH释放并降低缺血缺氧所致皮层神经细胞的病理性损伤.结论黄芩苷对大鼠脑片缺氧缺糖性损伤具有一定的保护作用,作用机制可能与其抑制了兴奋性氨基酸毒性有关.     

盐酸戊乙奎醚对大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片凋亡相关因子表达的影响

目的研究盐酸戊乙奎醚（penehyclidine hydrochloride,PHC）对大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片的保护作用及机制。方法采用大鼠海马脑片缺氧缺糖／复氧复糖模型;分为正常组、缺氧缺糖／复氧复糖（H／R）组、PHC 2μmol／L（PHC2组）、PHC 10μmol／L（PHC10组）、PHC 50μmol／L（PHC 50组）、Sco 50 μmoL／L（Sco50组）,测量各组LDH释放率,免疫组织化学法测定各组海马CA1区Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。结果PHC各组LDH释放率均较H／R组下降,以PHC50组效果最好（P〈0．01）。PHC50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2／Bax比值均较H／R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H／R组降低（P〈0．01）。Sco50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2／Bax比值也较H／R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H／R组降低（P〈0．01）。结论PHC可能通过减少LDH释放和Caspase-3、Bax的表达,增加Bcl-2的表达减轻大鼠缺氧缺糖／复氧复糖海马脑片的损伤。     

大鼠癫痫持续状态中海马神经元bcl-2,bax,p53的表达

目的：采用贝美格腹腔注射制作大鼠急性癫痫持续状态（ＳＥ）模型，观察海马神经元中ｂｃｌ－２，ｂａｘ，ｐ５３的表达。     

大鼠癫癎持续状态中海马神经元bcl-2、bax、p53的表达

目的 :采用贝美格腹腔注射制作大鼠急性癫持续状态 ( SE)模型 ,观察海马神经元中 bcl- 2、bax、p5 3的表达。　方法 :通过将 SD大鼠脑海马切片行 bcl- 2、bax、p5 3的免疫组化染色 ,观察肿瘤相关基因在大鼠 SE模型海马中的作用。　结果 :bcl- 2在正常大鼠海马中不表达 ,发作高峰期在 CA 3区有弱表达 ;bax在正常大鼠海马中弱表达 ,在发作高峰期 CA3区强表达 ;p5 3(突变型 )在正常大鼠海马及 SE模型中均不表达。　结论 :急性癫持续状态可造成海马神经元的凋亡 ,其部位主要位于 CA 3、CA1区 ,而且肿瘤相关基因 bcl- 2、bax在 SE过程中发挥作用 ,而p5 3(突变型 )不发挥作用     

丹参酮对原代大鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察缺氧缺糖对大鼠海马神经元细胞的影响及丹参酮的保护作用。方法取体外培养12天的海马神经元细胞随机分为正常对照组、缺氧缺糖组、丹参酮20μmol／L组、丹参酮40μmol／L组、丹参酮80μmol／L组（后3组缺氧缺糖前24h,加入丹参酮预处理）。缺氧缺糖组、各浓度丹参酮组在缺氧缺糖环境中培养2、4、24及36h后,收集其各个时间点的培养液,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果缺氧缺糖后,缺氧缺糖组各个时间点LDH渗出量明显高于正常对照组,经丹参酮预处理的神经元损伤有不同程度的减轻,各个时间点LDH渗出量明显低于对应的缺氧缺糖组。结论缺氧缺糖可引起海马神经元损伤,丹参酮对海马神经元细胞损伤具有保护作用。     

细胞凋亡相关基因bcl-2与bax在胃癌组织中表达探讨

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在人胃癌组织中蛋白的表达情况及其与胃癌的各种临床病理特征和预后的关系。方法:用免疫组织化学SABC法检测经手术治疗的72例胃癌患者的病理标本,用TUNEL法检测其中的细胞凋亡情况。同时检测13例正常胃组织作为对照。结果:bcl-2蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为36.11%,bax为52.78%,两者与正常胃组织比较差异均有统计学意义(P<0.05和<0.01)。结论:bcl-2和bax蛋白的表达与胃癌的lauren分型、分化程度及淋巴结转移相关,并通过对细胞凋亡的调控参与了胃癌的发生、发展,和预后密切相关。     

喉鳞癌组织中bcl-2和bax蛋白表达的临床意义

目的:探讨基因bcl-2在喉鳞癌中的表达及其与bax的关系,以及在喉癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化法测定110例喉鳞癌标本及20例正常粘膜中bcl-2及bax的表达。结果:正常粘膜几乎不表达bcl-2,喉鳞癌标本中表达率47.3%,和病理分级、淋巴结转移情况相关;bax蛋白在喉鳞癌阳性表达率为66.4%;bcl-2和bax呈负相关。结论:bcl-2与bax关系密切,在与喉癌的发生、发展中起作用,有望作为早期诊断的指标基因治疗靶点。     

大鼠海马脑片长期培养中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达变化

目的 研究在长期培养大鼠海马脑片各区中N-甲基-D-门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚单位NR2A，NR2B表达的变化规律。方法 400μm厚大鼠海马脑片，体外培养1，2，3，4，5周，再作20μm厚冰冻切片，行NR2A，NR2B免疫组织化学反应和图像分析。结果 NR2A，NR2B在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞体均有表达，NR2B还在CA1区锥体细胞顶树突明显着色。1周时，NR2A的表达较弱；4周时升至高峰，在CA3区，NR2B的表达1周时即达高峰；但在CA1区其表达至3周时始达高峰。结论 长期培养大鼠海马脑片各区中NR2A，NR2B的表达有时空变化，且二者的表达模式不同，提示此间NMDA受体的结构和功能可能也有改变。     

烟酰胺对高糖介导胰岛细胞bax及bcl-2表达的影响

目的 探讨烟酰胺对高糖环境下胰岛细胞bax及bel-2蛋白表达的影响。方法 体外培养大鼠胰岛细胞，应用免疫组化方法检测培养液中葡萄糖终浓度为22．2mmol／L及加入烟酰胺后胰岛细胞bax及bcl-2蛋白表达。结果 培养液中葡萄糖终浓度为22．2mmol／L时，胰岛细胞bax表达阳性，bcl-2表达较对照组降低。加入烟酰胺后bax表达降低，bcl-2表达增强。结论 烟酰胺能够上调bcl-2表达，下调bax表达，在高糖介导的胰岛细胞损伤中起一定作用。     

bax、bcl-2在梗阻性黄疸心肌损伤中的表达及意义

目的探讨bax、bcl-2在梗阻性黄疸心肌损伤中的表达及意义。方法健康日本大耳白兔48只，随机分为A、B两组，雌雄各半，A组为胆总管结扎组24只，B组为假手术组24只。建立实验动物模型，将A、B两组再分为3个亚组。所有实验动物均在相同条件下饲养，其中A1、B1组于术后7d取材，A2、B2组于术后14d取材，A3、B3组于术后21d取材。采用原位缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡，采用免疫组化法检测心肌组织bax、bcl-2的表达情况。结果A组动物的心肌组织中可见bcl-2和bax蛋白表达，bax蛋白在梗阻14d达高峰。此后开始下降，而bcl一2蛋白在梗阻21d达高峰；凋亡指数随bax升高而升高，随bcl-2的升高而降低；B组动物bax、bcl一2表达和AI值极低。结论梗阻性黄疸所致的心肌组织病理变化可能与凋亡程序启动有关；bcl-2和bax可能对梗阻性黄疸心肌细胞凋亡的调控起着重要作用。     

褪黑素对大鼠液压脑损伤后NGF、bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的:观察褪黑素对颅脑损伤后受损脑组织神经生长因子(NGF)、bcl-2、bax mRNA表达的影响,探讨褪黑素对创伤性脑损伤的保护作用机制.方法:采用侧方液压打击法制备大鼠颅脑损伤模型,应用原位杂交方法和计算机显微图像分析技术,观察褪黑素(5、10 mg/kg,皮下注射)对大鼠受损脑组织NGF、bcl-2、bax mRNA表达的调节作用.结果:脑损伤后立即给予褪黑素能够增强伤后12 h大鼠受损脑组织NGF和bcl-2 mRNA表达,增强效应与剂量呈正相关;褪黑素对bax mRNA表达无明显影响.结论:褪黑素能够增加液压脑损伤后NGF和bcl-2 mRNA表达而不改变bax mRNA表达,提示褪黑素可能通过提高受损神经细胞修复和抗凋亡能力发挥脑保护作用.     

通脑灵对缺氧条件下培养的神经细胞bcl-2和bax基因表达的影响

目的 :观察通脑灵对缺氧条件下培养的神经细胞 bcl- 2和 bax基因表达的影响。方法 :采用原位杂交检测 bcl- 2 m RNA和 bax m RNA。结果 :通脑灵组 bcl- 2的表达在复氧后 6 h出现 ,2 4h及 48h阳性信号逐渐增强 ,而对照组在复氧 6 h出现 bcl- 2阳性信号 ,但随复氧时间的延长逐渐下降。通脑灵组和对照组 bax的表达均于复氧后6 h出现阳性信号 ,2 4h达高峰 ,48h逐渐下降。结论 :通脑灵的神经保护作用可能部分地与调控缺氧损伤神经细胞内 bcl- 2和 bax基因的表达有关     

子宫颈癌端粒酶活性与bcl-2和bax蛋白表达相关性研究

目的：探讨端粒酶检测在宫颈癌诊断中的作用及其在宫颈癌发生中与bcl-2和bax蛋白表达的相关性. 方法：用原位杂交方法检测端粒酶的表达及其活性,采用免疫组织化学技术SABC法检测bcl-2和bax. 结果：端粒酶在宫颈癌中的表达率明显高于癌前病变（P〈0.01）和宫颈良性肿瘤.端粒酶活性与bcl-2表达负相关,与bax表达显著负相关,与bcl-2/bax比值明显正相关. 结论：bcl-2/bax表达失衡（比值增大）可能是端粒酶激活的重要途径之一.     

左旋四氢巴马汀对大鼠海马脑片缺氧损伤电生理的影响

目的 在海马脑片水平观察左旋四氢巴马汀(L-tetrahydropalmatine,L-THP)对脑组织缺氧后及恢复给氧早期突触功能的影响.方法 大鼠离体海马脑片以人工脑脊液孵育,观察缺氧后海马CA1区诱发群峰电位(population spike,PS)开始减小的时间和消失时间,缺氧损伤电位(hypoxic injury potential,HIP)出现时间、出现率和保持时间,复氧后PS的恢复率和恢复程度等指标并观察L-THP对这些指标的影响.结果 L-THP(0.028,0.14,0.28 mmol&#183;L-1)组脑片PS减小时间、消失时间与缺氧组相比后延,并有显著差异(P＜0.05),但其作用强度随剂量递减.缺氧组脑片平均在658.8 s出现HIP,L-THP 0.028 mmol&#183;L-1组,0.14 mmol&#183;L-1组和0.28 mmol&#183;L-1组脑片出现时间分别推迟为1 152.4和851.1,723.5 s,与缺氧组相比均有显著差异(P＜0.05).各组的HIP出现率分别为100%,33.3%,67.0%,83.3%.复氧30 min后,氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组的恢复率为8.33%,恢复程度为19.8%.在L-THP组(0.028,0.14,0.28 mmol&#183;L-1),PS的恢复率分别为92%、75%和33.3%,恢复程度分别为82.5%,70.4%和58.6%,与对照组比有非常显著的差异(P＜0.01).结论 L-THP能减缓缺氧时PS幅度的降低速度,减轻和防止脑片突触功能的不可逆损伤,提高脑片的耐缺氧能力,但随着剂量增加而作用减弱.