坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元死亡性质的探讨

目的:研究大鼠坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元的死亡性质,以便加以保护,促进神经损伤后运动功能的恢复。方法:切断大鼠右侧坐骨神经,再原位吻合,于术后不同时间取L_4～L_6节段脊髓,作石蜡切片,通过H·E染色和Hoechst33258染色,光镜下分别观察前角运动神经元胞体的形态学变化特征;作超薄切片,电镜下观察前角运动神经元胞体超微结构的变化规律。结果:光镜下,右侧脊髓前角运动神经元胞体尼氏体和细胞核染色质浓缩;电镜下,细胞膜内陷,将细胞分割成凋亡小体,然后裂解,细胞体消失;而左侧前角运动神经元胞体均一、无变化。结论:坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元有死亡,死亡性质是细胞凋亡。     

神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤后腰髓前角神经元的影响

周围神经损伤后再生能力如何 ,目前文献报道较多。多数学者认为 ,周围神经是可以再生的 ,但原因尚不清楚。笔者用硅胶管坐骨神经再生室模型探讨坐骨神经前角神经元及髓鞘碱性蛋白(ｍｙｅｌｉｎｂａｓｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ,ＭＢＰ)的变化。一、材料与方法1.动物分组 :大鼠 3 0只 (第三军医大学实验动物中心 ) ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ,随机分成 3组 ,每组 10只。Ⅰ组 :等渗盐水组 ,注射等渗盐水 2 0 μｌ;Ⅱ组 :神经营养因子 (ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ)组 ,硅胶管内给予ＮＧＦ 10 0ｎｇ 2 0 μｌ;Ⅲ组 :在Ⅱ组基础上每日患肢…     

大鼠坐骨神经损伤急性期激肽原在脊髓前角的变化规律

应用免疫细胞化学方法，结合图像分析仪，研究了激肽原在腰骶髓及Ｌ４～Ｌ６脊神经节的分布，以及坐骨神经切断后，其在相应的前角运动神经元的相对含量的变化规律。研究发现：激肽原分布于Ｌ４～Ｌ６脊神经节及腰骶髓灰质的第Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅸ层神经元及脊髓白质的神经胶质细胞和神经纤维。在神经损伤后，相应脊髓前角运动神经元的激肽原相对含量，在损伤后第１５ｈ是减少的。以后逐渐增多，到损伤后２４ｈ基本恢复到对照组水平，在第４８ｈ，７２ｈ，其含量明显超过对照组。     

大鼠坐骨神经损伤后运动神经元死亡数量的研究

目的 :研究周围神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元胞体的死亡数量。方法 :先计算正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量是否对称 ,再切断并原位吻合右侧大鼠坐骨神经 ,左侧不作任何处理、作为对照 ,于术后不同时间取L4 ～L6节段脊髓作H·E染色 ,计算脊髓前角运动神经元胞体数量的变化。结果 :正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量呈对称分布 ;右侧坐骨神经损伤后 ,其脊髓前角运动神经元胞体数量较左侧减少。结论 :大鼠坐骨神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元的胞体有死亡 ,其死亡具有一定的特征。     

耐力训练后脊髓前角细胞线粒体的电镜定量研究

观察了游泳耐力训练后大鼠脊髓前角外侧群细胞的超微结构变化，发现此群运动神经元线粒体的数量明显地增多，嵴致密，基质电子密度增高。但未见线粒体肿胀、嵴断裂和空泡化等变性现象。用体视学方法测量了线粒体的数密度和比表面。训练组和对照组大鼠前角细胞线粒体的数密度分别为０．６７５±０．１９个／μｍ~３和０．４４５±０．０４个／μｍ~３（Ｐ＜０．０５），比表面分别为６．３５±０．１７μｍ~２μｍ~（－３）和６．６４±０．１８μｍ~２μｍ~（－３）（Ｐ＜０．０２）。据此提出，耐力训练可引起前角细胞的超微结构变化。     

大鼠坐骨神经损伤急性期缓激肽在相应脊髓前角的变化规律

应用免疫细胞化学方法,结合图像分析仪,研究了缓激肽在脊髓腰骶段及L_(4～6)背根节的分布,以及坐骨神经切断后,它在相应前角运动神经元的相对含量的变化规律。结果:缓激肽分布于L_(4～6)背根节及腰骶髓灰质的第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ层神经元及脊髓白质的神经胶质细胞和神经纤维。在神经损伤的研究中,相应脊髓前角运动神经元的缓激肽含量,损伤后第15h是减少的,以后逐渐增多,至第72h仍维持在高位水平。     

大鼠脊髓损伤后神经生长因子对内皮素含量的影响

目的　探讨神经生长因子对大鼠脊髓损伤保护作用的机理。方法　采用改良Allen’s法 10g× 2 5cm致伤大鼠第 12胸椎脊髓 ,经蛛网膜下腔导管分别于术后即刻、1、4、8、2 4、72h各注入神经生长因子溶液 ,并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用放射免疫方法测定内皮素含量。结果　与正常组相比较内皮素含量在伤后均显著升高 (P <0 0 1) ,神经生长因子治疗组与生理盐水组相比较 ,在伤后 4、8、2 4、72h ,内皮素含量明显下降 (P <0 0 1)。结论　神经生长因子通过抑制脊髓损伤后继发作用 ,抑制了内皮素导致的恶性循环 ,从而保护了神经组织     

电刺激对大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡调控基因表达的影响

目的 观察直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax基因表达的作用,探讨电刺激防治细胞凋亡的机制。方法 30只SD大鼠坐骨神经切断后,平均分为两组。实验组在相应的脊髓节段立即置入直流电刺激器,对照组置入无输出电流的刺激器,分别于术后1,4,7,14,28d取材,应用免疫组化技术,光镜下观察脊髓动物神经元bcl-2,bax的表达,并对脊髓阳性运动神经元进行计数。结果 坐骨神经切断后4,7,14d,实验组脊髓运动神经元bcl-2阳性数高于对照组;坐骨神经切断后4,7,14,28d实验组脊髓运动神经元bax阳性数低于对照组。结论 直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax的表达具有调节作用。     

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复作用的实验研究

目的：研究外源性给予江浙蝮蛇毒提取的神经生长因子（sNGF)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法：建立大鼠坐骨神经钳夹模型，局部滴加药物和术后肌注sNGF，通过展爪反射，趾间距，自切及脊髓诱发电位（SEP），运动诱发电位（MEP）评定，观察坐骨神经修复情况。结果 sNGF治疗可使伤后SEP，MEP提早出现，减轻自切，改善后肢运动功能。结论：蛇毒提取的NGF对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用。     

小鼠神经生长因子治疗人急性脊髓损伤的疗效观察

目的研究小鼠神经生长因子治疗人急性脊髓损伤的临床疗效。方法对126例急性脊髓损伤患者,按自愿选择用药原则分为治疗组66例和对照组60例,治疗后比较疗效和并发症。结果治疗后,治疗组和对照组的脊髓功能恢复情况差异有统计学意义,治疗组优于对照组（P〈0.05）。治疗组与对照组并发症发生率无统计学意义（P〉0.05）。结论早期应用小鼠神经生长因子治疗急性脊髓损伤是一项有效措施,且不会增加并发症的发生率。     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的 探讨胚胎脊髓（Fetal spinal cord,FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响。方法 采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型。移植供体为同种异体妊娠14天的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤——FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组。术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score,CBS）,评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5cm作嗜银梁色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况。结果 胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组组优于C组,可以较好地恢复神经元形态。CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,治疗组统计学分析与对照组间有显著性差异。免疫组织化学检查,术后8周A、B组神经中丝（neurofilament,NF）着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生。结论 脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用。     

神经生长因子及三磷酸腺苷联合应用修复大鼠周围神经损伤及对失神经肌肉的作用

目的 探讨腹腔联合应用鼠源性神经生长因子(NGF)及三磷酸腺苷(ATP)对周围神经损伤修复及失神经肌肉的作用. 方法 选取SD大白鼠96只,体重(250±15)g,雌雄不限,按随机数字表法分为等渗盐水组(NS组)、ATP组、NGF组、ATP+NGF组;选取大鼠坐骨神经,暴露后人为切断造成3 mm缺损损伤,通过硅胶管连接两神经断端,建立神经再生室.术后立即对各组分别予以腹腔内注射等渗盐水0.4 ml、ATP0.4 ml(1 mg/ml)、NGF0.4 ml(0.2 μg/ml)、NGF+ATP 0.4 ml(ATP 1 mg/ml、NGF 0.2 μg/ml),之后每3 d通过腹腔注射1次.在第2,4,6,8周各组分别取6只大门鼠行坐骨神经指数测定、大体观察、坐骨神经肌电图检查,处死大鼠后切取标本观察再生室区段神经再生状况、腓肠肌湿重,HE染色观察腓肠肌纤维直径及截面积. 结果 术后第2,4,6,8周各组分别取6只大白鼠测定实验数据,NGF+ATP组坐骨神经指数、神经传导速度、腓肠肌湿重优于NS组及单纯ATP或NGF组(P＜0.05).大体观察可见NGF+ATP组患侧足趾红肿程度较其余三组轻,局部溃烂亦相对少,未见足趾脱落者.术后2周,各组神经再生室内可见纤细神经纤维生长,但未将神经断端连接一起.术后4,6,8周,神经再生室内可见神经纤维通过,NGF+ATP组相对其余三组神经纤维生长生长情况较好,且局部炎性反应及纤维粘连轻.NGF组神经纤维生长情况好于ATP组,但二者均优于NS组.第2,4,6,8周神经电生理及腓肠肌湿重NGF组优于ATP组,第4,6,8周坐骨神经指数、肌纤维直径及截面积NGF组优于ATP组(P＜0.05),且各时相点NGF组及ATP组的观测指标均明显优于NS组(P＜0.05). 结论 (1)联合应用NGF+ATP对神经损伤修复及失神经肌肉作用明显,优于单纯应用NGF及ATP;(2)单纯应用ATP对神经损伤修复及失神经肌肉有一定作用,但效果劣于NGF及NGF+ATP.     

神经生长因子在位听神经核内的定位分布

 目的 采用免疫细胞化学方法,观察正常豚鼠耳蜗神经核及前庭神经核内神经生长因子(Nerve growth factor,)精确定位,为进一步研究打下基础。方法 采用免疫组化法。结果 NGF-ir免疫阳性产物见于前庭核所属的内侧核,密集,上、外、下核呈散在分布,在4个亚核之间阳性神经纤维分布较多。耳蜗核的腹、背侧核团内阳性细胞相差不多,背略多于腹侧核。结论 提示NGF在豚鼠位听神经核团内,具有营养、保护及维持正常神经功能作用。     

联合应用神经生长因子和睫状神经营养因子治疗大鼠坐骨神经损伤

目的 探讨联合应用神经生长因子(NGF)和睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠坐骨神经损伤后再生及功能恢复的影响。方法 切除120只大鼠左侧6mm长坐骨神经，随机分为4组，每组30只，分别行NGF CNTF、CNTF、NGF、等渗盐水(NS)靶肌肉注射。伤后行坐骨神经功能指数(SFI)、形态学和S—100α、神经中丝200(NF200)免疫组化检查。结果 联合应用NGF和CNTF组SFI有髓神经纤维直径、数目和S—100α、NF200阳性轴突计数均明显优于单独用药组。结论 联合应用NGF和CNTF可明显促进大鼠坐骨神经损伤后的再生与功能恢复。     

脊髓减压病大鼠神经细胞凋亡及神经生长因子的保护作用

目的探讨脊髓减压病对大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响及神经生长因子的保护作用。方法SD大鼠随机分为正常对照组、安全减压组、生理盐水组和神经生长因子治疗组，建立大鼠脊髓减压病模型．于出舱后0，10，30，60，120min经蛛网膜下腔各注入20μl生理盐水或神经生长因子，在6，24，48，72h用TUNEL法标记脊髓神经细胞凋亡，免疫组织化学方法检测TNF-α蛋白表达。结果脊髓减压病大鼠出舱后6h组出现少量脊髓神经细胞凋亡及TNF—α蛋白表达，24h组阳性染色明显增强，48h组达到高峰，神经生长因子治疗后神经细胞凋亡及TNF—α蛋白表达明显减少，与生理盐水组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。TNF—α蛋白表达与神经细胞凋亡存在正相关（P〈0．05）。结论神经细胞凋亡是脊髓减压病大鼠的重要病理变化，TNF—α可能参与了脊髓减压病继发损伤，神经生长因子可以减轻脊髓减压病的神经细胞损伤。     

兔坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元及胶质细胞凋亡规律

目的：探讨坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元及胶质细胞凋亡规律。方法：65只大耳白兔分为正常对照组，高速弹丸震荡伤组（震荡伤组）和功能伤组，震荡伤组致伤靶点为兔右大腿外侧坐骨神经体表投影线中点，切割伤组在同一水平切断右坐骨神经，应用DNA电泳，原位末端标记法（TUNEL）染色和流式细胞仪进行细胞凋亡定性定量检测。结果：震荡伤组伤后2周运动神经元数明显减少，伤后1，2周，可见TUNEL阳性运动神经元及胶质细胞，DNA电泳出现凋亡梯形带，流式细胞仪检测可见亚二倍体峰，震荡伤组伤后1，2周，细胞凋亡百分比分别为10．6％和26．4％，切割伤组仅在4周时有少量阳性运动神经元，结论：与切割伤组比较，震荡伤组细胞凋亡发生早，数量多，凋亡是坐骨神经高速弹丸震荡伤后运动神经元数量减少的主要机制。