应用四种重组抗原诊断EBV初次感染和再激活的新免疫印迹试验

作者设计了一种新的免疫印迹试验检测EB病毒 (EBV) Ig G和 Ig M抗体来诊断 EBV初次感染和再激活 ,并与免疫荧光 (IF)法进行比较新方法是将 EBV编码的重组抗原 ,病毒核壳抗原 (VCA) p2 3(BL RF2 )、早期抗原(EA) - D p5 4(BMRF1 )、EA p1 38(BALF2 )和 EBV核抗原 (EBNA) - 1 p72 (BKRF1 )分别结合到硝酸纤维素膜条上 ,同时加抗人Ig G和 Ig M作对照 ,经与 1 :1 0 0稀释人血清培育和以碱性磷酸酶标记的羊抗人 Ig G或Ig M反应后再用底物显色。根据与相应对照条带的颜色强度相比来判断结果。IF法是通过间接 IF法和抗补体…     

老年人对TI-2抗原的免疫应答

细菌荚膜多糖是 T细胞非依赖性 (TI-2 )抗原 ,抗这些抗原的抗体与保护作用相关。迄今为止研究仅限于检测人体 Ig G、Ig M或Ig A抗体量的变化 ,而未在老年人对 TI- 2应答中提及具有功能活性的抗体轻链和抗体亚类。　　作者用 C群脑膜炎球菌荚膜多糖(MCPS)作为 TI- 2的模型抗原 ,对 2 1名老年人 (6 0～ 88岁 )和 2 2名青年人 (2 0～ 31岁 )(1 970年后无脑膜炎球菌接触史或疫苗接种史的健康志愿者 )皮下接种 0 .5 ml MCPS菌苗 ,分别于接种当天及免疫后 6、1 2周采血。用间接 ELISA法测血清总抗 MCPS抗体滴度 ,用夹心 EL ISA法测…     

用新的非侵入性抗原检测诊断幽门螺杆菌感染

为寻找新的非侵入性技术诊断幽门螺杆菌 (Hp)感染 ,本文评价了检测粪便 Hp抗原(Hp SA)酶免疫测定 (EIA)在 Hp感染的诊断和疗效观察中的准确性。用作 Hp SA EIA检测的粪便标本来自欧洲 1 1个胃镜室的 5 0 1例进行胃镜检查的患者。作者先将抗 Hp多克隆抗体吸附到微孔上作为捕获抗体 ,然后将稀释液稀释的粪便标本和结合过氧化物酶的多克隆抗体加入到微孔中 ,室温培育 1小时后 ,洗去未结合的物质 ,加入底物室温培育 1 0分钟。如有结合的 Hp抗原存在 ,即出现显色反应 ,加入终止液 ,用分光光度计 (45 0 nm)读取结果 ,<0 .1 40为阴性 ,0 .1 …     

不同包被缓冲液对单克隆抗体在ELISA中灵敏度和区别的影响

本文应用不同pH和离子强度的包被缓冲液测定抗原在微孔板中的吸附情况,并用单克隆和多克隆抗体分别测定了牛瘟病毒(RPV)和口蹄疫病毒(FMDV)在ELISA中的包被率。作者测定了pH5.0～8.0的0.01M磷酸缓冲液和不同离子强度(0～3M)时的包被情况。当用多克隆抗体测定包被RPV抗原时,最大OD值依赖于包被缓冲液的离子强度,当增     

编码配体-抗原融合体的DNA疫苗的定点免疫应答

作者以结合了淋巴结内皮小静脉 CD34的 L -选择蛋白 (Lsel)和结合了抗原提呈细胞 (APC) CD80和 CD86的 CTL A4作为配体 ,并以 CD5信号肽 (分泌必需 )为非定向对照 ,分别构建表达配体 -人免疫球蛋白 (h Ig)融合体的 Lsel- h Ig、CTL A4- h Ig和 CD5 L-h Ig质粒。分别将 1 0 0μg上述质粒于 0和 1 4天注射 6～ 8周龄雌性小鼠的股四头肌 ,用ELISA检测抗体 ,用51 Cr释放法检测细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL)应答。研究显示 ,抗体和 CD4T细胞的应答均增强 ,且抗体产生速度加快。免后 2周 ,免疫 CTL A4- h Ig质粒的3种不同品系 H- …     

第四代HIV-Ag/Ab检测法缩短阳转血清检测窗口期

最近 ,一种适用于大规模血源筛查的第四代人类免疫缺陷症病毒 (HIV)检测技术Vironostika HIV Uni- Form Ag/Ab已问世 ,它是 HIV p2 4抗原与抗 HIV- 1 /2及抗HIV- 1 O亚群抗体的联合检测方法。作者就这一方法对血清阳转样本的检测进行了再评价 ,以反映这种方法对缩短窗口期样本检测的性能 ,及分析它对 HIV- 1 p2 4抗原及抗HIV- 1抗体亚型的检测灵敏度。　　样本包括不同亚型 HIV- 1 (M亚群 A至 F亚型及 O亚群 )的参比血清WWRB30 1 ,HIV血清阳转参比样本及 HIV-1 O亚群参比血清 PRB30 2 ,不同亚型 HIV- 1的细胞培养上清…     

茯苓多糖PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作为疫苗佐剂的免疫原性

目的研究茯苓多糖(PCP)中PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作为疫苗佐剂的免疫原性。方法 1采用钥孔戚血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白分别与PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ连接制备免疫抗原KLHPCP-Ⅰ和KLH-PCP-Ⅱ及筛选抗原BSA-PCP-Ⅰ和BSA-PCP-Ⅱ。KLH-PCP-Ⅰ和KLH-PCP-Ⅱ分别与弗氏佐剂联用id免疫家兔2次,ELISA检测家兔血清中抗多糖抗体。2PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ单独im免疫小鼠2次,ELISA检测小鼠血清中抗多糖抗体。3PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ为佐剂分别配伍重组乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)和猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗(PRRSV)im或sc免疫小鼠2次,ELISA检测小鼠血清中抗多糖抗体。结果1KLH-PCP-Ⅰ或KLH-PCP-Ⅱ与弗氏佐剂联用免疫2次,可产生抗KLH和抗多糖抗体。2PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ单独im免疫小鼠2次,检测出低水平Ig M抗体,未检测出IgG抗体。3HBs Ag或PRRSV抗原联用PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ免疫小鼠2次,未检出抗多糖IgG抗体。结论 PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ本身免疫原性较弱,作为疫苗佐剂可能具有良好的安全性。     

乙型肝炎病毒血清学标志物与乙型肝炎病毒DNA相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)病毒载量与乙型肝炎血清标志物(HBV-M)之间的关系。方法运用酶联免疫吸附测定法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测857例乙型肝炎患者的HBV-DNA含量和血清学标志物(两对半)。结果血清学检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)+乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)+乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)阳性(大三阳)患者HBV-DNA阳性率明显高于其他类型(阳性率97.9%),且其病毒载量显著高于其他组。HBsAg+乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)+抗HBc阳性(小三阳)患者阳HBV-DNA性检出率也较高(阳性率51.3%),其病毒载量高于其他组。结论 HBV-DNA与HBeAg的存在明显正相关。在临床实践中,不仅要用HBV-M,来判断HBV是否在体内复制,还要结合PCR检测技术来测定HBV-DNA含量。     

古细菌脂质体疫苗佐剂可诱导强烈的体液、细胞以及回忆应答

用从古细菌中提取的醚甘油脂配制成的脂质体具有强烈的佐剂作用。作者选择不同遗传背景 (BALB/ c,C5 7BL/ 6和 C3H/ He J)的小鼠 ,对古细菌脂质体 (archaeosome)、弗氏佐剂 (FA)、氢氧化铝佐剂 (alum)和普通脂质体的免疫增强作用进行了比较。　　结果表明 :小鼠胃肠外接种包裹牛血清白蛋白 (BSA)的古细菌脂质体后 ,古细菌脂质体能显著增强 3种小鼠抗 BSA抗体水平(总 Ig G加 Ig M) ,其抗体滴度与 FA组相似 ,但显著高于 alum和普通脂质体组。而且古细菌脂质体组能诱生所有同种型抗原特异性Ig G1、Ig G2 a和 Ig G2 b抗体 ,且均高…     

人源狂犬病病毒中和性Mab在暴露后预防中的效果

作者利用接种细胞培养狂犬病灭活疫苗志愿者的外周血淋巴细胞 ,制备了可产生抗狂犬病病毒中和抗体的鼠 -人异源杂交瘤细胞 ,得到了 7株单克隆抗体 (Mab) ,并利用快速荧光灶抑制试验 (RFFIT)测定了其中和滴度 ,其中 Ig G类 Mab有 5种 :JF- 2 .1G11、JF-2 .1F1、JF- 2 .1H8、JA3.3A5 ,滴度在 1.7～5 IU/ ml之间 ,JB.1滴度最高 ,为 888IU/ ml。Ig M类抗体有 2株 :JG2 H3/ H5 E1、JG2 H3/H5 A1。将 5株 Ig G类抗体及人狂犬病免疫球蛋白 (HRIG)分别与 19株狂犬病病毒分离株进行交叉中和活性比较 :发现 JA3.3A5、JB.1及 HRI…     

酶联免疫吸附试验测定脊髓灰质炎Ⅱ型病毒特异IgG抗体

近年来酶联免疫吸附试验(简称ELISA)已应用于检测多种病毒抗原或抗体的研究工作。目前肠道病毒血清抗体的鉴定一般用中和试验,但需时间长,过程复杂,而ELISA在肠道病毒常规诊断上的应用仍处在研究阶段,我们也进行了ELISA检测血清中脊髓灰质炎病毒抗体的初步研究,现将实验结果报导如下:     

PCR检测儿童感染HIV的可靠性

作者用聚合酶链反应(PCR)方法对128例6天龄～11岁人类免疫缺陷症病毒(HIV)抗体阳性的儿童进行检测,并与HIV p24抗原检测、HIV分离培养和HIV抗体测定的方     

用辛酸处理免疫球蛋白溶液灭活脂包膜病毒

作者以脂包膜病毒 ,如人类免疫缺陷病毒 ( HIV)、牛腹泻病毒 ( BVDV)、Sindbis病毒及伪狂犬病病毒 ( PSR)作为实验病毒 ,选用不同浓度的辛酸 ,在不同 p H值、不同温度条件下 ,分别对 Ig G溶液 ( Ig G>95%)、富含Ig M的免疫球蛋白溶液 ( Ig G为 76 %、Ig M为 1 2 %、Ig A为 1 2 %)及高浓度 Ig M溶液( Ig M>80 %)进行灭活安全性和反应条件的研究。　　实验结果表明 :当 p H为 5.5,温度为2 2℃ ,辛酸的浓度为 7.54g/kg时 ,在第一分钟内可将 Ig G溶液中的实验病毒灭活至可检测水平以下 ;当 p H为 4 .8,温度为 2 0℃ ,辛酸浓度为 1 …     

烷基聚丙烯酸酯是良好粘膜佐剂

作者检测了合成的多聚体对提高灭活抗原粘膜免疫应答的效力。　　用分子量 45 0 k Da的聚丙烯酸〔p( AA)〕或 1 6 %丁酯酯化的聚丙烯酸〔Butyl1 6 - p( AA)〕水溶液加不同抗原间隔 2周鼻腔免疫小鼠 2次 ,第 2次免疫后 1周 ,用酶联免疫斑点测定检测小鼠肺部 Ig A抗体分泌细胞( ASC)数。结果表明 ,两种多聚体均能明显提高机体对灭活新城疫病毒 ( i NDV)、流感病毒MRC- 1 1灭活株 ( i MRC- 1 1 )、流感病毒 A/Texas株血凝素 /神经氨酸酶亚单位抗原( HA/NA)和牛血清白蛋白 ( BSA)的 Ig A抗体应答。 Butyl1 6 - p( AA)的佐剂作用明…     

多聚酶链式反应与酶联免疫吸附试验诊断肺炎支原体的比较

肺炎支原体 ( MP)是引发急性呼吸道感染和不典型肺炎的病原体。诊断肺炎支原体感染主要依靠实验室检查。我们应用多聚酶链式反应 ( PCR)技术和酶联免疫吸附试验( EL ISA)法对临床 115例呼吸道感染的患者进行了 MP-DNA和抗 MP- Ig M的检测 ,并将两种方法对诊断肺炎支原体感染的临床应用进行了比较研究 ,现报道如下。1　资料与方法1.1　检测对象呼吸道感染门诊和住院患者 115例。其中男 6 6例 ,女49例 ,年龄 15～ 6 8岁。在无菌条件下取患者咽拭子标本进行 PCR检测 ,分析其 DNA。同时取静脉血分离血清进行抗MP- Ig M检测。1.2　方…     

婴儿和儿童免疫七价肺炎球菌结合疫苗后的血清和唾液抗荚膜抗体

作者研究了七价肺炎球菌多糖 CMR1 97蛋白结合疫苗 ( Pnc CMR)的免疫原性。 6 0名芬兰婴儿分别在 2、4、6月龄接受 Pnc CMR基础免疫 ,在 1 5月龄时 ,30名婴儿用Pnc CMR、2 9名婴儿用肺炎球菌多糖疫苗( Pnc PS)加强免疫。在 2、4、6、7、1 5、1 6及 2 4月龄时用酶免疫法检测血清抗 4、6 B、9V、1 4、1 8C、1 9F及 2 3F型 Pnc PS Ig G抗体 ,在 7和 1 6月龄时检测除唾液抗 2 3F型外的唾液抗其余各型 Ig A和 Ig G及分泌型 Ig抗体浓度。　　结果显示 ,首次免疫前血清抗疫苗型Pnc PS Ig G抗体几何平均浓度 ( GMC)为0 .0 8( 4型 )…     

流感病毒体是RSV-F抗原的有效递送系统

亚单位疫苗难以诱生粘膜免疫 ,需要研究开发新的抗原递送系统。为此 ,作者设计了一个配方 ,将呼吸道合胞病毒 ( RSV) F蛋白包埋在流感病毒体 (血凝素成分 )中 ,简称RSV- F/IRIV,并与粘膜佐剂大肠杆菌不耐热毒素 ( HLT)的自然无毒性变异体结合 ,鼻内免疫小鼠。　　试验分三组 ,A组接种 RSV- F/IRIV+HLT,B组接种 RSV- F + HLT,C组接种IRIV+ HL T作为阴性对照。　　 EL ISA和中和试验检测 RSV- F特异性抗体显示 ,A组 Ig G水平较 B组高但无显著差异。Ig G亚型分析两组特异性 Ig G1应答明显而 Ig G2 a应答均很弱。A组…     

瑞士青少年中VZV IgG抗体的血清阳性率及血清阴性的危险因素分析

作者对瑞士青少年中的水痘 -带状病毒(VZV) Ig G抗体进行了血清阳性率调查。　　血清样本来自瑞士八个城市及农村地区的 13～ 15岁学生 ,共 1788份。用 EL ISA检测 VZV Ig G,对于 EL ISA不能确定的及阴性或弱阳性的样本 ,则加用 VZV感染细胞的膜抗原荧光抗体染色法 (FAMA)。 1788份样本中 ,用 EL ISA确定具有 VZV Ig G抗体的有170 7份 ,占 95 .5 % ;2 0份 (1.1% )不能肯定 ;6 1份 (3.4 % )为阴性。 13份弱阳性的和 15份不能肯定的样本 ,用 FAMA法测定均为阳性。 EL ISA法检测血清抗体阴性者 ,2 0人中有 17人 (85 % ) FA…     

ELISA法检测弓形体IgM抗体中类风湿因子的干扰观察

近年来由于人们保健和优生优育意识的提高 ,弓形体 Ig M抗体 (抗 - COX- Ig M)检测在临床应用愈来愈广泛。国内目前对抗 - COX- Ig M的检测主要是用酶联免疫吸附法 (EL ISA)。有些文章报道类风湿因子 (RF)对某些 EL ISA法检测抗体试验的影响 ,本文探讨 RF对抗 - COX- Ig M用 EL ISA法检测的干扰情况。1　材料与方法1.1　标本 :RF阴性血清 30 0例 ,男 16 8例 ,女 132例 ;平均年龄 4 5 .7(2 0～ 6 3)岁。经全自动贝克曼特种免疫蛋白测定系统测定 ,所用试剂为贝克曼配套试剂。RF均 >2 0 IU/m l,平均 2 4 2 (35～ 875 ) IU/m …     

用细菌产生的病毒env基因产物检测HIV抗体的一种新ELISA

对人类免疫缺陷症病毒(HIV)抗体的血清学检查,在临床诊断艾滋病及艾滋病的流行病学研究中都十分重要。但采用Ⅲ型人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV-Ⅲ)为抗原的间接ELISA往往产生大量不正确的结果。为了提高检测的准确性,作者采用细菌表达的高纯度HIV包膜糖蛋白合成抗原来检测HIV抗体。艾滋病患者血清中的抗体优先与HIV包膜糖蛋白结合,该糖蛋白由80个氨基酸组成,将编码该糖蛋白的240个碱基对DNA片段合