两步疫苗预防疟疾

英国牛津大学研究人员对小鼠接种编码疟原虫抗原的DNA疫苗后,再加强接种携带相同DNA片段的痘苗病毒,可完全保护小鼠抵抗疟疾。 他们用疟原虫DNA或表达相同抗原的修饰的痘苗病毒Ankara株(MVA)免疫小鼠,MVA去除了宿主基因和细胞因子受体的编码基因。18天后加强1次,再过4     

核酶可治疗EB病毒相关疾病

美国Scripps研究所和加利福尼亚大学圣迭戈分校的研究者近期研究发现,腺病毒编码的核酶能用于治疗EB病毒(EBV)引起的淋巴增生性疾病。 EBV是疱疹病毒科成员之一,可引起传染性单核细胞增多症、B细胞癌(如Burkitt淋巴瘤)和鼻咽癌。此病毒以潜伏感染B细胞的方式在人体内终身存在。 核酶为天然存在的信使RNA(mRNA)链,能切割其他mRNA。由于核酶能与特定的核苷酸序列结合,因此很快被认为是反义药物。 加利福尼亚研究是用Rous肉瘤腺病毒释放针对EBV核抗原-1(EBNA-1)的锤头状核酶。在体外,核酶能抑制EBV引起的细胞增生,阻止病毒感染细胞。     

结合电穿孔术的肌肉DNA免疫可增强抗结核杆菌抗原的细胞及体液免疫应答

6组 B6 D2小鼠分别注射 1 0 0 μg、1 0 μg或 1μg插入了编码结核杆菌抗原 85B序列( ag85b)的 v1 Jns- tp A质粒或插入了编码牛分枝杆菌抗原 MPB70序列 ( mpb70 )的pc DNA3质粒 ,每个剂量注射两组小鼠 ,其中一组在 DNA注射时结合电穿孔术 ,另一组则不采用电穿孔术。对照小鼠注射盐水并结合电穿孔术。在注射 DNA后 4和 8周分别取小鼠血清 ,用 ELISA法检测其亚类抗体水平。　　取 6只 BALB/c小鼠注射 1 2 0μg插入了编码结核杆菌抗原 85A序列 ( ag85a)的VR1 0 2 0质粒 ,其中 3只结合电穿孔术。同样取 6只小鼠注射 1 0 0 μg编码…     

干扰素与艾滋病疫苗

将细胞因子与抗原表达质粒混合接种小鼠即观察到协同效应。Larsen等将编码鼠IFN α-2b和IL-2的基因质粒分别与编码HIV-1免疫原的质粒共同接种于小鼠，结果都能增强体液免疫反应和促进抗原特异性Th细胞增殖。将抗原与细胞因子基因共同克隆于同一表达质粒已成为可能，以这种质粒免疫动物后，两个基因同时得到     

用重组DNA牛痘病毒制备的癌症疫苗免疫小鼠

美国应用生物技术公司和麻省理工学院的研究者宣称,他们已研制出一种真正的抗癌疫苗,用来免疫小鼠,能抵抗活肿瘤细胞的攻击。他们用基因工程方法制备了表达大鼠致癌基因(neu,编码细胞外185千道尔顿糖蛋白)的牛痘病毒,然后感染10只小鼠,另10只小鼠感染普通牛痘病毒,用含有neu致癌基因的活肿瘤细胞进行攻击。免疫小鼠能完全抵抗肿瘤的产生;而对照小鼠则产生了实质性肿瘤,然后消退。然而,血清学试验或肿瘤细胞攻击试验表明,致癌     

裸DNA预防结核病

目前,所谓的“裸DNA疫苗”保护动物免受流感、疱疹、人类免疫缺陷症病毒（HIV）、乙型肝炎甚至变态反应的攻击已获成功。但这种技术的真正前景在于研制一些用活病原体制备危险性太大的有效疫苗（如HIV和肝炎）。 现在,研究人员又取得了一项引人瞩目的成就——结核病裸DNA疫苗。Merck研究实验室和英国国立医学研究所的研究人员分别用编码结核杆菌单个抗原的裸质粒基因保护小鼠免受结核病侵袭。英国研究组给小鼠注射编码结核杆菌热休克蛋白hsp65的质粒DNA载体,而Merck研究组使用编码结核杆菌抗原的基因。     

肿瘤疫苗研制过程中的检定

肿瘤疫苗包含多种不同物质,这些物质能与免疫系统发生相互作用,产生局部炎症、迟发型趣敏反应和/或使肿瘤消退,并有望产生治疗作用.肿瘤疫苗可分为几类:(1)细胞疫苗;(2)抗原制剂;(3)表达治疗基因的病毒或质粒载体;(4)含有抗原、多肽或编码肿瘤抗原质粒的脂质体.虽然美国食品和药物管理局(FDA)没有批准过任何肿瘤疫苗,但许多临床试验正在进行,有些产品已进入研制最关键的Ⅲ期临床阶段.然而,涉及肿瘤疫苗临床应用的重要管理和学术问题仍有待讨论.本文讨论了与各型肿瘤疫苗相关的问题,并提出了在不同研制阶段对这些疫苗进行检定的建议.     

携带IL-2和IL-12基因的痘苗病毒可以诱导无毒性抗肿瘤应答

为了明确在肿瘤疫苗免疫的局部应用白细胞介素 ( IL) 2和 IL- 1 2的效果 ,作者将编码鼠 IL - 2和 IL - 1 2基因及实验肿瘤抗原基因 ( Lac Z)一起插入痘苗病毒构建成携带L ac Z基因、gpt报告基因、IL- 2基因和 IL- 1 2两个亚基 ( p35和 p40 )基因的肿瘤疫苗 ,并对其治疗效果进行研究。　　具体方法 :用携带 IL- 1 2两个亚基 ( p35和 p40 )基因的 p TK0 334质粒与表达 L ac Z的重组病毒 ( VZV)同源重组产生表达 IL- 1 2和 Lac Z的重组病毒 ( VAC- 1 2 ) ;p TK0 334质粒与表达 IL- 2和 Lac Z的重组病毒 ( VAC- 2 )同源重组产…     

新型基因治疗疫苗可避免危险的副作用

肿瘤蛋白为肿瘤生长所必需,因而是肿瘤疫苗的目标。然而,编码功能蛋白的基因疫苗可把癌基因引入正常细胞,导致注射部位癌细胞发生。 荷兰莱登大学研究人员研制的疫苗仅释放来源于肿瘤相关抗原的、必需的T细胞表位。他们证明,这种疫苗能保护小鼠防御致死性肿瘤攻击。此外,应用复制缺陷性重组腺病毒(rAd)较易大量生产疫苗。     

应用四种重组抗原诊断EBV初次感染和再激活的新免疫印迹试验

作者设计了一种新的免疫印迹试验检测EB病毒 (EBV) Ig G和 Ig M抗体来诊断 EBV初次感染和再激活 ,并与免疫荧光 (IF)法进行比较新方法是将 EBV编码的重组抗原 ,病毒核壳抗原 (VCA) p2 3(BL RF2 )、早期抗原(EA) - D p5 4(BMRF1 )、EA p1 38(BALF2 )和 EBV核抗原 (EBNA) - 1 p72 (BKRF1 )分别结合到硝酸纤维素膜条上 ,同时加抗人Ig G和 Ig M作对照 ,经与 1 :1 0 0稀释人血清培育和以碱性磷酸酶标记的羊抗人 Ig G或Ig M反应后再用底物显色。根据与相应对照条带的颜色强度相比来判断结果。IF法是通过间接 IF法和抗补体…     

RNAi基因治疗可阻止乳腺癌生长

美国得克萨斯大学Anderson癌症中心的研究人员采用RNA干扰(RNAi)基因治疗法成功地阻止小鼠中乳腺肿瘤的生长。他们的工作主要是针对STAT3蛋白的RNAi介导的基因敲减,这种蛋白可促使乳腺肿瘤和其他类型癌症中失控细胞的生长,还能阻止免疫细胞攻击肿瘤。研究人员用慢病毒载体将RNAi的编码基因插入肿瘤细胞。若成功,肿瘤会持续产生抗STAT3RNAi分子。体外用含RNAi的载体处理癌症细胞,结果3/4的细胞停止表达STAT3。这些细胞注入免疫功能正常的小鼠后,无论在注射部位还是远处部位都不生长出肿瘤。进一步研究提示,不仅STAT3受到抑制,…     

编码结核杆菌分泌型抗原85复合物的DNA疫苗的免疫原性和效力

为研究更有效控制结核病的菌苗,作者将结核杆菌培养滤液中3种分子量为30～32kDa的抗原(Ag)85复合物(Ag85A、Ag85B和Ag85C)的编码基因分别插入质粒载体,制成DNA疫苗,肌肉接种BALB/c和C57BL/6(B6)小鼠,研究其免疫原性和效力。     

粘膜基因表达疫苗——新的呼吸道合胞病毒疫苗策略

科学家尝试用各种方法研制预防呼吸道合胞病毒(RSV)感染的安全有效的疫苗.本文介绍了一种有效的预防性鼻内基因转移策略,即采用含编码RSV抗原的质粒DNA的脱乙酰壳多糖DNA纳球[粘膜基因表达疫苗(MGXV)].在RSV感染小鼠模型中,给予单剂MGXV(25μg/只)能显著降低急性RSV感染后的病毒滴度及病毒抗原负荷.MGXV处理小鼠对乙酰甲基胆碱的呼吸道反应性无显著变化,肺部无明显炎症.这些结果证明MGXV能预防急性RSV感染.     

肿瘤疫苗研制过程中的检

肿瘤疫苗包含多种不同物质，这些物质能与免疫系统发生相互作用，产生局部炎症，迟发型超敏反应和／或使肿瘤消退，并有望产生治疗作用。肿瘤疫苗可分为几类：（1）细胞疫苗；（2）抗原制剂；（3）表达治疗基因的病毒或质粒载体；（4）含有抗原、多肽或编码肿瘤抗原质粒的脂质体。虽然美国食品和药物管理局（FDA）没有批准过任何肿瘤疫苗，但许多临床试验正在进行，在些产品已入研究最关键的Ⅲ期临床阶段。然而，涉及肿瘤疫苗临床应用的重要管理和学术问题仍有待讨论。本文讨论了与各型肿瘤疫苗相关的问题，并提出了在不同研制阶段对这些疫苗进行检定的建议。     

编码单一分枝杆菌抗原的DNA能预防麻风杆菌感染

从麻风杆菌和鸟分枝杆菌中提取的35k Da蛋白是预防麻风病的亚单位疫苗的一种理想抗原。作者从质粒 p LJ3中扩增麻风杆菌 35k Da蛋白编码基因 ,将此基因克隆至p JW430 3( DNA- Neg)中 ,用标准分子生物学技术和 35k Da特定引物构建质粒 p ILM35( DNA- 35)。用 1 0 0 μg DNA- 35、DNA- Neg或磷酸盐缓冲盐水 ( PBS)间隔两周肌肉注射远交系瑞士白化病小鼠 3次 ,以 1× 1 0 5CPUBCG皮内接种小鼠为阳性对照。用 ELISA法测定抗体水平 ;收集免疫小鼠腹股沟和腋窝淋巴结及脾脏制成细胞悬液 ,测定淋巴细胞增殖 ;用捕获 EL ISA测定γ…     

表达与组织纤溶酶原激活物信号序列融合的结核杆菌蛋白的DNA疫苗的免疫原性

作者用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码结核杆菌抗原 ESAT- 6、MPT6 4、Kat G和 HB-HA的基因 ,然后再将其克隆至 p JW430 3真核表达载体 ,分别构建成带或不带组织纤溶酶原激活物 (TPA)信号序列的表达载体。　　为确定 TPA 质粒表达的抗原浓度是否高于 TPA- 质粒 ,作者在体外将两组表达ESAT- 6、MPT6 4、Kat G和 HBHA的载体转染横纹肌肉瘤细胞 ,48小时后 ,用免疫印迹法检测 ,结果显示所有 TPA 抗原的浓度均高于相应 TPA-组。为评价胞外蛋白表达水平 ,作者检测了 MPT6 4、Kat G质粒转染的细胞系培养上清 ,结果显示 ,TPA 组…     

小基因的保护作用:研制DNA疫苗的新方法[英]

作者研究了编码单纯疱疹病毒（HSV）表位小肽的质粒DNA在小鼠中的免疫原性。用重叠聚合酶链反应技术构建出编码HSV多个表位（gB_(494-509)、ICP27_(444-460)和gD_(1-23)的小基因,其中两个小肽（gB_(498-505)和ICP27_(448-456)）是细胞毒性T细胞（CTL）表位,而一个较大肽（gD_(1-23)）是B细胞和CD4~+T细胞表位,然后将该小基因克隆到pcDNA3.1质粒载体,称为PcMini。经逆转录酶-聚合酶链反应和斑点印迹试验证实,pcMini在293细胞和小鼠肌肉组织中得到表达。     

细胞因子和趋化因子作为DNA疫苗基因佐剂的研究进展

1990年第1次报道了编码外源抗原的裸露质粒DNA（naked plasmid DNA）注射小鼠后可以在体内表达抗原基因。尔后，一系列动物实验证明DNA疫苗能诱导针对其所编码抗原的体液或细胞免疫。由于DNA疫苗免去了烦琐的蛋白质表达与纯化步骤，更重要的是，基因在体内的表达及诱导免疫的过程，模拟了自然状态下机体感染外源病原生物表达抗原及诱导免疫的过程。因此，DNA疫苗系统一经建立，便很快成了抗感染、抗肿瘤免疫等领域的研究热点。     

粘膜基因表达疫苗——新的呼吸道合胞病毒疫苗策略

科学家尝试用各种方法研制预防呼吸道合咆病毒(RSV)感染的安全有效的疫苗。本文介绍了一种有效的预防性鼻内基因转移策略，即采用含编码RSV抗原的质粒DNA的脱乙酰壳多糖DNA纳球[粘膜基因表达疫苗(MGXV)]。在RSV感染小鼠模型中，给予单剂MGXV(25μg／只)能显著降低急性RSV感染后的病毒滴度及病毒抗原负荷。MGXV处理小鼠对乙酰甲基胆碱的呼吸道反应性无显著变化，肺部无明显炎症。这些结果证明MGXV能预防急性RSV感染。     

肌肉注射卵白蛋白/白细胞介素18融合DNA可有效诱导抗原特异性Th1型免疫应答

Th1型细胞可选择性分泌白细胞介素 2( IL- 2 )、γ干扰素 ( IFN- γ)和 β肿瘤坏死因子( TNF- β) ,调节以补体结合和调理抗体 (如Ig G2 a同种型抗体 )产生为特征的细胞介导免疫。作者构建了一种携带卵白蛋白 ( OVA)和 IL - 1 8( IFN-γ诱导因子 ) c DNA融合基因的哺乳动物细胞表达质粒 p OVA/IL- 1 8,并在 C57BL/6小鼠中研究了其是否能有效诱导抗原特异性 Th1型免疫应答。　　作者首先对含 SV4 0复制起点并表达免疫球蛋白基因的哺乳动物细胞表达质粒进行修饰 ,以去除其中绝大部分免疫球蛋白编码区及新霉素抗性基因 ,随后分别…