肾康丸对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠TGF-β1／Smad信号通路影响。方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病（diabetes mellitus，DM）模型，模型成功后随机分为3组：模型对照组、开搏通组、肾康丸组，另设正常对照组，治疗8周后，取大鼠肾脏，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白（fibronetin，FN）和TGF-β1mRNA基因表达情况；采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织Smad2、Smad3蛋白表达的情况。结果在治疗的8周里，模型组大鼠血糖均维持在16．7mmol／L以上；出现多饮、多食、多尿、消瘦的DM症状；8周后，DN模型组大鼠与正常大鼠比较，肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达显著上调（P〈0．01），Smad2、Smad3蛋白表达明显增加。肾康丸和开搏通都可以抑制DN大鼠肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达，差异具有统计学意义（P〈0．01），都可以减少Smad2、Smad3蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1／Smad信号转导通路的激活，减少细胞外基质合成和分泌，从而延缓DN进程。     

p53基因与糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡相关性研究

目的：研究糖尿病肾病（Diabetes nephropathy,DN）大鼠p53基因与肾组织细胞凋亡的关系。方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组。采用RT-PCR检测肾组织p53基因mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：DN模型组大鼠肾脏p53基因表达明显上调,且肾组织凋亡细胞明显增加。结论：DN模型组大鼠肾组织细胞凋亡增加,与p53基因mRNA呈正相关。     

锌制剂对糖尿病大鼠肾脏和肾脏组织中VEGF、MT及MMP-9表达的影响

目的：通过观察正常及糖尿病大鼠肾脏组织中血管内皮生长因子（VEGF）、金属硫蛋白（MT）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达,阐明补充外源性锌(Zn)制剂对糖尿病大鼠肾脏和肾脏组织中VEGF、MT及MMP-9表达的影响。方法： 将48只Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、阴性对照组（STZ组）、外源性锌干预糖尿病组（STZ+Zn组）及外源性锌干预正常组（Zn组）,每组12只。其中STZ组及STZ+Zn组腹腔注射链脲菌素(STZ)制成糖尿病模型, STZ+Zn组、Zn组每周2次经口灌胃5 mg?kg-1的锌制剂,共16周。取双肾,计算肾指数;HE染色及免疫组织化学染色观察大鼠肾脏病理学改变及MMP-9、VEGF和MT在肾脏组织中的表达。结果：与NC组比较,STZ组和STZ+Zn组大鼠肾指数升高（P<0.05）;与STZ组比较,STZ+Zn组大鼠肾指数升高（P<0.05）;Zn组肾指数与NC组比较差异无显著性(P>0.05)。大鼠肾脏组织中存在VEGF、 MT 及MMP-9的表达,其中MMP-9和VEGF主要表达在远端肾小管,MT主要表达在近端肾小管;NC组、STZ组、STZ+Zn组及Zn组之间比较肾脏组织中VEGF、MT和MMP-9表达差异无显著性(P＞0.05)。结论：锌制剂可以导致糖尿病大鼠肾指数增大,但不影响健康小鼠的肾指数;肾脏组织中存在VEGF、MT及MMP-9的表达;外源性锌制剂干预后VEGF、MT及MMP-9在糖尿病模型中的表达无明显变化。     

糖尿病大鼠肾MMP-9的表达及苯那普利肾脏保护机制探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其在苯那普利肾脏保护中的意义.方法采用腹腔注射STZ制备糖尿病大鼠模型,随机分为对照组、糖尿病组及苯那普利组,分别于4、8周处死.应用免疫组化方法检测肾组织MMP-9的活性水平.结果MMP-9在正常对照组肾小球、肾小管细胞均有阳性表达;在糖尿病组其表达明显减弱.苯那普利能显著上调MMP-9在肾组织的表达并提高其活性水平,与糖尿病组比较,差异有显著性意义（P＜0.01）.结论MMP-9在糖尿病肾病细胞外基质的生成中起一定作用,苯那普利可能部分通过上调MMP-9在肾组织的表达而起到肾脏保护作用.     

Exendin-4对2型糖尿病大鼠肾组织MMP-9与TIMP-1表达的影响

目的：观察Exendin-4对2型糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）表达的影响.方法：采用高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射的方法,建立2型糖尿病大鼠模型.将成模大鼠随机分为糖尿病组,exendin-4低、中、高剂量组,并设立正常对照组.给药6wk后,采用免疫组化方法检测各组大鼠肾组织中MMP-9,TIMP-1的蛋白表达.结果：糖尿病组MMP-9,TIMP-1的表达较正常对照组明显增强（P〈0.01）;exendin-4各组较糖尿病组MMP-9,TIMP-1表达减弱（P均〈0.01）.结论：Exendin-4对2型糖尿病大鼠有一定的肾脏保护作用,其机制可能部分是通过下调2型糖尿病大鼠肾组织MMP-9和TIMP-1的表达来实现的.     

糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性和血管内皮细胞生长因子的关系

目的 研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C（PKC）活性变化和血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的动态变化。探讨两者之间相互关系以及它们与糖尿病肾病（DN）发生发展之间的关系。方法 用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型，将大鼠随机分为正常对照组（N）、糖尿病2周组（DM2）和糖尿病4周组（DM4）。断头处死，分离肾小球，提取纯化胞浆及胞膜蛋白，利用（1—32P）ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性。用免疫组化和400倍光镜检测VEGF在各组大鼠肾脏的表达。结果糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组差异无显著性，胞浆PKC活性略有下降，相差不显著；肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组，膜结合PKC百分比显著增加，且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Ccr呈正相关。糖尿病组VEGF的表达多于正常对照组。肾小球细胞膜PKC活性与肾组织VEGF的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高，并诱导VEGF的高表达。PKC的激活在DN的发生发展中发挥着重要的调控作用。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2和C-IV表达的影响

目的探讨苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制因子．2（TIMP-2）和IV型胶原（C—IV）表达水平的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组（c组）,糖尿病未治疗组（DM组）,糖尿病苯那普利（10mg／kg）治疗组（DB组）。8周后,用免疫组化方法（SP法）和RT—PCR方法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2及C—IV的表达。结果DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白、mRNA的表达较C组明显降低,TIMp-2及C—IV蛋白、mRNA明显升高,差异有高度统计学意义（P〈0．01）,出现糖尿病。肾病（DN）典型的病理改变。DB组MMP-2蛋白、mRNA较DM组表达明显升高（P〈0．01）、TIMP-2和C—IV表达较DM组明显降低（P〈0．01）,病理改变好转。结论苯那普利可能通过逆转糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2的表达,降低C—IV的堆积,对糖尿病肾病（DN）起保护作用。     

固本通络汤对糖尿病肾病模型大鼠TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的 观察固本通络汤对糖尿病肾病大鼠（diabetic nephropathy,DN）转化生长因子-β1 （transforming growth factor β1,TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1）表达的影响.方法 采用单侧肾切除加链脲佐菌素制备DN模型,分为正常对照组、模型对照组、氯沙坦组和固本通络汤大、中、小治疗组,免疫组织化学法检测大鼠肾脏TGF-β1、MMP-9、TIMP-1的表达.结果 大、中剂量的固本通络汤能明显降低TGF-β1、TIMP-1的表达（P〈0.05）,升高MMP-9的表达（P〈0.01）.结论 固本通络汤可能通过抑制DN大鼠肾组织TGF-β1的表达,调节MMP-9、TIMP-1的平衡,发挥对DN大鼠的肾脏保护作用.     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾皮质中基质金属蛋白酶-2、9和Ⅳ型胶原表达的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和Ⅳ型胶原在糖尿病大鼠肾皮质中的表达及罗格列酮干预后的影响.方法：将40只SD大鼠随机分为3组：正常对照组（C组）,糖尿病组（DM组）,糖尿病罗格列酮干预组（DR组）.腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型,罗格列酮对DR组进行治疗性灌胃.应用免疫组化法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达.分别在光镜、透射电镜下观察各组大鼠肾小球病理改变.结果：DM组MMP-2、MMP-9的表达较C组显著下降,Ⅳ型胶原显著升高（P＜0.01）,出现糖尿病肾病（DN）典型的病理改变.DR组MMP-2、MMP-9的表达较DM组增高,Ⅳ型胶原表达下降,有显著统计学差异（P＜0.01）病理改变较DM组明显改善.结论：罗格列酮可通过逆转糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9的表达,降低Ⅳ型胶原的堆积,对DN起保护作用.     

五味子提取物对糖尿病大鼠肾脏组织中基质金属蛋白酶表达的影响及其肾脏保护作用

目的：探讨五味子提取物对糖尿病大鼠肾脏组织中基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响,从基质降解角度阐明其肾脏保护作用。方法：采用链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病大鼠模型,45只糖尿病模型大鼠随机分为模型组、五味子组和贝那普利组,每组15只;另取15只大鼠作为正常对照组。给药12周后检测各组大鼠常规血、尿生化指标及组织学改变;检测各组大鼠血清和肾组织匀浆中血糖（BG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）水平和尿白蛋白、尿总蛋白排泄率;免疫组织化学法检测大鼠肾组织中纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）、基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP-2）的表达量;酶谱法检测大鼠肾组织中MMP-2活性。结果：与模型组比较,五味子组大鼠肾小球系膜聚集等现象明显减轻,尿白蛋白排泄率、LDL-C及血清丙二醛（MDA）水平均明显降低（P<0.05）,肾组织中过氧化氢酶（CAT）（P<0.01）和超氧化物歧化酶（SOD）活性升高（P<0.05）,MDA水平降低（P<0.05）。免疫组织化学检测,与模型组比较,五味子组大鼠肾组织中FN、Col Ⅳ和TIMP-2表达量明显降低。酶谱法检测,与模型组比较,五味子组和贝那普利组大鼠肾组织中MMP-2活性明显升高（P<0.05）。结论：五味子提取物对STZ导致的实验性糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激、提高MMP-2活性、抑制TIMP-2表达从而改善基质降解有关。     

8羟基脱氧鸟苷在2型糖尿病大鼠肾脏的表达及Probucol的影响

目的:观察8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-deoxyguanosine,8-OHdG)在2型糖尿病(Diabetes mellitus,DM)模型大鼠肾脏的表达及普罗布考(Probucol)对它的影响.方法:将大鼠分为正常对照组(Normol rats,C)、DM组(Diabetic rats,D)、普罗布考治疗组(Diabetic rats treated with probucol,N),比较各组大鼠肾组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性,和8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量,同时观察血糖、血胰岛素、肾功能和肾脏形态变化.结果:与正常组比较,DM组血液中MDA含量明显上升(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),8-OHdO增多(P<0.05),肾功能和肾脏形态受损,而普罗布考治疗组的上述表达较DM组明显改善.结论:8-OHdG在DM肾病(Diabeticnephropathy,DN)中的表达明显增加,而普罗布考可以通过抑制氧化应激反应对2型DM模型大鼠肾脏产生保护作用.     

血糖波动与持续性高血糖对糖尿病大鼠肾脏病理改变及IV型胶原表达的影响

目的: 观察血糖波动与持续性高血糖对糖尿病大鼠肾脏病理改变及 IV型胶原(Col IV)表达的影响。方法: 将60只SD雄性大鼠随机分为正常组和模型组,正常组大鼠喂以普通饲料,模型组大鼠高糖高脂饲料喂养6周后予以小剂量链脲佐菌素(STZ,30mg/kg)皮下注射制造糖尿病大鼠模型。再将糖尿病组大鼠随机分为持续性高血糖组和血糖波动组,其中血糖波动组给予每日两次皮下注射胰岛素人为诱导血糖波动。3个月后将大鼠剖腹取出肾,行HE染色、PAS染色、Col IV免疫组织化学及Western印迹检测。结果: 与正常组大鼠比较,模型组大鼠肾小球体积增大、毛细血管内皮细胞基底膜增厚、系膜基质增多、肾小球球囊腔扩张,肾小管体积增大、肾小管管腔扩张、上皮细胞基底膜增厚,肾小球通透性增强,肾脏病理形态改变明显;肾肥大指数增加、肾小球硬化指数增加、Col IV表达量明显增加(P<0.01)。与持续性高血糖组比较,血糖波动组大鼠上述指标变化更为明显(P<0.05)。结论: 糖尿病大鼠出现了肾小球基底膜增厚、系膜基质增多等病理形态的改变,血糖波动组肾小球硬化更明显, Col IV的增多可能与糖尿病肾病的严重程度有关。     

葛根素对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的作用

目的 研究葛根素(Pue)对糖尿病大鼠。肾脏蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组、Pue(500、250、125mg／kg)治疗组、维生素E(VitE)组，同时另设正常对照组，给药12周后，测定肾功能及。肾脏指数，ELISA法测定肾脏PKC活性，放免法测定尿蛋白排泄率，并对肾组织进行光镜及电镜观察。结果 糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏指数(肾脏质量／体重)、肾小球细胞膜PKC活性明显升高，给予Pue治疗12周后，治疗组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率较糖尿病组显著降低，肾脏肥大也有明显改善，肾小球细胞膜PKC：活性显著下降，光镜及电镜下肾脏病理改变较糖尿病组有较大改善。结论 Pue可以纠正糖尿病大鼠早期肾脏高滤过、高灌注，并对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用，其部分机制可能是通过下调。肾脏PKC活性而实现的。     

糖尿病大鼠早期EDLF和肾皮质Na+,K+-ATPase活性的变化

目的探讨大鼠糖尿病早期肾功能、内源性洋地黄样因子(endogenous digitalis-like factor,EDLF)含量以及肾皮质Na ,K -ATPase活性的变化.方法实验用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,用放射免疫方法测定血清和尿EDLF浓度以及尿白蛋白含量,以比色法测定肾皮质Na ,K -ATPase活性.结果糖尿病组大鼠血糖、尿量、尿白蛋白、肌酐清除率、肾重/体重和血、尿EDLF的浓度与正常对照组相比均显著升高,而肾皮质Na ,K -ATPase活性则显著下降.胰岛素治疗后,除肾皮质Na ,K -ATPase活性升高外,糖尿病大鼠的上述指标均显著下降.结论糖尿病早期肾皮质Na ,K -ATPase活性降低,可能与EDLF释放增多有关.胰岛素治疗可抑制EDLF的释放从而提高肾皮质Na ,K -ATPase活性.     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨灯盏花素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾皮质RAGE表达水平的影响。方法雄性SD大鼠27只,随机分为3组。STZ腹腔注射建立糖尿病模型后,糖尿病灯盏花素治疗组(DD组)每日给予灯盏花素[20mg/(kg.d)]灌胃,8周后取肾脏组织行半定量RT-PCR检测RAGE mRNA的表达水平,与正常对照组(C组),糖尿病安慰剂组(D组)比较。结果成模8周时,糖尿病大鼠的体重、血糖与正常组相比有显著性差异(P<0.01),DD组与D组的血糖及体重无显著性差异(P>0.05);DD组、D组和C组的RAGE OD值/β-actin OD值分别为0.452±0.208,0.769±0.104,0.218±0.032,各组间RAGE表达有显著性差异(P<0.01)。结论糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA表达明显高于正常对照组。灯盏花素能下调肾皮质RAGE的表达水平,对糖尿病肾病具有一定治疗作用。     

多(二磷酸腺苷-核糖)水解酶抑制剂单宁酸对糖尿病大鼠肾脏病变的影响及其机制

目的：研究多（二磷酸腺苷-核糖）水解酶（PARG）抑制剂单宁酸（GLTN）对糖尿病
大鼠肾脏病变的影响并探讨其可能的机制。方法：将实验动物随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病组（DM组）、糖尿病3-氨基苯甲酰胺（3-AB）处理组（CDT组）、糖尿病GLTN低剂量（20 mg·kg-1·d^-1）处理组（LDT组）和糖尿病GLTN高剂量（30 mg·kg-1·d^-1）处理组（HDT组）,12周后检查各组动物血糖、血肌酐、尿素氮、尿蛋白排泄率水平及肾脏病变情况,免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织PARP阳性信号表达。结果：与DM组比较,LDT和HDT组血糖水平明显降低（P<0.01）,血肌酐、尿素氮水平和尿蛋白排泄率也明显降低(P<0.01,P<0.05,P<0.01）,LDT和HDT组糖尿病大鼠的肾脏病变程度减轻,肾组织PARP蛋白表达降低(P<0.05)。但LDT和HDT组之间上述肾功能参数比较差异无显著性(P>0.05)。结论：GLTN可降低糖尿病大鼠的血糖水平,抑制肾组织PARP表达,改善肾脏功能和形态异常。     

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达.方法采用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组).建模后第8周,测定24 h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表达.结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P＜0.05),但肾皮质CBS、CSE mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P＞0.05).结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶mRNA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病肾病的发生发展尚需进一步证实.     

选择性环加氧酶2抑制剂对糖尿病大鼠肾脏的影响及其作用机制研究

目的　探讨选择性环加氧酶 2抑制剂莫比可对糖尿病大鼠肾脏病变的影响。方法　将大鼠分成正常对照组 (6只 )、不用药组 (8只 )、消炎痛组 (6只 )和莫比可组 (9只 )。 16周后放射免疫法测定大鼠尿液中前列腺素E2 (PGE2 )和血栓烷素B2 (TXB2 )的排泄量 ,应用逆转录 聚合酶链式反应和免疫沉淀的方法分别检测肾皮质中转化生长因子 β1(TGF β1)及其Ⅱ型受体 (TβR2 )的基因表达和血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)的蛋白水平 ,并观察PAS染色下肾脏的病变情况。结果　与正常对照组相比 ,糖尿病大鼠PGE2 和TXB2 排泄增多 (分别为 16 4 1pg/ 2 4h± 2 88pg/ 2 4h ,5 5 0 7pg/ 2 4h± 135 9pg/ 2 4h)。TGF β1和TβR2 的基因表达显著上调 ,分别为 0 185± 0 0 37,0 194± 0 0 5 4。AT1R的蛋白水平下降 2 1 3%。光镜显示肾小球系膜区增宽 ,PAS染色阳性的胶原沉积增多。消炎痛、莫比可均能不同程度地减少PGE2 的生成 (P <0 0 5 ) ,但TXB2 仅在莫比可组显著下降。莫比可组TGF β1和TβR2 基因表达明显下调 (39% ,4 7% ) ,AT1R的蛋白水平回升 (P <0 0 5 ) ,肾脏病变有所好转 ,而消炎痛无效。结论　莫比可对糖尿病肾脏病变具有一定的保护作用 ,其机制可能与调节TGF β1和AT1R有关     

2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素受体表达的变化和丝胶的作用

目的：：研究2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素受体(insulin receptor,IR)表达的变化及丝胶的保护作用。方法：36只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组3组,每组12只大鼠。采用链脲佐菌素连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型,待模型成功建立后,丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4g/kg/d)灌胃35d。采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的空腹血糖,Western Blotting法和RT-PCR检测大鼠肝脏IR蛋白和mRNA的表达。结果：与糖尿病模型组大鼠比较,丝胶治疗组大鼠肝脏IR蛋白和mRNA的表达明显升高(P＜0.01)。结论：丝胶可能通过上调2型糖尿病大鼠肝脏IR的表达在降血糖中发挥作用。