落新妇甙诱导混合细胞培养中活化的T细胞凋亡及其机制

目的探讨落新妇甙对混合细胞培养中活化的T细胞产生细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)表达的影响。方法分离BALB/c小鼠心肌细胞(2×10~5/ml)和C57BL/6小鼠脾细胞(1×10~6/ml),前者作为刺激细胞,后者作为反应细胞,进行混合细胞培养。实验分为3组：(1)对照组,混合细胞培养采用RPMI-1640培养液；(2)落新妇甙组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml；(3)落新妇甙+CTLA-4单克隆抗体组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml和CTLA-4单克隆抗体9Hi0 30μg/ml。原位末端标记(TUNEL)法检测混合细胞培养中T淋巴细胞凋亡情况；逆转录一聚合酶链(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)法检测T细胞CTLA-4表达情况。结果落新妇甙组的T细胞凋亡指数明显高于对照组(73．4%±12．5% vs 35．1%±9．2%,P＜0．01),T细胞CTLA-4的表达亦显著高于对照组(P＜0．01)。落新妇甙加CTLA-4单克隆抗体组的T细胞凋亡指数和CTLA-4表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0．05)。结论落新妇甙诱导心肌细胞排斥反应中活化的T细胞凋亡可能与其增强T细胞中CTLA-4的表达有关。     

槲皮素通过G3BP1调控Wnt/β-catenin信号通路对前列腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的探讨槲皮素对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响,并分析其可能机制。方法人前列腺癌细胞(PC-3)随机分为空白对照组及槲皮素低、中、高浓度组,转染GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)siRNA及其阴性对照、pcDNA3.1-G3BP1及其阴性对照至PC-3细胞,并用槲皮素处理。分别采用细胞划痕试验和Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测G3BP1 mRNA表达,Western blot法检测G3BP1蛋白、EMT相关蛋白及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路蛋白表达。结果槲皮素抑制PC-3细胞迁移、侵袭,上调E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,下调N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail表达;槲皮素下调PC-3细胞G3BP1 mRNA和蛋白表达,下调Wnt家族成员3A(Wnt-3α)、β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)表达,上调GSK-3β表达;沉默G3BP1增强槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用,过表达G3BP1逆转槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素可通过抑制EMT抑制PCa细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与其靶向G3BP1抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

槲皮素对TRAMP-C2前列腺癌细胞的抑制作用

目的探讨槲皮素对TRAMP-C2前列腺癌小鼠模型的抑制作用及其机制。方法建立前列腺癌细胞株TRAMP-C2小鼠模型并随机分成4组。A组(对照组)；B组(槲皮素25 mg/ kg体重治疗组)；C组(槲皮素50 mg/kg体重治疗组)；D组(槲皮素100 mg/kg体重治疗组)。观察槲皮素对各组小鼠的抑瘤作用并检测各组肿瘤标本的微血管密度计数。结果接种5周后A、B、C、D各组小鼠的肿瘤重量分别为(1．85±0．23)、(1．61±0．10)、(1．10±0．17)、(0．79±0．11)g,治疗组明显低于对照组(P＜0．01),B、C、D组的抑瘤率分别为13%、41%、57%。各组肿瘤的微血管密度计数分别为39．29±6．39,31 61±4．82,23．42±3．91,14．00±4．01,治疗组明显减少(P＜0．05)。结论槲皮素可抑制前列腺癌细胞株TRAMP-C2小鼠移植瘤的生长；其机制可能与抑制肿瘤组织血管生成有关。     

黄精中甾体皂苷的分离与结构鉴定

从黄精的乙醇提取物的正丁醇萃取相中分离到3个甾体皂苷,经1H-NMR13C-NMR、135DEPT测定分析,鉴定出这3个化合物分别是薯蓣皂苷元-3-0-β-D-吡喃葡萄糖基(1-3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]β-D-吡喃葡萄糖苷,薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃葡萄糖苷,薯蓣皂苷元-3-O-α-L-,吡喃鼠李糖基(1→2)-[α-L-吡喃葡萄糖基(1→4)-[α-L-吡喃葡萄糖苷.其中皂苷I和Ⅲ在黄精中为首次报道.     

忍冬叶中黄酮化合物分析

从忍冬叶(山东临沂地区)中分离得忍冬黄素,忍冬黄素—6—鼠李葡萄糖甙、木犀草素、木犀草素—3—半乳糖甙和木犀草素—7—新橙皮糖甙五种黄酮化合物,它们都经红外、紫外、核磁共振、质谱并结合薄层层析和纸层析等分析手段确定结构。其中忍冬黄素—6—鼠李葡萄糖甙首次从植物中分离得到。用分光光度法分析比较了花蕾和叶中总黄酮的含量,叶中含总黄酮1.66%。     

雷公藤多甙对白细胞介素-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364基质金属蛋白酶-3、c-Jun基因表达的影响

目的 观察雷公藤多甙对白细胞介素(IL)-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364基质金属蛋白酶-3(MMP3)、c-Jun mRNA表达的影响.方法 选择不同浓度的雷公藤多甙作用IL-1β刺激的大鼠滑膜细胞株RSC-364,37℃,5%CO2的环境下培养48 h,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清的MMP3和实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测分析细胞中的c-Jun mRNA表达.结果 不同浓度的雷公藤多甙(0、5、10、20 mg/L)对IL-1β刺激的大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌MMP3的水平依次是198、176、140、115 μg/L,c-Jun mRNA表达分别是1.17×106、3.31×105、9.32 ×104、2.81 ×104copies/ml,即呈现明显地抑制.重要的是:c-Jun mRNA表达抑制呈现明显的剂量依赖性.结论 雷公藤多甙治疗类风湿性关节炎的有效的作用机制,可能与其抑制MMP3、c-Jun基因的表达相关.     

槲皮素在人乳腺癌细胞中抑制增殖和诱导凋亡的作用

目的 探讨槲皮素对人乳腺癌细胞的作用及其相关机理.方法 分别以 12.5、25、50、100及200 μmol/L终浓度的槲皮素作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-435S,运用台盼蓝拒染法检测槲皮素对乳腺癌细胞的细胞抑制率,流式细胞术分析槲皮素对乳腺癌细胞增殖周期的影响,RT-PCR 法检测乳腺癌细胞中细胞凋亡蛋白酶3(caspase-3) mRNA表达水平.结果 槲皮素能抑制人乳腺癌细胞的增殖,且与药物的剂量及作用时间有关;槲皮素能改变乳腺癌细胞周期的分布,随着槲皮素浓度的增加,G0/G1 期细胞所占比例减少,S 期细胞所占比例增加,G2/M 期细胞比例先增加后减少; 槲皮素能够激活乳腺癌细胞中caspase-3的表达.结论 槲皮素能够抑制人乳腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机理可能是通过改变细胞周期的分布及上调caspase-3的表达实现的.     

槲皮素及其7-OH衍生物对膀胱癌细胞增殖抑制作用及细胞周期的影响

【摘要】 目的 通过细胞试验及裸鼠移植瘤实验,研究槲皮素及其7-OH衍生物对人膀胱癌BIU-87细胞的增殖抑制作用及细胞周期的影响。方法〓体外实验:培养BIU-87细胞,分别加入槲皮素(QUE)及槲皮素单硫酸酯钠盐(SQMS),MTT实验测定并计算生长抑制率及半数抑制浓度IC50;流式细胞仪检测细胞周期。体内实验:观察不同剂量SQNS及槲皮素对BIU-87细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用;瘤体组织切片行HE染色和免疫组化染色检测Ki-67,CyclingB1,CyclingD1蛋白表达情况。结果〓槲皮素及SQMS体外均能抑制BIU-87细胞的增殖,相同浓度两药物间对比差异无统计学意义(P>0.05)。槲皮素使BIU-87细胞周期明显阻滞于G2/M期,而SQMS则主要阻滞于G0/G1期。在体内实验中,中等剂量的SQMS组抑瘤率与槲皮素组相近(P>0.05),CyclingD1表达比槲皮素组下调更明显(P<0.01),而槲皮素组CyclingB1表达比中剂量SQMS组下调更明显(P<0.05)。两组Ki-67表达无显著性差异(P>0.05)。结论〓槲皮素及其衍生物SQMS对膀胱癌细胞BIU-87有抑制增殖作用;中剂量的SQMS对成瘤生长的抑制作用与槲皮素作用相近;槲皮素对人膀胱癌细胞增殖抑制作用可能是通过下调CyclingB1的表达,阻滞细胞周期于G2/M期,而SQMS则可能是通过下调CyclingD1的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期。     

槲皮素和黄芪甲苷对大鼠缺氧心肌细胞的保护作用

目的 了解并比较槲皮素、黄芪甲苷对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用，寻找其作用的量效关系。方法 将SD乳鼠心肌细胞分成单纯缺氧组（A组）、缺氧＋100mg／L槲皮素组（B组）、缺氧＋50mg／L槲皮素组（c组）、缺氧＋25mg／L槲皮素组（D组）、缺氧＋50．0mg／L黄芪甲苷组（E组）、缺氧＋25．0131mg／L黄芪甲苷组（F组）、缺氧＋12．5mg／L黄芪甲苷组（G组）、缺氧＋10mg／L维生素E组（H组）。各组细胞原代培养后先加入相应浓度的槲皮素、黄芪甲苷、维生素E，再行缺氧处理12h（A组培养后直接行缺氧处理）。检测各组心肌细胞活力和乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS，只检测A、C、F、H组）值。结果B～G组与A组比较，LDH、MDA、ROS（C、F组）值下降，心肌细胞活力、SOD值上升，作用普遍优于H组。在同等高、中、低浓度下，加入黄芪甲苷组的心肌细胞活力和LDH水平总体优于加入槲皮素组（如C、F组的心,肌细胞活力为0．454±0．018、0．471±0．017，LDH为2800±9、2312±52），但两组MDA、SOD和ROS值比较，差异无统计学意义（C、F组的ROS为16．0±5．3、22．4±8．7，P〉0．05）。结论 黄芪甲苷、槲皮素能有效保护缺氧心肌细胞，减轻损伤程度，其作用优于维生素E。黄芪甲苷的保护作用较槲皮素更好，但两者减轻细胞脂质过氧化损伤的作用差异不明显。     

落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇信号通路的影响

目的探讨落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（PI-3K／PKB）信号传导通路的影响。方法分离BALB／C小鼠心肌细胞（2×10s／m1）和C57BL／6小鼠的脾细胞（1×10^6／ml），前者作刺激细胞，后者作反应细胞，进行混合细胞培养，建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分4组：对照组，心肌细胞与脾细胞混合培养；3个实验组在对照组基础上，落新妇甙组加入落新妇甙（15μg/ml）；落新妇甙加P13K激动剂组加入落新妇甙（15μg/ml）和P13K激动剂IL-8（20μg/ml）；落新妇甙加P13K抑制剂组加入落新妇甙（15μg／ml）和P13K抑制剂LY294002（20μmol／L）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。Western blot法检测T细胞P13K和Bcl-2蛋白表达情况。RT-PCR法检测T细胞PKB mRNA表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组[（74．2±11．7）％对（34．2±9．6）％，P〈0．01]，P13K、PKB、Bcl-2表达显著低于对照组（P〈0．01）。落新妇甙加P13K抑制剂组T细胞凋亡指数显著高于落新妇甙组，P13K、PKB、Bcl-2显著低于落新妇甙组（P〈0．01）。落新妇甙加P13K激动剂组T细胞凋亡指数和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论落新妇甙诱导心脏移植效应性T细胞凋亡与其抑制PI-3K／PKB信号通路有关。     

槲皮素改善脂氧素抑制移植心脏收缩力的作用

目的探讨槲皮素改善脂氧素(LXs)抑制移植心脏收缩力的影响。方法通过术前27~32d腹腔注射弓形虫速殖子稀释液1ml感染的方法建立慢性感染大鼠模型,进行同种异体颈部心脏移植,并设注射生理盐水的对照组和空白移植对照组。术后腹腔注射槲皮素稀释液(0.5mmol/L)1ml,观察移植心脏的存活时间、移植物的病理变化以及移植心脏心功能的动态变化。结果弓形虫慢性感染组与联合应用槲皮素组存活时间分别为(120.7±27.6)d、(108.6±21.6)d。移植心存活时间差异无统计学意义。慢性感染联合槲皮素组移植术后心功能明显高于单纯慢性感染组,射血分数分别为62.4±12.5、22.4±10.5。联合用药组的病理改变也明显轻于其他组。结论槲皮素改善脂氧素抑制移植心脏收缩力,并且不影响移植物存活时间,具有广泛的应用前景。     

槲皮素对TRAMP-C2前列腺癌细胞的体内抑制作用及对雄激素受体和细胞凋亡的影响

目的观察槲皮素对TRAMP-C2前列腺癌小鼠模型的体内抑制作用,探讨其作用机理。方法建立前列腺癌细胞株TRAMP-C2小鼠模型并随机分成4组。A组(对照组),B组(槲皮素25mg/kg治疗组),C组(槲皮素50mg/kg治疗组),D组(槲皮素100mg/kg治疗组)。观察槲皮素对各组小鼠的抑瘤作用并检测各组肿瘤标本的雄激素受体表达和细胞凋亡。结果接种5周后A、B、C、D各组小鼠肿瘤体积分别为3475.67±197.04mm3、2244.17±597.38mm3、1912.33±225.67mm3、1458.50±229.19mm3,治疗组体积明显小于对照组(P<0.01),B、C、D组的抑瘤率分别为35%、44%、58%。治疗组肿瘤的雄激素受体的表达强度和范围明显下降(P<0.05)。各组凋亡指数分别为12.49±2.11%、16.37±2.56%、20.96±3.14%、29.09±3.06%,治疗组明显大于对照组(P<0.01)。结论槲皮素可抑制前列腺癌细胞株TRAMP-C2小鼠移植瘤的生长,其机理可能与抑制前列腺癌细胞雄激素受体表达和促进肿瘤细胞凋亡有关。     

槲皮素对前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的:研究槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)的槲皮素处理,MTT法检测槲皮素对细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:槲皮素能抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,浓度由低到高,其24 h的抑制率(%)分别为3.01±1.32、4.84±1.73、20.35±1.30、16.78±1.89、27.25±4.01,48 h的抑制率(%)分别为10.18±1.16、6.22±0.04、24.29±4.19、22.4±4.26、41.42±5.43,当药物浓度>150μmol/L时P<0.05,具有统计学意义;流式细胞术显示PC-3细胞凋亡率随槲皮素浓度升高和作用时间延长而增加(P<0.05),其中浓度150μmol/L和200μmol/L组,24 h的凋亡率(%)分别19.10±0.28、26.55±0.78,48 h的凋亡率(%)分别为27.65±1.06、38.30±5.96;电镜观察到细胞的典型凋亡形态学变化。结论:在适当的条件下,槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,同时可诱导PC-3细胞凋亡,其具体作用机制有待进一步深入研究。     

槲皮素通过抑制Src磷酸化抑制成纤维细胞的生长

目的 探讨槲皮素(quercetin,QE)对成纤维细胞生长的调节作用.方法 自2018年1月至2019年1月辽宁中医药大学附属第四医院外科分别使用不同浓度的QE和生理盐水(对照组)处理增生性瘢痕成纤维细胞.通过MTT实验检测不同浓度的QE对成纤维细胞增殖的作用,应用Annexin V-PI染色法观察成纤维细胞的凋亡情...     

五羟黄酮对裸鼠人肝癌细胞Survivin基因表达的抑制作用

目的 观察三磷酸肌醇(IP3)和Survivin基因表达变化在五羟黄酮(quercetin)治疗裸鼠移植人肝癌中的作用.方法 以裸鼠移植人肝癌为对照,对照组腹腔注入含0.04%DMSO的RPMI 1640培养基0.05 ml/g,Quercetin治疗组腹腔注入quercetin每日50 mg/kg体重,3周后观察肝癌增长情况,3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织Survivin mRNA表达,Western blot分析肝癌组织Survivin蛋白表达.结果 治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积(15.8±10.1)mm3比(52.3±26.5)mm3,重量(44.8±10.4)mg比(91.3±31.4)mg],IP3含量显著低于对照组[(13.4±1.4)pmol/mg protein比(3s.3±6.6)pmol/mg protein],Survivin mRNA表达低于对照组但差异无统计学意义[RI(灰度与面积之积的相对强度)0.60±0.06比0.79±0.19](P>0.05),Survivin蛋白表达显著低于对照组[RI(灰度与面积之积的相对强度)1.23±0.25比6.69±1.80].结论 Quercetin能减少IP3生成,下调肝癌组织Sur-vivin基因表达,抑制裸鼠移植人肝癌增长.     

槲皮素对缺血再灌注大鼠离体心脏的作用

目的 观察槲皮素(Quercetin)对缺血再灌注损伤(IRI)离体大鼠心脏的作用.方法 将32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组(Control);给药对照组(Control+Que);缺血再灌注组(I/R);缺血再灌注给药组(I/R+Que),行Langendorff心脏灌注,给药组预防性给予槲皮素(5 μmol/L).监测各组心功能(±dp/dtmax),比较再灌注1 h心肌尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX2)、一氧化氮合酶(iNOS、eNOS)表达和超微结构的变化.结果 I/R组与Control组比较心功能显著降低(分别为18.91±3.38、-22.43±8.84和60.65±11.65、-56.62±8.49,P＜0.01),NOX2、iNOS、eNOS mRNA(分别为0.1590±0.0539、0.0897±0.0236、0.0154±0.0061和0.0247±0.0070、0.0377±0.0135、0.0091±0.0033,P＜0.05)和蛋白的表达均显著增加,心肌超微结构严重损伤;与I/R比较I/R+Que组(45.77±8.05,-42.10±8.71)显著增强心功能(P＜0.01),显著降低NOX2、iNOS、eNOS mRNA(分别为0.0864±0.0358、0.0445±0.0104、0.0085±0.0032,P＜0.05)和蛋白的表达,明显减轻心肌超微结构的损伤.结论 在离体水平预防性给予槲皮素能够显著减轻缺血再灌注对大鼠心肌造成的损伤,保护心脏.

Abstract：

Objective To observe the effect of quercetin (Que) on isolated rat hearts after ischemia-reperfusion injury (IRI). Methods Thirty-two SD rats were divided randomly into 4 groups with 8 in each group: ( 1 ) Control group, isolated hearts contiuosly peffused without ischemia; (2) Control + Que group: isolated hearts contiuosly perfused without ischemia but the adminstration of Que (5 μmol/L) 5 min after perfusion; (3) I/R group: isolated hearts perfused with 30 min global ischemia followed by reperfusion; (4) I/R + Que group: isolated hearts perfused with 30 min global ischemia followed by reperfusion and the adminstration of Que (5 μmol/L) 10 min before ischemia. Hemodynamic parameters ( ± dp/dtmax),myocardial ultrastructure, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases 2 ( NOX2),inducible nitric oxide synthase (iNOS) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) mRNA and protein expression after reperfusion were compared among the four groups. Results As compared with control group, hemodynamic parameters were greatly decreased after reperfusion ( 18.91 ± 3. 38, - 22. 43 ± 8. 84vs 60. 65 ± 11.65, - 56. 62 ± 8. 49 ,P ＜ 0. 01 ), myocardial ultrastructures were significantly destroyed and the expression levels of NOX2, iNOS, eNOS mRNA and protein were significantly increased after 60-min reperfusion (0. 1590 ±0.0539, 0.0897 ±0.0236, 0.0154 ±0.0061 vs 0.0247 ±0.0070, 0.0377 ±0. 0135, 0. 0091 ± 0. 0033, P ＜ 0. 05 ) in I/R group. As compared with I/R group, hemodynamic parameters were significantly recovered (45.77 ± 8.05, - 42. 10 ± 8. 71, P ＜ 0. 01 ), myocardial ultrastructures were well protected and the expression levels of NOX2, iNOS, eNOS were significantly decreased (0. 0864± 0. 0358, 0. 0445 ± 0. 0104, 0. 0085 ± 0. 0032, P ＜ 0. 05 ) in I/R + Que group, but there was no significant difference between control group and control + Que group ( P ＞ 0. 05 ). Conclusion Que can protect isolated perfused rat hearts from IRI by its antioxidative effect.     

槲皮素诱导TRAMP-C2细胞凋亡的实验研究

目的：探讨槲皮素对转基因前列腺腺癌小鼠c2细胞系（TRAMP-C2）凋亡影响及其作用机制。方法：采用不同浓度的槲皮素处理体外培养的TRAMP-C2细胞,应用MTT法检测槲皮素对TRAMP-C2细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测TRAMP-C2细胞的凋亡率,并应用基因芯片技术筛选槲皮素作用前后TRAMP-C2细胞差异性表达基因。结果：槲皮素能抑制TRAMP-C2细胞生长,诱导TRAMP-C2细胞凋亡,呈剂量及时间依赖性;基因芯片分析发现,应用5&#215;10^-5mol／L浓度槲皮素处理48h后的TRAMP—C2细胞有69个基因表达下调,94个基因表达上调,其中血小板反应素表达明显上调,为对照组的36倍。结论：槲皮素能诱导TRAMP-C2细胞凋亡,具有直接抗肿瘤作用,其作用机制可能与上调TRAMP-C2细胞血小板反应素l的表达有关。