CD4＋CD25＋FOXP3＋调节性T细胞和PD-1＋CD4＋T细胞对宫颈内皮细胞瘤预后的作用

目的：研究宫颈内皮细胞瘤（CIN）皮损处的CD4＋ CD25＋ FOXP3＋调节性T细胞（Tregs）和 PD‐1＋ CD4＋ T细胞及其转归之间的关联性。方法用细胞刷从CIN患者收集宫颈淋巴细胞,并用 FACS分析这些细胞中的CD4＋ CD25＋ FOXP3＋T regs和PD‐1＋CD4＋ T细胞。比较CIN消退者和未消退者之间CD4＋ CD25＋ FOXP3＋ T regs和 PD‐1＋ CD4＋ T 细胞群的差异。结果宫颈淋巴细胞中CD4＋CD25＋ FOXP3＋ T regs占11．8％,而PD‐1＋CD4＋ T细胞占30．3％。与未消退者组比较,CIN消退组CD4＋CD25＋ FOXP3＋ Tregs和 PD‐1＋ CD4＋ T 细胞均明显较低（P＜0．05）。结论宫颈 CD4＋ CD25＋ FOXP3＋ Tregs的产生与CIN自发消退成负相关,表明Tregs在人乳头瘤状病毒（HPV）相关的肿瘤免疫逃逸中起重要作用。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与皮肤病

0引言调节性T细胞(Treg)即抑制性T细胞,具有免疫调节作用,使机体保持保护性免疫又不发生病理性免疫。效应性T细胞对免疫反应的启动和Treg对免疫反应的下调之间的失衡可导致皮肤慢性炎症或自身免疫。虽然在20世纪70年代就已描述了抑制性T细胞,但由于缺乏识别的标记,对此亚群的认识未有进展。20世纪90年代Sakaguchi等首先描述了一种天然存在于小鼠的表达CD25的CD4 T细胞。动物研究揭示此亚群细胞能抑制抗肿瘤免疫,预防多种自身免疫疾病,包括炎症性肠病和自身免疫糖尿病,并能诱导对皮肤同种移植物的耐受。其后,在人类也描述了此亚群。积累…     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是目前免疫学领域研究的热点，对于维持机体免疫耐受和免疫应答稳态具有非常重要的作用。本文就近年在其产生、作用机制及与疾病关系等方面的研究进展进行综述。     

CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞在肾移植中的研究进展

随着器官移植数量的逐渐增多,免疫抑制剂应用越来越广泛,而随着应用免疫抑制剂时间的延长,免疫抑制剂的副作用逐渐增多,甚至有的出现感染、肿瘤产生、移植物失功。人们一直在寻找一种能够移植免疫耐受长久、副作用小的方法。调节性T细胞（Treg）可以激活免疫抑制功能,Sakaguchi等首先提出高表达IL-2受体的仅链（CD25）的TregCIM＋CD25＋,能够引起移植免疫耐受。此后人们对Treg又进行了深入的研究,发现CIM＋CD25＋Foxp3＋Treg是最重要的免疫调节性细胞。本文主要就CIM＋CD25＋Foxp3＋Treg在肾移植中的研究进展加以综述。     

恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8~＋CD28~＋、CD8~＋CD28~-及CD4~＋CD25~＋的表达及意义

目的探讨恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋的表达及意义。方法 60例恶性肿瘤患者均经手术、内窥镜、骨髓穿刺等病理学及细胞形态学检查证实,其中Ⅰ～Ⅱ期20例,Ⅲ～Ⅳ期40例。所有患者经放化疗、免疫治疗或最佳支持治疗等,其中有效组（完全缓解＋部分缓解＋疾病稳定）40例,无效组（疾病进展）20例。另收集同期体检健康者20例作对照组。采用流式细胞术检测对60例患者分别在治疗前、后以及对照组监外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋。结果治疗前Ⅰ～Ⅱ期恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋水平与Ⅲ～Ⅳ期差异均有统计学意义（〈0.05）,但与对照组差异无统计学意义（〉0.05）;经过治疗后,有效组外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋趋于正常,与对照组差异无统计学意义（〉0.05）,无效组仍与对照组差异有统计学意义（〈0.05）。结论恶性肿瘤患者外周血T细胞CD8＋CD28＋、CD8＋CD28-及CD4＋CD25＋不同临床分期及不同治疗效果表达不同,恶性肿瘤患者尤其晚期患者有免疫功能异常,治疗有效后免疫功能恢复正常。     

梅毒患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的检测

目的探讨梅毒患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞的比例及其临床意义。方法应用流式细胞分析仪检测42例梅毒患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例,并与30名正常人群的检测结果相对照。结果梅毒患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞比例[（8.94±6.72）%]较正常人对照组[（5.36±4.51）%]显著增高,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）,但其与快速血浆反应素试验（RPR）滴度无相关性（P﹥0.05）。结论梅毒患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例较高,它们对梅毒患者具有免疫抑制功能。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肿瘤免疫

机体的免疫功能与肿瘤的发生发展有密切关系,当宿主免疫功能低下或受抑制时,肿瘤发病率增高,而在肿瘤进行性生长时,肿瘤患者的免疫功能受抑制,两者互为因果。现已明确,机体免疫系统能产生抗肿瘤免疫应答,但是许多肿瘤仍能在机体进行性生长,甚至使宿主死亡。其核心问题是肿瘤细胞是如何逃避宿主免疫系统的攻击,     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的体外扩增

【目的】探讨有效的体外培养扩增CD4^＋CD25^＋Treg的方法。【方法】收集健康志愿者外周血5例,免疫磁珠法分选出CD4^＋CD25^＋Treg。将实验分为3组,第1组在CD4^＋CD25^＋Treg中加入100nmol／L rapamycin（1μg／mL）和包被了CD3／CD28单抗的磁珠培养3周,第8天开始加入1000U／mL的IL．2,第2组培养条件除不加rapamycin外其余与第1组相同,第3组培养细胞为CD4^＋CD25^＋细胞,培养条件同第1组。培养第7、14、21天收集细胞计数,第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达。MTY法检测体外扩增的CD4^＋CD25^＋Treg对自体和异体的CD4^＋T细胞增殖的抑制作用。【结果】三组细胞均有明显的扩增。加rapamycin培养的CD4^＋CD25^＋Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低,但细胞的纯度明显增加。CD4^＋CD25^＋T细胞组在培养第1周扩增迅速,从第2周开始增殖减慢,其中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例较培养前无明显的差别。三组至第3周时扩增倍数分别为89±21、338±78、216±55（F=484．655,P〈0．0001）,细胞的纯度分别为84．32％±4．62％、34．04％±5．78％、0．68％±0．39％（F=24．660,P〈0．0001）。体外抑制实验显示体外扩增的CD4^＋CD25^＋T细胞对自体和异体的CD4^＋T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低。在CD4^＋T／Treg比例为8：1、4：1、2：1、1：1时对自体CD4^＋F细胞的抑制率分别为9．65％、16．43％、28．75％、55．34％,对异体CD4^＋T细胞的抑制率分别为6．43％、14．72％、26．47％、50．25％,而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之间均无明显的差异。【结论】我们采用rapamycin＋CD3／CD28单抗标记的磁珠＋IL-2在体外成功扩增了CD4^＋CD25^＋Treg,其扩增的倍数为89．4±20．53,具有免疫抑制功能,有望进一步应用于临床。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肝移植免疫耐受

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞因其独特的免疫抑制功能而备受关注,在诱导和维持移植免疫耐受方面具有重要的作用。肝脏具有移植免疫特性．但肝移植术后如何避免排斥反应、诱导免疫耐受、提高存活率这一问题仍尚未解决。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肝移植免疫耐受中具有重要的作用。本文即从CD4^＋CD25^＋调节性T细胞入手,对其在肝移植排斥反应与免疫耐受中的作用加以综述。     

冠心病与外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的关系

目的 探讨不同类型冠心病患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平变化,以及CD4＋CD25＋调节性T细胞与冠状动脉粥样硬化严重程度的相关性.方法 选择2012年6月-2012年12月在杭州市第一人民医院心内科住院,经冠状动脉造影术检查及治疗的患者57例,其中造影检查正常对照组13例,稳定型心绞痛组14例,不稳定型心绞痛组15例,急性心肌梗死组15例.采用流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞比例,评价各组间差异,并对外周血T淋巴细胞亚群与冠状动脉粥样硬化严重程度进行相关性分析.结果 ①外周血CD4＋CD25＋细胞占CD4＋淋巴细胞比例在对照组、稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、心肌梗死组分别为（57.51＆#177;12.62）％、（50.19＆#177;9.27）％、（39.85＆#177;11.88）％和（32.37＆#177;9.56）％;②急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例较稳定型心绞痛组和对照组显著减少（P＜0.05）,但是急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组之间,以及稳定型心绞痛组和对照组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.③外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞与冠状动脉Genisi评分呈显著负相关（r=-0.617,P＜0.01）.结论 CD4＋CD25＋调节性T细胞参与了冠心病的发生发展,是导致动脉粥样斑块不稳定的原因之一,与斑块的不稳定呈显著负相关.     

树突状细胞对CIK细胞中CD+4CD+25 T细胞数量及免疫调节作用的影响

目的探讨CD4+CD2+5调节性T细胞(Tregs)对细胞因子诱导的杀伤细胞(C IK)增殖及杀伤活性的影响;同时分析树突状细胞(DC)在逆转Tregs细胞免疫抑制效应中的作用。方法分别利用培养前分选去除CD4+CD25+T细胞的外周血单个核细胞和常规PBMC,分别培养C IK,检测细胞增殖和杀伤活性;同时在培养前去除Tregs组(C IK-Tregdel)中加入CD4+CD2+5T细胞,检测细胞杀伤活性的变化。利用DC诱导C IK细胞,分别检测DC+C IK及单纯C IK组中Tregs细胞的比例、细胞杀伤活性和TGF-β、IL-10等细胞因子的分泌水平。结果培养前去除Tregs组中增殖细胞比例、细胞杀伤活性均高于常规C IK组,在C IK-Tregdel组加入分选的CD4+CD25+细胞后,C IK的杀伤活性降低。DC诱导前后C IK中CD4+CD2+5细胞含量分别为13%±5%和10%±4%(t=3.977,P=0.001),证实经DC细胞诱导后C IK细胞中的Tregs数量减少,同时,观察到CD8+、CD3+CD5+6细胞增加;DC+C IK组对肺癌细胞系A549、乳腺癌细胞系MCF-7、结肠癌细胞系HCT-8和淋巴瘤细胞系Raji的杀伤活性分别为49.47%、32.78%、40.28%、47.11%,均高于单纯C IK组(P均<0.05);另外,C IK及DC+C IK组TGF-β分泌分别为546 pg/m l±134 pg/m l、489 pg/m l±132 pg/m l,IL-10分别为107 pg/m l±32 pg/m l和92 pg/m l±32 pg/m l,证实经DC诱导后C IK细胞TGF-β和IL-10分泌水平低于DC诱导前;同时,观察到DC+C IK组IFN-γ和IL-6分泌高于单纯C IK细胞(P<0.05)。结论DC细胞可以增强C IK的抗肿瘤活性,而其对Tregs细胞的影响很可能是DC活化C IK的机制之一。     

IL-15诱导CD4+CD25- T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8....     

CD4+CD25+调节性T细胞和感染免疫

免疫抑制是减轻机体免疫损伤的重要机制，近来研究发现，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是免疫抑制系统的关键组分之一。这群细胞具有明显的免疫抑制效能，通过与细胞直接接触发挥作用。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的生物学特性及其在感染免疫中的作用进行简要综述。     

DHHCs家族成员在小鼠CD4~+CD25~-T细胞和CD4~+CD25~+调节性T细胞活化中的表达及意义

目的观察DHHCs家族成员在小鼠CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞活化前后的表达情况并探讨其意义。方法磁珠法从小鼠脾脏分选CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞术检测纯度后,体外用anti-CD3e/CD28抗体分别刺激其活化。TRIzol法提取细胞总RNA,RT-PCR逆转录成cD-NA,分别用24个DHHCs家族成员特异性引物进行PCR反应,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果活化前CD4+CD25-T细胞高表达DHHC5、DHHC14和DHHC18,活化后其上调表达DHHC2、DHHC4、DHHC6、DHHC8、DHHC9、DHHC12、DHHC15和DHHC16;活化前CD4+CD25+调节性T细胞仅表达DHHC9,活化后其上调表达DH-HC18,而下调DHHC9的表达。结论 DHHCs家族成员在CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞中表达存在差异,活化后表达谱发生显著变化,提示DHHCs家族成员的表达与CD4+T细胞的活化有关,可能参与CD4+T细胞不同亚群活化的调控。     

小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定

目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点.文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定.方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4( CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR )、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05).②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%.FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03) %,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为( 23.97±2.00)%和(16.78±3.24%).CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67) %,明显高于在CD4+ 和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%].纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达.结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+ Treg细胞表型及功能特征的细胞.     

支气管哮喘小鼠外周血CD8+CD28-T细胞群和CD8+CD56+T细胞群作用机制研究

目的研究哮喘小鼠外周血CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞间的关系及两种细胞群在哮喘中的作用。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组各15只。测定小鼠的气道反应性,对支气管肺泡灌洗液行细胞学分类,观察肺组织的病理变化,流式检测小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56+T细胞的比例,分析哮喘中两种细胞之间的相关性。结果成功建立小鼠哮喘模型。①哮喘组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞(%)较对照组明显增高;②哮喘组小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56+T细胞比例均较对照组升高;③CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞数量上呈正相关(r=0.737,P=0.002)。结论哮喘时外周血CD8+CD56+细胞和CD8+CD28-细胞数目异常,两种细胞正相关,可能在哮喘发病中起重要作用。     

CD3+CD16+CD56+自然杀伤T淋巴细胞与移植肾免疫状态的关系

目的 探讨肾移植患者CD3+CD16+CD56+自然杀伤T细胞(NKT)在外周血中的表达与移植肾免疫状态的关系,以及钙调磷酸酶抑制剂(CNI)不同的血药浓度下NKT细胞的水平。 方法 将92例肾移植患者根据CNI血药浓度水平及有无排斥反应分为3组：正常血药浓度的无排斥组（A组,58例）、低血药浓度的无排斥组（B组,8例）、排斥组(C组,26例),10例正常人群作为对照组(D组),采用流式细胞术检测各组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+自然杀伤（NK）和CD3+CD16+CD56+NKT细胞及人白细胞抗原（HLA）抗体的水平。结果 A、B、C、D组CD3+CD16+CD56+NKT细胞的百分数分别是（4.29±2.57）%、（4.31±2.08）%、（1.23±1.06）%、（3.98±2.26）%。A、B组与D组比较,NKT细胞百分数、NK细胞百分数及CD4+/CD8+无差异,HLA抗体阳性比率无显著升高;C组NKT细胞的百分数与正常对照组相比降低(P＜0.05),NK细胞、CD4+/CD8+均显著高于D组(P＜0.05),HLA抗体阳性比率显著升高。结论 肾移植后排斥反应时NKT细胞低表达,出现HLA抗体;无排斥反应时NKT细胞表达正常,不受低血药浓度的影响。CD3+CD16+CD56+NKT细胞在抑制移植肾免疫激活中起着重要作用。     

肿瘤细胞对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响

目的：探讨肿瘤细胞与免疫细胞相互作用对CD4+CD25+Treg细胞数量和功能的影响。方法：建立Lewis肺癌细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养体系。Lewis肺癌细胞与不同浓度小鼠脾淋巴细胞共培养,分为4组：实验组Ⅰ（5×105个Lewis肺癌细胞与1×106个淋巴细胞共培养）、对照组Ⅰ（1×106个淋巴细胞单独培养）、实验组Ⅱ（5×105个Lewis肺癌细胞
与2×106个淋巴细胞共培养）、对照组Ⅱ（2×106个淋巴细胞单独培养）;Lewis肺癌细胞与
淋巴细胞共培养不同时间,采用3个时间点：24、48和72 h;Lewis肺癌细胞培养上清与淋巴细
胞共培养,选择培养上清浓度为20%和50%。采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴
细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化,通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp
3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,实验组Ⅰ 中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRN
A表达明显增强（P<0.05）,实验组Ⅱ中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达无明
显变化（P>0.05）;Lewis肺癌细胞与淋巴细胞培养24及48 h可见CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3
mRNA表达明显升高（P<0.05）,而72 h后变化不明显;20%和50% Lewis肺癌细胞培养上清
均可明显提高CD4+CD25+Treg数量及Foxp3 mRNA表达（P<0.05）。结论：肿瘤细胞及其培养
上清可诱导CD4+CD25+Treg细胞数量增加、功能增强,由肿瘤细胞所引起的CD4+CD25+Treg细
胞产生及功能增强可能是肿瘤逃避免疫监视机制之一。     

大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的分选和提取

目的 分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T细胞并进行纯度和活性检测.方法 用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取大鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞纯度,台盼蓝染色计算细胞存活率.结果 免疫磁珠分选提取的CD4+CD25+调节性T细胞纯度在86% 以上,并且活性良好,活细胞百分率大于97%.结论 通过免疫磁珠分选能够提取高纯度高活性的CD4+CD25+调节性T细胞.