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1.
高表达乙型肝炎病毒转基因小鼠的制备 总被引:14,自引:0,他引:14
目的 制备高表达乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠,为乙型肝炎研究提供较理想动物模型。方法 构建、筛选高表达HBV质粒载体。用显微注射法导入昆明鼠受精卵雄性原核,用PCR、Southern杂交、放射免疫、免疫组织化学等方法分析HBV基因在小鼠体内的整合、表达情况。结果 显微注射1456枚卵,产仔118只,整合阳性25只,11只血清HBV DNA、HBsAg阳性,其中2只血清中HBsAg含量高于1000ng/ml,且子代鼠中达到900ng/ml。肝组织免疫组化分析发现有HBsAg、HBcAg表达,未见明显病理学改变。结论 已初步获得高表达HBV转基因小鼠。 相似文献
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本文介绍HBV转基因小鼠模型的类型特点及其在HBV致病性、HBV相关性肝癌、HBV基因表达调控、抗病毒药物筛选和HBV疫苗治疗方面的研究进展。 相似文献
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乙型肝炎病毒耐药细胞模型的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
治疗乙型肝炎的核苷(酸)类似物容易导致HBV的变异,从而产生耐药。由于乙型肝炎病毒具有高度的种族特异性而缺少理想的动物模型,因此细胞模型的建立和应用已成为HBV感染防治研究的必要条件。本文重点介绍了HBV DNA转染细胞模型的建立和核苷(酸)类似物耐药细胞模型的建立与应用方法。 相似文献
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乙型肝炎病毒基因组S区编码产物的检测及临床意义 总被引:35,自引:0,他引:35
为了进一步明确 HBV基因组 S区编码产物对乙型病毒性肝炎诊断的临床价值,用双抗体夹心 ELISA法检测 90份乙型病毒性肝炎患者血清标本HBsAg·PHSA-Re、Pre-S1和 Pre-S2,并与 HBVM及 HBVDNA PCR进行对比分析。结果以抗 HBc、HBsAg·PHSA-Re、HBVDNA(PCR)及 Pre-S2的阳性检出率为最高,分别为87.8%、73.3%、72.2%和64.4%,以HBVDNA作为HBV感染的金标准,无显著性差异(P>0.05);其中HBsAg·PHSA-Re与 HBVDNA和HBeAg的符合率最高,分别为 76.7 %和 74.7 %;MBsAg·PHSA-Re与 HBVDNA具有高度相关性。HBsAg·PHSA-Re做为早期诊断HBV感染及判断是否具有传染性方面,是一项非常重要的血清学指标,Pre-S2也可作为HBV复制活跃的标志之一,用于急慢性肝炎的预后判断. 相似文献
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乙型肝炎病毒基因疫苗诱导小鼠产生免疫应答的效应 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :构建编码乙型肝炎病毒 (HBV)表面蛋白S的重组质粒pCR 3 .1 S,将之直接肌肉注射balb/c小鼠 ,观察小鼠HBV特异的免疫应答。方法 :以ELISA法检测小鼠血清 ,3H TdR掺入法测定淋巴细胞增殖 ,51 Cr 4h释放法检测淋巴细胞杀伤功能。结果 :与空载体对照组相比较 ,基因疫苗诱发小鼠产生良好的抗HBs反应及HBV特异的细胞免疫应答 (P <0 .0 5)。结论 :基因疫苗pCR 3 .1 S可诱导balb/c小鼠产生全面的免疫应答 相似文献
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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染是其相关肝病发生、进展的根本原因。HBV基因与宿主基因的整合不一定是病毒复制的必要环节,但越来越多的研究表明HBV基因整合事件可发生于病毒感染宿主的不同疾病阶段。HBV基因整合事件可能是影响包括HBV慢性感染、慢性乙型肝炎、肝硬化、肝细胞癌等肝脏疾病发生、发展的重要因素之一。HBV基因整合可诱导宿主对HBV免疫耐受,从而导致病毒感染慢性化;HBV基因组中HBV X区、HBV前S和S片段与宿主基因的整合事件最为常见,这与肝硬化和肝细胞癌的发生密切相关。HBV基因易与宿主端粒反转录酶、赖氨酸甲基转移酶2B和细胞周期E1等基因发生整合,并影响这些基因的转录,进一步引起其他相关基因的功能紊乱。针对HBV基因整合事件,可通过Sanger法测序和HBV捕获测序的方式进行测定研究;虽然越来越多的HBV基因整合事件在二代测序研究中被发现,但HBV基因与宿主基因整合的机制尚未明确。整合事件对疾病的发生、转归和对宿主基因活动的影响仍不清楚,需深入、细致的研究。 相似文献
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乙型肝炎病毒核心区基因免疫小鼠细胞免疫应答研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的观察小鼠对HBV核心区基因疫苗的免疫应答。方法将经过基因修饰的乙型肝炎病毒核心区基因定向克隆于真核表达载体(pcDNA3),构建成HBV核心区基因疫苗(pcDNA-HBV),给Balb/c小鼠多点肌肉注射,2周后追加免疫一次,用竞争抑制酶联法及MTT法检测小鼠血清抗-HBc及脾细胞对HBcAg的特异性增殖反应。结果免疫接种2周后小鼠血清抗-HBc均阳性,持续12周以上,脾细胞对HBcAg的刺激指数明显高于对照组(P<0.05)。结论pcDNA-HBV在Balb/c小鼠体内既可诱导体液免疫应答,又可诱导特异性的细胞免疫应答 相似文献
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乙型肝炎病毒基因型与聚合酶基因异质性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 对202株乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶基因(P基因)序列进行系统分析,研究HBV基因型间P基因差异,为进一步研究HBV基因型、P基因变异与病毒复制及核苷类似物耐药的关系提供参考。方法 采用计算机软件对GenBank中己发表的202株HBV全序列及P基因进行分析比较。结果 HBVP基因在各基因型具有自身特点:在反转录酶(rt)区,A基因型氨基酸的型内差异较小,C、D基因型氨基酸的型内差异较大,在rt区A—F6个高度保守区域,发现在基因型间及型内存在氨基酸水平的差异。结论 (1)P基因及其氨基酸存在基因型间和型内异质性,因而分析某些氨基酸差异是与耐药有关还是准株被选择的结果,应综合考虑在该位点是否存在基因型间或型内的氨基酸差异,(2)对核苷类似物抗病毒治疗应答以及治疗中耐药现象的发生在HBV不同基因型可能不同。 相似文献
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目的 了解小分子HBV基因组缺失突变体的基因结构及特点.方法 采用一步法PCR从慢性乙型肝炎患者血清中扩增全基因组HBV DNA,回收并克隆<1 kh的小分子HBV DNA,测序并以BioEdit及VectorNTI 6.0软件分析基因结构特点.结果 获得基因长度介于174~986 bp之间的64种、共124个小分子HBV缺失突变体DNA,按基因结构特点分为3类,即3种GT-AG剪接变异体、29种"常规"缺失突变体及32种基因组内部含polyA的缺失突变体.所有小分子基因组缺失突变体在HBV各编码区及基因调控区均存在不同程度缺失,其中66%(42/64种)保留与HBV复制(包装)相关的所有顺式调控序列,48%(31/64种)保留X编码区.结论 乙型肝炎患者血清中普遍存在小分子HBV基因组缺失突变体,深入了解这些变异体的结构和功能,有助于进一步探索HBV的致病机制. 相似文献
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迄今为止尚无可靠的HBV体外感染系统和实用的动物模型,严重阻碍了其相关研究。因此建立生物学背景清晰、易于获取、经济适用的小动物模型尤为重要。目前有关HBV感染模型的研究大多集中在小鼠方面,并已取得了很大进展。本文就近年来有关HBV复制感染的小鼠模型研究成果进行综述。 相似文献
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Shogo Ohkoshi Haruka Hirono Kazuhiko Watanabe Katsuhiko Hasegawa Masahiko Yano 《World journal of hepatology》2015,7(28):2834-2840
Transgenic mouse technology has enabled the investigation of the pathogenic effects, including those on development, immunological reactions and carcinogenesis, of viral genes directly in living organism in a real-time manner. Although viral hepatocarcinogenesis comprises multiple sequences of pathological events, that is, chronic necroinflammation and the subsequent regeneration of hepatocytes that induces the accumulation of genetic alterations and hepatocellular carcinoma(HCC), the direct action of viral proteins also play significant roles. The pathogenesis of hepatitis B virus X and hepatitis C virus(HCV) core genes has been extensively studied by virtue of their functions as a transactivator and a steatosis inducer, respectively. In particular, the mechanism of steatosis in HCV infection and its possible association with HCC has been well studied using HCV core gene transgenic mouse models. Although transgenic mouse models have remarkable advantages, they are intrinsically accompanied by some drawbacks when used to study human diseases. Therefore, the results obtained from transgenic mouse studies should be carefully interpreted in the context of whether or not they are well associated with human pathogenesis. 相似文献
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杜鹃 《现代消化及介入诊疗》2012,17(5):248-250
目的探讨乙型肝炎病毒基因突变的类型及位点,观察阿德福韦酯的临床疗效。方法 43例慢性乙型肝炎位点变异患者服用阿德福韦酯10mg/d,48周,观察治疗前后临床指标的变化。结果变异位点为rtL180M/M204V、rtM204I、rtL180M/M204I28例,单独与联合变异并存;G1896A变异7例,V214A、V173L变异4例,G1896A、L180M、M204I、M204V联合变异4例。阿德福韦酯对HBV变异株有明显的抑制作用,HBVDNA由治疗前与治疗后24周、48周HBVDNA、ALT复常率显著改善(P值均〈0.01)。药物安全性良好。结论阿德福韦酯对位点变异慢乙肝患者有一定疗效。 相似文献
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谭友文 《世界华人消化杂志》2011,(15):1614-1619
从全球范围看,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)重叠感染估计约有700-2000万人口感染.重叠感染和单一HBV或HCV感染比较,更易发展为肝硬化、肝细胞癌甚至肝衰竭的比例也高,HBV和HCV重叠感染可有四种不同的临床模式,即HCV活动... 相似文献
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乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白基因的筛选 总被引:18,自引:1,他引:18
目的 筛选并克隆人肝细胞中与乙型肝炎病毒前S2蛋白(HBVPreS2)相互作用的蛋白质基因。方法 用聚合酶链反应(PCR)技术扩增HBVPreS2基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析。结果 成功克隆出HBVPreS2基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在4缺(SD/-Trp-Leu-SAde-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的4缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有12个,细胞色素C氧化酶Ⅱ有1个,细胞色素P450IVF亚基2个,细胞色素C氧化酶Ⅳ亚基同功酶1有2个,人血白蛋白3个,Na^ -K^ ATP的β1亚基1个,前清蛋白2个,植物血凝素半乳糖苷结合亚基1个,未知基因2个,结论 成功克隆出HBVPreS2蛋白的结合蛋白,为进一步研究HBVPreS2的作用提供了新线索。 相似文献
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Kyoungsub Song Chang Han Srikanta Dash Luis A Balart Tong Wu 《World journal of hepatology》2015,7(3):498-506
Hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV) infections are the most common causes of chronic liver diseases and hepatocelluar carcinomas. Over the past few years, the liver-enriched microRNA-122 (miR-122) has been shown to differentially regulate viral replication of HBV and HCV. It is notable that the level of miR-122 is positively and negatively regulated by HCV and HBV, respectively. Consistent with the well-documented phenomenon that miR-122 promotes HCV accumulation, inhibition of miR-122 has been shown as an effective therapy for the treatment of HCV infection in both chimpanzees and humans. On the other hand, miR-122 is also known to block HBV replication, and HBV has recently been shown to inhibit miR-122 expression; such a reciprocal inhibition between miR-122 and HBV suggests an intriguing possibility that miR-122 replacement may represent a potential therapy for treatment of HBV infection. As HBV and HCV have shared transmission routes, dual infection is not an uncommon scenario, which is associated with more advanced liver disease than either HBV or HCV mono-infection. Thus, there is a clear need to further understand the interaction between HBV and HCV and to delineate the role of miR-122 in HBV/HCV dual infection in order to devise effective therapy. This review summarizes the current understanding of HBV/HCV dual infection, focusing on the pathobiological role and therapeutic potential of miR-122. 相似文献
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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因克隆化的研究 总被引:23,自引:1,他引:23
目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBX反式激活相关基因。方法 以HBX表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照。制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组。分别与两组不同的接头衔接,再对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果 成功构建人HBX反式激活基因差异表达的cDNA消减文库;文库扩增后得到85个白色克隆,进行菌落PCR分析。均得以200-1000bp插入片段,挑取含有插入片段的65个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得19种已知基因序列。和15个未知基因。结论 应用SSH技术成功构建了HBX反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,该文库的建立为进一步阐明HBX反式调节的靶基因及致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据。 相似文献
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目的 了解新疆维吾尔自治区(简称新疆)维吾尔族慢性HBV感染者基因型、基因亚型分布情况及其与预后的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法,分析109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者感染病毒的基因型及基因亚型.多标本均数比较采用单向方差分析.结果 109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎88例,乙型肝炎肝硬化17例,肝癌4例.13基因型HBV感染者9例,占8.3%,C基因型感染者50例,占45.9%,C/D基因型重组体32例,占29.4%,D基因型感染者18例,占16.5%,C基因型、C/D基因型重组体为主要基因型.经过聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析及测序检测,鉴定9份B基因型HBV,均为Ba亚型.50例C基因型HBV感染者病毒基因亚型分布情况:Cl亚型27例,占54%,C2亚型23例,Cl亚型比C2亚型感染者多.在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中,HBV Ba基因亚型感染者分别为8例(9.1%)、1例(5.8%)和0例;C2基因亚型感染者分别为17例(19.3%)、8例(47.5%)和2例(50%);C/D基因型感染者分别为29例(33.0%)、2例(11.9%)和1例(25%),随着病情加重,Ba基因亚型和C/D基因型感染者所占比例呈下降趋势,C2基因亚型感染者所占比例增加.结论 新疆地区维吾尔族慢性HBV感染者以Cl基因亚型为主,新疆维吾尔族慢性HBV感染者存在C/D基因型重组体.C2基因亚型HBV感染预示病情严重,预后差. 相似文献
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目的探讨HCV感染在肝炎发生中的病原学作用。方法对89例急性肝炎进行HCV标志物分析,并从HCVRNA阳性的5例非甲非乙型急性肝炎患者血清中提取HCVRNA,经随机引物逆转录合成cDNA,先以型别特异的PCR法分型,再用巢式PCR扩增部分核心基因区序列,将产物连接p-GEM-T载体,在大肠杆菌中表达后测序分析。结果非甲非乙型急性肝炎中HAV、HBV和HCV阳性分别占47.2%、28.1%和15.7%,HAV和HBV双重感染占14.6%,非甲、非乙和非丙肝炎占9%;HCV分型显示Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅱ/Ⅲ混合型分别占85.8%、7.1%和7.1%;Ⅱ型血清用于序列分析,扩增序列424bp与原设计完全一致。急性肝炎株间核苷酸同源性在98.1%~99.5%。氨基酸同源性在97.6%~99.2%;前者的同源性在Ⅰ型为91.9%,在Ⅱ型为94.3%~95.6%;后者与Ⅰ型、Ⅱ型的同源性在92.3%~95.8%。结论HCV为引起非甲非乙型急性肝炎的主要病毒之一,以Ⅱ型为主,应引起临床重视。 相似文献