三氧化二砷对人卵巢癌细胞株SKOV3 细胞增殖抑制的影响

 目的 观察As₂O₃对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响。方法 采用MTT比色法，测定不同浓度As₂O₃对SKOV3细胞生长的抑制作用，并绘制浓度一抑制率量效曲线；用倒置显微镜及透射电镜观察药物作用后SKOV3细胞形态变化；流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 As₂O₃对SKOV3有明显抑制作用，且具有浓度和时间依赖性。72h时As₂O₃的IC50为4．67μM。As₂O₃ 1．0～4．0μM作用于SKOV3细胞在24～72h后均出现G2／M期阻滞，以48h最明显。As₂O₃ 2．0μM作用24h、48h后流式细胞仪检测SKOV3细胞的凋亡率分别为3．68％、6．66％。倒置显微镜和透射电镜均观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。结论 As₂O₃对卵巢癌SKOV3细胞的生长有明显的抑制作用，并可诱导SKOV3细胞周期阻滞及细胞凋亡。     

As2 O3对人胃癌BGC-823 细胞端粒酶的影响

 目的 观察三氧化二砷（As₂ O₃）对人胃癌BGC-823细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因转录的影响。方法 用不同浓度的三氧化二砷作用于人胃癌BGC-823细胞，通过MTT法测定细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡变化；TRAP PCR ELIsA方法检测细胞端粒酶活性的变化；RT-PCR半定量方法检测细胞端粒酶hTEI汀基因mRNA的转录水平。结果 三氧化二砷可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，抑制作用随三氧化二砷浓度的升高及作用时间的延长而增强。细胞的端粒酶活性明显下降，细胞hTERT基因的转录表达显著抑制。BGC-823细胞端粒酶活性的下调与As₂ O₃作用时间和浓度有关，呈现明显的时间-剂量效应关系。结论 As₂ O₃能够抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖、促使细胞凋亡、抑制细胞的端粒酶活性。As₂ O₃是一种良好的端粒酶抑制剂，在肿瘤的治疗中具有一定应用价值。     

三氧化二砷对人宫颈癌细胞Fas 表达和钙含量的影响

 目的 研究人宫颈癌Hela细胞经三氧化二砷(As₂O₃)处理后的Fas表达和钙含量变化。方法利用MTT法观察As₂O₃对Hela细胞的生长抑制作用，Annexin V-FITC+PI双参数检测细胞凋亡。流式细胞仪测定As₂O₃处理后Hela细胞Fas阳性百分率及胞内钙离子(IECa²⁺)含量变化。结果 (1) As₂O₃可显著抑制Hela细胞生长，且剂量-效应和时间-效应关系显著(P<0．05)，其24h、48h和72h的IG50值分别为8．62μmol／L、6．77μmol／L和4．89μmol／L。(2) As₂O₃处理后Hela细胞凋亡率明显增加。(3) As₂O₃能显著增加Fas蛋白表达和IECa²⁺含量(P<0．01)。结论 As₂O₃在体外可显著抑制Hela细胞生长并引起凋亡，其机制可能与上调Fas表达和IECa²⁺含量有关。     

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡及其作用机制的实验研究

 目的研究三氧化二砷（As₂O₃）诱导人鼻咽癌细胞株凋亡作用及其相关机制。方法采用流式细胞术，电镜、TUNEL方法检测As₂O₃诱导CNE1细胞凋亡作用，免疫组织化学法检测As₂O₃对CNE1细胞p53、bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果经As₂O₃处理的CNE1细胞发生凋亡，表现为FCM可检测到“亚二倍体峰”，形态学上可见核固缩，染色质边集，凋亡小体形成等改变；TUNEL法可检测到细胞内呈棕色颗粒的凋亡细胞，随着药物浓度升高，凋亡细胞发生率逐渐增多，As₂O₃目浓度为0．5mg／L、1．0mg／L和2．0mg／L作用48h后，CNE1细胞的凋亡指数分别为2．66±0．64、8．15±0．96和11．59±0．68，显著高于非药物处理组（0．43±0．43，P〈0．05）。经As2O3处理的CNE1细胞内p53和bax蛋白表达较对照组明显增加，与凋亡指数呈正相关关系（r=0．554，P=0．011；r=0．891，P=0．000…）；p53和bax蛋白表达也呈正相关关系（r=0．626，P=0．003）。结论As₂O₃在体外可诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡，其机制可能与上调p53、bax基因表达有关。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法：将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-PTEN）感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术（FCM）检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果：Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论：重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法:将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-PTEN)感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术(FCM)检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果:Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论:重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷抑制人鼻咽癌细胞侵袭的体外实验研究

 目的 观察三氧化二砷(As₂O₃)对人鼻咽癌细胞株HNEl-LMPl侵袭、转移的影响。方法 鼻咽癌细胞在含3μmol／L的As₂O₃培养基中培养48小时。然后在无含砷的培养基中继续培养48小时后，收集此时间点贴壁的细胞作为研究对象；用细胞-基质黏附实验、细胞运动实验和肿瘤细胞重组基底膜侵袭实验检测As₂O₃对HNEl-LMPl细胞黏附、运动及侵袭能力的影响；用激光共聚焦的方法检测EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMPl)的表达情况。结果 肿瘤细胞-基质黏附实验结果显示，经As₂O₃处理的HNEl-LMPl细胞，其黏附能力(平均吸光度为0．524±0．09)低于对照组细胞(平均吸光度为0．665±0．14)，两者相比有差异(P<0．05)。运动实验和肿瘤细胞重组基底膜侵袭结果均显示，经As₂O₃处理后，穿过游离的聚乙烯吡咯烷酮膜(PVP-F)的肿瘤细胞数明显减少(P<0.01)，同时As₂O₃能够下调LMPl的表达。结论As₂O₃具有抗人鼻咽癌细胞株转移的潜力，其机制可能与抑制LMPl的表达相关。     

三氧化二砷诱导肺癌细胞凋亡的体外实验研究

 目的　观察三氧化二砷体外作用于肺癌 A549细胞株所致的凋亡作用及形态学改变 ;方法　采用 MTT法、透射电镜法及 TUNEL荧光染色法观察不同浓度 As₂ O₃ 对肺癌 A549细胞株的作用效果 ;结果　 1及 2 .5μmol/ L As₂ O₃ 对肺癌 A549细胞株 2 4 h的凋亡诱导率为 :2 2 .80 %及 30 .1 5% ,48h的凋亡诱导率为 :41 .75%及 60 .0 4 % ,72 h的凋亡诱导率为 :56.38%及 73.30 % ,均分别高于相应时间点的 5- FU的作用 ,光镜下观察可见凋亡细胞体积缩小变圆 ,TUNEL染色后在免疫荧光显微镜下观察可见凋亡的细胞呈荧光染色阳性 ;结论　 As₂ O₃ 在体外可明显有效地诱导 A549细胞株凋亡.     

人NHE1 反义基因转染对SGC-7901 胃癌细胞增殖和凋亡的影响

 目的 探讨人NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞株增殖和凋亡的影响，探索胃癌治疗的新方法。方法 采用脂质体法将构建好的人NHE1基因反义真核表达栽体转染至SGC-7901胃癌细胞中，比较观察细胞转染前后生长曲线、双层软琼脂克隆形成能力、裸鼠成瘤能力以及细胞周期和细胞凋亡率的变化。结果 NHE1反义基因能使SGC-7901胃癌细胞生长速度减慢，双层软琼脂集落形成能力、体外生长增殖能力降低，细胞凋亡率增加，裸鼠体内成瘤能力显著降低。结论 反义NHE1基因能抑制SGC-7901胃癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，具有良好的胃癌治疗效果，提示NHE1基因可成为胃癌治疗的新靶点，具有一定的临床应用前景。     

塞来昔布诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡及其影响端粒酶活性的实验研究

目的探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞生长、端粒酶活性，细胞凋亡及相关基因的影响，研究其抗肿瘤的作用机制。方法终浓度为100、200及300μmol／L的塞来昔布作用于SGC-7901人胃癌细胞后，采用MTT比色法测定细胞的生长抑制率，采用半定量-TRAP银染法检测端粒酶活性，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及bcl-2表达水平变化。结果不同浓度的塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞均有抑制作用，抑制率与对照组相比，差异均有显著性（P〈0．05）；流式细胞学检测到凋亡峰，细胞阻滞于G0／G1期。同时它也显著抑制胃癌细胞的端粒酶活性，其抑制作用呈时间-剂量依赖性，且端粒酶活性的降低与bcl-2表达水平下降有关。结论塞来昔布能抑制胃癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，降低端粒酶活性，其作用机制与bcl-2表达水平下降有关，此可能是COX-2抑制剂抗肿瘤的机制之一。     

p42/44MAPK抑制剂U0126对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究U0126对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法 用MTT法测定U0126对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测U0126对SGC-7901细胞周期和细胞凋亡的影响,用Western blot分析p42/44和p38以及其磷酸化水平的变化。结果 10、15、20μM U0126均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;可使S和G2/M期肿瘤细胞比例减少,G₀/G₁期肿瘤细胞比例增加,其中20μM浓度的U0126作用最强(P<0.01);U0126诱导肿瘤细胞凋亡,其中20μM浓度的U0126凋亡作用最强(P<0.01);U0126使p-p42/44下调而使p-p38上调。结论 U0126诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,其机制可能是抑制p-p42/44表达,并使p-p38表达增强。     

细胞微缺氧模型的建立及其对胃癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:缺氧是实体瘤微环境的基本特征之一,体外制造微缺氧的细胞培养环境,对研究缺氧对肿瘤细胞的影响有重要意义。目前建立体外缺氧细胞培养模型的方法较为烦琐,尚缺少微缺氧对胃癌细胞影响较为完整的研究。本实验运用GasPaK产气袋法体外创建胃癌细胞微缺氧培养模型,并观察该状态下细胞生物学行为的变化。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,血气分析监测RPMI-1640培养液中PO2、PCO2和pH值变化。流式细胞仪分析微缺氧对SGC-7901细胞周期分布的影响,光镜及透射电镜观察微缺氧条件下SGC-7901细胞形态的改变,台盼蓝染色计数微缺氧对活细胞数的影响,MTT法检测微缺氧对SGC-7901细胞粘附能力的影响,游走实验检测微缺氧对SGC-7901细胞游走运动能力的影响。结果:GasPaK产气袋法在0.5～48h内PO2、PCO2和pH稳定,并能达到微缺氧细胞培养的条件。微缺氧处理SGC-7901细胞16h后未见细胞周期的变化。微缺氧导致部分SGC-7901细胞形态发生改变。微缺氧处理16h后活细胞计数无明显下降,微缺氧组SGC-7901细胞粘附能力增强,游走穿膜细胞数(196±9)是对照组(114±7)的1.71倍(P<0.05)。结论:通过GasPaK产气袋法制造的微缺氧肿瘤细胞培养环境,达到了条件稳定、重复性好的特点。微缺氧对SGC-7901细胞有影响,但这种影响相对较小,SGC-7901细胞对微缺氧有一定的耐受性。     

NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡和COX-2表达的影响

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡及COX-2表达的影响,并进一步探讨其作用的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测NS-398对SGC -7901细胞的杀伤抑制作用;免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞内COX-2的蛋白表达情况;ELISA法检测NS-398作用于SGC-7901细胞后PGE2释放水平;流式细胞仪检测SGC-7901细胞的凋亡情况.结果 NS-398对胃癌SGC-7901细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增强,呈剂量-时间双效应关系(P＜0.05);不同浓度NS-398作用下的SGC-7901细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降(P＜ 0.05);NS-398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应关系,与对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05);NS-398作用于SGC-7901细胞48 h后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应(P＜0.05).结论 NS-398通过COX-2依赖途径抑制SGC-7901细胞增殖并促进其凋亡.     

去甲斑蝥素对人类胃癌SGC-7901细胞凋亡相关基因表达的影响

 目的 探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人类胃癌SGC-7901细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 实验分对照组、5-Fu组、NCTD 组和5-Fu+NCTD 组，分别应用MTT、流式细胞术、免疫组化SABC法检测NCTD 对体外培养胃癌SGC-7901细胞的杀伤抑制率、凋亡率和survivin、bcl-2、caspase-3的表达。结果　NCTD对人类胃癌SGC-7901 细胞生长有抑制作用，呈剂量- 时间效应关系；凋亡率由（8.30±1.49）%上升到（20.56±1.32）%；survivin基因表达由（86.57±4.39）%下降到（26.11±2.27）%；bcl-2基因表达由（85.35±3.25）%下降到（30.26±1.83）%；caspase-3基因表达由（54.49±3.07）%上升到（92.78±2.47）%；与5-Fu联合应用上述作用更明显。结论 NCTD能抑制人类胃癌SGC-7901细胞的生长；与5-Fu具有协同作用，其机制可能与其诱导细胞凋亡，影响凋亡相关基因表达有关。     

柠檬酸钠联合三氧化二砷体外抗人胃癌细胞及其作用机制

目的探讨柠檬酸钠（Citrate）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对胃癌细胞的凋亡及其作用机制。方法用Citrate（终浓度为5 mmol/L）和（或）不同浓度的As2O3（终浓度依次为5、10 μmol/L）处理体外传代培养的胃癌细胞株SGC-7901和BGC-803。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR法观察凋亡相关基因Bcl-2、Mcl-1表达的变化。结果Citrate与As₂O3联合应用相对于单用Citrate或As₂O3可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（P<0.05）;与空白组相比,用药后 G0／G₁期细胞比例下降,G₂/M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G₂/M期,抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1表达明显下降。结论Citrate与As2O3联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

miR-34a regulates cisplatin-induce gastric cancer cell death by modulating PI3K/AKT/survivin pathway

The purposes of this study were to determine the expression profiles of microRNA-34a (miR-34a) in human gastric cancer cell line (SGC-7901) and cisplatin-resistant cell lines (SGC-7901/DDP), and to establish the correlation between miR-34a expression profile and the sensitivity of human gastric cancer cell to cisplatin-based pattern, thereby providing new methods and strategies for treating gastric cancer. Gastric cancer cell line (SGC-7901) and cisplatin-resistant cell line (SGC-7901/DDP) were cultivated in vitro, respectively. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and Western blot were utilized to determine the expression profiles of miR-34a and survivin in both gastric cancer cell lines. With miR-34a mimic and miR-34a inhibitor transfected into SGC-7901 and SGC-7901/DDP for 48 h, post-transfection changes of miR-34a expression was determined; the effects of miR-34a ectopic expression on the viability of cisplatin-induce gastric cancer cell were assayed by the MTT method. The effects of miR-34a ectopic expression on apoptosis of cisplatin-induce gastric cancer cell were determined by Annexin V/propidium iodide (PI) double staining method and flow cytometry. The effects of miR-34a ectopic expression on the AKT and p-AKT expression of cisplatin-induce gastric cancer cells were determined by Western blot and flow cytometry with the PI3K pathway inhibitor Wortmannin. As shown by qRT-PCR and Western blot analyses, the expression of miR-34a in cisplatin-resistant cell lines decreased significantly in comparison to that of SGC-7901 cell line (p?<?0.05), while significant up-regulation of survivin expression was also observed (p?<?0.05). Compared with the control group, the expression of miR-34a increased significantly in SGC-7901 cells transfected with miR-34a mimic for 48 h (p?<?0.01). After miR-34a inhibitor transfection, the expression of miR-34a decreased significantly (p?<?0.05). The viability of cisplatin-induce gastric cancer cells increased significantly (p?<?0.05) with significant decrease of apoptosis after miR-34a expression inhibition, as demonstrated by MTT and flow cytometry with miR-34a over-expression, the viability of cisplatin-induce gastric cancer cells decreased significantly (p?<?0.05), with significant apoptosis increase (p?<?0.05). As shown by Western blot and flow cytometry, in comparison to the control group, Wortmannin could inhibit miR-34a inhibitor and DDP induced up-regulation of p-AKT significantly (p?<?0.05) and stimulated apoptosis. In conclusion, miR-34a expression was down-regulated in cisplatin-resistant cell lines. miR-34a over-expression could improve the sensitivity of gastric cancer cells against cisplatin-based chemotherapies, with PI3K/AKT/survivin signaling pathway possibly involved in the mechanism.