白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测30株临床分离白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性,并用随机扩增DNA多态性(RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药,且它们的RAPD带型有着高度相似性,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

白色念珠菌临床株基因分型及耐药性研究

目的：了解白色念珠菌的基因分型情况以及不同基因型白色念珠菌的药敏试验结果。方法：应用聚合酶链反应（PCR）扩增白色念珠菌25S核糖体DNA基因内含子区,可转座I型内含子插入片段的数目及大小的不同使得扩增产物不同,根据产物片段大小和数目分型。采用K-B法对不同基因型进行白色念珠菌药敏分析。结果：临床分离的121株白色念珠菌经PCR分为三型：A型83株,B型27株,C型11株。A型为最常见的基因型,B型、C型白色念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药率显著高于A型菌株,对其他抗真菌药物的耐药率差异无显著性。结论：不同型别的白色念珠菌耐药谱可能与特定基因型有一定相关性。     

40例白色念珠菌的药敏分析

本文通过对40例白色念珠菌的药敏分析,发现大多数菌株对伊曲康唑、氟康唑、酮康唑敏感,对两性霉素B、制霉菌素、咪康唑有一定的耐药率,真菌药敏试验对指导临床合理用药有一定的意义。     

恶性肿瘤患者深部感染白色念珠菌的基因分型

目的对引起恶性肿瘤患者深部真菌感染的白色念珠菌进行基因分型。方法研究对象90例,CHROMagarCandida鉴定培养基分离鉴定白色念珠菌,PCR方法鉴定并进行ABC基因分型。结果引起恶性肿瘤患者深部真菌感染的白色念珠菌基因型分别为A型(36/90,40%)、B型(32/90,35.6%)、C型(22/90,24.4%),取自同一病人身体不同部位和相同部位的标本均分离出不同基因型白色念珠菌。结论恶性肿瘤患者深部白色念珠菌感染由不同基因型的白色念珠菌株引起。     

白色念珠菌的药敏试验及分析

近年来我们对从临床标本分离培养的６８株白色念珠菌 ,根据美国临床实验室标准化委员会确定的抗真菌药敏试验方法 ,应用法国梅里埃公司生产的试剂 ,进行了药敏试验 ,以供临床诊治真菌感染时参考 ,报道如下。１．菌株来源临床送检标本分离培养所得。６８株白色念珠菌标本中 ,有６３株 (９４．１ % )来自痰液 ,５株 (５．９% )来自尿液。标本来自６８例病人 ,其中男性４９例 ,女性１９例 ;年龄３０～４０岁４例 ,均为重症监护室因外伤及脑血管意外而昏迷的病人 ;５０～７９岁６４例 ,均系内科病房呼吸道感染病人。病人均长期使用头孢肤辛、头…     

5-氟胞嘧啶耐药白色念珠菌的DNA与RNA的随机扩增多态性分析

目的:比较对5-氟胞嘧啶耐药与敏感的白色念珠菌DNA基因组与RNA表达,探讨复发性念珠菌阴道炎的耐药机理.方法:选择临床诊断为复发性念珠菌阴道炎的病例16例,取阴道分泌物培养,提取菌株DNA基因组,应用随机扩增多态性DNA法分析菌株的DNA基因组的多态性,对分离菌株进一步做药敏试验,获得白色念珠菌耐药菌株与敏感菌株各8株;提取菌株RNA,利用随机扩增多态性RNA方法检测基因组的RNA表达.结果:临床耐药菌株与敏感菌株的DNA基因组指纹图无明显差异,但基因组的RNA表达存在差异,与敏感菌株比较,耐药菌株基因组的RNA出现条带数目的缺失或位置的改变.结论:复发性念珠菌阴道炎耐药的原因之一是表型耐药,而非基因型耐药,敏感菌株与耐药菌株共有一套基因组,在致病环境发生改变时,基因组RNA的表达转换,导致临床上表现出可逆耐药而非稳定耐药.     

白色念珠菌对氟康唑的耐药性研究进展

近10余年来，随着器官移植的普遍开展，恶性肿瘤，艾滋病(AIDS)的不断增多，大量使用广谱抗生素，免疫抑制剂，类固醇药物，抗癌的放疗与化疗，深部真菌病，尤其是因白色念珠菌感染所致的深部真菌病逐年增加。氟康唑是目前用于治疗深部真菌病的重要抗真菌药之一，从1988年上市以来，因具有吸收好，抗真菌谱广及毒性小等特点，在临床上得到了广泛应用并取得了良好的治疗效果，     

泛力克对白色念珠菌的抑制作用

将泛力克油剂用琼脂板孔中滴加法对白色念珠菌临床菌株行抑菌试验，用常用的抗真菌药物达克宁霜、克霉唑软膏、无极膏作对照。经统计学处理显示，泛力克对白色念珠菌有很强的抑菌作用，其抑菌效果明显高于达克宁霜、克霉唑软膏和无极膏（Ｐ＜０．０１）。     

外阴阴道念珠菌病白念珠菌基因型和抗真菌药物敏感性研究

目的 探讨外阴阴道念珠菌病(VVC)白念珠菌基因多样性与抗真菌药物敏感性的关系.方法 采用最近开展的CAI微卫星法聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术鉴定VVC患者白念珠菌的基因型,采用E-test法对检出的念珠菌进行体外药敏试验.结果 从VVC患者分离出89株白念珠菌,鉴定出26种基因型.白念珠菌对两性霉素B、氟胞嘧啶、酮康唑和氟康唑敏感.主要基因型(A、B、C、D)占69.7%(62/89),白念珠菌B基因型菌株及非B基因型菌株对伊曲康唑(ITR)的耐药率分别为66.7%(14/21)和4.4%(3/68),差异有统计学意义(P<0.05).结论 PCP-SSCP技术有利于研究白念珠菌对抗真菌药物的耐药机制.白念珠菌B基因型菌株对ITR有更高的耐药性.     

白念珠菌对氟康唑耐药性的研究

目的:探讨白念珠菌对氟康唑耐药性的产生是否有适应性突变的因素.方法:选择对氟康唑敏感的白念珠菌野生Y0109株,将其在含8 μg/ml氟康唑的沙堡固体培养基上进行漂移试验诱导培养,计数其生长出的菌落并根据Cairns的理论进行曲线拟合.结果和结论:拟合出的曲线基本符合Poisson曲线分布特点,根据Cairns的适应性突变理论及判定方法,初步证实白念珠菌对氟康唑耐药主要是因药物本身的后天诱导作用,使该敏感白念珠菌发生了适应性突变而成为耐药菌株.     

Analysis of genital Candida albicans infection by rapid microsatellite markers genotyping

Background Candida albicans （C. albicans） infection, often occurring in genital candidiasis, has increased dramatically recently. Developing an efficient C. albicans typing method may contribute to understanding its epidemiological characteristics and guiding efficient treatment. We used rapid microsatellite genotyping assay for interstrain differentiation of C. albicans isolates and explored some characteristics of its spread. Methods DNA was extracted from C. albicans isolates from gentalia, recta and mouths of 39 female cases and 27 male cases of genital candidiasis. Three fluorescent primers for the microsatellite markers in conserved genes （CDC3, EF3 and HIS3） of Co albicans were used to amplify the isolates DNA by PCR. Fluorescent signals were read with an automatic sequencer and analyzed with GeneScan software. Results Analysis of the three microsatellites markers showed 18 gene allelic associations in genital C. albicans infected patients： 10 allelic associations in female and 11 allelic associations in male, of which 3 allelic associations shared by both genders covered 71% of infections. The most dominant allele association of pathogenic strains for both genders was 116：124, 122：131,160：200 that covered about 50% of infection. Gentalia and recta shared the same strains in 80% of female patients, but in only 3.8% of male patients. There were 2.7% female patients, but no males, with same strain in both gentalia and mouths. Five of seven genital Co albicans infected couples had the same allelic associations of which 4 were the dominant pathogenic C. albicans susceptible for both genders. Conclusions The predominant allelic association of the pathogenic strain in genital C. albicans infection is 116：124, 122：131, 160：200. Vaginal pathogenic strains are probably maintained from the rectal reservoir. Pathogenic strains of male patients are probably from frequent sexual intercourse. The aggressiveness of some strains varies with gender.     

白念珠菌的应激反应与耐药性

白念珠菌是临床最常见的条件致病真菌,可以导致黏膜和系统感染。临床上广泛使用的抗真菌药物数量有限,长期广泛应用于临床所导致白念珠菌的耐药现象越来越普遍,耐药程度也越来越高。白念珠菌对抗真菌药物的高适应性导致了耐药性的产生,同时也是白念珠菌对环境应激的一种体现。本文对应激反应通路作了总结,并着重从应激反应角度阐述了白念珠菌的耐药性问题。     

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA基因分型研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测铜绿假单胞菌(PA)医院感染.方法以优化的反应体系和扩增条件对临床分离的49株PA进行RAPD基因分型,通过指纹图比较与分析,确证医院感染类别与爆发.结果 49株PA共得RAPD 29型,分型率100%;以周为时限, PA医院感染爆发流行共3起;9例个体连续感染的PA有7例为内源性医院感染,2例为外源性医院感染.结论 RAPD可对PA进行分子流行病学调查.     

RAPD技术在肺癌患者假丝酵母菌临床分型中的应用

目的应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对肺癌患者感染白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌进行基因分型,并分析不同基因型对不同抗真菌药物的耐药情况。方法采用经优化的随机扩增多态性DNA(RAPD)方法,对36株白假丝酵母菌和8株热带假丝酵母菌进行基因多态性分型,并对分型菌株进行药敏试验。结果 36株白假丝酵母菌可分为:13株为A型,10株为B型,7株为C型,6株为D型;8株热带假丝酵母菌可分为:5株为A型,2株为B型,1株为C型。药敏结果显示,白假丝酵母菌B型对6种抗真菌药物的敏感率明显高于A、C、D型;C型对6种抗真菌药物的耐药率明显高于A、B、D型。热带假丝酵母菌C型对6种抗真菌药物的敏感率为100%,热带假丝酵母菌A、B对伊曲康唑均出现了耐药,对其他5种抗真菌药物敏感。结论 RAPD技术用于念珠菌种内的分型具有较高的灵敏性与特异性,不同型别的白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌耐药性可能与特定基因型有一定相关性。     

膜转运蛋白与白念珠菌抗药

近年来白念珠菌感染的发生率剧增．随着抗真菌药物的广泛使用，抗药菌株不断出现，抗药现象已成为药物治疗的严峻挑战。膜转运蛋白高表达导致多药抗药是白念珠菌抗药性产生的最重要机制之一。本文对与白念珠菌抗药有关的膜转运蛋白做一综述。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌。其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠茵。选择1个随机引物（引物1251），采用任意引物PCR方法基因分型。将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4．0软件转化为数值图表，利用SPSS11．5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定，多态性丰富，可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71．7％，而其中7株的耐药菌相似系数高达86．7％，远高于58株菌的平均相似系数（47.3铆。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。[结论]基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带。但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

应用M13引物PCR指纹法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性

目的探讨M13微卫星引物PCR指纹法用于假丝酵母菌氟康唑耐药性基因分型的可行性。方法采用纸片扩散法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性,并进一步对41株假丝酵母菌进行M13引物PCR指纹分析,采用RAPD200软件邻接法(neighbour joining,NJ)聚类分析电泳带型模式。结果41例主要从痰液和阴道分泌物中分离的假丝酵母菌标本中中,氟康唑药物敏感11株(26.8%),依赖8例(19.5%),耐药22例(53.7%),PCR指纹分析至少可检测到12种不同的条带,条带数目从2条到12条不等,电泳带型模式与感染部位和氟康唑药物反应性有关。结论假丝酵母菌氟康唑耐药性菌珠所占比例较大,M13微卫星引物PCR指纹法可用于假丝酵母菌的分子流行病学调查和氟康唑耐药性基因分型。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

 【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

Relationship between antifungal resistance of fluconazole resistant Candida albicans and mutations in ERG11 gene

Background The cytochrome P450 lanosterol 14a-demethylase （Ergllp） encoded by ERG11 gene is the primary target for azole antifungals. Changes in azole affinity of this enzyme caused by amino acid substitutions have been reported as a mechanism of azole antifungal resistance. This study aimed to investigate the relationship between amino acid substitutions in Erg11 p from fluconazole resistant Candida a/bicans （C. albicans） isolates and their cross-resistance to azoles. Methods Mutations in ERG11 gene were screened in 10 clinical isolates of fluconazole resistant C. albicans strains. DNA sequence of ERG11 was determined by PCR based DNA sequencing. Results In the 10 isolates, 19 types of amino acid substitutions were found, of which 10 substitutions （F72S, F103L, F1451, F198L, G206D, G227D, N349S, F416S, F422L and T482A） have not been reported previously. Mutations in ERG11 gene were detected in 9 isolates of fluconazole resistant C. albicans, but were not detected in 1 isolate. Conclusions Although no definite correlation was found between the type of amino acid substitutions in Ergllp and the phenotype of cross-resistance to azoles, the substitutions F72S, F1451 and G227D in our study may be highly associated with resistance to azoles because of their special location in Erg11p.