结肠黑变病相关基因的cDNA芯片筛查分析

目的 应用基因芯片技术研究结肠黑变病(MC)和正常成人结肠组织基因的差异表达. 方法 分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将MC组和对照组结肠组织的mRNA分别标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交.通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因. 结果 MC组和正常对照组之间共筛选出93条差异表达基因,其中表达增加的基因有53条(2.0倍以上),表达降低的基因有40条(0.5倍以下). 结论 基因表达谱芯片筛选MC与正常成人结肠组织差异表达基因具有样品用量少、高速度、高敏感、高通量等特性.通过筛选所得差异基因提示MC的发病可能涉及细胞增殖、酯类代谢、能量代谢、细胞毒等多种因素,为进一步阐明MC的发病机制提供了新线索.     

基因芯片技术在胰腺癌相关基因研究中的应用

目的　应用基因芯片技术比较胰腺癌组织与正常胰腺组织基因表达谱的差异 ,以寻找新的诊断指标和治疗位点。方法　将 12 80 0 0个人类全长基因的PCR产物点样在特殊处理后的玻片上制备基因芯片。采用逆转录的方法分别将Cy5 dUTP标记胰腺癌组织mRNA、Cy3 dUTP标记正常胰腺组织mRNA以制备探针。将每一标本的混合探针与芯片杂交 ,用ScanArray 30 0 0荧光扫描仪扫描荧光信号。应用ImaGene3.0软件分析、计算每点的Cy5和Cy3信号值。以Cy5 /Cy3比值的自然对数绝对值 >0 .6 9为标准 ,筛选差异表达基因。结果　在所检测的 6例胰腺癌标本中 ,共有 5 4个基因有差异表达 ,其中胰腺癌组织中表达上调基因 32个 (包括基因库中已登录基因 2 4个 ) ,表达下调基因 2 2个 (包括基因库中已登录基因 15个 )。结论　基因芯片技术为阐明胰腺癌特异基因表达谱提供了强有力的工具。     

子宫内膜癌组织中Bim Bax mRNA表达及相关性研究

目的探讨促凋亡基因B im、Bax mRNA在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法RT-PCR方法检测17例正常增殖期子宫内膜、11例非典型增生子宫内膜及52例子宫内膜癌中B im mRNA、Bax mRNA的表达。结果B im mRNA在正常增殖期内膜、非典型增生内膜及子宫内膜腺癌组织中表达量逐渐减少,且差异显著(P<0.05)。Bax mRNA在正常增殖期内膜、非典型增生内膜及子宫内膜腺癌组织中表达量逐渐增加,有明显统计学差异(P<0.05)。在不同病理分级、不同手术病理分期及肌层浸润深度的子宫内膜腺癌组织中,B immRNA及Bax mRNA阳性表达量无明显差异(P>0.05)。相关分析结果显示在不同子宫内膜组织中,B im mR-NA与Bax mRNA表达呈明显负相关(P<0.05)。结论B im、Bax表达改变与子宫内膜癌的发生密切相关。     

基因芯片在筛选食管鳞癌相关基因中的应用

目的研究人食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织的基因表达谱,通过对比基因表达的差异,寻找与人食管鳞癌发展相关的基因。方法提取人食管鳞癌与正常食管鳞状上皮的mRNA,逆转录成cDNA,并用Cy3-dUTP标记正常食管组织,用Cy5-dUTP标记食管鳞癌组织,制成探针,与基因芯片进行杂交,经扫描仪扫描后,对获取的信号数据进行软件分析、对比。筛选出差异表达的基因。结果在4例新鲜标本的芯片杂交检测中,共发现4329条基因发生差异表达,其中2293条上调,2036条下调,将这些基因按GO（gene ontology）分子功能（function term）进行分类,发现与细胞分化、成熟,分子定位、连接,信号传导,酶活性调节,以及基因转录、翻译调节有关的基因最多。结论①食管鳞癌的发生发展与多条基因的异常表达有关。②应用基因芯片技术可以对食管鳞癌的基因表达谱进行分析,以筛选食管鳞癌相关基因。     

印迹基因 H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3基因表达谱的影响

目的获得印迹基因H19对滋养细胞株人绒毛膜上皮癌细胞系(JEG-3)细胞基因表达谱的影响,以期探讨H19对滋养细胞生物学行为的调控机制。方法含人全长H19cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染JEG-3细胞,采用Affymetrix的U133plus 2.0Array基因表达谱芯片检测基因表达谱的变化。结果转染后H19mRNA表达显著升高,JEG-3细胞基因表达谱明显改变,共筛选出96条差异基因,其中上调基因19条,下调基因77条。选择其中一种差异表达基因HES1,采用荧光定量PCR检测发现重度子痫前期胎盘组织HES1mRNA的表达水平较正常晚孕胎盘组织中HES1mRNA的表达水平明显降低。结论高通量基因芯片筛选出了H19调控滋养细胞的相关基因,为进一步探讨H19对滋养细胞生物学行为的调控机制提供了实验基础。     

基因芯片技术筛选2型糖尿病胰岛素抵抗脂肪代谢相关差异表达基因

目的:应用基因芯片技术比较2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)患者和正常人大网膜组织脂肪代谢相关基因表达谱的差异,探讨IR可能的发病机制.方法:分别用Cy5 和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将IR组(n＝5)和正常对照组(n＝5)脂肪组织的mRNA标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因.然后对芯片筛选结果中差异表达的FOXC2基因用Northern印迹法进行验证.结果:IR组和正常对照组之间共筛选出82条差异表达已知基因;其中脂肪代谢相关基因10条,表达增加的基因5条,表达降低的基因5条.Northern印迹证实IR组FOXC2 mRNA表达明显升高,与基因芯片检测结果一致. 结论:IR的发病与脂肪代谢相关,FOXC2可能是2型糖尿病IR的候选基因.     

PTEN,Bim蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨促凋亡基因PTEN Bi m蛋白在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化SP方法和Western blot方法检测17例正常增殖期子宫内膜、11例非典型增生子宫内膜及52例子宫内膜癌中PTEN、Bi m蛋白的表达。结果Bi m在正常子宫内膜中阳性表达率为100%,而在非典型增生内膜中阳性表达率开始下降(71.4%),在子宫内膜癌组织中明显下降,(P<0.05),而在子宫内膜癌各组织分级、临床分期及肌层浸润程度之间Bi m蛋白表达阳性率均无明显差异(P>0.05)。正常增殖期子宫内膜组织中PTEN表达量最多,随着内膜细胞的增殖程度的增加,PTEN表达量逐渐下降。结论PTEN Bi m蛋白表达改变与子宫内膜癌的发生密切相关。     

Gene expression profile differences in high and low metastatic human ovarian c ancer cell lines by gene chip

目的：用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO-8910PM和HO-8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法：按一步法分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的高低转移人卵巢癌细胞及对照组织的mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA一链做探针,分别混合后在2张含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交。经洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用ImaGene3.0软件对扫描图像进行数字化处理,计算机分析高低转移人卵巢癌细胞系之间及与正常卵巢上皮基因表达谱差异。结果：人卵巢癌细胞系HO-8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM与母系HO-8910比较差异2倍以上共有165个基因,其中两株细胞系比较差异3倍以上共有21个基因。结论：两株人卵巢癌细胞系与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展及高转移特性有关。本实验说明利用基因芯片对基因表达谱的检测可以为人体卵巢癌的基因诊断、治疗和预防提供新的方向。     

Fhit基因在子宫内膜癌增殖、侵袭中的作用和临床意义

目的探讨Fhit基因在子宫内膜癌中的表达情况,并通过RNA激活上调Fhit表达后观察其对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭、迁移的影响。方法收集135例子宫内膜癌组织和40例正常子宫内膜组织,使用免疫组织化学和Western blotting检测Fhit基因的表达情况并分析Fhit表达与临床病理特征的联系。构建Fhit-saRNA表达载体,转染至子宫内膜癌ISK细胞株,建立上调Fhit基因表达的子宫内膜癌细胞株。Western blotting和RT-PCR验证转染效果。通过CCK-8和Transwell试验分析转染前后增殖、迁移、侵袭能力的差异。结果免疫组织化学和Western blotting结果均显示在子宫内膜癌组织中Fhit基因表达与正常子宫内膜组织相比明显降低甚至缺失（P < 0.01）;CCK-8结果显示Fhit基因表达上调后子宫内膜癌细胞生长明显减慢,与未转染组比较差异有统计学意义（P < 0.01）;Transwell试验结果显示Fhit基因表达上调后子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力显著减弱,空白对照组的穿膜细胞数显著高于转染组（P < 0.01）。结论相比于正常子宫内膜组织,Fhit基因在子宫内膜癌组织中表达较低且与临床病理特征相关。在子宫内膜癌细胞株中通过saRNA上调Fhit后,其增殖、迁移、侵袭能力受到明显抑制。     

LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用

目的研究LRP16在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的表达;LRP16转染细胞,RT-PCR证实转染的成功性,WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为83.33%、0.82±0.21)明显高于正常子宫内膜组织(分别为30.00%、0.47±0.18),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示转染后细胞LRP16mRNA表达明显增加。转染组HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力并没有增强。结论 LRP16的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。     

子宫内膜癌细胞黏附分子吞噬细胞糖蛋白的表达及临床意义

目的:探讨子宫内膜癌细胞黏附分子吞噬细胞糖蛋白CD44的表达与临床病理因素的相关性。方法:应用抗CD44V6变异体单克隆抗体对子宫内膜癌石蜡标本60份进行免疫组化测定,同时采用流式细胞术对其标准体CD44H进行定量分析,并与临床病理资料进行对比。结果:60份子宫内膜癌组织中16份CD44H阳性表达,占26.7%(16/60),CD44V6阳性表达者11份,占18.3%(11/60),14份子宫内膜增生组织中,分别有6份占42.9%(6/14)CD44H和CD44V6表达,而22份正常子宫内膜组织CD44H阳性表达者14份,占63.6%(14/22),CD44V6阳性表达者18份,占81.8%(18/22),表明子宫内膜癌CD44表达显著低于正常子宫内膜和子宫增生内膜。子宫内膜癌淋巴脉管间隙受累率在CD44阴性组显著高于阳性组,且CD44V6变异性表达与子宫内膜癌淋巴脉管侵蚀,组织间隙受累显著相关(P<0.01)。结论:黏附分子CD44在子宫内膜癌发生发展中起一定作用,CD44表达下降与子宫内膜癌细胞通过淋巴脉管间隙转移有关,这些基因表达降低与子宫内膜癌患者不良预后因素有关,有可能作为子宫内膜癌患者的预后指标。     

MDM2、p53在增生、癌变子宫内膜的表达及其意义

应用原位杂交方法,以地高辛标记的cDNA探针检测6例正常子宫内膜、14例增生性子宫内膜和30例子宫内膜腺癌组织石蜡包埋标本中MDM2基因mRNA的表达,运用免疫组化SABC法检测MDM2和p53基因的蛋白表达。结果表明p53基因在正常、增生性及癌变子宫内膜组织中表达率依次增高,在子宫内膜腺癌组织中其表达水平与临床分期和病理分级相关（P<0.05）。MDM2基因在增生性内膜中较癌变内膜表达率高,但无统计学意义（P>0.05）。MDM2基因的mRNA与蛋白表达具很好的相关性（P<0.01）。认为p53与子宫内膜癌的形成相关。MDM2可能与子宫内膜组织异常增殖有关。在子宫内膜增生及癌变组织中可能存在p53对MDM2在转录水平的调控。     

肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE在子宫内膜癌组织中表达的研究

研究MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达,并探讨其肿瘤特异性抗原作为子宫内膜癌免疫治疗特异性靶位的可能性。方法：采用逆转录－聚合酶联反应（RT PCR）技术,检测35例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中MAGE 1、MAGE 3、BAGE和GAGE1 2基因的表达情况,以β actin作内参照。结果：35例子宫内膜癌组织中,MAGE 1、MAGE 3、BAGE、GAGE1 2表达阳性率分别为46％（16/35）、49％（17/35）、20％（7/35）和26％（9/35）,有77％的标本至少表达其中一种基因。15例正常子宫内膜组织中MAGE 1、MAGE 3、BAGE、GAGE1 2基因表达均为阴性。结论：肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌中有较高的表达,MAGE 1、MAGE 3、BAGE基因的表达与子宫内膜癌的病理分期及分级无相关性,GAGE1 2与子宫内膜癌的分期无关,与分级有关。其可作为子宫内膜癌患者免疫治疗的特异性靶点。     

基因表达谱芯片检测肺鳞癌与正常肺组织差异表达的基因

目的：用基因芯片技术探讨肺鳞癌异常基因的表达。方法：提取肺鳞癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,筛选肺鳞癌组织和正常肺组织表达差异的基因。结果：肺鳞癌组织与正常肺组织表达差异基因225条,其中癌组织中上调基因为116条．下调基因109条;差异极显著性基因37条,表达上调24条,下调13条。结论：多基因参与肺鳞癌发病,基因芯片技术是肺癌基因筛选的有效方法。     

γ-synuclein在子宫内膜癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨子宫内膜癌组织中γ-synuclein表达与子宫内膜癌预后的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测63例子宫内膜癌组织及12例正常子宫内膜组织中γ-synuclein的表达.结果 子宫内膜癌组织中γ-synuclein阳性表达率为44.4%(28/63),正常子宫内膜组织无表达,差异有统计学意义(P＜0.05).γ-synuclein阳性表达组总体生存率为97.1%,高于阴性表达组的35.7%,差异有统计学意义(P＜0.05);Cox多因素分析显示γ-synuclein、浸润深度与子宫内膜癌预后有关(P＜0.05).结论 γ-synuclein表达与子宫内膜癌发生发展及侵袭转移有关,可能对患者预后有提示作用.     

抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达

目的 :了解抑癌基因PTEN在子宫内膜癌中的表达及与子宫内膜癌临床病理因素的相关性 ,探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系 .方法 :运用免疫组织化学SABC法测定PTEN蛋白在 77(子宫内膜样腺癌 72 ,子宫浆液性癌 5 )例子宫内膜癌组织和 2 5例正常子宫内膜中的表达 ,并比较PTEN表达变化与组织学类型、手术临床分期、病理分级、子宫肌层浸润程度、淋巴结转移及患者年龄等临床病理因素之间的相关性 .结果 :子宫内膜癌组织中PTEN表达缺失率为 6 0 % ,与正常子宫内膜相比 (0 % )存在显著性差异 (P =0 .0 0 0 0 ) .子宫内膜样腺癌中PTEN的失表达率为 6 4 % ,而子宫浆液性癌为0 % ,二者差异显著 (P =0 .0 0 4 8) .PTEN的失表达率随内膜癌恶性程度的增加而增加 (P =0 .0 0 34) ,但与手术临床分期、肌层浸润程度、淋巴结转移及患者年龄等因素无关 (P >0 .0 5 ) .结论 :抑癌基因PTEN是在子宫内膜癌发生过程中占重要地位的突变基因 ,PTEN基因的失表达与子宫内膜癌 ,特别是子宫内膜样腺癌的发生发展密切相关     

p16蛋白和PCNA在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的探讨p16基因和PCNA在子宫内膜癌发生发展中的作用.方法采用免疫组化技术检测子宫内膜癌组织中p16蛋白和PCNA的表达.结果子宫内膜癌组织p16蛋白表达阳性率低于正常内膜组织(P《0.05),而PCNA表达高于正常内膜组织(P《0.01),p16蛋白表达与子宫内膜癌组织学分级、淋巴转移相关(P《0.05,P《0.05),PCNA指数与子宫内膜癌的临床分期、组织学分级、淋巴转移相关.p16蛋白表达阴性者预后差.结论p16基因和PCNA可能参与子宫内膜癌的发生发展,p16蛋白检测可做为子宫内膜癌的预后指标.     

子宫内膜癌患者人附睾蛋白4含量变化及其与肿瘤组织中凋亡分子表达的相关性

目的 探讨子宫内膜癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)含量变化及其与肿瘤组织中凋亡分子表达的相关性.方法 收集2015年9月至2016年9月安徽医科大学第二附属医院收治的子宫内膜癌患者38例,根据病理分期将其分为早期子宫内膜癌组(Ⅰ期)30例、中晚期子宫内膜癌组(Ⅱ~Ⅳ期)8例;另取同期在安徽医科大学第二附属医院门诊接受诊刮治疗的良性疾病患者50例作为对照组.采用电化学发光法测定HE4含量;采用荧光定量PCR法检测肿瘤组织促凋亡基因、抗凋亡基因mRNA表达量.结果 早期子宫内膜癌组和中晚期子宫内膜癌组患者血清HE4含量分别为(125.64±15.82)pmol/L、(243.25±46.83)pmol/L,均高于对照组的(57.38±6.91)pmol/L(P<0.05).早期子宫内膜癌组、中晚期子宫内膜癌组患者肿瘤组织中促凋亡基因XAF1、ITLN-1 mRNA表达量及Caspase-3蛋白表达量低于对照组,中晚期子宫内膜癌组患者以上分子mRNA表达量低于早期子宫内膜癌组(P<0.05);早期子宫内膜癌组、中晚期子宫内膜癌组患者肿瘤组织抗凋亡基因Survivin、c-myb、Bax、RLIP76、PTP1B mRNA表达量高于对照组患者,中晚期子宫内膜癌组患者以上分子的 mRNA表达量高于早期子宫内膜癌组患者(P<0.05).经Pearson检验,子宫内膜癌患者血清HE4含量与肿瘤组织促凋亡基因及Caspase-3蛋白表达量呈负相关,与肿瘤组织抗凋亡基因表达量呈正相关.结论 子宫内膜癌患者血清中存在异常高表达的HE4,且其表达量与肿瘤恶性程度直接相关.     

RT-PCR检测子宫内膜癌患者外周血中细胞角蛋白20基因的表达

【目的】建立自外周血样本中检测细胞角蛋白20（cytokeratins 20,ck20）基因表达的RT-PCR方法,初步检测其在子宫内膜癌患者中的阳性率。【方法】17例病理确诊为子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组,46例正常体检的女性为正常对照组,提取子宫内膜癌组子宫内膜组织及所有个体外周血单个核细胞总RNA,逆转录合成cDNA,巢式RT-PCR扩增ck20基因,同时扩增beta-actin基因以确保cDNA的有效性。以电泳中可见ck20基因的DNA条带确定为阳性表达。【结果】子宫内膜癌组患者的内膜组织及部分血样中可成功扩增出ck20基因。经小样本比较,ck20基因在正常对照组无阳性表达,在子宫内膜癌组外周血中的阳性率为70.6%。【结论】RT-PCR可检测血样中ck20基因的表达。与正常对照组相比,子宫内膜癌组ck20基因在外周血中的检出率显著升高,作为肿瘤标志物,对恶性上皮性肿瘤的诊断具有一定的临床价值。