ANAE染色和抗Thy 1-SPA菌体花环双标记法的建立 及其用于检测小鼠T淋巴细胞的研究报告

Ｔｈｙ抗原 [Ｔｈｙ(θ)ａｎｔｉｇｅｎ]是Ｔ淋巴细胞表面特异标志 ,系由第 9对染色体等位基因编码的抗原分子。Ｍｕｅｌｌｅｒ发现 ,抗θ血清可破坏ＡＮＡＥ阳性淋巴细胞 ,ＡＮＡＥ阴性者则否。设想 ,小鼠ＡＮＡＥ阳性淋巴细胞可能正是携有Ｔｈｙ 1表面标志物的淋巴细胞 ,应该可以直接获得证明。为此 ,作者进行了小鼠淋巴细胞抗Ｔｈｙ 1 -ＳＰＡ菌体花环与ＡＮＡＥ染色双标记的实验研究。目的 :建立ＡＮＡＥ染色联合抗Ｔｈｙ 1 -ＳＰＡ菌体花环双标记法 ;利用此法证明抗θ抗体对ＡＮＡＥ阳性淋巴细胞的特异作用。方法 :利用双标记法对正常…     

小鼠胸腺基质细胞系（MTEC1）对裸鼠骨髓细胞的诱…

在体外建立的小鼠胸腺基质细胞系（ＭＴＥＣ１）及其培养上清（ＭＴＥＣ１－ＳＮ）与裸鼠骨髓（ＢＭ）细胞共同培养，通过直接荧光素标记抗体，ＦＡＣＳ分析其细胞表面标志表明，ＭＴＥＣ１及ＭＴＥＣ１－ＳＮ均有诱导促进Ｔｈｙ·１＾－ＣＤ＾－４ＣＤ＾－８的ＢＭ细胞表达Ｔｈｙ·１，ＣＤ４及ＣＤ８分子的作用。在培养或共育三天时，ＭＴＥＣ１－ＳＮ可促进ＢＭ细胞分化形成ＣＤ＾＋４Ｔｈｙ·１＾－，ＣＤ＾－４Ｔｈｙ·１＾＋细     

ANAE染色和抗Thy1-SPA菌体花环双标记法的建立及其用于检测小鼠T淋巴细胞的研究

目的建立 ANAE染色联合抗 Thy1SPA菌体花环双标记法 ,并试图利用此法证明抗θ抗体对 ANAE阳性淋巴细胞的特异作用。方法利用双标记法对正常小鼠胸腺及脾细胞进行检测 ,观察抗 Thy1SPA抗体对 ANAE阳性细胞结合的专一性。结果双标记法中 ,抗 Thy1SPA菌体花环阳性同 ANAE阳性一样 ,能很好反映 6 15小鼠胸腺或脾脏 T细胞数 (P>0 .0 5 ) ;胸腺和脾脏细胞 Thy1 - ANAE 率 ,即双标记阳性率略低于总的 ANAE 或总抗θ菌体花环 数 ,但 3者之间有明显的相关性。结论成功建立了 ANAE-抗 Thy1SPA菌体花环法 ,并首次用此法证明抗θ血清对 ANAE阳性细胞的特异作用     

CD4^＋CD45^＋T细胞对SLE病人B细胞产生自身抗体的调节作用

选择体外抗ＤＮＡ，抗ＣＤＬ抗体双阳性的ＳＬＥ病人Ｂ细胞做为靶细胞，分别与不同的ＳＬＥ病人或正常人ＣＤ４＾＋ＣＤ４５＾＋Ｔ细胞亚群共同培养，结果显示，ＳＬＥ病人ＣＤ４＾＋ＣＤ４５ＲＯ＾＋Ｔ细胞对自身抗体的产生有明显的辅助作用，而ＣＤ４＾＋ＣＤ４５ＲＡ＾＋Ｔ细胞的作用不明显。     

MTEC 1分泌的趋化因子引起特定亚群胸腺细胞的定向迁移

分析胸腺髓质上皮样细胞系ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对胸腺细胞亚群的趋化作用。方法以抗体加补体杀伤结合免疫磁珠及ｐａｎｎｉｎｇ法，将小鼠胸腺细胞分离纯化，获得ＣＤ４＋ＣＤ８＋（ＤＰ），ＣＤ４－ＣＤ８－（ＤＮ），ＣＤ４＋ＣＤ８－（ＣＤ４ＳＰ）及ＣＤ４－ＣＤ８＋（ＣＤ８ＳＰ）四亚群细胞，用Ｂｏｙｄｅｎ小室分析ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对四群胸腺细胞的趋化作用。结果ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对ＤＰ及ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞有趋化活性（ＣＩ＝６．６±１．０及６．１±１．８）；对ＣＤ８ＳＰ细胞有中度趋化活性（ＣＩ＝３．２±１．０）；对ＤＮ趋化活性微弱（ＣＩ＝１．３±０．６）。化学趋化因子ＭＣＰ┐１纯品对ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞显示强趋化活性（ＣＩ＝５．６），对ＤＮ胸腺细胞则无可测出趋化活性。结论ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对ＤＰ，ＣＤ４ＳＰ及ＣＤ８ＳＰ胸腺细胞有显著趋化作用，对ＤＮ胸腺细胞几乎无趋化作用。提示此类化学趋化因子有趋使胸腺发育中后期阶段的细胞向胸腺髓质区迁移和定位的作用。     

PWM对人胎儿胸腺细胞的增殖效应

本文报道ＰＷＭ单独作用及与其它刺激因子或辅佐细胞共同作用，对胎儿胸腺细胞增殖的影响。据比重不同将胎儿胸腺细胞分为Ｔｈｙ－Ｌ（比重≤１．０７４）和Ｔｈｙ－Ｈ（比重＞１．０７４）两个亚群。用抗－ＣＤ３，抗－ＣＤ４，抗－ＣＤ８单抗加补体杀伤法分别去除ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＋４和ＣＤ＾＋８胸腺细胞。结果表明：ＰＷＭ可单独诱导胎儿胸腺细胞增殖，对Ｔｈｙ－Ｌ亚群的促增殖作用显著，但对Ｔｈｙ－Ｈ亚群无影响，ＣＤ＾－     

7株小鼠胸腺基质细胞系诱导裸鼠骨髓干细胞表达CD4…

为研究胸腺微环境在Ｔ细胞发育中的作用，我室在体外建立了７株小鼠胸腺基质细胞系，命名为ＭＴＥＣ１－ＭＴＥＣ７。通过初步分离得到裸鼠骨髓富含干细胞的细胞群，表面ＣＤ４及ＣＤ８分子均为阴性，将分离的骨髓干细胞为胸腺基质细胞共育３天后，经双色荧光抗体染色，ＦＡＣＳ分析发现胸腺基质细胞可诱导裸鼠骨髓干细胞表达ＣＤ４ＣＤ８分子。ＭＴＳＣ－ＳＮ及ＭＴＳＣ主要诱导的是ＣＤ４＾＋ＣＤ８＾－细胞，部分ＣＤ４＾＋ＣＤ８     

胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌干扰素的促进作用

目的分析胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌干扰素的影响。方法用胸腺细胞和胸腺基质细胞混合培养模型，测定ＩＦＮ活性并进行类型鉴别。结果胸腺细胞可以促进小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）产生Ⅰ型ＩＦＮ，胸腺细胞和胸腺基质细胞以４０１的比例培养时，促进作用最强。ＭＴＥＣ１细胞经抗ＩＣＡＭ－１抗体作用后，分泌Ⅰ型ＩＦＮ增多。用放线菌酮预处理ＭＴＥＣ１细胞后，胸腺细胞和抗ＩＣＡＭ－１抗体则不再影响ＭＴＥＣ１细胞产生ＩＦＮ。结论胸腺细胞与基质细胞的相互作用，可由粘附分子ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１介导。胸腺细胞能促进ＭＴＥＣ１细胞合成ＩＦＮ。     

锌对免疫细胞的细胞周期影响的研究

锌对免疫器官细胞的动力学和增殖特性研究，对临床防治缺锌、提高免疫能力，将提供有价值的生物信息。通过建立大鼠缺锌（ＺＤ）、高锌（ＺＥ）模型，采用流式细胞仪检测锌对骨髓、胸腺、脾脏细胞周期的影响。结果表明：（１）ＺＤ、ＺＥ组的骨髓、胸腺、脾脏细胞周期以及脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞周期显示：Ｇ＿０／Ｇ＿１期细胞增多，而Ｓ期、Ｇ＿２＋Ｍ期细胞减少，与配对（ＰＦ）组、自由喂养（ＡＬ）组及缺锌后补锌（ＺＤ＋ＡＮ）组间差别非常显著；（２）ＺＤ、ＺＥ组的脾脏Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４，非常显著地低于ＰＦ、ＡＬ、ＺＤ＋ＡＬ组，ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８比值也有显著地下降。以上结果提示，适量锌有促进免疫器官——骨髓、胸腺、脾脏细胞ＤＮＡ复制，使Ｇ＿０／Ｇ＿１期细胞增殖进入Ｓ期和Ｇ＿２＋Ｍ期。而缺锌和高锌则抑制免疫器官细胞的增植分化。     

抗ENA抗体及抗核抗体同时检测的临床意义

系统性红斑狼疮是一种慢性多系统的疾病，伴有多种血清自身抗体，我们采用免疫印迹法技术，对３０例ＳＬＥ患者和２０名正常人进行抗ＥＮＡ抗体的检测，同时用免疫荧光法检测了抗核抗体，测定结果：抗Ｓｍ阳性１０例，为３３．３％，抗ｕ１ＲＮＰ抗体阳性８例为２６．６％，两项均为阳性１１例，为３６．６％；１例为阴性；２０例正常人为阴性。ＡＮＡ３０例均为阳性两种核型１５例，抗ｄｓＤＮＡ阳性４例，为１３．３％，抗ＥＮＡ抗     

系膜增殖性肾炎中花生四烯酸产物对系膜细胞增殖的作用

在抗Ｔｈｙ１．１抗体引起的大鼠系膜增殖性肾炎中，肾小球的增殖性细胞核抗原（ＰＣＮＡ）阳性细胞增多，＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定的肾小球增殖活性（ＧＰＡ）升高。对肾炎鼠给予５－脂氧合酶抑制剂ＭＫ８８６或血栓素（ＴＸＡ２）合成酶抑制剂Ｆｕｒｅｇｒｅｌａｔｅ或１２－脂氧合酶抑制剂Ｂａｉｃａｌｅｉｎ进行处理，可分别抑制肾小球合成的白三烯（ＬＴ）Ｂ４及１２－羟     

大鼠Thy1抗血清制备及系膜增生性肾炎模型的建立

通过分离大鼠胸腺细胞，免疫家兔，制得兔抗大鼠Ｔｈｙ１抗血清（ＡＴＳ）采用连续４次注射ＡＴＳ，建立改进型大鼠系膜增生性肾炎模型，并应用ＰＣＮＡ，α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）作为增殖指标观察系膜细胞的增生情况。结果显示改进型动物模型在病变的诱导２８ｄ，３５ｄ时，表达ＰＣＮＡ，α－ＳＭＡ阳性细胞仍较多，较正常动物组，细胞增生明显（Ｐ〈０．０５），且病理持续时间较长。     

甲状腺上皮HLA—DR抗原异常表达及临床意义

应用一组识别淋巴细胞活化标志，细胞因子，组织相容性抗原（ＨＬＡ－ＤＲ）的单克隆抗体及ＡＢＣ免疫组化技术对５００例甲状腺粗针穿刺标本进行原位研究。结果发现甲状腺上皮ＤＲ抗原异常表达与局部浸润细胞总数，Ｔａｃ＾＋细胞，ＴＬｉＳＡ１＾＋细胞，ＩＦＮ－γ＾＋ＸＬＥＱ，－２＾＋细胞，尤其是Ｉ２＾＋细胞与ＴＮＦ－α，细胞百分比外周血甲状腺球蛋白抗体，甲状腺微粒体抗体，促甲状腺素水平呈正相关，甲状腺上皮ＤＲ抗原     

链球菌蛋白G应用于ELISA的实验研究

对酶标记链球菌蛋白Ｇ（ＳＰＧ）在ＥＬＩＳＡ的应用条件进行了研究并与ＳＰＡ作了系统比较。ＳＰＧ与ＩｇＧ结合受温度影响，３７℃结合活性高于室温和４℃；反应时间定为２ｈ反应溶液ｐＨ值升高，ＳＰＧ的结合力亦增强。在同等条件下与酶标记ＳＰＡ进行比较，结果表明ＳＰＧ对小鼠单克隆抗体、羊抗人、兔抗ＩＦＮ－γ和驴抗兔Ｉｇｇ以及牛、大鼠和人ＩｇＧ的结合力均明显高于ＳＰＡ。ＳＰＧ用于大鼠血清抗ＩＦＮ－γ抗体的检测，其阳性率和抗体滴度均大大高于ＳＰＡ。因此，ＳＰＧ作为一种广谱的、高亲和力的ＩｇＧ结合物，是应用于ＥＬＩＳＡ的理想的替代二抗。     

抗Thy—1单克隆抗体的免疫抑制作用

从体内，体外研究了抗Ｔｈｙ－１单克隆抗体（Ｍｃ－Ａｂ）的免疫抑制作用，结果表明：（１）体外抗Ｔｈｙ－１ＭｃＡｂ在补体参与下能够杀伤小鼠胸腺细胞，无补体时能抑制ＣｏｎＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖反应；（２）在体内，可以抑制小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ和ＰＨＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖，但不影响ＬＰＳ诱导的Ｂ淋巴细胞增殖反应。结果说明：抗Ｔｈｙ－１ＭｃＡｂ的免疫抑制使用可能包括补体依赖性细胞毒作用和通过Ｔｈｙ－１分子 地     

抗MPO抗体的ELISA检测和应用

本文应用Ｍａｔｈｅｓｏｎ方法从人白细胞中提取髓过氧化物酶ＭＰＯ，建立ＥＬＩＳＡ法检测６３份血清标本中抗ＭＰＯ抗体，同时与间接免疫荧光法（ＩＩＦ）作比较，结果是：１９例结节性多动脉炎（ＰＡＮ）患者中６例抗ＭＰＯ抗体阳性（３２％），较ＩＩＦ法阳性率提高（１９例中１例），而２２例正常人及２２例其他肾脏病患者血清均为阴性。提示ＥＬＩＳＡ法既可从分子水平鉴定系统性血管炎致病的特异性抗体，又是系统性血管炎敏感的诊断方法。     

丙型肝炎病毒基因组部分E2／NS1蛋白基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组的部分Ｅ２／ＮＳ１蛋白（氨基酸３６４－５１２）。表达蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，主要表达带的分子量在～４３０００左右。表达蛋白用于检测已用Ｃ３３ｃ及Ｑ２２检测过的血清，发现Ｅ２ＮＳ１引抗体阳性率占Ｃ３３ｃ及Ｑ２２抗体阳性血清的２０％，尚没有发现单独Ｅ２／ＮＳ１抗体阳性的血清。     

锌对大鼠免疫器官细胞周期增殖特性分析

本文通过建立大鼠缺锌（ＺＤ）、高锌（ＺＥ）模型检测锌对骨髓、胸腺、脾脏细胞周期的影响。结果表明：（１）ＺＤ、ＺＥ组的骨髓、胸腺、脾脏细胞周期，以及脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞的Ｇ·／Ｇ１期细胞增多，而Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞减少、与配对组（ＰＦ）、自由喂养组（ＡＬ）、缺锌补锌组（ＺＤ＋ＡＬ）间差别非常显著。（２）ＺＤ、ＺＥ组的脾脏Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３·ＣＤ４非常显著低于ＰＦ、ＡＬ、ＺＤ＋ＡＬ组。ＣＤ４／ＣＤ８比值也显著下降。提示适量锌促进免疫器官细胞ＤＮＡ复利，而缺锌、高锌则抑制其细胞的增殖分化。     

兔胸腺、猪脾丙酮粉的制备及ENA的提取

ＥＮＡ全称为Ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉ ｇｅｎ,即可提取性核抗原 ,包括Ｓｍ、Ｕ1 ＲＮＰ、ＳＳＡ、ＳＳＢ、Ｊｏ 1、Ｓｃ1 70、ｒＲＮＰ、Ｋｕ、ＰＣ ＮＡ、Ｍｉ 1、Ｍｉ 2、ＰＭ 1等。ＥＮＡ抗体是抗核抗体中种类最多、最为重要的一族抗体谱 ,是自身免疫性结缔组织病中常见的自身抗体。本文拟从兔胸腺和猪脾中制备ＥＮＡ丙酮粉 ,探索简便可行的浓缩ＥＮＡ蛋白抗原的方法 ,以达到提高检测抗ＥＮＡ抗体阳性率的目的 ,最终向基层医院推广。兔胸腺和猪脾冻存于 80℃超低温冰箱 ,首先 ,4℃下分别以磷酸盐缓冲液(ＰＢＳ)和…     

抗Thy－1单克隆抗体的免疫抑制作用

从体内、体外研究了抗Ｔｈｙ－１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫抑制作用。结果表明：（１）体外抗Ｔｈｙ－１ＭｃＡｂ在补体参与下能够杀伤小鼠胸腺细胞，无补体时能抑制ＣｏｎＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖反应；（２）在体内，可以抑制小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ和ＰＨＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖、但不影响ＬＰＳ诱导的Ｂ淋巴细胞增殖反应。结果说明：抗Ｔｈｙ－１ＭｃＡｂ的免疫抑制作用可能包括补体依赖性细胞毒作用和通过Ｔｈｙ－１分子对Ｔ淋巴细胞功能的抑制。