逆转录病毒表达载体N2A／hGM—CSF的构建及其在COS…

用特异性核酸内切酶Ｂａｍ Ｈｉ剪切质粒ｐＣＤ／ｈＧＭ－ＣＳＦ，制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段，低融点胶回收后，连接至Ｎ２Ａ载体Ｂｇ１Ⅱ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒Ｎ２Ａ／ｈＧＭ－ＣＳＦ。利用ＤＥＡＥ－葡聚糖介导该重组质粒转化ＣＯＳ－７细胞，收集４８ｈ培养上清液，免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然ＧＭ－ＣＳＦ的活性，而用质粒     

人干扰素/β肿瘤坏死因子重组杂合蛋白的免疫调节功能

报道了人干扰素／β肿瘤坏死因子（ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β）杂合蛋白对正常动物免疫反应的影响，结果如下：经ＬＰＳ激活的豚鼠腹腔巨噬细胞，当与适宜剂量的杂合蛋白温育后，其无细胞上清液中的Ｈ２Ｏ２浓度高于对照组。ＤＮＣＢ致敏的大鼠在半抗原攻击前，如在一侧耳翼内注入适宜剂量的ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β，则由ＤＮＣＢ诱导的迟发超敏（ＤＴＨ）反应大于在另一侧耳翼内注入ＰＢＳ作为对照的反应强度。在抗体形成细胞（ＡＦＣ）反应检测系统中，经异种红细胞致敏的小鼠免疫脾细胞用杂合蛋白做短暂处理后，其ＡＦＣ反应比对照组有所增强。     

逆转录病毒表达载体N2A／hGM－CSF的构建及其在COS－7细胞的初步表达

用特异性核酸内切酶ＢａｍＨＩ剪切质粒ｐＣＤ／ｈＧＭ－ＣＳＦ，制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段，低融点胶回收后，连接至Ｎ２Ａ载体ＢｇｌⅡ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒Ｎ２Ａ／ｈＧＭ－ＣＳＦ。利用ＤＥＡＥ－葡聚糖介导该重组质粒转化ＣＯＳ－７细胞，收集４８ｈ培养上清液，免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然ＧＭ－ＣＳＦ的活性，而用质粒Ｎ２Ａ转化ＣＯＳ－７细胞，培养上清中未检测出ＧＭ－ＣＳＦ活性。     

细胞因子调节人肝癌细胞ICAM—1分子的表达及其对CD3AK杀伤功能…

应用基因重组人干扰素α（ＩＦＮ－α）、干扰素γ（ＩＦＮ－γ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）体外处理人肝癌细胞系Ｈ－７４０２，ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法检测各处理组和对照组细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达水平，用ＬＤＨ释放法观察ＣＤ３单克隆缺本活化的杀伤细胞对各处理条件下Ｈ－７４０２细胞的杀伤活性。     

基因工程产品中CHO细胞蛋白残余量测定方法的建立

目的： 建立简便、快速、高灵敏度的基因工程产品中ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白的检测方法。方法： 以基因工程用宿主细胞ＣＨＯＤＨＦＲ－ 的全细胞蛋白和该细胞培养上清浓缩蛋白的混合物, 免疫家兔制备抗血清, 并用间接ＥＬＩＳＡ 测定其效价; 用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析该抗体的特异性; 用该抗体建立直接、间接ＥＬＩＳＡ, 分别测定两种检测方法的动力学曲线、检测范围及灵敏度。结果： 抗ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白的抗血清效价为２×１０－ ７ , 该抗体只与ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白起反应, 不与基因工程产品ＥＰＯ 起反应; 用该抗体建立的直接、间接ＥＬＩＳＡ 法检测范围较宽, 灵敏度小于１μｇ／Ｌ。结论： 建立了高灵敏度、高特异性、操作简单、快速, 可检测基因工程产品中ＣＨＯ 细胞蛋白残余量的两种ＥＬＩＳＡ 法。     

转化生长因子β1 mRNA在实验性肝癌间质差异形成中的 …

目的：应用原位分子杂交技术观察了ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ在实验性大鼠胆管细胞性肝癌（ＣＣ）和肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中的表达,探讨肝癌间质差异形成的可能机制。方法：大鼠肝癌组织经ＨＥ和Ａｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ染色确认ＣＣ或ＨＣＣ,用ＴＧＦ－β１反应ＲＮＡ探针检测ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ的表达,同时以ＴＧＦ－β１正链,β－ｍＲＮＡ呈弱到中等强度的表达,少数ＣＣ的间质细胞也有ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达。结论：由于Ｔ     

HCMV感染对单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用细胞ＥＬＩＳＡ法，研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的影响。结果表明ＨＣＭＶ感染后１ｄ，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达显著增高（Ｐ＜０．０１），以后逐渐降低，ｄ５降至对照水平；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）．ＴＮＦ（２５０Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－６（５００／ｍｌ）、ＩＬ－１（５００／ｍｌ）均能不同程度地刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达；ＨＣＭＶ感染后，细胞因子刺激ＨＬＡ－ＤＲ表达的水平在感染后ｄ５，较对照组均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＩＬ－１＋ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ＋ＩＦＮ－γ在刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达时有协同作用；ＨＣＭＶ感染后，ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－１及ＴＮＦ＋ＩＦＮ协同刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：在ＨＣＭＶ感染引起免疫抑制过程中，其引起单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达降低是一重要机制。     

DEFINITION AND MECHANISM RESEARCH OF NK CELLS AC-TIVATION THROUGH THE CD45 PATHWAY

为鉴定介导ＮＫ细胞激活的表面分子及其作用机制，本研究用一系列粘附分子单抗及配体体外刺激ＮＫ细胞，定量检测ＮＫ细胞ＩＦＮ－γ的分泌；检测了ＮＫ细胞经ＩＬ－２诱导后其异构体的变化及其不同异构体单抗对ＮＫ细胞的刺激作用；以ＣＤ２２α、ＣＤ２２β基因导入Ｂ７８Ｈ１细胞后观察转染细胞对ＮＫ细胞的粘附和刺激效应。结果表明：ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ１亚类ＣＤ４５单抗及其Ｆ（ａｂ）２均可独立刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＮＫ细胞经ＩＬ－２培养诱导后其表面ＣＤ４５分子异构体的表达呈ＲＯ逐渐增加，而ＲＡ逐渐减少的特征；ＣＤ４５ＲＯ单抗可刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＣＤ２２α、ＣＤ２２β转染细胞可粘附，但不能刺激ＮＫ细胞激活。结果提示：ＮＫ细胞可经ＣＤ４５ＲＯ途径激活并释放ＩＦＮ－γ，该途径与ＣＤ１６分子无关，ＣＤ４５分子的特异性配体并非既往所报道的ＣＤ２２，尚待进一步鉴定     

HCMV感染对单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用细胞ＥＬＩＳＡ法，研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的影响。结果表明ＨＣＭＶ感染后１ｄ，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达显著增高（Ｐ＜０．０１），以后逐渐降低，ｄ５降至对照水平；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）．ＴＮＦ（２５０Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－６（５００／ｍｌ）、ＩＬ－１（５００／ｍｌ）均能不同程度地刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达；ＨＣＭＶ感染后，细胞因子刺激ＨＬＡ－ＤＲ表达的水平在感染后ｄ５，较对照组均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＩＬ－１＋ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ＋ＩＦＮ－γ在刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达时有协同作用；ＨＣＭＶ感染后，ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－１及ＴＮＦ＋ＩＦＮ协同刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：在ＨＣＭＶ感染引起免疫抑制过程中，其引起单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达降低是一重要机制。     

微丝重组对细胞增殖作用的研究

用罗丹明－鬼笔环肽（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ－ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）显示微丝（ｍｉｃｒｏｆｉｌａｍｅｎｔｓ，ＭＦ）的荧光染色法对Ｇ０期小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞向Ｓ期过渡过程中，ＭＦ结构的变化及ＭＦ重组对ＮＤＡ合成的影响进行了研究。Ｇ０期细胞在血清刺激１ｈ后ＭＦ解聚，３ｈ后重新组装，并恢复原来的分布，我们发现细胞松驰素Ｂ使ＭＦ解聚并与蛋白激酶激活剂－佛波酯同样可促进Ｇ０期细胞提前进入Ｓ期，促进ＤＮ     

几种细胞因子对HSV-1感染单核巨噬细胞的影响

以ＨＳＶ－１接种Ｕ９３７和小鼠腹腔巨噬细胞，并在接种前后分别以不同的细胞因子处理细胞，借助病滴定、免疫荧光抗体试验检测病毒抗原，用ＰＣＲ检测病毒基因，研究了细胞因子对ＨＳＶ－１感染单核巨噬细胞的影响。结果报告如下。Ｍ－ＣＳＦ对ＨＳＶ－１感染Ｕ９３７细胞具有抑制作用。病毒接种前或后三天以２００Ｕ／ｍｌＭ－ＣＳＦ持续处理Ｕ９３７细胞，接种ＨＳＶ－１后病毒滴度的下降、病毒抗原及基因组ＤＮＡ的消失较末处理组迅速，Ｍ－ＣＳＦ还能拮抗ＬＰＳ对病毒增殖的促进作用。ＩＦＮ－α中和单抗与Ｍ－ＣＳＦ同时持续处理Ｕ９…     

LFA-1/ICAM-1在柯萨奇B组病毒播散感染中的作用初探

目的观察ＣｏｘＢ３感染大鼠单个核细胞，诱导细胞表面ＬＦＡ－１表达的变化，以及ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１在ＣｏｘＢ３从单个核细胞向心肌细胞播散感染中的作用。方法制备和培养大鼠心肌细胞和大鼠外周血单个核细胞，并进行病毒感染；制备和纯化分泌抗大鼠ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）和抗大鼠ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）的单克隆抗体；在Ｗｉｓｈ细胞上进行病毒感染性滴定，并观察细胞病变；流式细胞仪分析各组单个核细胞ＬＦＡ－１的表达情况；观察抗－ＬＦＡ－１和抗－ＩＣＡＭ－１单克隆抗体在ＣｏｘＢ３复制和播散感染中的作用。结果ＣｏｘＢ３感染大鼠外周血单个核细胞１８～２４小时可以诱导细胞膜ＬＦＡ－１表达增多，同时释放感染性病毒颗粒感染正常大鼠心肌细胞；加入抗－ＬＦＡ－１或抗－ＩＣＡＭ－１的单克隆抗体均可不同程度地抑制病毒向心肌细胞播散感染，并显著降低培养上清液中病毒滴度。结论ＣｏｘＢ３感染增加白细胞表面ＬＦＡ－１表达可能是病毒病理作用的重要步骤     

粘附分子对CD3介导的胸腺细胞[Ca^2＋]i应答的影响

ＬＦＡ－１和ＩＣＡＭ－１广泛表达于各胸腺细胞亚群，但ＩＣＡＭ－１在ＰＮＡ￣＋细胞的表达下调。本文报道：用抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１和抗ＣＤ３单抗，分析了粘附分子ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１对抗ＣＤ３诱导的胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答的影响。结果显示，可溶性抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１可抑制ＣｏｎＡ刺激的胸腺细胞增殖，且以抗ＬＦＡ－１抗体的作用更为显著，在ＣｏｎＡ或抗ＣＤ３诱导的胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答中，抗ＬＦＡ－１单抗可明显抑制［Ｃａ￣（２＋）ｉ升高。但如果用二抗交联ＣＤ３和ＬＦＡ－１，胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）ｉ则显著高于单独交联ＣＤ３时的水平（Ｐ＜０．０１），而ＣＤ３与ＩＣＡＭ－ｌ交联却无此效应，此外，仅交联ＬＦＡ－１或ＩＣＡＭ－１也无诱导［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答的作用。提示在ＬＦＡ－ｌ与ＩＣＡＭ－１介导的胸腺细胞与胸腺基质细胞相互作用中，ＬＦＡ－１可为ＴＣＲ／ＣＤ３途径介导的胸腺细胞活化提供复合刺激信号。     

α-2b干扰素治疗不同基因型丙肝疗效与免疫指标的关系

根据Ｏｋａｍｏｔｏ基因分型法对２８例丙肝患者的病毒基因进行了分型，１８例为ＨＣＶ－Ⅱ型，１０例为ＨＣＶ－Ⅲ型。重点研究了α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅱ型患者和ＨＣＶ－Ⅲ型患者免疫功能的不同改变：在α－２ｂＩＦＮ治疗前，ＨＣＶ－Ⅱ型患者和ＨＣＶ－Ⅲ型患者之间ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＣＤ４百分比、ＣＤ８百分比及ＣＤ４／ＣＤ８比值６项指标无明显差别。α－２ｂＩＦＮ治疗８ｗ时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４／ＣＤ８比值明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者ＣＤ４／ＣＤ８比值。α－２ｂＩＦＮ治疗１个疗程（１２ｗ）时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４百分比，ＣＤ４／ＣＤ８比值明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者。α－２ｂＩＦＮ治疗１个疗程后第４周（１６ｗ）时，ＨＣＶ－Ⅲ型患者ＣＤ４百分比，ＣＤ４／ＣＤ８比值仍明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者，但在整个治疗过程中，ＨＣＶ－Ⅲ型和Ⅱ型患者ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ和ＣＤ８百分比４项指标改变无显著差异。α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅲ型患者，其ＣＤ４百分比，ＣＤ４／ＣＤ８比值改变明显高于ＨＣＶ－Ⅱ型患者。这可能是α－２ｂＩＦＮ治疗ＨＣＶ－Ⅲ型患者疗效明显好于ＨＣＶ－Ⅱ型患者重要原因之一。     

B7／CD28和ICAM—1／LFA—1共刺激信号对T及B细胞功？…

目的 研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１对Ｔ细胞活化以及Ｂ细胞效应的作用。方法 在体外建立ＡＰＣ：Ｔ：Ｂ细胞反应系统,用Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１共刺激途径,利用＾３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ细胞增殖,ＥＬＩＳＡ法测定Ｂ细胞分泌的杭体,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞因子基因的表达。结果 Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单坑均可抑制Ｔ细胞增殖及ＩＬ     

慢性肾衰及血液透析过程中多肽生长因子与凋亡因子表达

目的：探讨慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）患者及血液透析（ＨＤ）过程中多肽生长因子及凋亡因子的含量变化及相互关系。方法：采用流式细胞术及放射免疫分析分别测定ＣＲＦ及ＨＤ前后外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤ９５、Ａｐｏ２．７和ＢＣｌ－１蛋白的阳性细胞数及血清中ＴＧＦ－α、ＩＧＦ－Ⅱ的含量。结果：ＣＲＦ（非透析组）ＣＤ９５、Ａｐｏ２．７、ＩＧＦ－Ⅱ明显高于对照组，差异显著。ＢＣｌ－２与ＴＧＦ－α含量均明显低于     

干扰素和肿瘤坏死因子对人脐静脉内皮细胞表达HLA—Ⅱ类抗原…

采用ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ法对ＩＦＮ－α，γ及ｒＴＮＦα单独或协同影响人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）表达ＨＬＡ－Ⅱ类抗原作了定量观察，结果表明，ＩＦＮγ直接刺激ＨＵＶＥＣ可依浓度和时间依赖的方式提高其ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达量，而ｒＴＮＦα，ＩＦＮα单独处理ＨＵＶＥＣ无效，当ｒＴＮＦα和ＩＦＮγ同时诱导时，对ＨＵＶＥＣ表达ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ均表现抑制作用，但是，当先用ＩＦＮγ诱导ＨＵＶＥＣ２４ｈ后     

脂质体转染AFP基因构建树突状细胞肝癌瘤苗及体外活性检测

目的：探讨以ＡＦＰ为靶点，构建ＡＦＰ－ＤＣ肝癌瘤苗及其抗肝癌免疫治疗的可能性。方法：应用脂质体将ＡＦＰ基因转染体外培养的未成熟 ＢＭＤＣ，构建 ＡＦＰ－ＤＣ肝癌瘤苗，以流式细胞术、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、３Ｈ－ＴｄＲ法和 ＭＴＴ法等检测其免疫活性。结果：ＡＦＰ－ＤＣ瘤苗不仅能产生和分泌ＡＦＰ，而且能上调自身的Ｂ７分子和ＭＨＣ分子，明显刺激Ｔ细胞增殖及提高ＣＴＬ的杀伤作用。结论：提示肝癌相关基因ＡＦＰ可作为抗肝癌基因治疗的切入点。     

人创伤性休克时白细胞表面LFA-1、Mac-1、CD18的表达

探讨人创伤性休克时白细胞表面ＬＦＡ－１、Ｍａc－１和ＣＤ１８表达变化。方法：间接免疫荧光标记法。结果：创伤性休克后多形核粒细胞（ＰＭＮｓ）表面ＬＦＡ－１、Ｍａｃ－１和ＣＤ１８表达呈下降趋势,但无显著意义（Ｐ＞０．０５）。单核细胞表面ＬＦＡ－１、Ｍａｃ－１和ＣＤ１８表达呈上升趋势,以ＣＤ１８为显著（Ｐ<０．０５）。结论：创伤后ＰＭＮｓ表面粘附分子表达量与它对内皮的粘附存在不一致性,而单核细胞粘附也似乎不仅仅依赖于粘附分子的表面受体表达增强。提示,单核细胞与ＰＭＮｓ在参与粘附反应时其表面ＣＤ１８表达量变化不一致,其功能调节是否一致尚待查明。     

高浓度抗CD3单抗诱导人外周血单个核细胞凋亡及细胞因子对？…

使用抗ＣＤ３单抗诱导新鲜分离的人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡，同时观察细胞因子对其影响，１８ｈ后电镜发现处理组发生典型凋亡改变，ＤＮＡ电泳出现典型阶梯状条。ＴＵＮＥＬ法流式细胞仪检测发现处理组凋亡发生率３９．６％，显著高于对照组（Ｐ〈０．０１），ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α可显著增强抗ＣＤ３单抗诱导的凋亡，ＩＬ－１￣ＩＬ－３，ＴＮＦ－α对凋亡无明显影响。ＣｓＡ可抑制剂ＣＤ３单抗诱导的凋亡，但加入ＩＦ