53例胃癌前病变粘膜组织K—ras基因突变情况分析

目的：探讨胃癌前病变组织K－ras基因突变情况,揭示K－ras基因突变与胃癌发生的关系。方法：应用聚合酶链反应（PCR）与单链构多态性分析（SSCP）对53例经病理切片诊断为胃癌前病变粘膜组织和10例正常胃粘膜组织进行K－ras基因突变分析。结果：53例胃癌前病变粘膜组织中,K－ras基因发生突变40例,占75．5％;男女间突变率比较差异无显著性（P＞0．05）;而10例正常胃粘膜组织无K－ras基因突变发生。结论：K－ras基因突变是胃癌前病变中常见的分子事件,用PCR－SSCP法检测胃粘膜组织K－ras基因的突变情况将有助于了解胃癌发生的生物学行为,对早期诊断有一定的帮助。     

肺癌K-ras基因点突变的研究

目的 :探讨肺癌发生的分子遗传学机理 ,了解肺癌中K ras基因的突变情况。方法 :采用聚合酶链式反应一单链构象多态性 (PCR SSCP)结合银染技术 ,对 3 2例肺癌组织及其相应的癌旁组织中K ras基因第 12、13、61位密码子的突变情况进行检测。结果 :肺癌组织中K ras基因总突变率为 2 5 % ( 8/3 2 ) ,其中腺癌突变率为 40 % ( 4 /10 ) ,鳞癌突变率为 2 3 % ( 3 /13 ) ,大细胞肺癌突变率为 3 3 % ( 1/3 )。小细胞癌突变率为 0 ( 0 /6) ,相应的癌旁组织突变率为 3 1% ( 1/3 2 )。结论 :K ras基因突变与肺癌发生发展有关。     

p53和C-Ha-ras基因在胃癌发生中的作用

目的　探讨 p5 3和C Ha ras基因突变在胃癌发生中的作用。 方法　用PCR SSCP和直接测序检测胃癌组织中C Ha ras(12、13密码子 )和 p5 3(外显子 7)基因的突变。 结果　胃癌组织中C Ha ras和 p5 3基因突变发生率显著高于浅表性胃炎和正常胃黏膜组织 ,基因的联合突变在部分胃癌组织中表达。结论　基因联合突变可能是胃癌发生的机制之一。     

结肠癌K-ras和P~(53)基因序列改变

采用PCR和DNA双链四色荧光单道测序方法对 31例结肠癌组织、13例大肠息肉伴不典型增生、11例结肠癌术后并发腹水标本进行K ras基因外显子 1、2和P53基因外显子 5、6、7、8测序分析。结果显示 :31例癌组织中发现K ras突变 7例 ,P53突变 12例 ,阳性率分别为 2 2 .58%和 38.71% ;13例息肉伴不典型增生组织中发现P53突变 2例 ;11例术后腹水标本中发现K -ras突变 1例 ,P53突变 2例 ,且突变与患者包埋组织结果一致。表明结肠组织癌变与这两个基因突变密切相关 ,癌基因突变是结肠癌较早期的细胞损害 ;DNA测序方法是研究癌基因突变的最精确可靠的方法。     

肺癌K-ras基因突变与呼吸道合胞病毒感染关系的研究

目的　探讨肺癌K ras基因突变与呼吸道合胞病毒 (RSV)感染的关系。方法　应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)结合单链构象多态性分析 (SSCP)免疫组化和ELISA方法检测肺癌组织中RSV、K ras基因和血清sIgM抗体。结果　①RT PCR显示17.9% ( 7/3 9)的肺癌标本中存在有RSV基因序列。②RSVRT PCR阳性的肺癌组织冰冻切片免疫组化显示RSV抗原在细胞浆呈弥漫性着色。③不经反转录反应直接作PCR扩增 ,则RSV阳性的标本不能观察到RSV特异的电泳区带。④SSCP电泳示 2 5 .6% ( 10 /3 9)的肺癌组织标本中K ras基因的第 12位密码子有突变。⑤肺癌组织RSV基因的检出与K ras基因突变结果经配对计数资料McNemar检验分析 ,χ2 =0 .3 6,P >0 .0 5。结论　肺癌组织内有RSV感染 ,可能和K ras基因的突变有关。     

P53、P2lras蛋白和P—糖蛋白在胃癌中过表达的意义

目的研究胃癌组织p53、p21ras蛋白和P-耐药糖蛋白(P-gp)在胃癌中的表达及临床意义.方法采用免疫组化SABC法检测7例正常胃粘膜、12例慢性萎缩性胃炎、8例粘膜慢性胃炎伴肠型不典型增生和93例胃腺癌组织中p53、p21ras蛋白和P-gp的表达.结果p53、p21ras蛋白和P-gp在正常胃粘膜组、癌前病变组和胃腺癌组中的阳性率分别为0,14.3%,0;20.0%,25.0%,5.0%;55.9%,51.6%,44.1%.p53蛋白、P-gp表达均与淋巴结转移有关(P＜0.05);p21ras蛋白表达与肿瘤的浸润程度有关(P＜0.05);P-gP表达与p53和p21ras表达有显著的协同性(P＜0.05).结论p53和p21ras蛋白常并存于胃癌组织中.p53突变蛋白和P-gp过表达在胃癌淋巴结转移中起重要作用,因此早期进行p53蛋白和P-gp检测有重要的临床意义.     

应用寡核苷酸芯片检测白血病患者P53和K-ras基因点突变

目的 研究白血病病例中P53、K—ras基因点突变情况。方法 采用寡核苷酸芯片技术对临床收集的白血病标本进行P53、K—ras突变热点检测。结果 共检测出P53突变8例、K—RAS突变4例。其中P53突变包括ANLL—M3 2例，M2 3例，ANLL—M5、ALL、CML各1例。K—ras突变包括CML3例，ALL1例。结论 P53、K—ras突变在白血病发生、发展中起到一定作用。应用寡核苷酸芯片进行P53、K—ras点突变检测，优缺点并存，具有一定临床实用价值。     

食管癌活检组织P53基因 5、6、7、8外显子突变检测

目的：研究P53基因突变与食管癌的关系。方法：应用银染单链构象多态性技术（SSCP）检测食管癌活检组织P53基因5、6、7、8外显子PCR扩增产物。结果：56例食管癌标本经PCR－SSCP检测和病理确诊。检出P53基因突变阳性病人22例,检出率为39．3％（22／56）,其中5－8外显子阳性检出率别为1．79％（1／56）,7．14％（4／56）,17．85％（11／56）和10．71％（6／56）,结论：食管癌P53基因突变并非偶然事件。     

原发性胃腺癌P53基因第7、8外显子突变研究

目的：探讨连云港地区原发性胃腺癌P53基因变异发性情况，方法：应用聚合酶链反应单链构象多态分析法（PCR－SSCP）对20例原发性胃腺癌的P53基因第7、8外显子突变进行了检测。结果：共发现突变5例（25％），其中第7外显子突变4例，第8外显子突变1例，在20例原发性胃腺癌组织分型中，高分化和中分化各3例，均未见P53基因第7、8外显子突变，低分化13例，发现P53基因第7外显子突变3例，第8外显子突变1例；低分一未分化1例，亦发现第7外显子突变。结论：P53基因突变与原发性胃腺癌发生有关；对原发性胃腺癌的治疗有指导意义。     

痰液中多基因检测在肺癌诊断中的价值

目的：探讨P53,K－ras,P15,P16基因在肺癌组织及相应痰液中的改变情况及其联合检测早期诊断肺癌的价值。方法：应用PCR－SSCP－银染法检测59例肺癌和14例肺良性疾病患者活检组织及相应痰液中P53基因第5－8外显子突变情况;应用PCR－RFLP法对25例肺腺癌和14例肺良性疾病组织及及相应痰液中K－ras基因突变进行了检测;并应用PCR法检测了所有肺癌和良性疾病组织及相应痰液中P15、P16基因纯合缺失情况。结果：肺癌组织中P53,P15、P16基因改变频率分别为37．3％,11．9％,23．8％。而良性病变组织中仅1例出现P16基因缺失。肺癌组织和相应痰液中P53,K-ras,P15,P16等基因的突变基本一致,P＞0．05。对上述基因突变与吸烟关系的分析显示,吸烟者出现P53基因和K-ras基因突变的频率明显高于非吸烟者,P＜0．01。我们还对4种肿瘤相关基因联合检测在肺癌早期诊断中的价值进行了评估,表明4种基因联合检测敏感度为78％,明显高于单一基因（以阳性率最高的P53为例）的敏感度37.3%。结论：P53基因K－ras基因和P15,P16基因在肺癌组织中突变率相对较高;多基因联合检测在肺癌早期诊断中的价值明显优于单基因的检测;痰液多基因的联合检测可能有助于肺癌的早期诊断。     

Abnormal Change of p53 Gene in Gastric and PrecancerousLesions and APC Gene Deletion in Gastric Carcinoma and Near Tissues

Hypothesisoftumorsuppressorgenehadbeenproposedtwentyyearsag0['],butthefirstsuppressorgeneRb(retinoblas-toma)wasseparatedandcloneduntill986[z].Suppressorgene,includingp53andAPCgenes,n0whasbecomenew"hot"subjectintheareaoftumorresearch.p53genemutation,deleti0nandAPCgenedele-tionoccurredinsomehumantumorsandtheremaybesomerelationbetweenAPCgeneandp53genedeletion[3-7]-Inthispa-per,PCR-RFLP,PCR-SSCPmeth0dswereusedtoanalyzep53,APCgenealterationsingastriccancerandprecancerouslesi0nsinordertoin…     

肺癌组织p53和K-ras基因突变及其表达产物检测的意义

目的：研究肺癌组织中ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ 基因突变、蛋白表达,以及二者的关系． 方法：应用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ和免疫组织化学方法分别检测肺癌组织中的ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因突变和蛋白表达． 结果：肺癌组织中检测到ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因的突变分别为５３％ 和１４％ ,肺癌组织中检测到ｐ５３ 蛋白和 ｐｒａｓ ２１ 蛋白的积聚分别为５８％ 和１９％ ． 结论：ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因突变与肺癌发生关系密切,其基因突变与蛋白的积聚之间存在一致的关系,但并非完全对应． ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因突变及其表达产物的检测对肺癌患者有一定的辅助诊断意义．     

人乳头状瘤病毒和p53基因及H-ras基因在喉癌细胞中的表达

目的：研究喉癌细胞p53基因、H－ras基因突变及其与人乳头瘤病毒（HPV）感染的关系，探讨其在喉癌发生发展中可能起的作用。方法：采用分子生物学技术，包括聚合酶链反应、单链构型多态性分析、限制性内切酶长度多态性分析，及DNA序列分析等方法，对28例喉癌进行人乳头状瘤病毒、p53基因及H－ras基因检测。结果：28例喉癌中有50％在p53基因的第7－8外显子有突变，其中4例行DNA序列分析表明均有碱基替换、插入或丢失；而H－ras基因第12密码子的突变率仅3．57％；高危型HPV（HPV－16或－18）感染在喉癌细胞中有一定的特异性，且与p53基因突变有一定的相关性。结论：在喉癌的发生发展过程中高危型HPV感染和p53基因突变起着重要的作用，且两者之间可能存在某种内在的联系。     

检测胰液和粪便中K-ras和p53基因突变对胰腺癌早期诊断的价值

目的 通过检测胰液、粪便癌基因K－ras和抑癌基因p53的突变,探索早期诊断胰腺癌的手段。方法 1994年至2000年5月住院和门诊患者共201例,正常对照60例,通过聚合酶链反应－限制片段长度多态性（PCR－RFLP）方法检测胰液、粪便K－ras突变,PCR－SSCP方法检测p53突变。结果 胰腺癌患者胰液K－ras突变率为87．8％（36／41）,胰腺良性病变为23．5％（4／17）。粪便K－ras扩增成功率为90．0％（235／261）。胰腺癌患者粪便K－ras突变率为88．0％（66／75）,胰腺良性病变为51．1％（24／47）,正常人粪便K－ras突变率为19．6％（9／46）。胰腺癌胰液细胞p53突变率47．4％（18／38）,胰腺良性疾病为12．5％（2／16）。胰腺癌粪便p53突变率为37．1％（23／62）,慢性胰腺炎为19．1％（4／21）。结论 胰腺癌患者胰液K－ras突变的敏感性、特异性高,可以作为胰腺癌诊断的辅助手段。粪便K－ras结合p53检测可以提高敏感性,在胰腺癌筛选中有潜在的价值,联合血清CA19－9等肿瘤标记物检测有助于提高胰腺癌早期诊断率。     

Ha-ras、p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异，并结合临床分期、病理分级等参数进行了综合分析。结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异率分别为３６％、３０．８％，两者均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；且与分级分期呈正相关。复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变。提示Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异及相互作用在很大程度上参与了膀胱癌的发生及演变，并与其生物学行为密切相关，有望成为判断肿瘤恶性程度、自然病程及预后的评估指标     

胃癌组织ras和P53基因突变的检测

（１）目的 研究胃癌组织中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变情况,（２）方法 采用ＰＣＲ ＲＦＬＰ技术,分析４１例胃癌标本中Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（３）结果 本组４１例中,１２例（２９．３％）发生Ｐ５３基因突变,１６例（３９．１％）发生ｒａｓ基因突变,１全负时发生Ｐ５３基因和ｒａｓ基因的突变。（４）结论 Ｐ５３和ｒａｓ基因突变与胃癌的发生密切相关,在胃癌的发生中可能起重要作用。     

用PCR-SSCP及DNA测序法研究胃癌p53基因突变

目的 探讨p53基因突变与人类胃癌发生的关系。方法 运用PCR、PCR－SSCP结合银染法对25例胃癌组织p53基因第4、第5－6和第7外显子进行突变检测;运用双脱氧链终止法对第7外显子阳性突变标本进行DNA测序。结果 在25例胃癌组织中检出突变5例,突变率为20％;在第7外显子阳性突变标本中发现了18bp的大片段缺失。结论 p53基因突变与人类胃癌的发生具有明显相关性,并且这种突变可能不仅仅局限于点突变,大片段缺失也是p53基因突变方式之一。     

胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的作用

目的:探讨胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的价值.方法:应用突变富集聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)法检测胰腺疾病胰管刷检标本K-ras基因第1外显子第12密码子点突变.结果:35例胰管刷检标本PCR扩增均获成功,成功率100％.20例胰腺癌中14例检测到K-ras突变,7例慢性胰腺炎1例K-ras突变,两组间差异显著(P<0.05).胰腺囊腺瘤、十二指肠乳头癌均未见K-ras突变.胰管刷检标本K-ras突变与胰腺癌部位无关.胰管刷检K-ras突变检测诊断胰腺癌的敏感性、特异性、准确性分别为70％、94％、83％.结论:检测胰管刷检标本中K-ras基因突变有助于提高胰腺癌的诊断,具有良好的临床应用前景.     

人类乳头瘤病毒16,18型,p53基因与胃癌

３０例新鲜胃癌标本，采用多聚酶链反应技术检测人类乳头瘤病毒１６、１８感染、并采用多聚酶链反应－单链构象多态性技术对ｐ５３基因突变进行检测。结果：ＨＰＶ１５阳性率为４０．０％，未发现ＨＰＶ１８感染：Ｐ５３基因突变率为５０．０％，ＨＰＶ１６感染和Ｐ５３基因突变同时存在者为１６．７％。