全自动酶偶联法测定腺苷脱氨酶

目的　建立全自动测定腺苷脱氨酶 (ADA)的酶偶联分光光度法。方法　用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究。用该法测定了 90例健康者的血清样本及 99例胸腹水的ADA活性。结果　该法最低检出限为1.7U/L ,线性范围可达 2 2 0U/L(r=0 .9989) ,批内CV为 2 9%～ 5 .4 % ,批间CV为 4 .7%～ 6 4 % ,回收率为 99.7%。胆红素 <136 .8μmol/L ,血红蛋白 <3.5g/L ,抗坏血酸 <2 84 μmol/L和三酰甘油 <9.0 3mmol/L的情况下 ,对测定结果无显著性影响。 结论　本法灵敏度高 ,线性、精密度好 ,结果准确 ,干扰少 ,且操作简便快速 ,适用于全自动生化分析仪分析。     

用新底物DCAP-P检测酸性磷酸酶方法的建立

目的　合成酸性磷酸酶 (ACP)的底物 2 ,6 二氯 4 乙酰基苯基磷酸 (DCAP P) ,并建立以DCAP P为底物的一种新的ACP测定方法。方法　在BTS 310型半自动分析仪和TBA 4 0FR型全自动生化分析仪上研究连续监测法 ,建立试验参数。结果　本法测定DCAP吸收峰为 32 6nm ;ACP的Km=0 139mmol/L ;340nm时DCAP的摩尔消光系数为 14 4 4 0L·mol 1·cm 1,缓冲液浓度 0 1mol/L ,最适pH5 .4 ,底物浓度 2 0mmol/L ,延滞期 6 0s,线性反应期 15min ;线性范围为 0～ 1188U/L ;血红蛋白 <115 6 2mg/L及胆红素对测定结果无影响 ;本法总ACP与PAP(前列腺酸性磷酸酶 )的参考值范围分别为 12 5 8～ 19 4 2U/L和 2 5 2～9 0 4U/L。结论　此方法重复性好 ,线性反应期长 ,线性范围广 ,干扰因素少 ,适用于自动化分析仪。     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估

本文就国产尿液 NAG活力连续监测法试剂盒进行了评价。该试剂盒酶促反应延迟时间应选为 3m in,监测时间选择 6 0 s。线性 0～ 15 0 U / L ,r=0 .9998,线性误差小于 7%。重复实验 ,水平 批内为 2 6 .3± 1.1U / L ,CV4.2 % ,随机误差 8.2 % ;批间 s 1.77U / L ,CV 6 .7% ,随机误差 13.2 %。水平 批内 91.3U / L± 2 .43U / L ,CV2 .6 % ,随机误差 5 .2 % ;批间 s 4.44 U / L ,CV 4.9% ,随机误差 9.5 %。平均回收率 99.5 %。测定体检健康者尿样 6 0例 ,经统计学分析 ,结果呈偏态分布 ,男女间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,单侧 95 %上限为 2 .4U / mm ol Cr(37℃ )     

血、胆汁淀粉酶及同工酶活性在胆道疾病中的变化

淀粉酶主要由胰腺、唾液腺分泌。除急性胰腺炎外 ,部分胆道疾患在症状发作时期血总淀粉酶 (T Amy)及胰淀粉酶同工酶 (P Amy)活性明显增高。我们对 15 8例胰、胆管疾病患者血及 2 3例胆道疾病患者胆汁内淀粉酶活性进行了观察 ,并对其机理进行探讨。1　材料和方法1 1　研究对象　正常对照组 5 7例 ,男 2 7例 ,女 30例 ,年龄 19～ 6 0岁体检健康者。疾病组 15 8例 ,均为本院住院患者 ,男性 98例 ,女性 6 0例 ,年龄 16～ 71岁。病例中胆管结石 5 5例 ,胆管炎 6例 ,胆囊结石 2 9例 ,急性胆囊炎 2 5例 ,胆管癌 6例 ,胆管囊肿 6例 ,急性胰腺炎 31…     

血清β—N—乙酰氨基己糖苷酶自动分析法改进

目的　对血清 β N 乙酰氨基己糖苷酶总活性自动分析法进行改进 ,使其整个试验过程实现全自动。方法　利用SYNCHRONCX9ALX全自动生化分析仪的操作功能 ,对原法的试验过程、试验条件、测定参数等重新设计 ,并对本法进行评价。结果　本法的检测波长为 4 10 / 5 2 0nm ,酶促反应时间 8.2 6 6 7min ,色原PNP在4 10 / 5 2 0nm下的毫摩尔吸光系数为 18.5 ,线性达 80 0U/L ,批内CV为 0 .4 9%～ 2 .2 1% ,批间CV为 0 .6 9%～2 .93% , x± 2s参考范围为 7.5 8～ 2 8.4 6U/L。本法无须另做样品空白 ,从样品上机到结果打印一气呵成。结论　本法不但简便快捷 ,真正实现了全自动 ,而且精密度及线性优于原法。     

胰腺疾患时血清免疫反应胰蛋白酶的浓度和胰型淀粉酶同工酶活性的比较

本文用放射免疫法测定血清中免疫反应胰蛋白酶(ITP)浓度,用不溶性蓝色淀粉为基质测定α-淀粉酶总活性,用琼脂糖电泳法分离胰型淀粉酶同工酶(PIA),并比较了三者对胰腺疾病的诊断价值.对照组:无胰腺、胃肠道、唾液腺、肝或肾等疾病的住院病人29例,ITP浓度和PIA活性均值分别为234μg/L(135～400μg/L)和88U/L(24～185     

自制超薄型琼脂糖凝胶板电泳分离检测血清LDH同工酶及成年人参考范围的建立

目的 自制超薄型琼脂糖凝胶板,建立电泳分离检测血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的方法并建立成人血清的参考区间。方法 用自制琼脂糖凝胶板分离检测LDH同工酶,对方法学性能包括精密度、正确度、线性范围、参考区间进行确认和建立。结果 5种LDH同工酶图谱分离清晰,批内CV值均小于8.77%,批间CV值均小于13.12%,胶板间CV值均小于7.89%。LDH1在13.48～287.65U/L,LDH2在18.19～575.67U/L,LDH3在19.42～504.62U/L,LDH4在8.00～342.27U/L和LDH5在13.88～199.79U/L的范围内呈线性,斜率趋近于1。与Sebia配套电泳试剂盒的结果比较,5种同工酶在两方法间的差异无统计学意义(t=0.028 1～0.567 4,均P>0.05),相关系数r=0.949 4～0.985 5。建立的成人参考区间为LDH1:15.7%～34.3%,LDH2:26.8%～38.9%,LDH3:18.8%～28.1%,LDH4:5.7%～13.7%和LDH5:2.7%～15.3%。结论 自制超薄型琼脂糖凝胶板电泳分离检测血清LDH同工酶的方法性能良好,可用于临床检测。     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估

本文就国产尿液NAG活力连续监测法试剂盒进行了评价.该试剂盒酶促反应延迟时间应选为3 min,监测时间选择60 s.线性0～150 U/L,r＝0 .99 98,线性误差小于7%.重复实验,水平Ⅰ批内为26.3±1.1 U/L,CV 4.2%,随机误差8. 2 %;批间s 1.77 U/L,CV 6.7%,随机误差13.2%.水平Ⅱ批内91.3 U/L±2.43 U/L,CV 2 .6%,随机误差5.2%;批间s 4.44 U/L,CV 4.9%,随机误差9.5%.平均回收率99.5% . 测定体检健康者尿样60例,经统计学分析,结果呈偏态分布,男女间差异不显著(P＞0.05) ,单侧95%上限为2.4 U/mmol Cr(37℃).     

SARS患者的肝脏损害

目的　研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者肝脏功能和肝组织病理学的变化 ,探讨 SARS患者肝脏损害的可能机制及其临床意义。方法　依据中华人民共和国卫生部诊断标准 ,选择 2 0 0 3年 2— 6月收治的 SARS患者 110例检测肝脏功能 ,其中 8例死亡者行肝组织病理学检查 ;并与健康体检者 35例进行比较。结果　 SARS组患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)、天冬氨酸转氨酶 (AST)、总胆红素 (TBil)、乳酸脱氢酶(L DH)水平均显著高于对照组 ,分别为 (91.6 1± 5 0 .5 3) U/ L 比 (32 .91± 10 .5 6 ) U/ L,(78.6 8± 33.32 ) U/ L 比(2 9.4 3± 8.89) U/ L,(11.6 7± 4 .2 6 ) μmol/ L 比 (8.4 4± 3.86 ) μmol/ L,(42 9.95± 188.94 ) U/ L 比 (2 0 0 .83±4 4 .86 ) U / L ,P均 <0 .0 0 1;白蛋白 (AL B)和前白蛋白 (PAB)均明显低于对照组 ,分别为 (34.4 0± 5 .13) g/ L比(42 .0 9± 6 .79) g/ L和 (0 .2 0± 0 .0 6 ) g/ L比 (0 .34± 0 .0 5 ) g/ L ,P均 <0 .0 0 1;血清直接胆红素 (DBil)、总胆汁酸 (TBA)、γ谷氨酰转肽酶 (GGT )、碱性磷酸酶 (AL P)水平与对照组无差异 (P均 >0 .0 5 )。 AL T、AST、GGT、L DH变化范围较大 ,为正常范围 4～ 9倍 ,其余各项变化范围较小。AL T、AST和 PAB异常率达 80 .0 %以上 ,AL     

血清氯化物酶法测定

目的　建立血清氯化物的α 淀粉酶及其底物 2 氯 4 硝基苯 α D 麦芽三糖苷 (CNP G3)直接测定方法。方法　根据氯离子是α 淀粉酶的激动剂原理建立氯化物测定方法 ,并做方法学评价。结果　测定结果的平均偏差率为 0 4 6 % ;线性范围 5 0～1 5 0mmol/L ;平均回收率为 1 0 0 6 2 % ;批内CV <1 2 4 % ,日间CV <1 86 % ,总CV1 4 5 %～ 2 2 4 % ;加入高浓度的维生素C、葡萄糖、蔗糖、果糖、α 淀粉酶、三酰甘油、血红蛋白、胆红素、钙离子、溴离子、碘离子、氟离子、硫氰酸钾、对硝基酚、叠氮钠和硫酸铵均未显示干扰。与硫氰酸汞比色法 (MTC) ( x±s)比较 :MTC法 (X) :(95 6 6± 1 4 .4 5 )mmol/L ,酶法 (Y) :(95 6 2± 1 4 .93)mmol/L ,t=0 .0 78,P >0 5 ,Y =1 .0 1 6X - 1 .5 87,r=0 .984 ,n =93,P <0 .0 0 1 ;与离子选择电极法 (ISE) ( x±s)比较 :ISE法 (X) :(99.0 0±1 3.1 1 )mmol/L ,本法 (Y) (98.6 1± 1 2 .70 )mmol/L ,t=0 .1 4 0 ,P >0 .5 ,Y =0 .96 2X +3.375 ,r=0 .993,n =4 4 ,P <0 .0 0 1。溶解的工作试剂 (R1、R2 ) 2～ 8℃冷藏至少可以稳定 1 4天。结论　该方法测定成本低 ,准确、精密、线性范围宽 ,稳定性好 ,在抗卤族元素溴、碘及硫氰酸等阴离子的干扰方面 ,显著优于其他方法     

糖化血红蛋白不同测定法的评价

目的　对 3种测定糖化血红蛋白的方法进行方法学评价。方法　用离子交换高效液相层析 (HPLC)法 (X)、微柱亲和层析手工法 (Y1)、胶乳凝集免疫法 (Y2 )测定糖化血红蛋白 ,进行线性范围、回收率、精密度、干扰因素及参考范围的分析。结果　X、Y1、Y2 法的线性范围分别为 2 .8%～ 18%、3.6 %～ 15 .3%、2 .3%～15 .5 %。3种方法的平均回收率均在 95 %～ 10 4 %以内 ,批内、批间平均变异系数 (CV )均 <5 %。 10 .2mmol/L三酰甘油、8.0mmol/L胆固醇、6 84 μmol/L胆红素、10 .1%的HbF对 3种方法均无干扰。Y1法测定结果显著高于X法 (P <0 .0 1) ,回归方程 :Y1=1.15X - 0 .17(r =0 .86 ,P <0 .0 1) ;Y2 法与X法的测定结果差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,Y2 法的测定结果偏低 ,回归方程 :Y2 =1.0 4X - 0 .6 9(r =0 .92 ,P <0 .0 1) ;X、Y1、Y2 法的参考范围分别是 4 .3%～ 6 .7%、3.5 %～ 8.3%、3.6 %～ 6 .7%。结论　与HPLC法相比 ,微柱亲和层析手工法测定结果偏高 ,而胶乳凝集免疫法的测定结果偏低。     

血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用

目的　建立比色测定血清酸性α 醋酸萘酯酶总活性的方法。方法　用α 醋酸萘酯为底物 ,在 37℃、pH6 .2的酸性环境中经酶水解产生α 萘酚 ,然后与重氮试剂固蓝B偶联反应显色测定。结果　最适pH 6 .0～ 6 .4 ,底物浓度为 2mmol/L ,吸收峰波长为 5 2 0nm ,线性范围 0～ 2 5 0 0U/L ,酶促反应时间为 2 0min ,显色反应时间为 2 0min ,显色稳定时间为 2 0min ,批内、批间变异系数分别为 2 .6 7%和 5 .1 %。血红蛋白 1g/L和胆红素 1 72 μmol/L无干扰。枸橼酸钠、草酸盐、肝素、EDTA K2 常用浓度无抑制 ,氟化钠可抑制该酶活性。标本 2～ 8℃冰箱保存 7d结果无变化。正常参考值 (n =1 0 0 )为 (1 6 4 5± 378.5 )U/L( x± 1 .96s)。结论　该方法简便实用 ,适于各级实验室开展 ,可作为评价肝细胞变性坏死、肝纤维化、肝脏合成功能异常的一项新的血清学指标     

酶单位换算法(1)

名称 (代号 )测定方法习用单位换算系数国际单位 (SI)酸性磷酸酶 (ACP)麝香草酚肽法 U/ ml 0 .0 16 6 7μmol· s- 1 / L5 -核甘酸酶 (5 - NT) U/ ml 16 .6 7μmol· s- 1 / L淀粉酶 (AMY) Somogyi法 U/ dl 0 .343 μmol· s- 1 / L尿淀粉酶 Somogyi法 U/ h 0 .0 343 μmol· s- 1 / L胆碱酯酶 (Ch E)比色法 U/ ml 0 .8335 μmol· s- 1 / L酶单位换算法(1)…     

选择抑制法测定淀粉酶同工酶

本文对选择抑制法测定淀粉酶同工酶的实验条件作了探讨，通过数学推导和实验，建立了结果计算公式和标准曲线。本法线性范围：０－１５００ｕ／Ｌ，回收率，血清９８－１０２，尿液９２－９５，批内，批弹ＣＶ均〈９％，灵敏度：０．００１ＡＵ＝５ＩＵ／Ｌ，脂血，胆红素，葡萄糖对本实验无干扰。     

血清中m—AST同工酶匀相免疫抑制测定法

[目的]研究建立血清中m—AST同工酶匀相免疫抑制测定的方法。[方法]利用抗S-AST的羊抗人抗体，与血清中S—AST形成免疫复合物，抑制S—AST活性，建立自动分析仪速率法测定血清中m—AST活力，并根据NCCLS相关文件，对方法进行评估。[结果]抗S—AST的抗体10μl抑制S—AST的有效率≥88％，特异性好，对m-AST无交叉抑制。线性在m—AST 100U／L，r=0．9979，批内CV 1．77％～3．92％，批间CV 2．25％～4．13％，日间CV 3．44％～4．89％，总CV 4．87％～5．02％。在与上海长征医院电泳法对照比较，r=0．9976。参考值为5～17U／L。[结论]用均相免疫抑制法测定血清中m—AST同工酶具有简便快速，特异性重复性好。适用于手工和自动分析仪测定。     

冠心病患者氧化型低密度脂蛋白自身抗体与高敏C-反应蛋白的关系

目的　探讨氧化型低密度脂蛋白自身抗体 (oxLDL Ab)、高敏C 反应蛋白 (hs CRP)与冠心病之间的关系以及oxLDL Ab与hs CRP之间的相关性。　方法　对 6 1例确诊的冠心病患者、116例高血压病患者和 12 3名健康对照进行血清oxLDL IgG、IgM和hs CRP水平进行检测 ,并作相关性分析。结果　冠心病患者oxLDL IgG 2 1 4 8(17 5 8～ 2 9 0 1)U/L、oxLDL IgM 4 71(3 88～ 7 0 6 )U/L和hs CRP 3 2 7(1 32～ 6 80 )mg/L均显著高于高血压组 15 93(11 12～ 2 2 2 6 )U/L、2 5 4 (1 17～ 5 0 5 )U/L、0 79(0 4 2～ 1 87)mg/L和健康对照组 11 12 (4 70～ 16 5 7)U/L、1 6 1(0 6 0～ 3 0 3)U/L、0 74 (0 4 8～1 5 0 )mg/L ,P均 <0 0 0 1,而hs CRP在高血压病组和健康对照组之间差异无显著意义 ,P >0 0 5。在这3组中均未发现oxLDL Ab与hs CRP之间有相关性。　结论　oxLDL Ab与hs CRP在冠心病患者中显著升高且无明显相关性 ,提示二者在冠状动脉硬化进程中可能各自起着重要的作用。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的　建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法　用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果　所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论　建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。     

2,7—二氨基芴作色源检测血浆游离血红蛋白

在有过氧化氢的条件下 ,血红蛋白 (Hb)催化用 2 ,7 二氨基芴 (2 ,7 diaminofluorene ,DAF)氧化生成芴蓝 ,芴蓝在42 0～ 5 0 0nm间有一吸收峰。选用 44 0nm作检测波长时 ,吸光度值与Hb含量在一定范围 (5～ 45 0mg/L)内线性关系 ,Y =12 6 48X 0 0 39,r =0 996 3;批内CV1 89% ～ 2 91% ;批间CV2 99% ～ 3 6 4% ;平均回收率 10 1 7% ;与直接分光光度法比较Y =0 987X 0 14,r=0 975 2 ;参考范围 7～ 2 5mg/L。本法操作简便 ,结果可靠 ,试剂保存期长 ,适用于一般临床实验室     

脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素

目的　建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法。方法　对pH、2 酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果　用双试剂连续监测法 ,试剂Ⅰ :10 0mmol/LN ,N 二乙醇胺基乙酸缓冲液 (pH 8.80 ) ,含 2 酮基异乙烯酸钠 3.0mmol/L、NADH 0 .3mmol/L、亮氨酸脱氢酶 2 .0kU/L。试剂Ⅱ :试剂Ⅰ中加入脲酶 70kU/L。本法线性范围血清 0 .5～ 15 0mmol/L ,尿液 8.0～ 6 5 0mmol/L。血清和尿液的平均回收率分别为 10 2 .1%和 10 1.5 %。血清批内和批间平均CV分别为 1.0 2 %和 1.70 % ;尿液批内平均CV为 1.98%。本法 (Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法 (X)对比相关良好 (血清Y =0 .992X +0 .0 4 0 ,r=0 .993;尿液Y =0 .990X +0 .6 1,r=0 .991)。胆红素 <32 5 μmol/L、血红蛋白 <5g/L、抗坏血酸 <80 0 μmol/L、三酰甘油 (TG) <7.5mmol/L和NH+ 4 <0 .5mmol/L对测定无明显干扰。结论　本法简便、准确、线性范围广 ,可用于常规自动分析。     

全自动生化分析仪的精密度和交叉污染率评价

目的　对MERCK MEGA全自动生化分析仪使用 6年后的精密度和交叉污染率进行评价。方法　采用Roche公司的胆固醇 (Cho)、三酰甘油 (TG)、葡萄糖 (Glu)、肌酸激酶 (CK)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 5种试剂盒在MERCK MEGA生化仪上按NCCLS文件对其批内精密度 (Swr)、总精密度 (ST)及交叉污染率进行评价。结果　该仪器的Swr为Cho 0 .0 2 2 4mmol/L、0 .0 30 1mmol/L ,TG 0 .0 14 4mmol/L、0 .0 2 31mmol/L ,CK 1.0 95U/L、2 .5 32U/L ,ALT 0 .5 70U/L、0 .6 5 2U/L ,Glu 0 .389mmol/L、0 .0 6 15mmol/L ,ST 分别为Cho 0 .0 6 33mmol/L、0 .0 884mmol/L ,TG 0 .0 2 87mmol/L、0 .0 4 5 7mmol/L ,CK 2 .76 4U/L、6 .0 80 8U/L ,ALT1.0 5 39U/L、1.0 4 15U/L ,Glu 0 .0 816mmol/L、0 .15 6mmol/L。平均交叉污染率为 0 .10 3%～ 0 .2 0 8%。与试剂厂商提供的数据比较 χ2 <χ2 ( 95 % ) ,两者差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　MERCK MEGA全自动生化分析仪使用 6年后仍具有良好的分析精密度 ,能适应实验室的常规需要。