Avian influenza

Influenza is an old disease but remains vital nowadays. Three types of influenza viruses, namely A, B, C, have been identified; among them influenza A virus has pandemic potential. The first outbreak of human illness due to avian influenza virus (H5N1) occurred in 1997 in Hong Kong with a mortality of 30%. The most recent outbreak of the avian influenza epidemic has been going on in Asian countries since 2003. As of March 2005, 44 incidental human infections and 32 deaths have been documented. Human influenza viruses differ with other avian influenza viruses on the choice of cellular receptors. Avian influenza viruses bind to cell-surface glycoproteins or glycolipids containing terminal sialyl-galactosyl residues linked by 2-3-linkage [Neu5Ac(alpha2-3)Gal], whereas human viruses, including the earliest available isolates from the 1957 and 1968 pandemics, bind to receptors that contain terminal 2-6-linked sialyl-galactosyl moieties [Neu5Ac(alpha2-6)Gal]. Recent evidence suggests that human bronchial ciliated epithelial cells contain Neu5Ac(alpha2-3)Gal and can be infected with avian influenza viruses. Nevertheless, avian influenza viruses can not infect non-ciliated bronchial epithelial cells. Hence, adaptation of the avian influenza virus to nonciliated cells is a prerequisite for a pandemic virus to emerge. Biological behaviors of influenza viruses indicate that once a pandemic virus emerges, isolation is not likely to contain this epidemic. A specific vaccine against the pandemic strain will not be available until 6 to 12 months after the inception of the pandemic. Judicious use of antiviral agents and stringent disease control measures are imperative to decrease the impact of a future pandemic.     

人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究

目的：研究人流感病毒（H1N1）及禽流感病毒（H5N1）感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法：分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素（IL）-1β、-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α变化。结果：与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论：H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。     

常见市售流感病毒抗原试剂对 H6N2 H7N3 H9N2禽流感病毒检测效果的比较

目的：比较4种商品化的甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒对甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原的检测效果。方法：以H6N2、H7N3、H9N2禽流感毒株作为检测毒株,以倍比稀释法将毒液稀释成不同浓度,严格按照试剂盒说明进行操作,观察这4种试剂盒（3种胶体金法和1种免疫渗滤法）对甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒株的检出情况并比较其对毒株的检测下限。结果：4种试剂盒均可检测出甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原,检测下限范围（ log10 TCID50/mL）分别为国产1：1．6～2．4,国产2：3．3～4．1,国产3：3．3～4．1,进口：2．3～2．8。结论：4种试剂盒均可检出甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原;国产1的检测效果较好,操作简便快捷。这些检测试剂都可考虑作为禽流感可疑病例的筛查使用。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒进化过程中猪作为宿主及“混合器”的作用

不同种属流感病毒通过基因重排产生变异病毒导致了多次周期性全球流感大流行。2009年爆发流行的新型甲型H1N1流感病毒是猪H1N1流感病毒、禽H5N1流感病毒和人H1N1流感病毒的基因重排病毒,其8条基因片段均有自己的进化特点。禽类流感病毒是导致人类流感流行的流感病毒的起源,其常在猪体内进行基因重排进化为人类流感病毒。猪是流感病毒的中间宿主,也是不同种属流感病毒基因重排的“混合器”,在2009年新型甲型H1N1流感病毒进化过程中起重要作用,是未来流感防制的重要环节。     

深圳市一起人感染高致病性禽流感病例的流行病学调查

目的 明确人感染高致病禽流感病例的感染来源,探索是否存在人与人之间的传播,为进一步认识与防治禽流感提供科学依据.方法采用现场流行病学调查和实验室检测相结合的方法进行调查、诊断.结果 发现2011年深圳首例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例,无明确病、死禽接触史,密切接触者中无不明原因肺炎病例,未发现人-人传播证据.结论 2011年深圳人感染高致病性禽流感病例属感染个案,未发现人传人现象,感染来源可能与农贸市场环境有关.今后应继续加强不明原因肺炎监测,加强人感染高致病性禽流感的应急贮备、培训和健康教育.     

2009年新型甲型H1N1流感病毒聚合酶编码基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲型流感病毒(A/H1N1)聚合酶PA、PB1和PB2编码基因的进化规律。方法:从NCBI流感病毒基因数据库下载2009年新型甲型H1N1流行株的PA、PB1和PB2聚合酶编码基因序列以及人、猪和禽流感病毒相应的参考序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0（MEGA4.0）软件比对和修剪此次流行株的代表序列及所有参考株序列并构建系统树,再比对和修剪此次流行株的代表序列及人A/H1N1病毒各年代(1918~2008年)参考序列并构建系统树,同时比对此次流行株的代表序列及人A/H1N1各年代(1918~2008年)参考序列编码PB2蛋白的氨基酸序列。结果:不同地区分离的2009年新型甲型H1N1流感病毒的聚合酶PA、PB1和PB2编码基因均具有高度同源性,并聚集在一个独特的进化支上,与猪流感病毒对应基因接近。三者均与2005年美国爱荷华州分离的人A/H1N1病毒基因(A/Iowa/CEID23/2005/H1N1)具有高度的相似性。2009年新型甲型H1N1流感病毒、2005年美国爱荷华州流行的H1N1 (DQ889682)病毒PB2蛋白第627位氨基酸与禽类流感病毒相同,均为谷氨酸,而与其他人A/H1N1 (1918~2008年)病毒的赖氨酸不同。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒聚合酶基因可能来源于2005年美国爱荷华州分离的人A/H1N1病毒,禽流感病毒可能参与了聚合酶基因的重排过程。     

流感病毒感染小鼠星形胶质细胞诱导GDNF转录水平上调

目的探讨星形胶质细胞感染流感病毒后的神经保护效应,检测流感病毒H3N2和H9N2体外感染小鼠星形胶质细胞是否会诱导胶质细胞神经营养因子转录水平的改变。方法从新生小鼠大脑皮质分离培养神经胶质细胞,并进一步纯化星形胶质细胞,经纯度鉴定后,用感染复数为2的流感病毒H3N2和H9N2进行体外感染。在感染早期（6h）和感染中后期（24h）分别提取细胞RNA,real-time PCR检测神经营养因子转录水平的变化。结果病毒感染后的星形胶质细胞显著上调GDNF转录水平的表达,NGF,BDNF,NT-3转录水平变化不明显。H3N2和H9N2感染星形胶质细胞表达的细胞因子变化情况一致。结论流感病毒H3N2和H9N2感染星形胶质细胞可诱导神经营养因子GDNF转录水平的上调。     

深圳市首例人禽流感病例的实验室检测分析

目的对深圳市首例人禽流感病例进行实验室确诊，并研究其携带病毒关键基因的遗传特性。方法采用实时荧光RT-PCR方法检测高致病性禽流感病毒（H5N1）核酸，采用血凝抑制方法检测患者血清抗高致病性禽流感病毒的抗体滴度变化，利用MEGA3．1软件分析患者携带病毒HA、NA基因的进化关系。结果成功确认了深圳市首例人禽流感病例，患者携带病毒为H5N1高致病性禽流感病毒，HA、NA基因进化关系比较特殊。结论深圳地区禽鸟中可能携带高致病性禽流感病毒，具有潜在感染人类的可能。     

开封市首例人感染H7N9禽流感调查报告

目的确定人感染H7N9禽流感疫情,查明感染来源,以便采取相应措施控制疫情,为今后预防控制工作提供科学依据。方法对河南省开封市1例不明原因肺炎病例进行现场流行病学调查,同时采集患者咽拭子,采用荧光定量PCR方法进行流感病毒核酸检测,包括甲型、H1亚型、H3亚型、H5亚型、H7亚型和N9亚型。根据现场流行病学调查和实验室检测结果对该病例进行诊断和分析。结果该患者厨师职业,病初表现为流感样症状,并伴有胸闷,病情持续性加重,临床诊断为重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征,不排除人感染H7N9禽流感病毒的可能。患者咽拭标本禽流感病毒(H7N9)核酸阳性。患者发病前未接触过类似病人,但接触过屠宰的禽类。所有密切接触者经医学观察8 d均未出现类似症状。结论该病例确诊为开封市首例人感染H7N9禽流感病例,未发现人传人的现象。     

核、膜蛋白的基因能抑制禽类流感病毒及其重组株的繁殖

对人流感病毒A/Udorn/72(H_3N_2)株与禽类流感病毒A/Mallard/NY/78/(H_2N_2)重组后的重组株分析表明,仅含禽类病毒的核蛋白(NP)或膜蛋白(M)的RNA片段的重组株,在松鼠猴的呼吸道繁殖是受限制的。另外。仅有禽类的RNAl和NS基因的重组株(Clone 12)在松鼠猴的气管内的繁殖也明显受限制,而只具有其中一个基因的Clone 9, Clone 2, 则限制就不明显。由此表明,禽类流感病毒的NP和M基因在宿主范围的繁殖限制中起主要作用,而RNAI和SN基因的结合,同样起着繁殖受限制作用。     

Potential infections of H5N1 and H9N2 avian influenza do exist in Guangdong populations of China

Background Southeast China is one of the sites of influenza origin. During 2003-2004, nine avian influenza outbreaks took place in Guangdong Province. But no human case was reported. To examine the status of potential human infection by human influenza （H1N1, H3N2） and avian influenza （H5N1, H7N7, H9N2） in the avian influenza epidemic area of Guangdong Province, China, we conducted a seroepidemiologic survey in the people of this area from April to June of 2004.
Methods Three out of 9 H5N1 avian influenza affected poultry areas in Guangdong were randomly selected, and the population living within 3 kilometers of the affected poultries were chosen as the survey subjects. One thousand two hundred and fourteen people were selected from 3 villages at random. Human and avian influenza antibody titers were determined by hemagglutination-inhibition （HI） test and microneutralization test （MNT）.
Results The positive rate of antibody to H5N1 was 3.03% in the occupational exposure group and 2.34% in general citizens group; that of H9N2 was 9.52% in the occupational exposure group and 3.76% in the general citizens group. Moreover one case in the occupational exposure group was positive for H7N7. One year later, all previously positive cases had become negative except for one H5N1-positive case.
Conclusion The observations imply that H5N1 and H9N2 avian influenza silent infections exist in Guangdong populations.     

H5N1型高致病性禽流感研究进展及其对人类的威胁

H5N1高致病性禽流感是人、禽和其它哺乳动物共患的一种新发传染病,近年禽间疫情波及范围越来越大,人间疫情呈地方性流行趋势.发病人群年龄偏低、病死率高.禽流感病毒有可能变异成一种即有高致病性又有人流感病毒高传播性特点的新型流感病毒,构成越来越严峻的大流行威胁.本文着重就流行病学、病原学及防制对策方面的相关进展进行综述.     

2009年新型甲型H1N1流感病毒全基因组序列重组分析

目的:分析2009年流行的新型甲型流感病毒（A/H1N1）全序列的基因重组现象。方法:从NCBI基因数据库下载2009年新型甲型流感病毒（A/H1N1）全基因组序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0（MEGA 4.0）软件对8条基因序列进行拼接和比对,分析2009年爆发株与历史流行株序列间的同源性;同时采用Simplot 3.5.1软件分析新型流感病毒A/H1N1基因重组现象。结果:2009年3月以来爆发的新型A/H1N1病毒株聚合酶B1(polymerase B1,PB1)基因来自于人H3N2,其同源性为93.7%;聚合酶B2 (polymerase B2,PB2)和聚合酶A (polymerase A,PA)与禽H5N1同源性较高,同源性分别为89.0%、89.9%;血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)和非结构蛋白(non-structural protein,NS)与北美地区猪H1N1同源性较高,同源性分别为91.7%、93.1%和93.1%;神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和基质蛋白(matrix protein,MP)与欧洲地区猪H1N1同源性较高,同源性分别为90.5%、95.5%。全基因序列同源性分析发现2009年新型A/H1N1病毒与北美地区猪H1N1病毒同源性最高,为83.9%。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒可能是人H3N2、北美地区猪H1N1、欧洲地区猪H1N1、禽H5N1的基因重排病毒。     

鸡流感病毒SAα-2,3 Gal和α-2,6 Gal受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的作用

目的：探讨鸡流感病毒受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的位置和作用。方法：应用凝集素组织化学染色技术检测鸡呼吸道和消化道流感病毒SA受体的分布,用荧光素Alexa 488标记的禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1分别与鸡呼吸道、消化道各解剖部位结合。结果：鸡呼吸道均表达SA-α2,3Gal和-α2,6Gal受体,SA-α2,6Gal受体在气管、支气管和次级支气管呈高密度分布,而SA-α2,3Gal受体在呼吸道的分布以副支气管上皮细胞为主;消化道结肠上皮细胞SA-α2,3Gal受体呈弥漫分布,但SA-α2,6Gal受体仅少量分布。同时,禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1均可与呼吸道和消化道上皮细胞结合。结论：鸡同时表达SA-α2,3Gal和-α2,6Gal受体,能与禽流感病毒和人流感病毒结合,有助于病毒基因重配,可充当产生人类流感大流行潜在的中间宿主。     

鹌鹑流感病毒SA受体的分布特点及其在流感病毒生态系统中的作用

目的探讨鹌鹑流感病毒受体分布特点及其在流感病毒生态系统中的位置和作用。方法应用亲和组化法检测鹌鹑呼吸道和消化道流感病毒SA受体的分布,用荧光素Alexa488标记的禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1分别与鹌鹑呼吸道、消化道各解剖部位结合。结果鹌鹑呼吸道均表达SAα-2,3Gal受体和SAα-2,6Gal受体,SAα-2,3Gal受体在呼吸道气管、支气管、次级支气管和消化道结肠上皮细胞均呈弱阳性分布,而副支气管呈阳性弥漫分布;SAα-2,6Gal受体在呼吸道气管、支气管和次级支气管多呈强阳性弥漫分布,而在副支气管、消化道结肠均为缺乏或仅极少量分布。禽流感病毒H9N1、人流感病毒H1N1均可与呼吸道和消化道上皮细胞结合。结论鹌鹑同时表达SAα-2,3Gal受体和α-2,6Gal受体,能与禽流感病毒和人流感病毒结合,有助于病毒基因重配,可充当产生人类流感大流行潜在的中间宿主。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化及NA基因编码蛋白抗原性、酶活性位点、糖基化位点变异情况。方法:从NCBI基因库检索获得43株不同年代不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0（MEGA 4.0）软件进行基因进化分析和氨基酸序列分析。结果:2009年新型甲型H1N1流感病毒与禽H5N1流感病毒NA基因的同源性达到85％,潜在抗原位点氨基酸分布相同;所有毒株的酶活性中心位点高度保守,但糖基化位点有变异。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒的NA基因可能来源于禽H5N1流感病毒;神经氨酸酶抑制剂治疗有效。     

禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的病理变化

 【目的】 通过鼻腔将H5N1禽流感病毒接种ICR小鼠,观察其主要器官组织的病理变化?【方法】 麻醉ICR小鼠后将100 μL H5N1禽流感病毒原液用移液枪滴入接毒组小鼠鼻腔,接毒后14 d内每隔24 h取材一次,采用福尔马林固定,石蜡包埋?切片,HE染色?【结果】 禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠后表现出明显的病理改变?ICR小鼠的肺部病变最严重,表现为间质性肺炎,肺间质充血?水肿和淋巴细胞浸润,血管周围淋巴细胞浸润,毛细血管扩张,上皮细胞变性?坏死?脱落,并有充血和单核细胞浸润,肺泡壁明显增宽,血管充血,有的肺泡溶合,呈气肿状?肝?肾?脑等其它脏器也出现病变?【结论】 禽流感ICR小鼠模型能复制出人类禽流感疾病的许多病理特征,禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的肺病理类似于人禽流感严重病例的肺病理?     

广东省2例城市型人感染高致病性禽流感(H5N1)病例的流行病学调查

目的通过对2例城市人禽流感病例的流行病学调查、分析,探讨无直接病死禽暴露情况下的可能感染来源,为进一步防控禽流感提供科学依据。方法采用现场流行病学、血清学调查的方法;荧光定量PCR、ELISA、RT-PCR和应急监测等方法进行调查、诊断。结果2例感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例未发现有明确病死禽接触史,但发病前到过甚至多次到过农贸市场;密切接触者中没有发生不明原因肺炎病例,未发现人—人传播证据。结论2例人感染高致病性禽流感病例均属城市型感染个案,非人传人病例,感染来源可能与农贸市场环境有关。     

Identification of dual receptor-binding specific strains of human H5N1 viruses in China

Objective Both the 2,6 linkage and its topology on target cells are critical for the recognition by human influenza virus.The binding preference of avian flu virus H5N1 HA to the 2,3-linked sialylated glycans is considered the major factor limiting its efficient infection and transmission in humans.To monitor potential adaptation of H5N1 virus in human population,the surveillance of receptor-binding specificity was undertaken in China.Methods The binding specificity of 32 human H5N1 virus strains isolated from 2003 to 2009 was tested by 2,3-specific sialidase-treated chicken red blood cell (CRBC) agglutination assay and a solid-phase direct binding assay with synthetic sialylglycopolymers.Results Dual binding preference to 2,3 and 2,6-glycans were found in two strains:A/Guangdong/1/06 (A/GD/1/06) and A/Guangxi/1/08 (A/GX/1/08).Though minor effect of short-2,6-binding was detected in A/GX/1/08 at a low virus titer,both showed high affinity to the oligosaccharide at a high load.Notably both are of the long-2,6-recognition,with the same topology as that of human H1N1 and H3N2 viruses.Conclusion The findings suggest that human H5N1 virus in China likely acquired the potential human-adaptation ability.Further research and surveillance on receptor-binding specificity of H5N1 viruses are required.     

广州市一起水禽H5N1疫情禽流感病毒血凝素基因分析

目的了解广州市一起水禽H5N1疫情中高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(HA)基因的特点以及与其他毒株序列间的关系。方法自疫点采集97份咽拭子标本及84份环境拭子标本,实时荧光RT-PCR检测H5核酸,从阳性标本中扩增全长HA基因并作序列测定,同2006年广州市及国内其他地区报道的人禽流感病毒HA基因进行比较并作系统发生分析。结果从一份环境拭子中扩增获得一株H5N1禽流感病毒HA基因,系统发生树分析发现与广州市2006年人禽流感病毒HA序列一致性较高,且与国内其他地区报道的H5N1病毒HA基因属于同一组;从基因序列推导出HA的氨基酸序列,发现其受体特异性为禽源的,蛋白酶水解位点含有多个连续的碱性氨基酸,符合高致病性禽流感病毒的特征。结论引发此次禽间禽流感的为高致病性H5N1病毒,和广州市人禽流感的H5N1病毒在遗传上有紧密的亲缘关系。禽源性的H5N1病毒仍存在感染人类的可能性,禽类从业人员目前处于感染高致病性禽流感的高危状态,进一步加强对活禽市场和禽类从业人员的监测,对于预防禽流感的流行具有重要意义。