低氧条件下低氧诱导因子-1α及p53的表达

目的　研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子 1α及凋亡相关基因p5 3蛋白表达的变化 ,探讨两者之间的关系。　方法　实验用雄性昆明小鼠 ,分为低氧组和对照组 ,低氧仓浓度分别为 10 %、7%、5 %。用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦扫描显微镜技术 ,检测小鼠在低氧条件下肺组织中HIF 1α及p5 3蛋白表达的变化。　结果　正常组小鼠肺组织HIF 1α无表达 ,p5 3少量表达 ;低氧组HIF 1α及p5 3蛋白表达均增加 ,并且随低氧时间的延长及低氧强度的增加而增强 ,P <0 0 5 ,HIF 1α及p5 3的表达呈显著正相关 (r=0 97)。　结论　低氧可诱导小鼠肺组织中HIF 1α的表达增强 ,同时肺组织p5 3蛋白的表达上调 ,两者呈显著正相关 ,说明HIF 1α有可能参与肺组织p5 3蛋白表达的调节 ,进而调节凋亡的发生。     

低氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的机制

目的：研究低氧诱导肺泡巨噬细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及HIF-1α对肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法：应用HIF-1α诱骗法(HIF-1α decoy)抑制低氧(3％O2，5％CO2，92％N2)培养的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的作用，并用免疫组织化学、Western blot、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果：HIF-1α在常氧对照组肺泡巨噬细胞核中表达呈阴性，在低氧组和HIF-1α decoy组表达呈阳性；低氧组和HIF-1α decoy组中HIF-1α蛋白的含量显著高于常氧对照组(P<0.05)。HIF-1α mRNA的含量在低氧组和HIF-1α decoy组明显高于常氧对照组(P<0.05)；培养的巨噬细胞上清液中TNF-α的含量在低氧组(115±17 ng／L)明显高于常氧对照组(69±13 ng／L，P<0.05)和HIF-1α decoy组(81±15 ng／L，P<0.05)。结论： 低氧可明显诱导肺泡巨噬细胞HIF-1α的表达和活性增强，后者能促进TNF-α的产生，提示在可导致肺部低氧的炎症性疾病如COPD中HIF-1α可能发挥重要作用。     

低氧促进神经干细胞增殖分化过程中低氧诱导因子-1α表达的变化

目的:观察小鼠胎脑皮质神经干细胞(NSCs)在体外低氧条件下细胞增殖与分化以及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况,分析HIF-1α对NSCs增殖与分化的作用。方法:体外低氧条件下(3%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的细胞,实验分低氧1、2、3、4d组,常氧组为对照。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞,RT-PCR检测实验组细胞HIF-1α mRNA的表达。结果:低氧4d组细胞呈HIF-1α阳性,其余HIF-1α为阴性。实验组神经元特异性烯醇酶(NSE)平均灰度值进行性增加。各实验组HIF-1α mRNA与对照组相比具有显著性差异。结论:在低氧能促进NSCs的增殖与分化过程中,HIF-1α表达变化可能在其中发挥了重要作用。     

低氧刺激结缔组织生长因子表达与肾间质纤维化

目的：观察低氧对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨低氧致肾间质纤维化的机制。方法： 单侧输尿管结扎（UUO）9 d大鼠动物模型，用RT-PCR方法检测肾组织中低氧标记分子-低氧诱导因子（HIF-1α）的mRNA水平，免疫组化方法观察假手术组及模型组肾组织中HIF-1α和CTGF的表达及部位，Western蛋白印迹技术检测肾组织CTGF的蛋白水平。体外实验，正常大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）分别置于低氧（1%O2）和正常氧条件下培养6 h，应用RT-PCR和Western蛋白印迹检测CTGF mRNA和蛋白表达水平。结果： 对照组肾组织未能检测到HIF-1α mRNA和HIF-1α蛋白表达；模型组肾组织有高水平HIF-1α mRNA，并出现HIF-1α蛋白表达，主要分布在小管-间质细胞；CTGF蛋白与HIF-1α蛋白表达部位及程度一致；低氧（1% O2）培养刺激NRK-49F细胞表达CTGF mRNA和蛋白。结论： 低氧刺激的CTGF的表达增加与肾间质纤维化的发生有关。     

低氧诱导因子-1α参与低氧预处理诱导的心肌血管生成

目的：研究低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在低氧预处理（HPC）诱导心肌血管生成中的作用,并探讨其细胞信号转导的机制。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组和HPC组。动物置于低氧仓内，持续通入10% O2和90% N2 4 h复制低氧预处理模型。用Ⅷ因子免疫组化染色检测HPC后7 d和21 d心肌组织微血管密度。制备心肌组织蛋白提取物，分别以磷酸化的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）抗体和HIF-1α抗体检测HPC后1 d、7 d和21 d p-ERK1/2活性及HIF-1α表达。结果：HPC后7 d和21 d心肌组织微血管密度分别较对照组高36.99%和37.76%（均P<0.01）；p-ERK1/2活性在HPC后1d 较对照组高18.67%；HPC诱导HIF-1α的表达，其表达高峰出现在HPC后1 d。结论：HPC可以促进心肌微血管生成，其机制涉及ERKs活化和HIF-1α表达上调。     

低氧增加人皮肤微血管内皮细胞系迁移并促进凋亡

目的研究低氧环境对人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)迁移、凋亡及相关因子HIF-1α、VEGF、i NOS基因及蛋白表达的影响。方法低氧培养人微血管内皮细胞,分为常氧组(对照组)和低氧组(Co Cl2模拟化学低氧)。CCK-8细胞生存实验确定合适处理浓度(200μmol/L Co Cl2),划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞技术观察细胞凋亡;用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1α、VEGF、i NOS mRNA和蛋白表达。结果与常氧组比较,低氧组细胞迁移能力增加(P0.05),凋亡增多(P0.05),均呈时间依赖性。低氧组HIF-1α、HIF-1β、VEGF、i NOS mRNA表达较常氧组比较均增加(P0.05),HIF-1α、VEGF、i NOS蛋白表达较常氧组比较均增加(P0.05),具有一定时间依赖性。结论低氧能增强人皮肤微血管内皮细胞迁移能力,并促进其细胞凋亡,其可能机制与HIF-1α、VEGF、i NOS蛋白表达升高有关。     

HIF-1α介导低氧诱导的内皮细胞Brm表达上调的机制研究

目的:本研究拟探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)在低氧诱导的血管内皮细胞Brm表达上调中的作用及机制,为低氧性肺动脉高压的防治提供理论依据。方法:在内皮细胞中过表达或siRNA干扰HIF-1α的表达,并给予1%低氧处理24 h后,运用萤光素酶报告基因检测方法检测Brm启动子的转录活性,运用RT-qPCR检测Brm的mRNA表达水平,运用Western blot检测Brm的蛋白表达水平。运用ChIP技术检测低氧条件下HIF-1α与Brm启动子区域的结合变化情况。结果:过表达HIF-1α可显著上调Brm的启动子活性、mRNA及蛋白表达,而siRNA干扰HIF-1α可显著抑制Brm的启动子活性、mRNA及蛋白表达,ChIP实验揭示低氧可显著增强HIF-1α与Brm启动子的结合。结论:低氧上调内皮细胞中Brm的表达依赖HIF-1α的转录调控作用。     

在CoCl_2模拟低氧条件下HIF-1α直接调控PPARγ2的表达

目的探讨在Co Cl2模拟低氧条件下,低氧诱导因子1α(HIF-1α)对于过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)是否具有调控作用。方法用real time PCR和Western blot检测Co Cl2模拟低氧条件下PPARγ2和低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达。用双荧光报告系统检测HIF-1α对于PPARγ调控的剂量依赖性,并通过染色质免疫共沉淀技术进一步验证。结果 Co Cl2模拟低氧条件下PPARγ2和HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平均随着诱导时间的增加而增加。过表达HIF-1α导致PPARγ2表达上调(P0.01),而抑制HIF-1α则导致PPARγ2表达下调(P0.05)。HIF-1α对PPARγ2基因的表达具有正调控作用,通过结合于PPARγ2上游调控区特定的低氧应答元件(HRE)而调控其表达。结论 PPARγ2通过HIF-1α依赖的途径在Co Cl2模拟的低氧条件下发挥低氧适应作用。     

低氧通过HIF-1α上调卵巢癌细胞SKOV3中HPA的表达

目的探讨低氧条件下卵巢癌细胞株SKOV3中低氧诱导因子-1α(HIF-1α),乙酰肝素酶(HPA)的表达变化及相互作用关系。方法分组孵育细胞株,用免疫细胞化学定性检测HPA蛋白,Western-blot和RT-PCR检测HIF-1α、HPA蛋白和mRNA。结果HPA蛋白定位于胞质。低氧12~36 h HIF-1α蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),而mRNA变化不明显,HIF-1α抑制剂雷帕霉素可抑制蛋白表达水平。在低氧后各时间点HPA蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05),雷帕霉素显著抑制HPA蛋白及mRNA表达。结论低氧可依赖HIF-1α途径增强HPA的表达,进而促进肿瘤的浸润转移。     

低氧诱导因子1α诱导卵巢癌细胞周期阻滞的研究

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF-1α）对卵巢癌细胞周期的阻滞作用。方法: 采用化学性低氧诱导剂氯化钴（CoCl2）和物理性低氧培养箱两种方法对体外培养的卵巢癌SW626细胞诱导低氧，用诱骗法（decoy）阻断HIF-1α功能，Western blotting、RT-PCR和流式细胞术分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平和细胞周期比率。结果： B1组(3.75±1.31)和C1组(3.48±1.01) HIF-1α蛋白表达水平明显高于A1组(0.97±0.31)（P<0.05), decoy法对HIF-1α蛋白表达没有明显影响(P>0.05)；A1组（0.65±0.32）和B1组（0.64±0.34）HIF-1α mRNA表达水平明显低于C1组（1.28±0.62）（P<0.05），decoy法对HIF-1α mRNA 表达没有明显影响（P>0.05）；流式细胞术检测发现B1组（81.78±24.33）和C1组（77.62±22.76）G0/G1期细胞比率显著高于A1组（49.49±18.54）（P<0.05）；B2组（61.54±20.84）明显低于B1组（P<0.05），C2组明显低于C1组（56.03±21.42），而A1组和A2组之间无明显差异（P>0.05）。结论：CoCl2或物理性低氧均能明显诱导卵巢癌细胞SW626 G0/G1期细胞周期阻滞和HIF-1α的表达，HIF-1α在低氧引起的卵巢癌细胞SW626的细胞周期阻滞中起重要作用。     

HIF-1α/SDF-1信号轴在低氧诱导祖细胞迁移和黏附中的作用

目的: 分析低氧对大鼠肺动脉内皮细胞低氧诱导因子(HIF-1α)及间质细胞衍生因子(SDF-1)表达的影响,探讨二者的相互关系(即是否存在HIF-1α/SDF-1信号轴)及其在低氧诱导祖细胞迁移和黏附中的作用。方法: 免疫磁珠分离纯化SD大鼠外周血CD34/CXCR4阳性祖细胞,免疫荧光、Western blotting及ELISA法检测不同低氧时间HIF-1α和SDF-1在大鼠肺动脉内皮细胞的表达,迁移和黏附实验检测常氧组、低氧组、HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2)组、SDF-1中和抗体组及同时加2ME2和SDF-1中和抗体组祖细胞的迁移指数和黏附率。结果: HIF-1α和SDF-1的表达与低氧时间有关,低氧12 h时二者表达到峰值(均P<0.01),应用2ME2可使SDF-1表达下调(P<0.05),应用2ME2或SDF-1中和抗体后均下调祖细胞的迁移指数和黏附率(P<0.05)。结论: 低氧可诱导肺动脉内皮细胞HIF-1α及受其调控的下游因子SDF-1的表达,提示HIF-1α与SDF-1存在信号调节关系。HIF-1α/SDF-1信号轴在介导祖细胞迁移和黏附至肺动脉内皮细胞的过程中起重要作用。     

低氧诱导因子1在低氧致肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡的影响,以及HIF-1α、P-ERK1/2、iNOS蛋白表达变化在其中的作用与意义。方法: 体外培养大鼠PASMC，设计常氧组、低氧组及ADM、L-NAME、PD98059干预组，用MTT比色法和PCNA的免疫组化法测定细胞增殖反应，用流式细胞仪检测细胞凋亡，用Western blotting法检测HIF-1α、P-ERK1/2、iNOS的蛋白表达。结果: （1）低氧24 h组的A值明显高于常氧组(P<0.01)，而PD98059及ADM干预组明显低于低氧组(P<0.01)， L-NAME干预组明显高于低氧组和常氧组(P<0.01)。（2）免疫组化表明，低氧24 h组呈阳性表达(P<0.01)。PD98059、ADM抑制了PCNA的表达(P<0.01)， L-NAME促进了PCNA的表达(P<0.01)。（3）各组在低氧培养24 h后，凋亡指数差异无显著(均P＞0.05)。（4）Western blotting表明常氧组少量HIF-1α、iNOS、 P-ERK1/2表达，低氧4 h后均表达增高(P<0.01),8 h仍维持在高峰(P<0.01)，而HIF-1α、P-ERK1/2在低氧24 h后表达下调。L-NAME促进了HIF-1α表达(P<0.01),PD98059部分抑制了HIF-1α、iNOS及P-ERK1/2表达(P<0.01)；ADM部分抑制了HIF-1α表达，促进iNOS表达(P<0.01)。结论: 低氧能促进肺动脉平滑肌细胞增殖，对细胞的凋亡无影响；HIF-1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞增殖中起重要作用。     

低氧诱导肺动脉内皮细胞间质细胞衍生因子-1的表达及其调控机制

肺血管重塑（PVR）是低氧性肺动脉高压持续且难以逆转的主要原因,其主要病变表现为肺动脉壁细胞增多,但其来源和机制仍不清楚。研究表明骨髓和外周血中存在血管壁细胞的祖细胞,并且参与了PVR的形成。间质细胞衍生因子-1（SDF-1）是特异性介导干细胞归巢至骨髓,介导祖细胞归巢至损伤或缺血组织的关键因子。SDF-1表达在这些部位的血管内皮细胞,而低氧是这些部位的微环境特征,也是诱导SDF-1表达的主要原因。低氧诱导因子-1α（HIF-1α）是特异性介导细胞低氧反应的关键因子,直接调控脐静脉内皮细胞SDF-1基因的表达㈨。我们旨在探讨低氧对肺动脉内皮细胞SDF-1表达的影响及HIF-1α对其表达的调控作用。     

慢性低压低氧对大鼠肺组织HIF-1ɑ、COX1蛋白及氧化应激反应的影响

目的探讨慢性低压低氧环境对大鼠肺组织细胞色素C氧化酶1(COX1)蛋白及氧化应激反应的影响。方法将大鼠随机分为常氧组(1 500 m)和低氧组(4 300 m),低氧组大鼠暴露低氧30 d后采集标本。用Western blot检测肺组织COX1蛋白的表达及ELISA检测肺组织和血清HIF-1ɑ、血浆ROS、肺组织SOD和CAT酶。用生理信号采集系统测定肺动脉压(PAP)。结果在低氧组的大鼠血清和肺组织内HIF-1α蛋白显著高于常氧组(P0.01);ROS含量显著低于常氧组(P0.01);COX1蛋白在低氧组的大鼠肺组织中表达显著下降(P0.01);血清总抗氧化能力升高(P0.01)。结论高海拔对机体的影响可能是直接性的损伤,而并非仅仅是氧化应激反应所致。     

低氧微环境促进人乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭和增殖

目的探讨合并2型糖尿病乳腺癌组织中HIF-1α、PAR-1、VEGF的表达及低氧微环境对人乳腺癌细胞系(MCF-7)侵袭和增殖的影响。方法乳腺癌合并2型糖尿病手术切除送检的标本37份,免疫组化检测乳腺癌和癌旁组织中HIF-1α、PAR-1、VEGF表达,测定微血管密度(MVD);将MCF-7细胞分为对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、低氧组(1%O_2,5%CO_2,94%N_2)、高糖低氧组。采用显微镜观察各组细胞形态;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;RT-qPCR和Western blot检测HIF-1α、PAR-1、VEGF mRNA和蛋白表达。结果乳腺癌组织中HIF-1α、PAR-1、VEGF表达及MVD计数高于癌旁组织(P0.05);高糖低氧组MCF-7穿过基膜的细胞数及细胞存活率明显升高(P0.01);低氧组、高糖低氧组HIF-1α、PAR-1、VEGF mRNA及蛋白表达较空白组明显升高(P0.05)。结论低氧高糖促进MCF-7细胞增殖和侵袭及HIF-1α、PAR-1、VEGF表达,可为临床2型糖尿病乳腺癌检测及治疗提供靶点。     

HIF-1α介导了间歇低氧对人肺腺癌A549细胞体外生物学行为的影响

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是否介导间歇低氧对人肺腺癌A549细胞体外活力、凋亡以及侵袭的影响。方法:采用体外转染方法将特异性针对HIF-1α的siRNA导入A549细胞,在间歇低氧条件下培养后通过real-time PCR和Western blot法检测HIF-1α及其下游Bcl-2、Bax、P53、P21、VEGF的mRNA和蛋白表达;通过MTT法和流式细胞术分别检测A549细胞的活力、凋亡及细胞周期;通过Transwell小室检测A549细胞的侵袭能力。结果:未转染HIF-1α-siRNA的A549细胞[间歇低氧空白对照组(IHC组)、间歇低氧空载体对照组(IHE组)及间歇低氧阴性对照组(IHN组)]经间歇低氧干预后的HIF-1α、Bcl-2及VEGF表达均明显高于常氧对照组(RA组),Bax及P21表达均明显低于RA组(P0.05),而转染HIF-1α-siRNA的A549细胞[间歇低氧siRNA组(IHS组)]较IHC组、IHE组及IHN组经间歇低氧干预后的HIF-1α、BCL-2及VEGF表达均明显下调,Bax及P21表达较均明显上调(P0.05);所有间歇低氧组A549细胞的P53表达均较RA组升高(P0.05),但各间歇低氧组之间无显著性差异。IHC组、IHE组及IHN组A549细胞经间歇低氧干预后较RA组的细胞活力增强,凋亡率下降,侵袭力增强(P0.05),而IHS组A549细胞经间歇低氧干预后细胞周期被阻滞于G1期,较未转染组的细胞活力下降,凋亡增加,侵袭能力下降(P0.05)。结论:间歇低氧可通过HIF-1α途径调控其下游基因表达进而促进A549细胞的活力和转移;通过RNA干扰技术造成HIF-1α基因沉默可以抑制间歇低氧引起的A549细胞生长和转移。     

低氧对胎鼠中脑NSCs的促体外增殖作用

目的观察低氧对大鼠中脑神经干细胞体外增殖的影响,并探讨其增殖的可能机制。方法取孕13.5 d的W istar大鼠,麻醉后取胚胎,分离中脑神经干细胞(NSC),常规培养鉴定后分3组:对照组;10%O2组;3%O2组。采用4孔板培养3~4 d后进行神经球记数,用流式细胞仪测定其增殖指数,最后用RT-PCR方法测定低氧(10%O2)不同时间点(1、3、6、12、24、48和72 h)低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达水平。结果低氧组神经球记数和增殖指数明显高于对照组,尤以10%O2组最为明显(P<0.01);10%O2组12 h和48 h时的HIF-1αmRNA表达水平比同一时间点的对照组明显增加。结论轻中度低氧有利于NSC的体外增殖,而HIF-1可能在其中发挥了重要作用。     

HIF-1α和HIF-2α在胃癌中的表达及意义

目的 探讨胃癌中低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的表达及其临床意义。方法 用免疫组化SP法检测组织中HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达;用Western blot法检测组织中HIF-1α、HIF-2α的表达。结果 胃癌中HIF-1α、HIF-2α和VEGF的阳性表达率分别为61.5%、36.5%和61.5%,均显著高于正常对照组的11.1％、0和0;HIF-1α表达与VEGF及胃癌的淋巴结转移密切相关。胃癌组织中HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织。结论 低氧诱导因子的表达可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用。     

MDA-MB-231乳腺癌细胞两种低氧模型的建立与比较分析

目的:由于实体瘤内的肿瘤细胞常处于低氧环境,本实验拟探究两种常用低氧模型对乳腺癌细胞影响的差异。方法:以不同浓度(0~300μmol/L)CoCl2处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞不同时间(24 h、48 h和72 h)建立化学低氧模型,以不同程度低氧(1%、2%和5%O2)处理MDA-MB-231细胞不同时间(4 h、16 h和24 h)建立物理低氧模型。采用CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力。结果:综合不同时间和浓度的HIF-1α蛋白表达结果,最终以100μmol/L CoCl2处理24 h建立化学低氧模型,以2%O 2处理24 h建立物理低氧模型;物理低氧细胞的HIF-1α蛋白表达明显高于化学低氧,且物理低氧细胞处于复氧环境后HIF-1α蛋白快速降解;物理低氧细胞凋亡增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,而化学低氧细胞无明显变化;两种低氧细胞的MMP-2蛋白表达均升高,且化学低氧细胞的侵袭及迁移能力增强。结论:两种低氧细胞模型构建成功,并且两种低氧细胞在HIF-1α蛋白表达与稳定性、细胞活力、凋亡、侵袭及迁移等方面均存在差异。这些差异可为低氧模型的选择和研究低氧环境下的肿瘤细胞特性提供参考。     

低氧诱导因子-1α在糖尿病肾病中作用机制的研究进展

低氧诱导因子-1α (HIF-1α)是一种核转录因子。在高糖低氧条件下,HIF-1α表达增加,诱导其下游靶基因VEGF、HO-1和BNIP3的表达,通过影响血管生成、细胞外基质沉积、铁代谢及线粒体自噬参与糖尿病肾病(DKD)的发生发展。此外,HIF-1α通过促进细胞因子的产生,参与DKD炎性反应并导致肾脏纤维化。