建立胃癌高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型的探讨

目的 应用表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术分析胃癌血清蛋白质指纹图谱,筛选胃癌特异性血清蛋白组合,建立胃癌诊断模型.方法 利用强阴离子交换芯片(Q10)分别对山东省临朐县胃癌高发区36例胃癌患者和46例浅表性胃炎患者的血清蛋白指纹图谱进行检测,采用ZUCIPDAS蛋白芯片数据分析系统,建立高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,并利用盲筛法验证模型的正确性.结果 通过对26例胃癌患者及37例浅表性胃炎患者血清蛋白指纹图谱进行检测,筛选出差异具有统计学意义的6个蛋白质峰,质荷比分别为8587、6945、8243、3899、7035和9943,并建立胃癌蛋白指纹图谱诊断模型,该模型诊断胃癌的灵敏度达88.5%,特异度达97.3%.在完成建模后,选择19例患者血清进行盲筛,其中胃癌患者10例,浅表性胃炎患者9例.通过盲筛验证,该模型诊断胃癌的灵敏度为80.0%,特异度为88.9%.结论 初步建立了胃癌高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,该模型诊断胃癌的灵敏度和特异度均达到80%以上,该方法为胃癌的诊断提供了新的思路.     

血清蛋白质谱结合人工神经网络在宫颈癌诊断中的应用

目的:采用蛋白质芯片表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测宫颈癌病人血清蛋白指纹图谱,通过差异蛋白组学筛选特有的蛋白标记物。方法:应用SELDI-TOF-MS技术和WCX2(弱阳离子)芯片采集58例宫颈癌患者和57例健康人血清蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件筛选差异蛋白质组。将115例血清随机分为两组:以训练组30例宫颈癌患者和30例健康人建立人工神经网络(ANN)模型,以验证组28例宫颈癌患者和27例健康人血清标本用于模型的双盲法验证。结果:宫颈癌患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有145个差异表达的蛋白质峰(P0.05),筛选出质荷比(M/Z)分别为5912、5642、8702、4320、6432的标志蛋白(P10-6),建立人工神经网络模型,其对宫颈癌的诊断敏感性为92.86%,特异性为88.89%,阳性预测值为89.66%,阴性预测值为92.31%。结论:特征蛋白在宫颈癌患者较正常人血清明显的高表达或低表达,可能对宫颈癌的早期诊断和治疗后随访具有重要的指导意义。     

SELDI技术筛选胃癌相关血清蛋白质指纹图谱的临床研究

目的 应用SELDI-TOF-MS技术筛选胃癌相关血清蛋白质多肽谱指纹并建立辅助诊断胃癌模型.方法 采用CMIO弱阳离子芯片,结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测50例首次就诊且病理诊断为胃癌患者和16例健康人血清样本并记录其蛋白质多肽谱指纹,利用Biomarker Wizard软件比较两组间的血清蛋白质指纹图谱.Biomark-er Patterns软件进行分析,建立胃癌的特异指纹模型.结果 胃癌患者血清蛋白质多肽谱与健康人相比,有34个蛋白质差异有统计学意义,其中m/z为6016,6744,2822,4474,7892和3242的六个蛋白质组成的诊断模型能达到鉴别胃癌患者和健康人的最佳诊断效果,在测试模式下,灵敏度和特异度分别为96.0%和93.8%,准确度为95.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术用于胃癌患者血清蛋白质多肽谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白组多肽谱指纹,可用此方法建立胃癌的辅助诊断模型.     

飞行时间质谱技术筛查卵巢癌患者血清特异性蛋白的研究

目的:应用飞行时间质谱技术筛选卵巢癌患者与正常人血清中差异性蛋白,为卵巢癌的早期诊断提供理论依据。方法:应用弱阳离子芯片(WCX2)及表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测30例正常人(对照组)和30例卵巢癌患者(实验组)血清中蛋白质的含量,并作比较。结果:对照组与实验组在2 000～30 000 Da间质荷比为3 812.556 Da与7 237.904 Da的2个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SELDI-TOF-MS技术对卵巢癌早期诊断和特异性肿瘤标记物的筛选等方面具有一定价值。     

质谱在乳腺癌血清蛋白组中的应用及其临床意义

目的研究乳腺癌患者血清蛋白,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在乳腺癌早期诊断中的临床意义。方法对48例乳腺浸润性导管癌患者和26例乳腺良性肿瘤患者与52名健康人血清,采用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱,检测各血清标本获得蛋白指纹图谱;用Biomarker Wizard找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns建立诊断模型;扩大样本量,通过盲法分析进一步验证诊断模型。结果初步筛选出6个差异蛋白峰,差异有统计学意义(P<0.01),建立由3164、3403 m/z两个差异蛋白峰组成的乳腺癌诊断模型,其敏感率为90.0%,特异性为93.3%;扩大样本盲法验证结果其敏感性为77.8%,特异性为90.9%;另外26例乳腺良性肿瘤患者中有21例可以检出。结论由两个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分乳腺浸润性导管癌、乳腺良性肿瘤患者与健康人。     

不明原因流产与正常早孕妇女血清蛋白质谱

目的研究不明原因流产患者血清蛋白质谱特征,探讨不明原因自发性流产的可能病因。方法采用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(SELDI-TOFMS),运用WCX2蛋白质芯片检测39例不明原因流产患者和30例正常早孕血清蛋白质谱,获得的蛋白质谱用Biomarker Wizard软件分析,初步筛选蛋白质峰,结合生物信息学的支持向量机方法建立并测试不明原因流产患者血清蛋白质指纹图谱模型。结果在芯片上捕获到251种蛋白质,经蛋白质质谱仪分析发现不明原因流产患者与正常对照组有29种差异蛋白,从中筛出差异显著的5种蛋白质组成原发不孕患者血清的蛋白质谱最佳优化模型,其中质荷比(m／z)分别为8 350,6 954,8 634,8 826的4种蛋白质表达下降,质荷比为(m／z)6 628的蛋白质表达上调。模型经三倍交叉验证实验测定,其敏感性为83．9％,特异性为83.7％。阳性预测值为81．1％。结论不明原因流产患者与正常早孕者血清蛋白质谱存在明显差异,深入研究可能为不明原因流产的病因学提供基础,同时有助于自发性流产血清生物标记物的筛查和发现。     

矽尘接触人群血清蛋白质指纹与接尘量的相关性分析

目的 筛选矽尘接触人群血清蛋白质指纹并分析其与接尘量的相关性.方法 应用液体芯片飞行时间质谱技术检测Ⅰ期矽肺组(25例)、正常对照组(30例)、矽尘接触组(30例)及可疑矽肺组(30例)血清蛋白质指纹并筛选出差异显著的蛋白,对每个样品差异蛋白的峰强度与其对应的接尘量进行相关性分析.结果 4组间共筛选出5个差异显著蛋白,其中5081 Da、5066 Da为表达上调蛋白,3954 Da、2021 Da、1777 Da为表达下调蛋白,将这些蛋白峰强度分别与其相应的接尘量进行相关分析,未发现蛋白峰程度与接尘量有相关关系(r1=0.039,r2=0.104,r3=-0.047,r4=-0.028,r5=-0.016,P＞0.05).结论 本次研究中矽尘接触人群血清蛋白质指纹与接尘量不存在相关关系.     

血清蛋白质谱结合人工神经网络在胃癌诊断中的研究

目的 建立筛选胃癌血清蛋白质谱的人工神经网络(ANN)诊断模型.方法 将84例胃癌患者和75例对照者的血清样本按照随机数字表法随机分为训练集(106例)和测试集(53例).首先应用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及弱阳离子交换表面芯片(CMl0)检测练集样本,结合反向传播ANN的方法建立诊断模型,进一步检测测试集样本并评价该模型的诊断价值.结果 胃癌患者与对照者血清蛋白质谱图有5个明显表达差异的蛋白质峰(P<0.05),质荷比分别为7567、6742、5262、4869、4256 m/z,5个蛋白质峰作为标志蛋白建立ANN诊断模型.利用该模型对胃癌患者进行盲法预测,结果表明其对胃癌的诊断灵敏度和特异度分别为90.0%和91.3%.结论 胃癌血清蛋白质谱结合ANN建立的诊断模型对胃癌诊断具有较高的灵敏度和特异度,可用于胃癌早期诊断与肿瘤标志物筛选研究.     

血清蛋白指纹图谱技术在诊断耐多药肺结核患者中的应用价值

目的探讨血清蛋白指纹图谱技术在诊断耐多药肺结核患者中的应用价值,为耐多药肺结核患者的诊断提供新的技术支持。方法选择2011年5月-2013年5月收治的82例肺结核患者,根据药敏试验结果将其分为耐多药组47例以及非耐药组35例,另选择健康者30名作为对照组,检测3组受试者的血清蛋白峰并进行比较。结果 3组血清差异蛋白峰分子质量主要以5 341、8 039、12 900m/z为主;其中5 341m/z蛋白峰耐多药组阳性率为87.23%、非耐药组阳性率为37.14%、健康对照组阳性率为16.67%,3组比较,差异有统计学意义(P<0.05);运用5 341、8 039、12 900m/z 3个蛋白质峰组合所构建的诊断模型能够达到最佳的诊断效果,该模型诊断耐多药肺结核与无耐药肺结核的总准确率为76.83%、特异度为71.42%、灵敏度为80.85%。结论血清蛋白指纹图谱具有无创、微量、简便、快速的特点,对于耐多药肺结核患者具有较高的诊断灵敏度,有望在将来成为耐多药肺结核患者早期诊断发现的一个辅助检查指标。     

iTRAQ结合MALDI-TOF/MS检测涂阴肺结核患者血清差异蛋白

目的利用差异蛋白质组学方法检测涂阳和涂阴肺结核患者血清差异表达蛋白,以发现涂阴肺结核相关的潜在标志物,为临床治疗提供参考依据。方法分析2011年医院的住院患者39例临床资料,采用iTRAQ标记结合MALDI-TOF/MS筛选30例痰涂片阴性和9例痰涂片阳性的肺结核患者血清的差异表达蛋白,并进行生物信息学分析,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 3次独立重复试验一共筛选和鉴定到344种蛋白质,其中置信度在>95.0%有271种蛋白质;与涂阳肺结核患者血清蛋白多肽图谱相比,涂阴肺结核患者血清中11种蛋白表达水平显著增高,7种蛋白表达降低(P<0.05);生物信息学分析发现差异蛋白主要定位在细胞外,参与酶抑制剂活性和应激反应过程。结论涂阴和涂阳肺结核患者血清蛋白多肽图谱存在明显差异;处于关键节点上的6个蛋白可能与涂阴结核病的发生发展有密切联系。     

应用Clinprot系统研究21-三体综合征胎儿羊水蛋白质谱

目的:建立21-三体综合征的蛋白质组指纹诊断模型,为21-三体综合征的产前快速诊断提供理论依据。方法:收集2009年1月~2011年12月间在该院做产前诊断的孕妇,采用液体蛋白芯片飞行时间质谱技术对18例21-三体综合征胎儿(21-三体组)及18例正常胎儿(对照组)的羊水进行蛋白质组学对比研究。结果:21-三体组和对照组中共有44种蛋白质峰强度差异有统计学意义(P<0.05),选取其中质荷比(m/z)分别为3 762.68 Da、7 988.8 Da、3 911.26 Da、3 709.99Da和1 450.5 Da的5种蛋白质峰建立分类预测模型,该模型对21-三体组和正常对照组的识别率和预测率均为100%,其中3762.68 Da和861.8 Da的分布能力较好,3 762.68 Da在21-三体组中高表达,861.8 Da在21-三体组中低表达。结论:利用Clinprot系统筛选出来的44种差异表达蛋白有可能成为用于21-三体综合征产前快速诊断的一组生物学指标,3 762.68 Da可能为21-三体综合征胎儿的羊水蛋白标志物。     

高血压脑出血肝阳化风证与肝阳上亢证患者血清蛋白质组学研究

目的初步建立高血压脑出血肝阳化风证、高血压肝阳上亢证及健康对照的血清蛋白质组表达图谱,初步鉴定其差异表达的蛋白质。方法各组血清均以试剂盒去除白蛋白及IgG,以BCA法测血清蛋白浓度。以双向凝胶电泳分离各组血清蛋白质,考马斯亮蓝染色,扫描凝胶成像,以PDQuest软件对各组血清蛋白质组表达图谱进行差异分析,选定差异点进行MALDI-TOF质谱分析。Mascot软件搜索MSDB和SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果⑴初步建立三组血清蛋白质表达图谱。⑵8个蛋白质点在三组血清中呈现差异表达,初步鉴定其中的5个蛋白质:血清淀粉样前体蛋白,铜蓝蛋白,维生素D结合蛋白,载脂蛋白C-III和转铁蛋白。结论得到鉴定的5个蛋白质可能与高血压脑出血肝阳化风证发病过程相关。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肝癌血清标志物的研究

[目的]分析肝癌患者与慢性肝病患者血清蛋白指纹图谱的差异,建立肝癌和慢性肝病血清标志物诊断模型。[方法]采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,应用弱阳离子结合芯片(weak cation exchange,WCX2)以及配套软件,对肝癌患者和慢性肝病患者的血清差异蛋白质进行检测分析,构建诊断模型。[结果]通过对肝癌患者术前血清与慢性肝病患者血清蛋白质谱分析发现共有38个蛋白质表达量有明显差异。并获得相对分子质量为M3815,M4678,M4703,M4881,M5304,M5716,M6203,M7789,M7988,M8168,M9312这11个蛋白质组成的模型,可将肝癌患者与慢性肝病患者正确分组,其准确率81.5%(53/65),灵敏度81.3%(39/48),特异度82.4%(14/17)。[结论]有分类意义的11个差异蛋白可能与肝癌发生发展密切相关。     

血清蛋白质图谱分析在卵巢癌早期诊断中的应用

低分子量血清蛋白的概况可以反映器官潜在的病理变化 ,有助于肿瘤的早期诊断。在质谱技术的基础上发展起来的表面加强激光解析及电离飞行时间质谱技术联合人工智能技术 ,可以对卵巢癌患者的血清进行分析从而得到蛋白质图谱 ,对血清蛋白质图谱分析可用于卵巢癌的筛查 ,有望成为卵巢癌新的诊断手段。     

裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内差异表达蛋白的检测

[目的]分析裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内血清中的蛋白指纹图谱,并与正常对照裸鼠比较,筛选差异表达蛋白,为鼻烟癌的早期诊断提供特有的血清蛋白标志物. [方法]采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白芯片技术检测12只正常裸鼠和45只裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内血清中的蛋白指纹图谱,用Ciphergen ProteinChip 3.0 软件进行数据的校正与分析,采用Ciphergen Biomaker Wizard 3.1版软件分析筛选对照与试验组间的差导表达蛋白. [结果]对照组与试验组间检出17个差异表达的蛋白质(P<0.0001),其质荷比(M/Z)分别为13447、14586、8948、8017、5553、6742、14743、11586、15675、9178、6423、14940、15492、11528、8615、6738、8102.分子量主要集中在20 000 D以内.大多数标志蛋白在试验组中表达明显增高,少数为低表达.在裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内随时间的推移而出现一些规律性表达的蛋白质、质荷化(M/Z)为6738、8017、8102、8615的4个蛋白质在接种癌细胞后表达逐渐增强,质荷比(M/Z)为14740、15484的两个蛋白质表达逐渐域弱. [结论]在正常裸鼠和裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型之间发现具有一定价值的差异表达蛋白,对鼻咽早期诊断的微量蛋白标志物的研究具有极其重要的意义.     

血清蛋白质图谱分析在卵巢癌早期诊断中的应用

低分子量血清蛋白的概况可以反映器官潜在的病理变化，有助于肿瘤的早期诊断。在质谱技术的基础上发展起来的表面加强激光解析及电离飞行时间质谱技术联合人工智能技术，可以对卵巢癌患者的血清进行分析从而得到蛋白质图谱，对血清蛋白质图谱分析可用于卵巢癌的筛查，有望成为卵巢癌新的诊断手段。     

结直肠癌有无肝转移血清差异蛋白质表达的研究

目的：利用蛋白质组学技术分离、鉴定结直肠癌有无肝转移患者血清中差异蛋白质,筛选诊断肝转移的血清蛋白标志物。方法：根据入组条件,收集结直肠癌无肝转移病例、有肝转移病例,在两组中随机抽取12例血清样本,同组血清等量混合进行双向凝胶电泳,建立两组血清蛋白质双向电泳图谱,用Image—MasterV5．0软件寻找两组差异蛋白质点,MALDI—TOF—MS对差异蛋白质进行鉴定,查询生物信息数据库对差异蛋白质进行初步分析。结果：两组比较差异在2倍以上蛋白质有8种,其中5个蛋白质表达上调,3个蛋白质表达下调;两组每个差异蛋白灰度体平均值比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。通过数据库搜索鉴定出7种蛋白质,上调的5个蛋白质分别是Transferrin、Complement component C9、RN Adirected DNA polymerase（RNA指导的DNA合成酶）、Conserved hypothetical—protein（假定蛋白质）、SEC14L17 kDa protein;下调的2个蛋白质分别是Haptoglobin和Isoform 1 of Serumalbumin。结论：结直肠癌有无肝转移患者血清中的蛋白质表达谱有一定的差异性,这些差异蛋白质可能成为诊断肝转移的血清标志物。     

围着床期血清差异蛋白质筛选

目的 初步筛选与着床相关的蛋白质.方法 分别采集因输卵管因素接受体外受精-胚胎移植（VF-ET）治疗的妇女胚胎移植后2 d和2周后患者血清,以2周后患者血清人体绒毛膜促性腺激素（β-HCG）为标准,β-HCG＜100 U/L者为着床失败组,共28例.β-HCG＞100 U/L者为着床成功组,共27例.利用2-DE电泳技术对比分离两组间蛋白质谱,分离两组胚胎移植后2 d血清中的差异蛋白质,以MALDI-TOF技术进行蛋白测序.结果 差异蛋白质经质谱测序结果为人结合珠蛋白/触珠蛋白前体,分子量为45861Da.结论 着床成功与失败患者围着床期血清蛋白质谱存在差异,差异蛋白测序证实为人结合珠蛋白/触珠蛋白前体;该蛋白质在早期的血清检测中有可能特异性地反映着床的成败;可进一步研究,做成相关抗体来检测患者血清中的含量,早期预测着床成功性.     

Ⅱ期煤工尘肺患者与接尘正常人血清蛋白质差异性

目的 比较Ⅱ期煤工尘肺患者与接尘工人血清蛋白质的表达差异.方法 以病例与对照尽可能齐同为原则,选择了4对Ⅱ期煤工尘肺病例和接尘对照者,采静脉血,分离血清,以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向.进行蛋白分离,然后做图谱分析和质谱鉴定.结果 接尘工人和Ⅱ期煤工尘肺患者血清差异蛋白质点共有1596个,其中差异大于2倍的蛋白质点共有123个.对两组血清差异蛋白质中差异最大的16个点进行了鉴定,共鉴定出14个点的蛋白质,其中,8个蛋白质点在Ⅱ期煤工尘肺患者中是上调的,6个蛋白质点在Ⅱ期煤工尘肺患者是下调的.结论 Ⅱ煤工尘肺患者与接尘工人血清蛋白质的表达存在差异,需要进一步研究证实.     

双向电泳-质谱技术寻找原发性高尿酸血症血清差异蛋白初探

目的 通过对比分析正常人和高尿酸血症患者血清蛋白双向电泳图谱,初步分析高尿酸血症血清差异蛋白.方法 采用双向凝胶电泳(2-dimentional gel electrophoresis,2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对高尿酸血症患者和对照组健康人血清进行分析,寻找高尿酸血症血清差异蛋白.结果 差异表达蛋白质点数为10个,质谱成功鉴定出4个差异蛋白质,其中补体C3、触珠蛋白、α1-抗胰蛋白酶呈上调表达,载脂蛋白L1呈下调表达.结论 补体C3、触珠蛋白、o1-抗胰蛋白酶、载脂蛋白L1在高尿酸血症组和正常对照组血清中存在差异,但结果有待运用其他生物学的方法进一步验证.