Effect of 5-fluorouracil (5-FU) Joint Arsenic Trioxide (As2O3) on Growth Inhibition of Liver Cancer Cell BEL-7402 During Hypoxia in Vitro

目的 探讨缺氧条件下,不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)联合0.5 μmol/L浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制的影响.方法 用二氯化钴(CoCl2)诱导细胞培养的化学性缺氧条件,及四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定缺氧条件下不同浓度5-FU及5-FU联合As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用.结果 在化学性缺氧条件下,不同浓度5-FU联合As2O3对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制作用比单用5-FU有统计学差别(P﹤0.05),呈剂量-效应依赖关系.结论 在CoCl2诱导的化学缺氧条件下,非细胞毒剂量As2O3具有改善缺氧状态下5-FU对人肝癌细胞BEL-7402化疗敏感性下降的作用.     

缺氧时三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402生长的影响

目的 探讨由二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性缺氧条件下,不同浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法,测定常氧和缺氧条件下,不同浓度As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用.结果 不同浓...     

三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用

目的：探讨黄芪总黄酮（total flavonoids of Astragalus，TFA）在体外实验条件下对人肝癌细胞（BEL-7402）生长、繁殖的影响。方法：以BEL-7402细胞为实验对象，5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照，比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后，TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响。结果：数据表明TFA处理48h半数抑制浓度（IC50）为40μg／ml，5-FU为0．3μg／ml；TFA浓度达80μg／ml时可使BEL-7402细胞生长明显受挫（P〈0．05），有丝分裂指数下降；与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多，胞浆出现大量空泡，核固缩。结论：TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用。     

姜黄素单体影响肝癌BEL-7402细胞凋亡及其周期蛋白D表达的研究

目的 采用细胞学实验观察3种姜黄素单体对肝癌细胞株BEL-7402的抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用强度和机制.方法 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Annexin Ⅴ-FITC双标记及流式细胞术(FCM)实验观察3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用与细胞周期变化,采用 Western blot实验分析3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402细胞周期蛋白D表达的影响.结果 (1)3种姜黄素均可通过诱导肝癌细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞生长增殖,存在时间与剂量效应,以姜黄素Ⅲ抑制效果最强.(2)3种姜黄素通过影响细胞周期生长的调控信号、降低细胞周期蛋白D表达量致使肝癌细胞停滞于G1/S期.结论 3种姜黄素均可通过抑制肝癌细胞周期蛋白D表达而诱导细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长增殖,具有很高的临床治疗价值.     

As2O3对肾癌786-0细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的研究

目的 探讨As2O3与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对肾癌细胞786-0细胞株细胞增殖、细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响.方法 取对数生长期786-0细胞,MTT比色法检测As2O3和/或不同浓度5-FU对细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法及蛋白质印迹法检测XIAP mRNA表达及XIAP蛋白质表达的变化.结果 不同浓度的5-FU分别作用786-0细胞后,细胞生长受到抑制,但无明显的时间、浓度相关性;2μmol/L As2O3与不同浓度5-FU联合应用对786-0细胞的增殖抑制率随作用时间、药物浓度的增加逐渐升高,与单药相比较(P＜0.01),两药相互作用系数显示为协同作用.48h检测2μmol/L As2O3与不同浓度5-FU联合用药处理的786-0细胞的凋亡率明显增加,与单药相比(P＜0.01);XIAP mRNA表达明显减少,与单药相比(P ＜0.01);2μmol/L As2O3与400 μg/ml 5-FU联合应用48h XIAP蛋白表达亦明显减少,与单药相比(P＜0.01).结论 As2O3联合5-FU可以明显提高肾透明细胞癌的化疗敏感性,抑制786-0细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,这一作用与抑制786-0细胞XIAP基因的表达有关.     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

干扰素α-2b联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞生物学行为的影响

目的检测干扰素(IFNα-2b)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)在体外对肝癌细胞株HepG2的杀伤抑制作用,并探讨可能的作用机制。方法体外复苏、培养人肝癌细胞,并单用IFNα-2b或5-FU,以及不同浓度的IFNα-2b联合5-FU对其进行干预。用MTT法测定IFNα-2b联合5-FU对体外培养的人肝癌细胞生长的抑制率;用HOECHST染色法检测药物对人肝癌细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学法检测用药后人肝癌细胞中突变型p53、c-myc表达的变化。结果 IFNα-2b和5-FU都能抑制HepG2细胞生长,并随着作用时间的延长而增强,IFNα-2b与5-FU联合用药比单用IFNα-2b或5-FU抑制效果更明显,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强;IFNα-2b和5-FU均能诱导肝癌细胞凋亡,二药联用时细胞凋亡更明显,可呈剂量依赖性地诱导肝癌细胞凋亡,不同浓度下的凋亡率均明显高于对照组;IFNα-2b和5-FU均可明显抑制突变型p53、c-myc蛋白的表达,二药联用抑制作用更明显。结论IFNα-2b和5-FU联用可呈剂量和时间依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,呈剂量依赖性地诱导肝癌细胞凋亡,下调突变型p53、c-myc蛋白的表达,表现出协同作用。这些可能是IFNα-2b和5-FU联合抗癌的部分机制。     

抗坏血酸与三氧化二砷联合应用诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨抗坏血酸(ascorbic acid,AA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用增强肝癌细胞凋亡的作用。方法肝癌细胞株BEL-7402及SMMC-7721细胞分别用As2O3(1 μmol/L)、AA(62.5 μmol/L)、As2O3(1 μmol/L) AA(62.5 μmol/L)处理24～96 h,流式细胞仪上检测细胞凋亡百分率;用试剂盒法测定细胞内谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量。结果1 μmol/As2O3作用24～96 h有诱导BEL-7400及SMMC-7721细胞凋亡的作用,从(62.5 μmol/L) As2O3(1 μmol/L)作用72 h BEL-7402细胞凋亡百分率为(61.7±0.8)%,SMMC-7721细胞为(26.8±0.9)%,较单独应用As2O3(1 μmol/L)的凋亡百分率[(40.2±0.8)%;(11.4±0.5)%]明显增高。As2O3(1 μmol/L)单独作用对SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响。从(62.5 μmol/L)单独作用对BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响,但可明显降低SMMC-7721细胞内GSH的含量(P<0.05)。AA(62.5 μmol/L)与As2O3(1 μmol/L)联合作用可明显降低SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量(P<0.05),SMMC-7721细胞内GSH的含量降低更显著(P<0.01)。结论AA及As2O3联合应用能增强肝癌细胞株BEL-7402及SMMC- 7721细胞凋亡作用,尤其是对As2O3不敏感细胞株SMMC-7721细胞作用更显著。     

CIK细胞联合表柔比星对肝癌的体内外杀伤作用研究

目的 研究CIK细胞联合表柔比星对肝癌细胞BEL-7402的体内外杀伤效应.方法 取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-1、IL-2、抗CD3单抗诱导CIK细胞成熟,流式细胞仪检测培养第1、7、14 d的CIK细胞表型.Cell Counting Kit-8试剂盒(CCK-8)检测CIK细胞、表柔比星及两者联合对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应.用肝癌细胞BEL-7402建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为生理盐水对照组、CIK治疗组、表柔比星组、CIK联合表柔比星治疗组(联合组),观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用.结果 CIK细胞经多种细胞因子诱导培养后,CD_3~+CD_(56)~+细胞比例明显上升,14 d时CD_3~+CD_(56)~+细胞比例达(46.83±2.53)%,与第1天比差异有显著性(P<0.01),细胞量扩增了近1 000倍.联合组对肝癌细胞的杀伤率明显高于各单独治疗组,差异有显著性(P<0.05).体内实验表明,CIK细胞联合表柔比星可明显抑制裸鼠肝癌细胞种植瘤的生长且无明显副作用.结论 细胞因子活化杀伤细胞疗法联合化疗能显著抑制体内外肝癌细胞BEL-7402的生长,为肝癌的生物化疗提供了实验室依据.     

细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应

目的：探讨细胞分化剂（CDA－Ⅱ）在三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。方法：应用CDA－Ⅱ和As2O3共同处理肝癌细胞株BEL－7402、HepG2，通过四唑蓝比色法检测细胞存活率；用活细胞荧光染色观测细胞凋亡及形态学变化、流式细胞术分析细胞周期变化及凋亡率。结果：CDA－Ⅱ毒性作用很低，但可以显增强As2O3对肝癌细胞生长的抑制作用，1．0g/L CDA-Ⅱ便可使As2O3对两株细胞的半数抑制浓度由5．0μmol/L降低至1．0μmol/L（P＜0．01）。形态学可观察到CDA－Ⅱ明显加强了As2O3诱导的细胞凋亡，且与剂量有关；流式细胞术分析，低质量浓度的CDA－Ⅱ（＜2．0g/L)细胞生长阻滞于G2期较对照组多，而随着剂量的增加则凋亡细胞和滞留于G1期的细胞增多，低剂量CDA－Ⅱ与As2O3共同处理肝癌细胞后，凋亡率明显高于单独用As2O3。结论：CDA－Ⅱ可增强As2O3诱导肝癌细胞的凋亡效应，两药具有协同作用。     

MiRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

目的探讨微水RNA-122(miR-122)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响。方法构建miR-122和阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8,caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果仅用miR-122处理BEL-7402/5-FU细胞时,与未转染组和转染对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加,用10μmol/m L 5-FU作用BEL-7402/5-FU细胞24 h后,与未转染组和转染对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;与未转染组和转染对照组比较,转染了miRNA-122的BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论 miR-122能够下调BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达,miR-122能促进5-FU诱导的BEL-7402/5-FU细胞凋亡。     

三氧化二砷对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对胆管癌癌细胞株QBC939的增殖抑制作用并初步探讨其机制。方法 胆管癌细胞株QBC939用不同浓度As2O3处理，活细胞计数和细胞克隆试验观察As2O3对细胞动力学的影响；丫啶橙荧光染色、透射电镜，TUNEL观察细胞凋亡；流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期变化；增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2单抗SABC免疫组化染色。结果 在0．75-6μmol/L范围内，As2O3明显抑制QBC939细胞增殖和诱导细胞凋亡，其作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而增强；相应地PCNA和bcl-2表达减弱。流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰，并阻滞细胞周期的G2-M期。结论 As2O3可明显抑制胆管癌细胞株QBC939的生长、诱导癌细胞凋亡，有临床治疗胆管癌的潜在价值。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞的增殖抑制作用 .方法　应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验 ,研究 As2 O3对肝癌 Hep G2细胞的增殖抑制和细胞毒作用 .结果　 As2 O3 能显著抑制肝癌细胞的生长 ,5μmol· L- 1 As2 O3 抑制程度明显强于 1μmol· L- 1 . 5和 1μmol· L- 1 As2 O3 作用后细胞克隆形成率分别为 (1.5±1.2 ) %和 (12 .3± 2 .2 ) % ,明显低于对照组的 (30 .0± 4.2 ) %(P<0 .0 1) .As2 O3对肝癌细胞有较强的细胞毒作用 ,且呈明显剂量和时间依赖性 ,其对肝癌细胞的杀伤率高于 5 -氟脲嘧啶 (5 - FU )和丝裂霉素 (MMC) ,但无显著性差异 ,As2 O3与 5 -FU及 MMC存在协同效应 ,联合应用杀伤率明显升高 .结论　 As2 O3具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用 ,有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值     

细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应

【目的】探讨细胞分化剂 (CDA Ⅱ )在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。【方法】应用CDA Ⅱ和As2 O3 共同处理肝癌细胞株BEL 74 0 2、HepG2 ,通过四唑蓝比色法检测细胞存活率 ;用活细胞荧光染色观测细胞凋亡及形态学变化、流式细胞术分析细胞周期变化及凋亡率。【结果】CDA Ⅱ毒性作用很低 ,但可以显著增强As2 O3 对肝癌细胞生长的抑制作用 ,1 0 g/LCDA Ⅱ便可使As2 O3 对两株细胞的半数抑制浓度由 5 0 μmol/L降低至 1 0 μmol/L(P <0 0 1)。形态学可观察到CDA Ⅱ明显加强了As2 O3 诱导的细胞凋亡 ,且与剂量有关 ;流式细胞术分析 ,低质量浓度的CDA Ⅱ (<2 0 g/L)细胞生长阻滞于G2 期较对照组多 ,而随着剂量的增加则凋亡细胞和滞留于G1期的细胞增多 ,低剂量CDA Ⅱ与As2 O3 共同处理肝癌细胞后 ,凋亡率明显高于单独用As2 O3 。【结论】CDA Ⅱ可增强As2 O3 诱导肝癌细胞的凋亡效应 ,两药具有协同作用。     

单用丝裂霉素或表柔比星对肝癌细胞株的抑制作用

目的:研究单用丝裂霉素或表柔比星对肝癌细胞株的抑制作用.方法:用含不同浓度化疗药物丝裂霉素(mitomycin,MMC)或表柔比星(epirubicin,EPI)的培养液培养肝癌细胞株(BEL-7404、PLC/PRF5、SMMC77221、HepaG2、BEL-7402、QGY7703),采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium assay, MTT)法观察单用化疗药物MMC或EPI对肝癌细胞株的抑制率.结果:对任意一种肝癌细胞而言,随着药物浓度的增加,其细胞抑制率也相应增加,在相同药物浓度下EPI的细胞抑制率明显高于MMC(P＜0.05).结论:化疗药物EPI对于肝癌细胞株的抑制作用明显优于MMC,为临床应用提供了实验依据.     

三氧化二砷联合抗坏血酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)联合抗坏血酸(AA)对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其细胞内谷胱甘肽(GSH)水平.方法:As2O3和AA不同组合孵育细胞HepG2,采用台盼蓝染色实验检测药物对细胞生长的影响,流式细胞仪检测亚二倍体凋亡峰,Annexin V染色检测细胞凋亡率,GSH实验检测细胞内GSH水平.结果:100 μmol/L的AA单独作用与对照组相比在细胞增殖和凋亡都无显著性差异;低剂量(2 μmol/L)和高剂量(5 μmol/L)的As2O3都能抑制细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,联合AA作用后,比相应浓度的单独As2O3作用更为显著;AA和As2O3分别处理都能明显消减细胞GSH含量,两种药物联合作用后与相应单独As2O3作用相比GSH水平显著性降低.结论:GSH在As2O3对肝癌细胞抑制增殖和诱导凋亡作用机制中起到重要的作用,高低剂量的As2O3联合AA通过降低GSH水平均可以增强As2O3对肝癌细胞抑制生长及其诱导凋亡作用的敏感性.     

三氧化二砷纳米粒体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3）新剂型纳米粒的制备方法及体外诱导肝癌细胞凋亡的作用，并与传统的As2O3溶液进行比较。方法：①采用溶胶-凝胶法制备As2O3纳米粒；②用光镜、电镜、MTT、流式细胞仪法研究As2O3纳米粒诱导人肝癌细胞凋亡的效柴。结果：①制备了大小约为80nm和40nm两种粒径的As2O3纳米粒子，电镜下呈圆形或椭圆形，分散性好；②细胞培养发现，5、10μmoL／L浓度的As2O3纳米粒可对人肝癌细胞生长产生明显的抑制作用，并诱导癌细胞凋亡，细胞凋亡率明显高于相同浓度的As2O3溶液组。结论：通过溶胶-凝胶法可将As2O3制备成纳米粒子，体外细胞实验证实其抗肝癌细胞的效应强于传统的As2O3溶液。     

羟基喜树碱诱导人肝癌BEL-7402凋亡的研究

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用.方法 用HCPT以不同终浓度诱导BEL-7402人肝癌细胞,用MTT法观察其细胞毒性.分别以倒置显微镜、电镜、荧光显微镜观察其改变.结果 HCPT以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞的生长.荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征的形态学改变.结论 羟基喜树碱既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖,又能诱导其凋亡显示出较强的细胞毒性.     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。