厚壳贻贝抗氧化肽的分离、鉴定及活性评价

目的：以厚壳贻贝(Mytilus coruscus)为原材料,以抗氧化活性为筛选指标,运用酶解技术和现代分离纯化技术,制备抗氧化多肽。方法：以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH?)、羟自由基(HO?)及2,2"-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基(ABTS?)清除率为指标,优化酶解条件。通过超滤、凝胶过滤层析和反向高效液相色谱分离抗氧化肽,并评价其抗氧化活性。结果：最佳酶解条件为：木瓜蛋白酶、酶解时间3 h、加酶量3%、料液比1：50。通过反相高效液相色谱及测序,鉴定4条多肽分别为HK1：Gln-Thr-Asp(362.34 Da);HK2：His-Gln-Glu-Glu(541.52 Da);HK3：Leu-Glu-Gly-Asp-Thr(533.54 Da);HK4：Thr-Gln-Glu(376.37 Da)。其对DPPH?自由基清除率的EC₅₀分别为0.523±0.002 mg/mL,0.419±0.002 mg/mL,0.467±0.007 mg/mL,0.626±0.011 mg/ mL;对HO?自由基清除率的EC₅₀分别为0.587±0.027 mg/mL,0.866±0.034 mg/mL,1.009±0.018 mg/mL,1.014±0.036 mg/mL)、对ABTS?自由基清除率的EC₅₀分别为0.218±0.001 mg/mL,0.117±0.002 mg/mL,0.121±0.001 mg/mL,0.415±0.003 mg/mL。结论：木瓜蛋白酶酶解厚壳贻贝蛋白,可以产生具有显著自由基清除活性的酶解肽,可为厚壳贻贝抗氧化肽的开发利用提供理论依据和参考。     

单环刺螠ACE抑制肽的分离、鉴定及活性评价

目的：以单环刺螠(Urechis unicinctus)为原材料,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性为筛选指标,运用酶解技术和现代分离纯化技术,制备具有降压潜能的ACE抑制肽。方法：运用可控酶解技术,以ACE的抑制率为筛选指标,优化酶解条件。运用超滤、Sephadex G-15凝胶柱层析、反相高效液相色谱(RP-HPLC)及质谱测序等一系列分离纯化和鉴定技术,制备具有ACE抑制活性的生物活性肽,并通过Lineweaver-Burk法确定其抑制剂类型。结果：最佳酶解条件为：胰蛋白酶,37℃、pH 8.0、加酶量4.0%、料液比1:30、酶解时间4.0 h。通过超滤、Sephadex G-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化,得到5条活性肽,经质谱和氨基酸序列分析确定其分别为：Pro-Gln-Met-Thr-Phe(DHCY1, 622.75 Da)、Pro-Tyr-Phe-Lys-His(DHCY2, 690.8 Da)、Pro-Gly-Trp-Lys-Ala(DHCY3, 557.66 Da)、Pro-Gln-Gly-Met-Ile-Val-Val(DHCY4, 742.94 Da)、Val-Met-Arg-Ile-Ile(DHCY5, 630.86 Da)。其中DHCY1、DHCY4、DHCY5表现出较好的ACE抑制活性,其抑制率分别为86.26±0.85%、92.11±1.13%、96.51±1.04%。经判断,DHCY5为竞争性ACE抑制剂。结论：胰蛋白酶酶解单环刺螠蛋白,可以产生具有显著ACE抑制活性的酶解肽,包括ACE竞争性抑制剂,具有潜在的降血压活性,可为单环刺螠酶解肽的开发利用和降血压产品的开发提供理论依据和参考。     

合欢皮皂苷物质的分离、纯化及其抗血管活性的研究

目的 分离合欢皮中的皂苷物质,并评价其对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)增殖的影响.方法 以细胞活性为指标,依次采用D101大孔树脂、硅胶柱、反相C18色谱柱从合欢皮正丁醇相中分离得到活性组分H5;采用UPLC-TOF-MS分析,确定此组分中所含的主要成分.结果 组分H5中主要皂苷类物质为julibroside J5、julibroside J8、isomer of J5和isomer of J8,总含量为79.15％,且对EA.hy926细胞的增殖具有抑制作用(IC50=7.82 ±1.59 μg·mL-1).结论 成功分离得到了具有抗血管新生作用的合欢皮皂苷物质.     

N，N′-双取代-L-谷氨酰胺类肽化合物的合成与抑瘤活性研究

设计合成了7个谷氨酰胺小分子类肽化合物。对肺腺癌细胞体外初步抑瘤活性实验表明,化合物1b、1g在160 μg/ml的剂量下,抑制率高于对照品抗瘤酮A10。     

基于UPLC-Q-Exactive-MS的菲牛蛭酶解物肽段鉴定与分子特性表征

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Exactive-MS）技术对菲牛蛭酶解物中肽段进行鉴定与表征。方法 采用胰蛋白酶对菲牛蛭进行酶解,利用UPLC-Q-Exactive-MS技术结合Maxquant软件对菲牛蛭酶解物进行分析并对其肽段进行序列鉴定,同时采用生物信息学平台对这些肽段进行生物活性与不良反应预测以及相对分子质量、等电点（pI）、净电荷、亲水性氨基酸比例、不稳定指数等基本分子特性的预测。结果 利用UPLC-Q-Exactive-MS技术联合Maxquant软件在菲牛蛭酶解物中共鉴定出32条肽段,其中肽段AGFAGDDAPR的各项肽段分子特性符合目前已知抗血栓肽的共性特征,鉴定分数为103.83,可信度高;活性概率为0.56,相对分子质量976.01,肽链长度为10;平均亲水性为0.5,亲水性氨基酸残基比例为30%,水溶性良好;pI值为4.21,净电荷为-1;不稳定性指数为20.72,在水中稳定性强;具有抗血栓活性的可能性较大。同时6条肽段SSGETSSIIRR、AGFAGDDAPR、SSGETSSIIR、DSYVGDEAQSKR、GARRER、SIEDQVKR被预测具有抗血管生成活性且无溶血现象,但仍需进一步的合成与活性验证。结论 以菲牛蛭为例,提供了一种快速从酶解物中鉴定动物药肽段序列的方法,以期为动物药的肽类成分的研究提供思路。     

关节液血管活性肠肽水平、白细胞介素 -1β、基质金属蛋白酶 3与踝创伤性关节炎症状严重程度、足踝功能的相关性分析

目的 探究关节液血管活性肠肽(VIP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP3)与踝创伤性关节炎(PTAOA)患者症状严重程度、足踝功能的相关性.方法 选取安阳市人民医院2018年1月至2019年5月踝创伤性关节炎病人72例作为研究对象,根据改良K-L分级分为2级(22例)、3级(30例)、4级(20例).检测对比不同分级病人关节液VIP、IL-1β、MMP3水平、症状(疼痛、肿胀)评分及足踝功能(AOFAS)评分,Pearson相关性分析关节液VIP、IL-1β、MMP3与症状、足踝功能关联性.结果 关节液VIP水平随改良K-L分级增加呈降低趋势,IL-1β、MMP3呈升高趋势(P<0.05);4级病人疼痛、肿胀评分高于3级、2级病人(P<0.05);关节液VIP与疼痛、肿胀呈负相关,IL-1β、MMP3与疼痛、肿胀呈正相关(P<0.05);4级病人功能和自主活动及支撑、最大步行距离、踝-后足稳定性、足部对线评分低于3级、2级病人(P<0.05);关节液VIP与功能和自主活动及支撑、最大步行距离呈正相关,IL-1β、MMP3与功能和自主活动及支撑、最大步行距离呈负相关(P<0.05).结论 关节液VIP、IL-1β、MMP3在PTAOA病人中表达明显异常,与病情、症状严重程度、足踝功能显著相关,调控VIP、IL-1β、MMP3表达可能为PTAOA的防治提供一个潜在的思路.