地塞米松促进卵巢癌细胞系p21/WAF1和TβR-II的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松 (Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO 8910增殖的分子机理。采用RT PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 1 WAF1,转化生长因子 β1 (TGF β1 )及其I型受体 (TβR I)和II型受体 (TβR II)的mRNA表达水平 ,免疫细胞化学方法分析TβR II的蛋白表达水平。发现Dex能够诱导HO 8910细胞p2 1 WAF1mR NA的表达 ,10 - 7mol LDex处理细胞 8h组比对照组p2 1 WAF1mRNA表达增加 2 84倍 (P <0 0 1)。并且证明Dex亦可上调TβR IImRNA的表达水平 ,10 - 7mol LDex处理 8h使TβR IImRNA的表达量比对照升高 1 2倍 (P <0 0 1) ;Dex也引起TβR II蛋白表达的增加。这些效应均可被糖皮质激素受体 (GR)拮抗剂RU4 86逆转。而TGF β1 和TβR ImRNA的表达不受Dex的影响。以上结果提示 ,Dex通过GR介导而促进p2 1 WAF1和TβR II的表达 ,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO 8910增殖过程     

地塞米松促进卵巢癌细胞系p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松(Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO-8910增殖的分子机理.采用RT-PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1,转化生长因子-β1(TGF-β1)及其I型受体(TβR-Ⅰ)和Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的mRNA表达水平,免疫细胞化学方法分析TβR-Ⅱ的蛋白表达水平.发现Dex能够诱导HO-8910细胞p21/WAF1 mRNA的表达,10-7mol/L Dex处理细胞8 h组比对照组p21/WAF1 mRNA表达增加2.84倍(P＜0.01).并且证明Dex亦可上调TβR-Ⅱ mRNA的表达水平,10-7mol/L Dex处理8 h使TβR-Ⅱ mRNA的表达量比对照升高1.2倍(P＜0.01);Dex也引起TβR-Ⅱ蛋白表达的增加.这些效应均可被糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486逆转.而TGF-β1和TβR-ⅠmRNA的表达不受Dex的影响.以上结果提示,Dex通过GR介导而促进p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖过程.     

地塞米松促进卵巢癌细胞系p21／WAFl和TβR－Ⅱ的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松(Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO-8910增殖的分子机理.采用RT-PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1,转化生长因子-β1(TGF-β1)及其I型受体(TβR-Ⅰ)和Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的mRNA表达水平,免疫细胞化学方法分析TβR-Ⅱ的蛋白表达水平.发现Dex能够诱导HO-8910细胞p21/WAF1 mRNA的表达,10-7mol/L Dex处理细胞8 h组比对照组p21/WAF1 mRNA表达增加2.84倍(P＜0.01).并且证明Dex亦可上调TβR-Ⅱ mRNA的表达水平,10-7mol/L Dex处理8 h使TβR-Ⅱ mRNA的表达量比对照升高1.2倍(P＜0.01);Dex也引起TβR-Ⅱ蛋白表达的增加.这些效应均可被糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486逆转.而TGF-β1和TβR-ⅠmRNA的表达不受Dex的影响.以上结果提示,Dex通过GR介导而促进p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖过程.     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肾发育过程中的表达

目的观察TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及胎肾发育中的表达,探讨它们与大鼠整胚及胎肾发育间的相互关系和作用机制。方法半定量RT-PCR分析三种因子在13~17 d全胚中的变化情况;免疫组化法观察三种因子在15~17d胎肾中的表达及该组织发育结构特点。结果半定量RT-PCR示,3种因子在发育13~15 d表达呈递增趋势,16~17 d出现下降。免疫组化示,TGFβ1主要位于肾深部内管状结构的上皮细胞,TβRI、TβRII位于肾内管状结构及其周围的间充质组织细胞。结论TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及胎肾发育过程中起着重要的调控作用,尤其是对组织器官形态的发生。     

石蜡包埋人胰腺癌组织中Smad4蛋白和转化生长因子β1及其Ⅱ型受体的表达

目的：探讨转化生长因子（TGF）－β通路中Smad4蛋白,TGFβ1和转化生长因子βⅡ型受体（TβRⅡ）的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。方法：用EnVision免疫组织化学技术检测56份石蜡包埋人胰腺癌标本Smad4蛋白,TGFβ1和TβRⅡ蛋白表达的情况。结果：56份胰腺癌组织Smad4,TGFβ1和TβRII阳性率分别为58．93％（33）,66．07％（37）和60．71（34）,对应正常胰腺组织阳性率分别为89．29％（50）,25．00％（14）和25．00％（14）,TGFβ1的表达与临床分期,肿瘤的有无转移相关（P＜0．05）,TGFβ1和TβRII之间也有相关关系（P＜0．05）,结论：胰腺癌组织中Smad4表达降低,TGFβ1与TβRII则呈过表达,TGFβ1和TβRII对胰腺癌的发生可能有协同作用。Smad在TGF－β诱导基因表达调控和随后的生长抑制中是关键的转录因子,但TGFβ有时也可能以与Smad4无关的形式起作用。     

子痫前期患者胎盘组织TGF-β1、TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的表达及其意义

目的检测胎盘组织中TGF-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)及其受体(TGF-beta receptor,typeⅠandtypeⅡ,TGFβRⅠ,TGFβRⅡ)的表达,评估TGF-β1及其受体在子痫前期发病中的作用。方法采用SP免疫组化法检测正常妊娠组和轻、重度子痫前期组胎盘组织中TGF-β1、TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的分布与定位,并通过高清晰度彩色病理图像分析系统对其进行定量分析。结果重度子痫前期组TGF-β1和TGFβRII的平均光密度较正常妊娠组显著增加(P<0·01),TGFβRI的平均光密度也较正常妊娠组增加(P<0·05)。结论TGF-β1、TGFβRI和TGFβRII在滋养细胞的浸润过程中发挥重要作用,它们可能与子痫前期的发病有着重大的关系。     

姜黄素减轻氧化型低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞损伤

目的:观察姜黄素对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的作用及分子机制。方法:以不同浓度姜黄素预处理体外培养的HAECs,再以ox-LDL对细胞进行干预。MTT法和Ed U法评估细胞增殖能力;ELISA法对培养液中白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子β1(TGFβ1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)以及分泌型晚期糖基化终产物受体(sRAGE)浓度进行检测;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)评估过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的结合活性;Western blot法检测HAECs中磷酸化PPARγ、血红素氧合酶-1(HO-1)、HMGB1、IL-6、TGFβ1和RAGE的表达水平。结果:ox-LDL处理的HAECs细胞活力和增殖能力下降,细胞内PPARγ/HO-1信号被抑制,其下游HMGB1/RAGE炎症通路被激活,细胞分泌的IL-6、TGFβ1、HMGB1以及sRAGE浓度显著增加。不同浓度姜黄素预处理可激活ox-LDL诱导的HAECs内PPARγ/HO-1信号通路,从而抑制下游HMGB1/RAGE炎症通路,降低IL-6、TGFβ1、HMGB1以及sRAGE炎症因子水平。结论:ox-LDL能够通过抑制PPARγ/HO-1而激活HMGB1/RAGE炎症通路造成HAECs损伤。姜黄素则能够通过活化PPARγ/HO-1通路抑制炎症反应,减轻ox-LDL对HAECs的损伤。     

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的:研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾纤维化大鼠TGF-β1-Smad通路的影响,借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法:雄性SD大鼠18只随机分为3组,假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量;HE染色和电镜观察肾组织病变;采用RT-PCR检测肾组织TGF-β1 mRNA水平;蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体(TβRI)、转化生长因子II型受体(TβRII)、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多;病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多;肾组织TGF-β1mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较,中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少;肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻;肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论:抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路,抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化,减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。     

糖皮质激素对小G蛋白RhoB的调节作用及其可能机制

目的 :小G蛋白Rho家族介导的信号途径在维持细胞的形态 ,促进细胞的运动迁移 ,调节肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡以及侵袭中具有重要作用。糖皮质激素受体 (glucocorticoid ,GR)作为配体依赖性的转录因子 ,在与配体结合后可以通过调节靶基因的转录 ,调节多种不同组织来源的肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡。鉴于此 ,我们推测糖皮质激素对细胞增殖分化和凋亡的调控可能部分是通过调节小G蛋白Rho的表达而实现的。本研究的目的是利用表达有内源性GR的人卵巢癌细胞系HO -8910为模型 ,观察糖皮质激素对小G蛋白Rho表达的调节作用 ,并探讨其可能的作…     

丹参素对TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖与活化的影响

目的:观察丹参素对转化生长因子-β1(TGFβ-1)诱导的肝星状细胞(HSCs)增殖与活化的影响。方法:体外分离培养大鼠HSCs,细胞分为4组:对照组、TGFβ-1组、TGFβ-1+丹参素组及丹参素组。MTT法检测HSCs增殖情况;细胞免疫化学法分析各组HSCs表达结缔组织生长因子(CTGF)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化。结果:与对照组比较,TGFβ-1无明显促进HSCs增殖的作用,TGFβ-1+丹参素组及丹参素组均促进HSCs增殖(P<0.05)。与对照组比较,TGF-β1能明显促进HSCs表达CTGF和α-SMA,丹参素单独作用降低CTGF和α-SMA的表达;TGFβ-1+丹参素组CTGF和α-SMA的表达低于TGFβ-1组。结论:丹参素对HSCs的增殖有抑制作用,且部分抑制TGFβ-1诱导的HSCs活化。     

内源性CO抑制肾性高血压大鼠离体血管反应性

体内由血红素加氧酶(HO)催化血红索代谢的产物一氧化碳(CO)可通过刺激血管平滑肌的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)和钙激活的钾通道及抑制ET-1和血小板源生长因子-β(PDGF-β)的表达,发挥舒血管的作用.我们曾报道[1],HO/CO系统可降低肾性高血压大鼠的血压.本研究通过体内外实验进一步探讨HO/CO舒张血管平滑肌的可能机制.     

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的： 研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾纤维化大鼠TGF-β₁-Smad通路的影响，借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法: 雄性SD大鼠18只随机分为3组，假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型，抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量；HE染色和电镜观察肾组织病变；采用RT-PCR检测肾组织TGF-β₁ mRNA水平；蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体（TβRI）、转化生长因子II型受体（TβRII）、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果: 与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多；病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多；肾组织TGF-β₁ mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较，中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少；肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻；肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论: 抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β₁-Smad通路，抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化，从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化，减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。     

石蜡包埋人胰腺癌组织中Smad4蛋白和转化生长因子β_1及其Ⅱ型受体的表达

目的　探讨转化生长因子 (TGF) β通路中Smad4蛋白、TGFβ1和转化生长因子 βⅡ型受体 (TβRⅡ )的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。 方法　用EnVision免疫组织化学技术检测5 6份石蜡包埋人胰腺癌标本Smad4蛋白、TGFβ1和TβRⅡ蛋白表达的情况。 结果　 5 6份胰腺癌组织Smad4、TGFβ1和TβRⅡ阳性率分别为 5 8 93%(33)、6 6 0 7%(37)和 6 0 71%(34 ) ,对应正常胰腺组织阳性率分别为 89 2 9%(5 0 )、2 5 0 0 %(14)和 2 5 0 0 %(14)。TGFβ1的表达与临床分期、肿瘤的有无转移相关 (P <0 0 5 )。TGFβ1与TβRⅡ之间也有相关关系 (P <0 0 5 )。 结论　胰腺癌组织中Smad4表达降低 ,TGFβ1与TβRⅡ则呈过表达。TGFβ1与TβRⅡ对胰腺癌的发生可能有协同作用。Smad4在TGF β诱导基因表达调控和随后的生长抑制中是关键的转录因子 ,但TGFβ有时也可能以与Smad4无关的形式起作用。     

沉默LAIR-1表达对卵巢癌细胞增殖功能的影响

沉默白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)在卵巢癌H08910细胞的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖功能的影响。构建LAIR-1的shRNA慢病毒表达载体,转染人浆液性卵巢癌细胞系H08910。RT-PCR和Western blot检测H08910细胞中LAIR-1分子的沉默效率;采用PI染色法和MTT法检测沉默LAIR-1表达对HO8910细胞周期及增殖功能的影响。成功建立沉默LAIR-1分子表达的稳定HO8910细胞株。与阴性对照组比较,转染LAIR-1-shRNA慢病毒载体的HO8910细胞中LAIR-1的mRNA及蛋白水平表达均明显降低(P<0.05)。LAIR-1-shRNA组G1期细胞数目明显低于CON组和NCshRNA组(P<0.05);沉默LAIR-1分子表达后,LAIR-1-shRNA HO8910细胞的增殖率明显高于NC-shRNA HO8910组和空白对照组(P<0.05)。沉默卵巢癌细胞HO8910LAIR-1分子表达可明显增强细胞增殖的能力,提示卵巢癌细胞表达的LAIR-1可能对癌细胞的生物学功能发挥抑制作用。     

转化生长因子β(TGFβ)在急性胰腺炎可上调自身及TGFβ受体的表达

TGFβ作为细胞活性多功能的调节因子,它只有刺激细胞增殖,同时又具有抑制细胞增殖的作用。哺乳动物TGFβ共有3种同型体(TGFβ1～3),它们主要是通过与细胞表面的受体(TβRⅠ、TβRⅡ)结合而发挥生物学效应。TβRⅠ、TβRⅡ属丝/苏氨酸     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肺癌细胞系BE1和LTEP-α-2中Axin基因表达及细胞增殖的影响

目的本研究的目的是探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)对人肺癌细胞系BE1及LTEP-α-2的增殖和侵袭的调节及其可能的机制。方法两个细胞系均应用5-Aza进行处理,并应用MTT法检测两细胞系经5-Aza处理后细胞增殖能力的变化,Transwell法检测了两细胞系处理后侵袭能力的变化,Westernblot检测Axin、β-catenin、cyclin D1和MMP-7的表达。结果 5-Aza抑制BE1和LTEP-α-2细胞的增殖和侵袭能力(<0.05),与LTEP-α-2细胞系相比,BE1细胞系受抑制程度更为明显(<0.05)。5-Aza上调BE1细胞中Axin的表达,抑制β-catenin、cyclin D1和MMP-7的表达,但对LTEP-α-2细胞中Axin等的表达没有明显的影响。结论 5-Aza可以抑制肺癌细胞的增殖和侵袭,BE1细胞中的Axin基因可能存在异常高甲基化,高甲基化的Axin基因可能成为未来治疗肺癌的靶点。     

AM激活mTOR信号通路对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)通过激活mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号途径对人卵巢癌细胞HO8910增殖的影响。方法应用AM及mTOR拮抗剂(雷帕霉素)诱导卵巢癌细胞,CCK8法检测AM及雷帕霉素对卵巢癌细胞增殖的影响,进一步采用Western印迹法,测定AM对mTOR磷酸化的激活作用结果 AM可促进卵巢癌细胞的增殖,并呈剂量依赖关系及受体依赖关系,而这种促增殖作用可被mTOR信号通路的拮抗剂雷帕霉素所抑制;随着AM浓度的增加,卵巢癌细胞mTOR磷酸化水平随之升高。结论AM介导的mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的分子靶向治疗提供新的思路。     

Nme1-1465 T＞C和转化生长因子β1-509T＞C基因多态性与胃癌遗传易感性

目的 探讨中国福建地区汉族人群Nme1基因Nme1-1465 T＞C和转化生长因子(TGF)β1基因TGFβ1-509 C＞T单核苷酸多态性与胃癌遗传易感性的关系.方法 采用病例对照研究.选取福建地区组织病理学确诊的胃癌患者274例及年龄和性别频数匹配的对照健康体检人群277例,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法进行Nme1-1465 T＞C(rs16949649)和TGFβ1-509 C＞T(rs1800469)多态性检测,应用非条件Logistic分析方法计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI),以评估不同基因型与胃癌发病风险、病理特征及两基因多态性间的交互作用的关系.结果 Nme1-1465 T＞C位点携带纯合子CC基因型的患者发生淋巴结转移的风险是携带TT+CT基因型患者的2.5倍(OR=2.5,95%CI 0.08～2.10;P=0.029).TGFβ1-509 T＞C的基因型分布与肿物大小、组织分化、组织浸润及淋巴结转移均未见相关性.肠型病例组中,经Logistic回归分析表明,与携带两个位点都是野生型纯合子Nme1 TT*TGFβ1 CC基因型的个体相比,携带位点发生变异(杂合子或突变纯合子)的Nme1 TC*TGFβ1 TC、Nme1 TC*TGFβ1TT和Nme1 CC*TGFβ1 TC基因型个体患胃癌风险分别显著降低至0.42倍(95%CI 0.54～0.94,P=0.022)、0.32倍(95%CI 0.42～0.97,P=0.013)及0.26倍(95%CI0.42～0.97,P=0.008).结论 Nme1-1465 T＞C基因多态性与胃癌的预后密切相关,同时Nme1-1465 T＞C和TGFβ1-509 T＞C在胃癌遗传易感性方面存在协同作用.     

miR-211 对上皮性卵巢癌细胞HO8910 增殖及细胞周期相关蛋白的影响

目的:探讨miR-211 与上皮性卵巢癌发生的关系,及其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:对30 例上皮性卵巢癌组织标本及卵巢癌细胞系HO8910 中miR-211、Cyclin D1 和CDK6 表达情况进行研究,同时选取30 例非卵巢癌患者组织标本及正常卵巢上皮细胞株IOSE80 作为对照,并分析上皮性卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中miR-211、Cyclin D1、CDK6 表达情况及表达相关性;miR-211 对卵巢癌细胞增殖,以及对Cyclin D1 和CDK6 表达的影响。结果:卵巢癌组织miR-211 相对表达水平显著低于正常组织(P<0.05),卵巢癌细胞中miR-211 相对表达水平显著低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05);在上皮性卵巢癌细胞系HO8910 中,第3 天和第4 天miR-211 组细胞数显著低于miR-Ctrl (P<0.05);上皮性卵巢癌组织中Cyclin D1、CDK6相对表达水平显著高于正常卵巢上皮组织(P<0.05);上皮性卵巢癌细胞系中miR-211 显著抑制Cyclin D1 和CDK6 的表达;在卵巢癌组织中,Spearman 相关性分析结果显示miR-211 和Cyclin D1 和CDK6 相对表达水平呈负相关(r =-0.583,P =0.010)。结论:miR-211 可抑制卵巢癌细胞增殖,并抑制周期相关蛋白Cyclin D1 和CDK6 的表达,miR-211 与周期相关蛋白Cyclin D1 和CDK6 在卵巢癌发生中可能存在调控关系。     

BMP-7不能逆转TGF-β1诱导的人支气管上皮细胞上皮间质转换

正骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)属于TGF家族一员,在哺乳动物上皮细胞内具有增殖、迁移及凋亡的作用,同时在多种器官组织中具有明显的抗纤维化作用[1]。BMP-7通过激活细胞膜上的受体,激活细胞内Smad1,5,8形成复合物,竞争性作用抑制TGF-β1活化的Smads蛋白复合物[3]。研究显示BMP-7抑制二氧化硅诱导