干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的：探讨干扰素α（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：用不同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,７５μｇ／Ｌ,１００μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,记录细胞数目,进行甲基绿－派洛宁染色,测定软琼脂集落形成率。结果：ＩＦＮ－α能明显抑制Ａ５４９细胞的增殖,药物组与对照组之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）,药物组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落     

人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN-α融合蛋白表达载体的筛选

目的探讨如何在无药物抗性改变;无转化细胞生物指示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白原核表达载体。方法在 ＩＦＮ－α基因两端加上 ＸｂａⅠ酶切位点后用 ＰＣＲ法扩增,再重组入以抗体库技术筛选得到的人源抗ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体的相应位点上,构建 ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。取 ＰＣＲ扩增得到的 ＩＦＮ－α ＤＮＡ,用地高辛标记系统进行化学标记,制备 ＩＦＮ－α ＤＮＡ探针。取构建的融合蛋白表达载体转化受体菌．增菌后,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体 ＤＮＡ,点样于硝酸纤维膜上, ８０℃烤２ｈ,预杂交液 ４２℃,２ｈ膜预杂交,标记探针 ４２℃, ４ｈ杂交,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色。同时设单纯人源抗 ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体为阴性对照, ＩＦＮ－α质粒为阳性对照。阳性克隆再以 ＳａｃＩ和 ＸｂａⅠ酶切,琼脂糖电泳鉴定。结果４０株转化细胞中筛选出７个阳性克隆,酶切鉴定显示两者符合率达１００％,成功地筛选出了ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。结论人源ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载     

人抗乙肝表面抗原抗体Fab片段/αA-干扰素融合蛋白原核表达载体的构建

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗，我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白原核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α。方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５端引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ表达载体ｐＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实重组片段已正确插入载体相应酶位点，片段与ＰＣＲ扩增片段大小相同，硷基序列正确。结论：ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ的成功构建，为人抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素融合蛋白在大肠杆菌的表达打下基础     

益气养血保元方对肺癌细胞PCNA,p53蛋白表达的影响

采用免疫组化法观察益气血保元胶囊（ＯＱＰ０对体外培养人肺癌Ａ－５４９细胞ＰＣＮＡ，ｐ５３蛋白异常表达的影响。结果：ＯＱＰ作用后Ａ－５４９细胞ＰＣＮＡ，ｐ５３蛋白表达减弱。提示：ＯＱＰ可抑制ＰＣＮＡ，ｐ５３蛋白表达，其抑癌作用机理可能与抑制ＰＣＮＡ，ｐ５３蛋白表达有关。     

携带HuIFN－β cDNA的重组逆转录病毒载体的构建及在人肝癌细胞中的特异表达

目的：研究逆转录病毒介导干扰素基因转移及在肝癌细胞中特异表达作用。方法：将人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＰＬ位点，分别构建了转录受ＳＶ４０启动子驱动的载体ＭＮＳＩＦＮＢ和转录受人甲胎蛋白增强子（ＡＦＰｅ）调控的载体ＭＮＡＩＦＮＢ。用脂质体转染法将载体分别转导ＰＡ３１７包装细胞，质粒转染率为每１０５ＰＡ３１７细胞（４～２５）×１０３ＣＦＵ／μｇ，病毒感染率（４．５～５００）×１０４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌、肾癌及黑色素瘤细胞。结果：ＮｅｏＲ克隆ＲＮＡ斑点杂交及ＩＦＮ活性分析证明，人ＡＦＰｅ可促进异源启动子启动ＨｕＩＦＮ－β基因在合成ＡＦＰ的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。结论：ＡＦＰ＂持家基因＂顺式调控序列在合成ＡＦＰ的肝癌细胞中特异驱动ＩＦＮ－β基因表达，该研究为肝癌特异性免疫基因治疗提供了资料。     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

细胞因子联合抗癌药抑制肺腺癌细胞的研究

目的 检测白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与顺铂（ＤＤＰ）合用对肺腺癌Ａ５４９细胞株（Ａ５４９）和耐顺铂Ａ５４９细胞株（Ａ５４９／ＤＤＰ）的细胞毒性作用。方法 采用四氯唑蓝快速比色法（ＭＴＴ法）进行体外细胞毒性实验。结果ＩＬ－２与顺铂使用后顺铂对两株细胞的毒性作用无明显变化；ＴＮＦα与顺铂用后顺铂对两株细胞的毒性作用明显增强；ＩＬ－２、ＴＮＦα与顺铂三者合用后顺铂对两株细胞的毒     

人抗惭肝表面抗原抗体Fab片段／αA—干扰素融合蛋白原核表达 …

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗。我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α，方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５；引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡＧ抗体Ｆａｂ表达载体ＰＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ＰＨＳ／ＩＦＮ－α，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实     

尿激酶型纤维酶原激活系统与肺癌转移的关系

目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活物ＵＰＡ及其特异受体ＵＰＡＲ和抑制物ＰＡＩ－１,ＰＡＩ－２与肺非小细胞癌（ＮＳＣＬＣ）转移的关系。方法 用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＵＰＡ,ＵＰＡＲ,ＰＡＩ－１和ＰＡＩ－２在６６例肺ＮＳＣＬＣ中蛋白水平表达。结果肺腺癌,鳞癌有淋巴结转移组ＵＰＡ,ＰＡＩ－１阳性率及表达强度均比无移组高,Ｐ值均〈０．０５。肺大细胞癌有淋巴结转移组ＵＰＡ,ＵＰＡＲ阳性率无比转移组高,Ｐ＝０．     

人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN—α融合蛋？…

目的 探讨如何在无药物抗性改变,无转化细胞生物批示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段ＩＦＮ－μ融合蛋白塬核表达载体。方法 在ＩＦＮ－α基因两端加上Ｘｂａ１酶切位点后用ＰＣ放地重组人以抗体库技术筛选得到的人源抗ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体的相应相应们点上,构建ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ＝ＴＦＮ－α融合蛋白表达载体。取ＰＣＲ扩增到的ＩＦＮ－αＤ     

3种干扰因子对人肺癌细胞株A549体外增殖,侵袭力入ICAM— …

目的：研究全反维甲酸（ＡＴＲＡ）等干扰因子对肺癌细胞株Ａ５４９侵袭、无殖及ＩＣＡＭ－１分子表达的调节作用。方法：根据细胞穿过铺有Ｍａｔｒｉｇｅｌ胶多孔膜数量检测细胞侵袭力,用改良龙胆紫吸收比色计数法检测细胞增殖,以流式细胞分析和酶联免疫吸附试验检测ＩＣＡＭ－１、ｓＩＣＡＭ－１表达水平。结果：Ａ５４９经ＡＴＲＡ处理生,细胞表面ＩＣＡＭ－１表达降低,体外侵袭力明显降低,体外增殖明显抑制;ＩＦＮα不增加     

环孢霉素A对培养的人角朊细胞主要组织相容性抗原表达的影响

目的：研究环孢霉素Ａ对人皮肤角朊细胞的主要组织相容性抗原（ＭＨＣ）表达的影响。方法：采用γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）刺激培养的人角朊细胞ＭＨＣ－Ｉ／Ⅱ抗原表达的实验模型,研究了低剂量环孢霉素Ａ对角朊细胞ＭＨＣ－Ｉ／Ⅱ抗原表达的影响。结果：０．１２５ｍｇ／Ｌ的环孢霉素Ａ对于ＩＦＮγ－刺激的角朊细胞ＭＨＣ－Ｉ类抗原（ＨＬＡ－ＡＢＣ抗原）表达的增强,具有抑制作用（Ｐ〈０．０１）;但是对于ＩＮＦ－γ刺激的角朊     

人肺腺癌A549多重抗药细胞株生物学特性变化

目的；探讨人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞株生物学特性变化，方法：采用阿霉素（ＡＤＭ）浓度递增的方法诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系（Ａ５４９／Ｐ）在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌＡＤＭ下持续增殖，通过光镜和电镜观察其增殖及形态结构变化，结果：Ａ５４９／Ｒ２细胞由巨大细胞增殖而来，其微绒毛，线粒体及分泌泡明显增加，有进一步分化趋向，结论：Ａ５４９／Ｒ２     

非小细胞性肺癌微血管密度和P53蛋白的检测及其临床意义

目的：检测非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织的微血管密度（ＭＶＤ）和Ｐ５３蛋白表达,并探讨其临床意义。方法：取未经放、化疗的ＮＳＣＬＣ手术标本７例,应用ＦⅧ－Ａｇ抗体和Ｐ５３单抗分别免疫组化检测ＭＶＤ和Ｐ５３。在２００倍视野下,每张切片计数５个血管最丰富区的微血管密度,取其平均数（ａ－ＭＶＤ）;在Ｐ５３蛋白阳性表达密度区计数６００个肿瘤细胞中的阳性表达数。结果：ａ－ＭＶＤ值在Ｐ５３蛋白阳性表达计数≥１     

Ｍｉｒ－１６对人肺腺癌Ａ５４９细胞增殖及凋亡的影响

【目的】 探讨基因Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞株Ａ５４９中的表达状况以及Ｍｉｒ－１６对Ａ５４９细胞生物学行为的影响。【方法】 Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中的含量采用实时荧光定量ＰＣＲ的检测,后将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞,用ＭＴＳ、流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡及细胞周期。构建野生型及突变型ＷＩＰ１３’－ＵＴＲ的荧光素酶报告载体,检测荧光素酶的相对活性,验证在肺腺癌中ＷＩＰ１是Ｍｉｒ－１６的作用靶点。【结果】 在人肺腺癌Ａ５４９细胞中Ｍｉｒ－１６呈低表达;将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞后表达上升,并可促进Ａ５４９细胞的增值率明显降低;早期凋亡的细胞比例增加;处于Ｇ１期的细胞比例明显增加,处于Ｓ期的细胞比例明显减少。与各对照组相比,Ｍｉｒ－１６显著抑制野生型ＷＩＰ１－３’ＵＴＲ表达载体的荧光素酶活性。【结论】Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中低表达,并抑制肺腺癌细胞的增殖及促进细胞的早期凋亡,有望成为肺腺癌靶向治疗的新靶点。     

钙蛋白酶对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及纤维化模型的影响

【目的】 研究钙蛋白酶在血管紧张素ＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）诱导的心肌纤维化中的作用及作用机制。【方法】 原代培养ＳＤ大鼠心肌成纤维细胞（ＣＦ）,取传代２－４代细胞,,预先给予不同浓度ｃａｌｐａｉｎ抑制剂ＰＤ１５０６１６,观察对Ａｎｇ ＩＩ诱导致纤维化模型的影响。实验分为空白对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ）、模型组（Ａｎｇ ＩＩ）、低浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿５ μｍｏｌ／Ｌ）、高浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿１０ μｍｏｌ／Ｌ）。Ｅｄｕ检测ＣＦ增殖,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测纤维化因子纤连蛋白（ＦＮ）、结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）、α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）蛋白表达,同时检测ｃａｌｐａｉｎ激活的下游产物Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ以及胞浆中ｐ－ＩκＢ与细胞核内Ｐ６５、ＮＦＡＴ４的蛋白水平变化。【结果】 ＰＤ１５０６１６显著抑制由Ａｎｇ ＩＩ诱导的ＣＦ增殖及ＦＮ、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ等纤维化因子表达上调。Ａｎｇ ＩＩ显著提高Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ的表达,ＰＤ１５０６１６可阻断Ａｎｇ ＩＩ的作用,提示ｃａｌｐａｉｎ受Ａｎｇ ＩＩ激活,是Ａｎｇ ＩＩ作用的下游因子。ＰＤ１５０６１６可抑制Ａｎｇ ＩＩ引起的胞内ＩκＢ磷酸化和胞核中ｐ６５、ＮＦＡＴ４的表达上调,提示ｃａｌｐａｉｎ的作用与ＮＦ－κＢ 、ＮＦＡＴ４转位入核的信号通路相关。【结论】 ｃａｌｐａｉｎ在Ａｎｇ ＩＩ刺激诱导心肌纤维化过程中发挥重要作用,其机制可能与ＮＦ－κＢ和ＮＦＡＴ信号通路的激活有关。     

人白细胞干扰素对子宫内膜腺癌细胞系的作用

目的 观察人白细胞干扰素对子宫内膜腺癌细胞系细胞生长和细胞周期的影响。方法 用不同浓度：２０００Ｕ／ｍｌ，５００Ｕ／ｍｌ１００Ｕ／ｍｌ的ＩＦＮ－α与ＪＥＣ共同培养８ｄ，观察ＪＥＣ细胞生长曲线，细胞凝集素受体表达变化，并用流式细胞仪分析癌系细胞周期。     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）刺激动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白（Ｎ－ＬＤＬ）刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强，表明Ｏｘ－ＬＤＬ和Ｎ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ细胞增殖时与Ｓ期细胞的增加有关；Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖的同时ＰＣＮＡ蛋白阳性率增加，而与Ｐ５３、Ｐ２７和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达无关。提示ＰＣＮＡ可能参与了Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ的细胞增殖作用；特异性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＧＦ１０９２０３Ｘ能降低Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖过程中ＰＣＮＡ的阳性率，表明该细胞增殖过程中ＰＣＮＡ表达的抑制可能与ＰＫＣ信号传递通路有关。     

重组融合蛋白Fab/IFN-αA体外抗HBV作用的实验研究

目的 在体外细胞水平上观察重组融合蛋白（Ｆａｂ／ＩＦＮ－αＡ）对乙型肝为病毒（ＨＢＶ）基因表达的抑制作用。方法 应用ＨＢＶ ＤＮＡ转染细胞系（ＨｅｐＧ２．２．１５细胞）作模型,通过固相放射免疫方法检测Ｆａｂ／ＩＮＦ－αＡ作用后细胞上清液的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ水平的变化,结合细胞存活率来评价其抗ＨＢＶ作用,并与α－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）进行比较。结果 经１２ｄ作用,Ｆａｂ／ＩＮＦ－αＡ在细胞存活率     

IFNα2b诱导MxA蛋白的表达及其抗病毒活性研究

研究ＭｘＡ抗病毒蛋白的表达及其活性。方法用ＩＦＮα２ｂ处理ＷＩ－３８细胞或人外周血单核细胞１２ｈ或２４ｈ,并用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法或或ＦＡＣＳ法分别进行了ＭｘＡ蛋白表达的检测及微量细胞病变抑制法对重组的ＭｘＡ和ＩＦＮα２ｂ进行抗病毒效应实验。结果（１）低浓度ＩＦＮα２ｂ（〉１１Ｕ／ｍｌ）可诱导ＷＩ－３８细胞达ＭｘＡ;（２）１０ｎｇ／ｍｌＭｘＡ可以抵抗２０ＴＣＩＤ５０的ＨＳＶ－１、Ｐｏｌｉｏ。